长春花感染柑橘黄龙病菌微波热处理防控效果

为探索黄龙病防治途径,开展微波热处理对黄龙病的防控效果研究。该研究搭建了微波热处理平台,对长春花微波热处理参数(转盘转速、单个磁控管的微波功率、磁控管数量)进行优化,并用优化后的参数组合对感病长春花进行热处理,处理后90 d内跟踪检测长春花叶片中黄龙病菌的浓度、淀粉和类黄酮的含量。结果表明,长春花微波热处理的最优参数组合为单个磁控管的微波功率150 W、3个磁控管、转速15 r/min;热处理90 d后,感病长春花叶片中的黄龙病菌Ct值(阈值循环数,该值低于32时为阳性)由阳性(17.01±0.97)转至近阴性(31.91±2.35),病菌浓度下降了99.98%,淀粉含量和类黄酮含量恢复至正常水平,植株的活性恢复较好。研究表明,微波热处理有效抑制植物体内的黄龙病菌,可为黄龙病的规模化防治提供新思路。

评估茶枝柑黄龙病病情的3种定量方法的比较研究

【目的】为比较3种不同黄龙病病情定量评估方法的优劣之处。【方法】运用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)技术,定量分析了柑橘黄龙病菌(Candidatus Liberibacter asiaticus,CLas)在茶枝柑的叶脉、叶肉、果皮、囊壁、果实中柱、树皮、根系等多个部位的分布情况,并进一步使用“橘园黄龙病病情指数分析、病树中CLas含量分析及黄龙病发病率检测”3种方法定量评估了新会区两个茶枝柑果园中黄龙病的发病情况。【结果】CLas在茶枝柑各部位含量的大小:叶脉>橘络>果实中柱>根>叶肉>绿树皮>果皮白瓤>囊壁>外果皮。茶枝柑叶脉中CLas 16S rDNA基因平均含量为10^(7.89)CN/g FW,茶枝柑外果皮中CLas 16S rDNA基因平均含量为10^(4.54)CN/g FW。三江镇联合村果园20棵茶枝柑的平均病情指数为52.75;随机采集叶片样品,可在其中18棵茶枝柑的叶脉样品中检出CLas,其16S rDNA平均含量为10^(5.57)CN/g FW;选择性采集显症叶片样品,可检测出20棵茶枝柑树的黄龙病发病率为100%。双水镇大树村果园20棵茶枝柑的平均病情指数为30.75;随机采集叶片样品,可在其中3棵茶枝柑的叶脉样品中检出CLas,其16S rDNA基因的平均含量为10^(4.99)CN/g FW;选择性采集显症叶片样品,可检测出20棵茶枝树的黄龙病发病率为100%。【结论】明确CLas在茶枝柑不同部位的定量分布情况,为茶枝柑的黄龙病定量分析提供了参考依据;3种定量评估茶枝柑黄龙病病情的方法各有优劣,综合运用才能更准确全面地反映出黄龙病在果园的发病情况。

黄龙病发病芦柑根际土壤细菌群落组成与多样性特征

【目的】本研究旨在研究福建南平地区芦柑(Citrus reticulata)植株根际土壤细菌群落,并分析黄龙病对其细菌群落的影响,为南平地区芦柑黄龙病的防控提供科学依据。【方法】采用五点法采集了健康和黄龙病发病的芦柑植株根际土壤样本,通过扩增子测序技术和生物信息学方法,深入研究了黄龙病发病芦柑根际土壤细菌群落的多样性和组成变化,分析了土壤理化因子与细菌群落的关联性。【结果】研究结果表明,黄龙病发病的芦柑植株根际土壤细菌群落的多样性略高于健康植株。黄龙病发病芦柑根际土壤中的变形菌门相对丰度明显升高,而放线菌门相对丰度显著降低。在属水平上,与健康植株相比,黄龙病发病芦柑植株根际土壤细菌群落中蔷薇属和嗜酸性杆菌属的相对丰度显著增加,与速效钾、有效磷以及有机质呈现显著负相关,而与pH值呈现显著正相关。相反地,康奈斯氏杆菌属和褚氏杆菌属的相对丰度明显低于健康植株,并与速效钾、有效磷以及有机质呈现显著正相关,同时与p H值呈现显著负相关。【结论】黄龙病菌感染改变了柑橘土壤理化特性,并显著减少根际土壤中有益细菌的相对丰度,从而导致了芦柑植株根际细菌群落的多样性和组成出现显著变化。与此同时,黄龙病发病的芦柑植株可能通过招募固氮和促进植物根际生长的有益细菌来对抗病原菌的侵害。

柑橘黄龙病菌亚洲种分子检测引物评价及绝对定量PCR体系优化

柑橘黄龙病是对柑橘产业最具毁灭性的病害,目前没有可用的有效药剂和抗病品种,分子检测对黄龙病有效防控至关重要。本研究对国内外常用的常规PCR和巢式PCR检测引物进行评价,针对多拷贝的nrdB和16S rDNA基因,构建质粒标准品并筛选适用于绝对定量PCR的最佳质粒。结果表明,使用Es Taq MasterMix对感染Candidatus Liberibacter asiaticus(C Las)的柑橘样品进行常规PCR检测时,在评价的16对引物中,OI1/OI2c、Las606/LSS和HLBF468/R877灵敏度最高,推荐同时使用检测黄龙病菌含量低的样品;各组巢式PCR检测引物有其适用扩增体系,部分引物用Es Taq MasterMix扩增时出现非特异性扩增,F1/B1→F3/B3则适用Es Taq MasterMix体系,且最高可稳定特异检出10^(5)倍稀释感染C Las柑橘总DNA样品(2×10^(-3) ng/μL),是灵敏度最高的引物组,OI1/OI2c→S3/S4在Es Taq MasterMix和Ex Taq DNA聚合酶体系中均可稳定特异检出104倍稀释感染C Las柑橘总DNA样品(2×10^(-2) ng/μL),是适用扩增体系最广的引物组;构建的5个绝对定量PCR质粒标准品中,pnrdB83扩增效率最接近100%,且在2次重复试验中波动最小,稳定性最强,并且作为标准品对黄龙病待测样品进行绝对定量时,各样品在2次重复试验中的拷贝数差值最小,是本研究筛选的最佳质粒。本研究的结果将为柑橘黄龙病菌的定性和定量分子检测提供参考。

基于可见光谱特征波长提取和分类算法的柑橘黄龙病快检研究

柑橘黄龙病(HLB)是由亚洲韧皮杆菌引起的一种严重病害,目前无法根治。其防控具有重要意义和经济价值。当前利用健康和患病叶片的光谱差异对其进行诊断显示了良好的应用前景。因患病叶片在叶绿素反射区及O—H伸缩振动区的可见光谱与健康叶片存在显著差异,而可见光谱检测在采集和数据处理方面具有成本低、简便的优势,研究可见光谱的黄龙病快速检测方法具有可行性和重要意义。为了减少光谱数据冗余和计算量,实现精准的黄龙病的早期鉴别以及降低黄龙病相似病症的误诊率,采集了黄龙病患病地区共160个叶片样本。经qPCR测定分别将其分类标定为健康、轻度疾病、重度疾病和缺镁症四类。根据叶片样本在可见光波段450~800 nm的反射光谱特征,通过S-G平滑以及降采样等预处理光谱数据后,为了优选出尽可能囊括光谱特征信息的特征波长,分别使用遗传算法(GA)、连续投影算法(SPA)以及竞争自适应重加权采样法(CARS)对采集到的可见光谱数据进行特征波长提取和降维优选出特征波长,进一步降低模型复杂度,提高预测精度。综合泛化能力及检测速度的考量,在定性判别分析模型的选择中采用训练速度快,分析准确率高的最小二乘支持向量机(LS-SVM)以及随机森林(RF)对两种变量筛选算法降维后的数据进行分类判别。通过对不同的模型的验证优选,筛选出最佳的快检方案。对比发现,在建立的模型中,SPA-RF模型与其他模型比较,对于训练集和测试集的判别准确率分别达到了100%和97.5%。结果表明,连续投影算法以及随机森林的组合分类模型可以很好地实现黄龙病早期的病理鉴别,同时也能够很好地识别出黄龙病病叶与其他相似病症的差异,为柑橘黄龙病快速检测及防治提供了一种方法依据。

发根农杆菌介导的柑橘黄龙病抗性快速评价体系优化及应用

【目的】黄龙病(Huanglongbing,HLB)是一种毁灭性柑橘病害,主要由韧皮部杆菌属亚洲种(Candidatus Liberibacter asiaticus,CLas)侵染引起。本研究旨在探究侵染初期CLas在柑橘毛状根中的增长规律,优化发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)介导的黄龙病抗性快速评价体系并应用于抗菌肽的抗性评价。【方法】基于植物表达载体pGNGM1300,通过发根农杆菌K599介导的毛状根转化体系转化不同柑橘品种,筛选毛状根诱导快、转化率高的品种;接种CLas后,利用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)对毛状根中的CLas进行定期检测,揭示其增长规律;在优化黄龙病抗性评价体系的基础上,通过CLas和相关基因的(RT-)qPCR、胼胝质含量检测、显微结构观察和症状观察等开展抗菌肽的黄龙病抗性评价。【结果】供试的11个柑橘品种中,香橼(Citrus medica)的毛状根诱导最快(15 d)、诱导率最高(73.75%),并且毛状根中转基因阳性率高(53.54%)。qPCR定期监测结果显示,在接种后第20—30天(days post inoculation,dpi),CLas开始在根中定殖;在30—50 dpi,CLas含量呈显著上升的趋势;CLas含量在60—120 dpi时略有波动,但与50 dpi时差异不显著。抗菌肽MaSAMP(stable antimicrobial peptide)、HBD-4(homo sapiens defensin beta 4)和CB(cecropin B)的抗性评价结果分析显示,在50—120 dpi,MaSAMP和CB表达植株中CLas含量均低于对照,且差异显著,除90 dpi外HBD-4表达植株中CLas含量也显著低于对照。3种抗菌肽表达植株中的胼胝质含量均显著低于对照(60 dpi),韧皮部细胞壁增厚不明显,未出现明显的淀粉粒和胼胝体沉积,并且均未发现根部死亡等现象(90 dpi)。【结论】揭示了侵染早期CLas在柑橘毛状根中的增长规律;优化了发根农杆菌介导的黄龙病抗性快速评价体系;明确转基因过表达抗菌肽MaSAMP、HBD-4和CB可显著抑制CLas的增殖,减少胼胝质沉积,减轻黄龙病症状,具有用于黄龙病防控实践的潜力。

柑橘黄龙病菌亚洲种重复序列分析及其检测引物筛选

由柑橘黄龙病菌亚洲种(Candidatus Liberibacter asiaticus,CLas)引起的黄龙病(Huanglongbing,HLB)对柑橘产业危害严重,通过加强病原检测有利于减少病害传播。利用高拷贝重复序列位点设计引物,虽能提高黄龙病检测的灵敏度,但重复序列的多态性很难保障引物检测特征稳定。通过比较11个CLas全基因组的重复序列,以期获得保守的重复序列,利于开发通用型CLas检测引物。结果显示,CLas全基因组有4段长度>50 bp的高拷贝重复序列,其重复数量和序列在11个菌株中均具有保守性。基于4段重复序列开发了CLas特异的6对引物,均能稳定检测田间柑橘黄龙病样品,熔解曲线吸收峰单一,熔解温度稳定。比较6对引物的灵敏度,发现基于5个拷贝重复序列开发的IR16-fr灵敏度最高。使用IR16-fr和常规引物CQULas-FR对50份田间柑橘叶片样品进行检测,结果显示,CQULas-FR对CLas的检出率为20%,而IR16-fr的检出率为26%。新引物IR16-fr可为田间CLas高效率检测提供技术支撑。

柑橘黄龙病菌效应子致病机制研究进展

柑橘黄龙病(Citrus Huanglongbing,HLB)是全世界范围内为害最严重的柑橘病害之一,每年对柑橘生产造成巨大损失,严重影响全球柑橘产业发展。在中国岭南地区,重要药用植物茶枝柑、化州柚、广佛手等均受到柑橘黄龙病的威胁。亚洲韧皮部杆菌(Candidatus Liberibacter asiaticus,CLas)是最常见的柑橘黄龙病致病菌株,该菌定殖于植物的韧皮部,主要感染芸香科柑橘属(CitrusL.)植物。目前尚无体外成功培养亚洲韧皮部杆菌的报道,因此对柑橘黄龙病致病机制研究和黄龙病防治均有较高难度。效应子(又称效应蛋白)是病原菌向宿主分泌的一类致病因子,是病原菌侵染植物的重要武器。效应子能够靶向宿主细胞关键免疫信号转导和调控组分,从而抑制植物防御反应,增强病原菌致病性。柑橘黄龙病菌能够分泌近百个效应子,根据分泌途径的不同,主要分为Sec依赖型效应子和非经典分泌效应子,其中Sec依赖型效应子有90个、非经典分泌效应子有15个。这些效应子在柑橘黄龙病菌侵染宿主过程中发挥关键作用。已有研究发现,黄龙病菌效应子能够靶向包括植物免疫信号转导、细胞自噬、水杨酸信号途径等多个生物学过程,从而干扰宿主柑橘的防御反应,以促进黄龙病菌的定殖。该文结合近年来有关柑橘黄龙病菌效应子致病机制的研究,阐述了柑橘黄龙病研究概况、黄龙病菌效应子的分类,重点综述了影响柑橘防御反应的柑橘黄龙病菌效应子的致病机制,最后展望了黄龙病菌效应子的未来研究趋势和方向,讨论了基于效应子靶标寻找黄龙病重要抗性基因的可能性,期望通过亚洲韧皮部杆菌效应子研究,为柑橘黄龙病致病机制研究和病害防控提供指导。

基于3种原噬菌体基因的赣南地区黄龙病菌种群动态分析

柑橘黄龙病(citrus Huanglongbing,HLB)对全球柑橘产业造成了重大经济损失。为明确赣南地区柑橘黄龙病菌基因组上原噬菌体的分子特征和传播动态,本研究对采自赣南10个市县区的470份样品进行HLB检测,并对阳性样品中3种类型的原噬菌体(SC1、SC2和P-JXGC-3)上的SC1_gp050、SC2_gp040和PJXGC_gp08基因序列进行遗传多样性分析和谱系地理学分析。结果显示,共检出74份HLB阳性样品,包括7种原噬菌体组合类型:SC1、SC2、P-JXGC-3、SC1+SC2、SC1+P-JXGC-3、SC2+P-JXGC-3和SC1+SC2+P-JXGC-3,含SC2类型的原噬菌体检出41份,检出率为55.41%,说明赣南地区含SC2类型的原噬菌体菌株最为普遍。遗传多样性分析结果表明,赣南地区的3种原噬菌体的基因交流频繁,遗传分化现象不明显。选择压力分析结果显示,SC1和P-JXGC-3类型的原噬菌体均处于负向选择,SC2类型的原噬菌体处于正向选择。基于3种原噬菌体上的基因构建的中介网络图和单倍型分布表结果显示,3种原噬菌体均存在1个祖先单倍型,其他独有单倍型均是由该祖先单倍型经多次突变而来,其中PJXGC_gp08基因产生的独有单倍型最多。时空动态分析结果显示,SC1类型原噬菌体存在2条传播路径,分别为安远和全南地区间的相互传播(3<BF<20),安远地区可能是SC1类型原噬菌体的主要扩散传播地。P-JXGC-3类型原噬菌体存在3条传播路径,瑞金可能是P-JXGC-3类型原噬菌体的扩散中心。上述成果为解析柑橘黄龙病菌亚洲种Candidatus Liberibacter asiaticus在赣南地区的遗传进化及扩散动态提供参考依据。

柑橘黄龙病诊断技术研究进展

柑橘黄龙病是一种毁灭性细菌病害,对国内外柑橘产业构成严重威胁。黄龙病至今尚无有效的治疗方法,快速、准确诊断黄龙病并及时将病株清除,成为黄龙病有效防控的关键措施。通过对柑橘黄龙病各种诊断技术进行综述,旨在为准确、快速、简便诊断黄龙病提供参考。

柑橘黄龙病发生特点及防控措施

柑橘黄龙病是一种对柑橘产业构成严重威胁的病害。它是一种细菌性病害,主要由柑橘黄龙病菌引起,对柑橘产业造成巨大威胁。对此,为有效防控柑橘黄龙病,还需了解其发生特点,并在栽培阶段加强栽培管理,提高树势,清除病株残体和枯枝落叶,定期检查果园。

浅析柑橘黄龙病的特点和防控对策分析

柑橘黄龙病是对全球柑橘产业构成严重威胁的病害。为了有效控制和预防该病害的发生和传播,全球农业部门和科研机构需要共同努力,开展深入研究,探索更加有效的防治方法。同时,广大果农需要提高警惕,加强对果园管理,及时发现并处理可能出现的黄龙病症状。指出了研究黄龙病的意义,介绍了黄龙病,阐述了柑橘黄龙病的发病症状,分析了柑橘黄龙病发病的特点与规律以及柑橘黄龙病的发病原因,提出相关防治措施。

广西柑橘黄龙病防控问题之我见

柑橘是广西水果中最大宗的品种,排名全国第一,是广西脱贫致富的主力军。在20世纪80年代和21世纪初广西柑橘产业因柑橘黄龙病出现了两次毁灭性打击,从20世纪60年代广西开始组织有关力量开展柑橘黄龙病的防控和整治工作,积累了大量的经验。但一个物种一旦出现,是不可能被消灭干净,必须围绕着橘农增收、柑橘木虱大暴发、黄龙病快速蔓延等问题进行商榷,找到免疫或共生共存等柑橘黄龙病综合防控的有效方法,实现柑橘产业和柑橘黄龙病的防控的平衡。

柑橘黄龙病研究进展

近年来黄龙病的危害不断加剧,严重威胁着柑橘产业的可持续健康发展。本文从柑橘黄龙病病原特征、病害特点出发,论述了柑橘黄龙病的防控策略,为黄龙病的科学防控提供重要参考。

柑橘黄龙病与柑橘木虱在衡阳地区的发生调查

柑橘产业是衡阳地区最重要的水果产业之一,而黄龙病是柑桔产区的“不治之症”,为了摸清柑橘木虱发生区域和黄龙病感病情况,减轻柑橘黄龙病对衡阳柑橘生产带来的影响,通过对衡阳地区柑橘木虱分布范围的调查及柑橘黄龙病的检测,为保障当地柑橘产业的健康发展,总结出柑橘黄龙病对衡阳地区的为害情况和相应的防控策略,为遏制黄龙病的扩散,防控柑橘黄龙病提供依椐。

有机肥配施赤霉素和混合芽孢杆菌对柑橘黄龙病的作用

比较有机肥配施微生物菌剂、赤霉素对柑橘黄龙病菌的含量、土壤有机质及土壤微生物群的影响,为柑橘黄龙病的治疗和柑橘土壤肥力提升提供科学依据。从柑橘叶片内生菌中分离得到枯草芽孢杆菌,设置有机肥配施复合芽孢杆菌剂、25 mg/L赤霉素的病株为处理组,另一组为对照,对柑橘黄龙病菌含量、土壤有机质及土壤微生物进行比较分析。与对照组相比,有机肥配施复合芽孢杆菌、赤霉素处理柑橘的带菌量显著下降,黄龙病在荧光定量PCR扩增中从基线到指数增长的拐点所对应的循环次数(Ct值)从初始的25.10增加到了31.46,土壤有机质和速效钾分别提高了22.0%和102.0%。复合芽孢杆菌分泌出的代谢产物既能抑制病菌的生长,还能通过建立优势益生菌群优化土壤结构,促进根系生长,有效解决营养输送的问题,恢复病树状态。有机肥配施复合芽孢杆菌和赤霉素对改善柑橘黄龙病,提高土壤有机质、速效钾等有显著促进作用。

遥感技术支持下的柑橘黄龙病受灾风险评估

柑橘黄龙病受灾风险预判是控制病情蔓延的有效措施,为实现大区域黄龙病精准监测防控,综合多指标开展地块尺度黄龙病风险评估,以广西蒙山县新圩镇柑橘地块为对象,基于多时相归一化植被指数(NDVI)、地表水分指数(LSWI)、MERIS陆地叶绿素指数(MTCI)遥感指标,建立柑橘黄龙病监测模型,获取黄龙病受灾现状地块;综合迁飞距离、坡度、柑橘长势、高程和均温指标,利用层次分析法(AHP)计算指标权重,构建柑橘黄龙病受灾风险评估综合模型,评估柑橘地块感染黄龙病风险等级。结果表明,柑橘黄龙病监测模型准确率为80.31%、漏分率为10.53%,有效减少柑橘黄龙病外业调查;迁飞距离、坡度、柑橘长势、高程和均温评估指标权重分别为0.404、0.289、0.186、0.120、0.086,木虱迁飞扩散能力是病情蔓延主导因素。新圩镇感染黄龙病的高风险区475.93 hm^(2)、中风险区552.00 hm^(2)、低风险区1188.87 hm^(2),分别占柑橘面积的21.47%、24.90%、53.63%,黄龙病进一步扩散感染风险性较高,建议有关部门加强对高风险区的防控力度,防止病情蔓延。

中国柑橘黄龙病研究30年

综述了我国自1978年以来有关柑橘黄龙病的研究概况,包括柑橘黄龙病在我国的分布与危害、黄龙病寄主、病原研究、病害诊断与检测、传播途径与病害流行、防控技术等。

脱毒处理下柑橘黄龙病动力学模型的稳定性分析

基于柑橘黄龙病的防控现状,本文建立了一类考虑脱毒处理的柑橘黄龙病动力学模型,计算得到了基本再生数R_(0).当R_(0)<1时,无病平衡点是全局稳定的,当R_(0)>1时,无病平衡点是不稳定的,通过数值模拟验证了结果.

柑橘黄龙病的传播介体-柑橘木虱在广东果园的发生调查

柑橘木虱是重要害虫也是柑橘黄龙病的传播介体,因此调查木虱发生动态及其携带黄龙病菌的情况对指导黄龙病的防控有重要意义。本研究调查了广东多个果园的黄龙病发病情况,观察了柑橘木虱的生物学特性,统计了柑橘木虱在不同月份的发生数量,检测了木虱携带黄龙病菌情况。结果发现:失管果园中,黄龙病发病严重且木虱数量大,已成为散播病害的重要源头,而与失管果园保持一定距离且加强木虱防控可减轻黄龙病危害;还发现:广东地区6月份柑橘木虱种群已有一定数量,7、8月,其种群数量再次攀升,到了9、10月份,种群数量保持在高位。11、12月间,种群数量快速下降。最后根据本研究的调查结果,提出了一些加强黄龙病防控的措施。