miR-141-5p影响黏膜黑色素瘤细胞生物学行为的机制研究

目的探讨miR-141-5p在黏膜黑色素瘤(MM)组织及细胞中的表达及其意义,分析其影响MM细胞生物学行为的机制。方法回顾性收集2015年1月至2020年12月温州医科大学附属第一医院手术切除的MM和色素痣组织标本。qRT-PCR法检测并比较MM和色素痣组织、MM细胞株A375和人角质形成细胞株HaCaT中miR-141-5p、细胞外信号调节激酶(ERK)1/2 mRNA的相对表达量。采用Pearson相关分析miR-141-5p与ERK1/2 mRNA相对表达量的相关性。A375分别用miR-141-5p模拟物(模拟物组)、miR-141-5p模拟物对照(模拟物对照组)、miR-141-5p抑制物(抑制物组)和miR-141-5p抑制物对照(抑制物对照组)处理;采用qRT-PCR检测并比较4组细胞中miR-141-5p相对表达量;采用细胞计数(CCK)-8法、克隆形成实验、流式细胞术、划痕实验和Transwell侵袭实验观察并比较4组细胞存活率、增殖能力、细胞凋亡比例和细胞迁移、侵袭能力;采用Western blot法观察并比较4组细胞ERK1/2、磷酸化的ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白相对表达量。采用HE染色、免疫组化染色观察MM和色素痣组织形态并检测p-ERK1/2、ERK1/2表达水平,比较不同p-ERK1/2、ERK1/2表达情况MM患者临床病理特征差异。结果miR-141-5p和ERK1/2 mRNA在MM组织和A375中表达下调(均P<0.01);Pearson相关分析显示,miR-141-5p与ERK1/2 mRNA相对表达量呈正相关(P<0.05)。相比对照组,模拟物组细胞增殖和迁移、侵袭能力显著降低,细胞凋亡比例升高,抑制物组细胞增殖和迁移、侵袭能力升高,细胞凋亡比例降低(均P<0.05)。相比对照组,模拟物组细胞p-ERK1/2蛋白相对表达量显著升高,抑制物组显著降低(均P<0.05)。MM组织中ERK1/2与p-ERK1/2蛋白表达明显减少(均P<0.05)。p-ERK1/2阴性组和阳性组、ERK1/2阴性组和阳性组不同临床病理特征比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论miR-141-5p可能通过ERK1/2通路影响MM细胞生物学行为。

原发性鼻窦黏膜黑色素瘤研究进展

原发性鼻窦黏膜黑色素瘤(SNMM)是一种侵袭性恶性肿瘤,具有转移性高、预后不良等特点。SNMM出现的症状是非特异性的,鼻腔是最常见的起源部位。SNMM在组织病理学上具有多样性,基因表达谱分析已经识别了许多常见的基因突变,这些突变可能为新兴的生物治疗提供潜在的靶点。另外了解AJCC手册提供的TNM分期对临床有重要意义,在手术基础上结合多模式治疗可能使患者获益。SNMM患者常在就诊时已达晚期,因此本文将SNMM近年发病情况、组织病理学特点、特有分子标记物、临床分期及临床治疗方案与预后的最新信息进行总结。

原发性肛门直肠黏膜黑色素瘤2例并文献复习

目的 探讨原发性肛门直肠黏膜黑色素瘤(ARMM)临床资料、组织学形态、免疫表型及分子表达情况、鉴别诊断及治疗预后等并复习相关文献。方法 收集在佛山市顺德区第五人民医院就诊的ARMM共2例,回顾性分析ARMM的临床资料,常规石蜡包埋、切片,HE染色,光镜观察。检测并分析其免疫组化、原位杂交EBER和黑色素瘤相关基因突变检测(13基因,FFPE)二代基因测序(NGS)。结果 例1、2,均为直肠黑色素瘤,瘤细胞免疫组化均表达HMB45、Melan A、S-100;二代基因测序显示例1,NGS检测到NF1和TP53基因突变;例2,NGS检测到BRAF基因变异,最终诊断均为原发性ARMM。结论 原发性ARMM是一种罕见高侵袭性肿瘤,预后差,疗效甚微并易复发及转移,联合靶向及免疫治疗可能会提高疗效。

Sitravatinib联合Niraparib对黏膜黑色素瘤细胞系增殖、凋亡和自噬的影响及其机制

目的研究抗血管生成药物Sitravatinib联合多聚(腺苷二磷酸[ADP]-核糖)聚合酶抑制剂(PARPi)Niraparib对黏膜黑色素瘤细胞的作用及其可能的机制。方法CCK8法检测Sitravatinib和Niraparib在黏膜黑色素瘤(MM)细胞系的半数抑制浓度(IC 50);CompuSyn模型计算不同浓度联合条件下的联合指数(CI)。细胞集落形成实验测定细胞增殖;流式细胞测量术测定细胞凋亡;Western blot检测蛋白质表达;RT-qPCR检测mRNA表达。结果在人阴道黏膜来源黑色素瘤细胞系(HMVⅡ)和人外阴黏膜黑色素瘤腹股沟淋巴结转移病灶来源细胞系(GAK)中Sitravatinib(2μmol/L)联合Niraparib(20μmol/L)条件下CI值分别为0.19和0.15;与对照组及单药组相比,联合组细胞增殖能力显著下降(P<0.05或P<0.01或P<0.001);细胞凋亡率显著升高(P<0.01或P<0.001),凋亡标志物蛋白质和mRNA表达均显著升高(P<0.001);细胞自噬标志物蛋白质和mRNA表达显著升高(P<0.01或P<0.001);DNA损伤相关蛋白质表达显著升高。而与对照组相比,Sitravatinib单药组和联合组重组酶辐射敏感蛋白51(RAD51)表达显著下降。随着Sitravatinib剂量逐渐升高至2μmol/L,RAD51蛋白和mRNA表达显著下降(P<0.05或P<0.01),BRCA1与BRCA2的mRNA表达显著下降(P<0.05或P<0.01或P<0.001)。结论Sitravatinib联合Niraparib可抑制黏膜黑色素瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡并促进细胞自噬,其机制可能与Sitravatinib抑制同源重组修复(HRR)水平相关。

黏膜黑色素瘤的常见临床病理特点

黏膜黑色素瘤较皮肤黑色素瘤少见 ,日常诊断工作中较易引起误诊。本文以黏膜黑色素瘤好发部位为主线 ,归纳整理其临床及病理特点 。

232例晚期黏膜黑色素瘤患者的一二线治疗疗效及预后影响因素

目的:探讨晚期黏膜黑色素瘤(mucosal melanoma,MM)患者的临床特征、治疗及预后影响因素。方法:收集2008年1月至2015年12月北京肿瘤医院肾癌黑色素瘤内科收治的232例晚期MM患者的临床资料,一二线治疗方案,对患者生存情况进行随访,并对影响总生存期的多因素预后进行分析统计。结果:本组晚期MM患者共232例(男101、女131例),中位年龄56.0岁;原发部位:直肠肛管29.3%,鼻腔25.0%,泌尿生殖道20.7%,口腔20.3%,食管4.7%;就诊时M分期:M1a 17.2%,M1b 21.6%,M1c 61.2%;多数患者存在多处转移,常见转移部位为肺50.4%、肝34.9%、骨23.3%。中位PFS:一线治疗方案患者4.5个月,二线治疗方案患者2.5个月。所有患者中位OS为11.0个月,其中M1a期16.0个月、M1b期14.0个月、M1c期10.0个月。预后分析发现,就诊时M分期和血清LDH与OS显著相关(P<0.01),与原发灶部位、性别、年龄、基因突变状态等无显著相关性。结论:鼻腔、口腔是MM的好发部位,就诊时M分期、LDH水平是OS的独立预后因素。

替莫唑胺联合舒尼替尼治疗转移性黏膜黑色素瘤的疗效及安全性

目的:探索替莫唑胺(temozolomide,TMZ)联合舒尼替尼(sunitinib,SUN)在转移性黏膜黑色素瘤治疗中的应用价值。方法:回顾性纳入我中心2008年8月至2016年12月间接受TMZ联合SUN治疗的晚期黏膜黑色素瘤患者。患者均无BRAF/NRAS突变,服用TMZ(200 mg/m^2,d 1~5)和SUN(37.5 mg,d 1~28)治疗,28 d为一个疗程,治疗直至病情进展或毒副反应无法耐受。主要观察客观有效率(ORR)、疾病无进展生存期(PFS)、总生存期(OS)和毒副反应发生率。结果:纳入的27例患者中,原发肠道4例、泌尿生殖道9例、鼻咽部5例、口腔7例、食管2例,有19例患者既往接受过抗肿瘤治疗,TMZ联合SUN治疗的中位治疗周期为3.0。治疗后ORR 19.2%,疾病控制率(DCR)81.5%,中位PFS(3.0±0.7)个月,中位OS(7.1±0.9)个月。全组患者中有4例存在KIT突变,提示存在KIT突变/扩增的患者使用KIT抑制剂可能获益。联合治疗耐受性良好,仅2例患者因出现血小板抑制Ⅳ级,将SUN调整剂量为25 mg。Ⅲ~Ⅳ级副反应包括血小板下降(19.2%)、白细胞下降(19.2%)和肝功能损害(3.9%),未发生治疗相关性死亡事件。结论:TMZ联合SUN是治疗转移性黏膜黑色素瘤的有效方案,且安全性良好。

中国头颈黏膜黑色素瘤临床诊治专家共识

我国恶性黑色素瘤的发病率较欧美发达地区低,2009年上海市恶性黑色素瘤的发病率约为0.42/10万。但是由于我国人口基数大,因此临床上恶性黑色素瘤人数众多。2009年、2011年已经发布了2版《中国黑色素瘤诊治指南》,主要针对皮肤恶性黑色素瘤。在我国,黏膜恶性黑色素瘤是最常见的类型之一,但对黏膜恶性黑色素瘤的研究较少,而黏膜黑色素瘤的治疗手段和预后与皮肤黑色素瘤有许多不同。因此,制订符合我国国情的黏膜恶性黑色素瘤临床实践共识非常必要。

可溶性PD-L1作为晚期肢端及黏膜黑色素瘤预后因素的研究

目的:可溶性PD-L1(sPD-L1)水平升高与肾细胞癌和多发性骨髓瘤预后相关。然而,sPD-L1在晚期黑色素瘤中的调节作用和功能尚不完全清楚。本研究旨在评估晚期肢端及黏膜黑色素瘤患者循环系统中sPD-L1浓度与预后的关系。方法:于2012年1月至2015年12月期间在北京大学肿瘤医院招募了未经治疗的晚期肢端及黏膜黑色素瘤患者102例,同时收集40例健康人外周血,使用酶联免疫吸附法测定受试者循环系统中sPD-L1浓度。结果:晚期黑色素瘤队列包括58名肢端黑色素瘤患者和44名黏膜黑色素瘤患者。患者治疗前血清sPD-L1平均浓度(2.91±2.23 ng/ml)高于健康献血者(0.59 ng/ml)。102例患者中39例(38.2%)患者血清sPD-L1水平显著升高(>2.91 ng/ml),与LDH水平和Tregs数量增加显著相关,P值分别为0.021和0.017。高浓度和低浓度sPD-L1患者的总生存期存在显著差异,分别为8.5个月和11.6个月(P=0.022)。结论:晚期肢端或黏膜黑色素瘤患者的sPD-L1浓度升高,可能在疗效预测方面发挥重要作用。

中国人口腔黏膜黑色素瘤临床诊治专家共识

头颈黏膜黑色素瘤(HNMM)是一类高度恶性的实体肿瘤,5年生存率长期徘徊在20%左右,其致病因素、驱动基因、临床表现及治疗手段等与皮肤黑色素瘤差异较大。2015年,国内首个头颈黏膜黑色素瘤诊治专家共识建立,经过6年多的推广应用,HNMM临床诊治规范性有了很大提高。随着黏膜黑色素瘤临床与基础研究的不断深入,HNMM的诊治与预后在近些年发生了较大变化,特别是头颈部各分支学科的蓬勃发展,口腔、鼻腔鼻窦、眼部等黏膜黑色素瘤各自发展出独特的诊治模式,该共识已不能满足当前临床的实际需求。对此,专家组认为头颈部黏膜包含的解剖范围较广,涉及的临床科室较多,不同学科之间黑色素瘤诊疗模式差异明显,临床亟须符合个体化治疗及精准治疗的更加专科化的诊治共识。为了进一步提高口腔黏膜黑色素瘤(OMM)的远期生存率和生存质量,让共识更好地指导临床工作,专家组聚焦OMM,深入讨论,基于循证医学证据和经验医学,完成专家共识的制定。考虑到患者的个体化差异,本共识可作为OMM临床实践的参考。

68例肛管直肠黏膜黑色素瘤临床病理特征及预后

目的:总结肛管直肠黏膜黑色素瘤(anorectal mucosal melanoma,ARMM)的临床病理特征,分析其预后相关因素。方法:回顾性分析2010—2018年北京大学肿瘤医院收治的原发性ARMM手术切除标本共68例,复阅病理切片评估病理特征,分期采用Slingluff分期法。结果:(1)临床特征:患者诊断时中位年龄61.5岁,男女比例1∶1.62,首发临床表现最常见的是便血(49例);肿瘤部位最常见的是肛管直肠(66.2%),其次为直肠(20.6%);诊断时分期为Ⅰ期28例(局限期,41.2%),Ⅱ期25例(区域淋巴结转移期,36.8%),Ⅲ期15例(远处转移期,22.1%);5例行局部扩大切除术,其余为腹会阴联合切除术,48例术后接受了辅助治疗。(2)病理特征:大体检查88.2%为隆起型肿块,肿瘤中位最大径3.5 cm,中位厚度1.25 cm,黏膜肌以下浸润深度0~5.00 cm(中位1.00 cm);肿瘤浸润达固有肌层者27例,达肠周脂肪组织者16例;67.6%为无色素性或色素不明显;细胞形态最常见的是上皮样(45例,66.2%);89.7%有溃疡形成,35.3%可见坏死,55.9%有血管淋巴管侵犯,30.9%有神经周围侵犯,核分裂象计数中位值18/mm^(2);免疫组织化学检测S100、HMB-45和Melan-A阳性率分别为92.0%、92.6%、98.0%,Ki-67增殖指数中位值50%;53例进行了CKIT、BRAF及NRAS基因突变检测,突变率分别为17.0%(9例),3.8%(2例),9.4%(5例)。(3)预后:66例患者获得了随访资料,中位随访17个月,中位生存时间17.4个月,1年、2年、5年的总生存率分别为76.8%、36.8%、17.2%;诊断时淋巴结转移率56.3%;49例(84.5%)发生了远隔部位转移,最常见的转移部位是肝;单因素分析显示,肿瘤最大径(>3.5 cm)、黏膜肌以下浸润深度(>1.0 cm)、坏死、血管淋巴管侵犯、BRAF基因突变、术后未行辅助治疗、肿瘤浸润层次深、诊断时分期晚均为总生存期的预后不良因素;多因素分析显示,血管淋巴管侵犯、BRAF基因突变为影响总生存期的独立危险因素,诊断时分期相关的P值接近临界值。结论:ARMM患者的总体预后差,血管淋巴管侵犯、BRAF基因突变是独立的预后不良因素;Slingluff分期法可以有效提示预后,诊断时应详尽评估病理特征,明确分期,并尽可能做基因检测;肿瘤黏膜肌以下的浸润深度可能是比肿瘤厚度更好的预后指标。

黏膜黑色素瘤的探索与治疗策略

黏膜黑色素瘤是黑色素瘤的一种罕见亚型,具有独特的生物学和临床特征。研究其特有的低突变负荷、高结构变异负荷和独特的驱动基因将有助于了解其自然病程及其对各种治疗的反应。目前仍缺乏黏膜黑色素瘤最佳治疗策略的共识。新的靶向治疗和免疫治疗的联合治疗是目前临床试验研究的方向。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)被认为与不良预后相关,阻断该途径可以控制黑色素瘤的进展。此外,该途径在肿瘤微环境中还具有免疫抑制作用,体内研究显示同时抑制VEGF受体和细胞程序性死亡受体-1(programmed cell death-1,PD-1)途径,可以协同增强T细胞浸润,抑制肿瘤生长。PD-1单抗和VEGF受体抑制剂联合方案在晚期初治黏膜黑色素瘤中显示出良好的安全性和持久的抗肿瘤效果。总体而言,尽管其他亚型晚期黑色素瘤的全身治疗取得了巨大的进步,但黏膜黑色素瘤患者的预后仍不佳,这一罕见亚型的实验室和临床研究工作更为迫切地需要受到重视。

鼻及鼻窦黏膜黑色素瘤患者临床资料回顾性研究

目的:研究鼻及鼻窦黏膜黑色素瘤(sinus and nasal mucosal melanoma,SNMM)Ⅲ-Ⅳa期[2010年美国AJCC分期(第7次修订版)]的临床及组织病理学特点、手术治疗及辅助治疗对预后的影响因素。方法:本文对2006年至2017年间收治的满足Ⅲ-Ⅳa期鼻及鼻窦黏膜黑色素瘤患者临床资料进行回顾性研究。结果:最终共纳入16例满足条件的鼻及鼻窦黏膜黑色素瘤患者,其中7例男性,9例女性,平均年龄为63.5(35~81)岁,随访时间为23.5(7~76)个月。患者1年生存率为81.25%,3年生存率为18.75%,5年生存率为12.50%。接受术后辅助治疗患者11例,其中,术后辅助放疗5例,术后辅助生物治疗6例。结论:鼻及鼻窦黏膜黑色素瘤恶性度高,预后差,术后复发和转移发生率较高,彻底清除肿瘤病灶的手术联合术后辅助治疗的综合治疗为首选治疗方法。

口腔黏膜黑色素瘤人源性移植瘤模型的建立及鉴定

目的:建立和鉴定口腔黏膜黑色素瘤(oral mucosal melanoma,OMM)人源性移植瘤(patient-derived xenograft,PDX)模型。方法:将4例原发性口腔黏膜黑色素瘤组织移植于免疫缺陷裸鼠皮下,观察并记录裸鼠成瘤情况,待移植瘤稳定生长后进行传代;利用H-E染色观察原发瘤和移植瘤的组织病理学特征,应用免疫组织化学染色检测黑色素瘤标志物HMB-45、Melan-A、S-100及Ki-67在两者组织的表达水平。结果:4例口腔黏膜黑色素瘤组织皮下移植成功并序列传代;H-E和免疫组织化学染色显示,移植瘤在组织病理形态和4个标志物表达情况上与原发瘤保持一致。结论:本研究成功建立4例口腔黏膜黑色素瘤人源性移植瘤模型,传代移植瘤保留了原发瘤的组织病理学和分子特征,可为口腔黏膜黑色素瘤研究提供理想的临床前动物模型。

基于WHO-ICTRP注册平台分析的黏膜黑色素瘤临床研究注册特点分析

目的:基于WHO国际临床试验注册平台(ICTRP),研究黏膜黑色素瘤临床研究注册特点,为黏膜黑色素瘤的临床转化研究提供参考。方法:检索WHO ICTRP临床试验注册平台数据,由2名研究者独立筛选注册项目、提取资料,对纳入的临床研究项目从注册数量、研究阶段、国家/地区、临床研究设计等方面进行描述性分析。结果:51项涉及黏膜黑色素瘤的临床研究项目纳入本研究。项目开展国家与地区主要分布在欧美国家与东亚地区,头颈黏膜黑色素瘤临床研究主要在东亚地区开展(11/12)。研究者发起的项目48项,生物医药公司发起的项目3项。研究实施单位以单中心为主(42项),多为Ⅱ期临床试验(38项)。临床试验的干预措施复杂多样,药物治疗和多种方式联合治疗占据主导地位。结论:通过对WHO ICTRP上注册的有关黏膜黑色素瘤临床研究的特点进行统计和分析,发现黏膜黑色素瘤临床研究数量偏少,受关注度不高。黏膜黑色素瘤临床研究的水平有待提高。

牙龈黏膜黑色素瘤19例的治疗分析

口腔黏膜黑色素瘤（OMM）发病率为每年1．2例／1000万人，占口腔恶性肿瘤的0．26％～0．5％，占头颈部黏膜黑色素瘤（MMHN）的6．3％，其最常见发病位置为牙龈和硬腭，诊断后中位生存期约为19个月，5年生存率为0％～20％。现回顾性分析我院1995。2010年问收治的19例经病理确诊的牙龈黏膜黑色素瘤（GMM）患者的临床和随访资料，探讨其治疗及影响其预后的因素，希望为GMM的临床治疗和预后评估提供一些帮助。

中国黏膜黑色素瘤的临床特点及基因突变分析

【目的】采用二代测序(NGS)检测黏膜黑色素瘤中的295个基因突变情况,分析黏膜黑色素瘤患者的基因突变谱及突变特点,探索潜在治疗靶点。【方法】组织标本来自2017年9月至2018年9月在中山大学肿瘤防治中心生物治疗科就诊的黏膜黑色素瘤患者,于我院分子诊断科行NGS检测295个基因变异。【结果】黑色素瘤主要驱动基因突变频率分别为BRAF 20%(5/25),KIT 20%(5/25),NRAS 12%(3/25),NF18%(2/25)。最常见的基因突变为MYC拷贝数增加(36%,9/25),其次为KDR拷贝数增加,突变率为24%(6/25)。DNA损伤修复,细胞周期,PI3K-mTOR,生长因子受体,MAPK,免疫应答和WNT/NOTCH相关通路广泛存在突变,突变率分别为76%(19/25),72%(18/25),56%(14/25),60%(15/25),36%(9/25),28%(7/25),24%(6/25)。可见多个靶向治疗靶点,如ATM,ATRX,EMSY,FANCI,RAD52,MET,PDGFRA,KDR,FLT4,ALK,ERBB3及ROS1等。【结论】中国黏膜黑色素瘤基因突变谱与皮肤型存在差异,且与西方人群不同,NGS测序可为黏膜黑色素瘤的治疗提供潜在治疗靶点。

黏膜黑色素瘤临床病理新进展

最新WHO分类[1-6]将黏膜黑色素瘤 (Mucosal melanoma, MM)分为黑色素瘤,NOS、结节性黑色素瘤及黏膜雀斑样黑色素瘤,有的将促结缔组织增生性黑色素瘤 (DM)列为亚型[6],DM除亲神经性外,S-100与p53阳性,而神经纤维瘤均呈阴性[7]。本文参考文献,就MM研究的最新进展及新版相关内容做一介绍。

阿西替尼对人口腔黏膜黑色素瘤裸鼠移植瘤血管生成拟态的作用探讨

目的:探讨阿西替尼用于口腔黏膜黑色素瘤(oral mucosal melanoma,OMM)治疗的可行性。方法:取病理确诊的口腔黏膜黑色素瘤标本,构建病人源性小鼠移植瘤(patient-derived xenografts,PDX)模型。将PDX动物模型随机分为2组,分别给予阿西替尼和羧甲基纤维素钠处理,用药周期28 d。应用免疫组织化学染色和过碘酸雪夫反应双染法,检测各组肿瘤的血管拟态(vasculogenic mimicry,VM)、EphA2、MMP-2及HIF-1a等蛋白的表达。采用SPSS 23.0软件包对数据进行统计学分析。结果:与空白对照组相比,阿西替尼显著抑制肿瘤生长,VM数量、CD34^+血管数量、EphA2及MMP-2蛋白表达水平显著降低;HIF-1a表达显著高于对照组。结论:阿西替尼对人口腔黏膜黑色素瘤小鼠具有较好的肿瘤生长抑制作用,主要机制可能为抗血管新生和VM形成。

黏膜黑色素瘤基因组学研究进展

黏膜黑色素瘤是一种恶性程度高、预后较差的黑色素瘤亚型,在亚洲地区更为常见。由于缺乏对致癌驱动因子的了解和鉴定,使得黏膜黑色素瘤的治疗存在局限性。近年来随着基因组学研究技术的不断发展,越来越多的研究表明在基因组水平上黏膜黑色素瘤与皮肤黑色素瘤具有明显的不同。黏膜黑色素瘤突变负荷低、基因组不稳定性高,同时在皮肤黑色素瘤中突变率较低的基因如KIT、SF3B1及SPRED1等在黏膜黑色素瘤驱动基因突变中占据主要地位。现对黏膜黑色素瘤基因组学特征的最新研究进展作一综述。