基质硬度通过黏附蛋白调节胚胎干细胞的力学感知和分化命运

目的力学响应是理解基质硬度调节胚胎干细胞(ESCs)肝向分化的关键因素,研究分化初始阶段干细胞通过细胞黏附感知和力学信号传递尤为重要。本研究聚焦于不同硬度的基质条件细胞-细胞和细胞基质黏附对ESCs向定型内胚层(DE)分化的协同调控,并探究了细胞黏附蛋白和关键力信号转导通路。方法使用聚丙烯酰胺水凝胶制备3种不同硬度的基质,建立基于不同硬度的基质条件ESCs(H1细胞系)原位定向分化实验体系。利用牵引力显微镜、组学分析、Ch IPseq、q PCR、免疫荧光及Simple WES等方法,阐明不同硬度基质条件下ESCs向DE细胞分化的力学-生物耦合规律和机理。结果基质硬度是决定ESCs分化命运的关键。较硬基质上,ESCs的分化启动较快,DE细胞标志物表达随分化进度增加,其表达水平与基质硬度呈正相关;较高硬度促进了ESCs在克隆边缘的分化,位于克隆边缘的细胞比位于克隆内部的细胞高表达DE细胞标志物。不同硬度的基质上ESCs向DE细胞分化时,负责细胞-基质黏附的β1 integrin表达增加而细胞间E-cadherin表达减少,且呈现硬度依赖性。激活E-cadherin或阻断β1 integrin均可减少YAP入核使细胞的分化能力降低。结论基质硬度能够影响干细胞分化命运,硬基底更利于ESCs的DE向分化,该过程涉及细胞-细胞间及细胞-基质间黏附蛋白的相互作用进而调节胞内YAP的核移位。

皮肤鳞状细胞癌组织微RNA-103a-2-5p、钙黏附蛋白11表达及其临床意义

目的分析皮肤鳞状细胞癌组织中微RNA-103a-2-5p(miR-103a-2-5p)和钙黏附蛋白11(CDH11)的表达水平,探讨二者在临床研究中的意义。方法选取2017年1月至2019年6月宝鸡市人民医院诊治的98例皮肤鳞状细胞癌病人为研究对象,收集病人术中切除的癌组织及癌旁正常组织。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测组织中miR-103a-2-5p的表达水平。采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测CDH11表达水平。TargetScanHuman网站预测miR-103a-2-5p与CDH11的靶向关系;Pearson相关性分析癌组织中miR-103a-2-5p和CDH11水平的关系;Kaplan-Meier生存曲线分析miR-103a-2-5p、CDH11表达与皮肤鳞状细胞癌病人预后的关系;影响皮肤鳞状细胞癌病人预后的因素采用Cox回归分析;受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析miR-103a-2-5p和CDH11的表达对皮肤鳞状细胞癌的诊断价值。结果与癌旁正常组织[1.03±0.12,(5.06±1.43)µg/L]相比,皮肤鳞状细胞癌组织miR-103a-2-5p表达水平(1.46±0.38)显著升高(P<0.05),CDH11表达水平[(2.96±0.62)µg/L]明显降低(P<0.05);TargetScanHu-man网址预测miR-103a-2-5p与CDH11间存在结合位点;经Pearson相关性分析,miR-103a-2-5p与CDH11水平呈负相关(P<0.05);两者均与病人病理分级、TNM分期、淋巴结转移、侵袭程度相关(P<0.05);miR-103a-2-5p高表达组和CDH11低表达组复发率显著高于miR-103a-2-5p低表达组和CDH11高表达组(P<0.05);TNM分期、淋巴结转移、miR-103a-2-5p是影响病人预后的危险因素(P<0.05),CDH11是影响病人预后的保护因素(P<0.05);miR-103a-2-5p、CDH11二者联合诊断皮肤鳞状细胞癌的ROC曲线下面积(AUC)为0.836,显著优于其各自单独诊断(P=0.018、0.021)。结论皮肤鳞状细胞癌病人miR-103a-2-5p表达水平升高,CDH11表达水平降低,二者均与病人临床病理特征及预后有密切关系,且二者联合可较好的诊断皮肤鳞状细胞癌。

肺炎支原体黏附蛋白P30研究进展

肺炎支原体(Mp)是导致儿童、青少年及老年人上、下呼吸道感染的主要病原体,可导致肺炎、肺内外并发症及呼吸系统后遗症等。Mp黏附蛋白P30与P1蛋白一样在感染宿主细胞中发挥重要作用。本文从P30蛋白的结构和亚型、功能、血清学诊断及疫苗开发等方面介绍P30蛋白的最新研究进展,为Mp感染的诊断及防治研究提供参考。

钙黏附蛋白及降钙素在前列腺癌组织中的表达及意义

目的探讨前列腺癌浸润转移的机制以及上皮间质转化现象的意义。方法采用免疫组化法检测34份前列腺癌组织(观察组)和10份前列腺增生组织(对照组)中上皮性钙黏附蛋白(E-cadherin)、神经性钙黏附蛋白(N-cadherin)及降钙素表达。结果观察组E-cadherin、N-cadherin及降钙素阳性率分别为44.1%、67.6%、44.1%;对照组分别为90.0%、0.0%、10.0%;P均<0.05。E-cadherin表达随肿瘤分化程度的降低而减少,与N-cadherin和降钙素表达呈负相关,N-cadherin与Calcitonin表达呈正相关,P均<0.05。结论 E-cadherin、N-cadherin和降钙素与前列腺癌的发生、发展明显相关,可作为判断前列腺癌恶性进展的指标。

喉鳞癌中扭曲基因、上皮型钙黏附蛋白和神经型钙黏附蛋白基因表达及相关研究

目的研究转录因子扭曲基因(Twist)在喉鳞癌(LSCC)中的表达及其通过对上皮型钙黏附蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏附蛋白(N-cadherin)的作用在判断肿瘤的生物学行为方面的意义。方法采用免疫组织化学SP法及反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测49例喉鳞癌及20例癌旁组织中Twist、E-cadherin和N-cadherin基因的表达情况。结果 Twist在喉癌组织中的阳性表达率(61.22%)明显高于癌旁组织(25%)(P<0.01);Twist在喉癌组织中的mRNA相对表达量(0.93±0.39)明显高于癌旁组织(0.57±0.24)(P<0.01);Twist在喉癌中蛋白及mRNA表达均与淋巴结转移、临床分期相关,而与肿瘤病理学分级、临床分型及年龄无关。在mRNA及蛋白水平,Twist与E-cadherin,N-cadherin与E-cadherin的表达均呈负相关;Twist与N-cadherin均呈正相关。结论 Twist在喉鳞癌中过度表达,可能通过分别上调N-cadherin和下调E-cadherin的表达,进而在喉鳞癌的浸润、转移过程中发挥重要作用。

RNA干扰ABCE1基因后可增加肺癌95-D/NCI-H446细胞的E-钙黏附蛋白表达并减低细胞侵袭力(英文)

研究ABCE1对肺癌(95-D和NCI-H446)细胞的作用.使用RNA干扰技术,抑制ABCE1基因的表达,通过Western blot分析及FACS检测,观察ABCE1基因对E-钙黏附蛋白在95-D/NCI-H446细胞表达的影响;运用transwell侵袭实验,观察M95-D/NCI-H446细胞侵袭力的变化.RNA干扰ABCE1基因后,实验组与对照组相比,在48h后可显著抑制肺癌(95-D和NCI-H446)细胞ABCE1蛋白的表达,同时,伴随E-钙黏附蛋白的高表达,以及细胞侵袭力的降低.ABCE1基因与E-钙黏附蛋白相关,抑制ABCE1基因可增加肺癌95-D/NCI-H446细胞的E-钙黏附蛋白的表达,减低细胞的侵袭力。

厚壳贻贝足丝黏附蛋白mfp-3重组表达及黏附功能分析

厚壳贻贝(Mytilus coruscus)中富含各种黏附蛋白分子,其中贻贝足丝蛋白3(mussel footprotein-3,mfp-3)是贻贝用以与外界基质进行黏附的主要蛋白分子.贻贝足丝中天然的mfp-3的含量低,水溶性差,因此纯化困难.本文以厚壳贻贝足丝蛋白mfp-3的cDNA序列为目的基因,用PCR法扩增Mfp-3基因,并成功构建含有多聚组氨酸标签的重组mfp-3原核表达载体pET-21a/Mfp-3.经IPTG(isopropylthio-β-D-galactoside)诱导表达出重组蛋白,利用亲和层析和反相高效液相色谱分离纯化,获得分子量为9.18 kD的重组蛋白.经酪氨酸酶催化、玻璃包被和石英晶体微天平(quartzcrystal microbalance,QCM)分析.结果表明,重组厚壳贻贝mfp-3蛋白经酪氨酸酶催化后,L-3,4-二羟基苯丙氨酸(即多巴,L-3,4-dihydroxyphenylalanine,DOPA)含量较高并且具有较好的黏附性能.上述研究为开发以mfp-3黏附蛋白为来源的生物粘合剂奠定了良好的基础.

血管黏附蛋白-1、核因子-κB在动脉粥样硬化斑块中的表达及其意义

目的探讨动脉粥样硬化(AS)血管中血管黏附蛋白-1(VAP-1)、核因子-κB(NF-κB)的表达水平,并分析两者的相互关系及其与AS发生发展的关系。方法应用免疫组化方法检测5例AS血管标本和1例正常血管标本中VAP-1、NF-κB的表达水平,分析VAP-1、NF-κB在二者表达中的相关性,并探讨其病理意义。结果VAP-1、NF-κB在AS血管中的阳性表达分别为(18.16±10.91)/HP和(27.12±9.56)/HP;NF-κB在正常血管仅有少量表达或呈未活化的状态,为(8.80±4.44)/HP,VAP-1在正常血管仅外膜轻度着色。VAP-1、NF-κB的表达之间呈明显正相关(r=0.558,P=0.004)。结论VAP-1、NF-κB的表达与AS发生发展密切相关,VAP-1在动脉粥样硬化斑块移行的平滑肌细胞中有大量表达。

肺炎支原体P1黏附蛋白基因的克隆与表达

目的对肺炎支原体(Mycoplasmapneumoniae,Mp)3’端的P1黏附蛋白基因片段进行基因克隆、重组表达、蛋白纯化和表达产物的免疫性分析,为临床诊断试剂和疫苗的研制打下基础。方法应用PCR技术直接从MpFH株染色体DNA中扩增894bp的3’端p1基因片段(p1’),将此基因片段插入表达载体pGEX-6P-1后,转入大肠杆菌BL21扩增后提取重组质粒进行酶切、PCR扩增及核苷酸测序进行鉴定。诱导阳性克隆株表达重组蛋白后纯化,用兔抗Mp多克隆血清通过免疫印迹实验鉴定其免疫反应性。结果插入重组质粒的p1基因片段经测序后,与GenBank中p1基因核苷酸序列(AF290001、AF290002、AF286371、AE000002、M21519、M18639)比较,其同源性为99.66%～100%。氨基酸序列同源性为99.32%～100%。经SDS-PAGE分析,重组蛋白的相对分子量约为59kDa。免疫印迹实验证实重组蛋白是P1黏附蛋白抗原。结论成功构建了pGEX-6P-1-p1’重组质粒并获得表达。此p1’基因重组质粒表达的蛋白具有免疫反应性,有希望成为特异性抗原诊断试剂和疫苗的候选抗原。

E-钙黏附蛋白及其相关蛋白在前列腺癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨上皮性钙黏附蛋白（E—cad）及连环蛋白α（α—cat）、连环蛋白β（β-cat）在前列腺癌的表达及其与病理分级、临床分期的关系。方法采用免疫组织化学方法检测54例前列腺癌标本、25例前列腺增生症组织的E—cad、α—cat、β-cat表达情况。结果标本阳性表达率：前列腺癌明显低于前列腺增生；病理Ⅲ-Ⅳ级前列腺癌明显低于Ⅰ-Ⅱ级前列腺癌；临床Ⅲ～Ⅳ期前列腺癌明显低于Ⅰ～Ⅱ期前列腺癌。结论前列腺癌组织E—cad、α—cat、β-cat的表达减弱可作为评价预后的指标，并为临床决定治疗方案提供参考。

海洋生物黏附蛋白研究进展

海洋附着生物粘合蛋白的研究对于生物粘合剂的开发及海洋防污行业均具有重要的意义。综述了对贻贝足丝蛋白,藤壶胶蛋白以及管栖毛虫管胶蛋白的研究进展。3种不同生物的黏附蛋白具有某些相似性,同时又各有其结构特点,对其蛋白质结构,功能及粘合机制的研究既具有重要的学术意义也具有广阔的应用前景。

血管黏附蛋白-1在糖尿病肾病患者体内水平变化及意义

目的观察2型糖尿病(T2DM)患者血管黏附蛋白-1(VAP-1)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平变化,探讨其与糖尿病肾病(DN)发病关系。方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测DN组患者(40例)、T2DM组患者(39例)血清VAP-1、hs-CRP、生化法检测血糖(Glu)、高效液相比色法检测糖化血红蛋白(GHbA-1)水平并与健康对照组(46例)比较。结果 VAP-1、hs-CRP、Glu、GHbA-1组间差异均有统计学意义(P<0.05),DN组VAP-1、hs-CRP水平高于T2DM组及健康对照组,且T2DM组hs-CRP水平高于健康对照组。T2DM组内VAP-1与hs-CRP、Glu水平呈正相关(r=0.568、0.755;P<0.05、0.01);hs-CRP与Glu、GHbA-1水平呈正相关(r=0.886、0.475;P<0.01、0.05)。Glu与GHbA1呈正相关(r=0.471;P<0.05)。DN组内VAP-1与hs-CRP、GHbA-1、Glu水平呈正相关(r=0.521、0.830、0.454;P<0.05、0.01、0.05),hs-CRP与Glu呈正相关(r=0.690;P<0.01)。结论 T2DM患者Glu及GHbA-1水平变化对VAP-1、hs-CRP升高存在影响,高VAP-1可致微血管病发生并影响患者肾功能,VAP-1拮抗治疗是预防糖尿病并发症的重要方面。

上皮性钙黏附蛋白和β连环素在非小细胞肺癌中的表达及其意义

背景与目的肿瘤的浸润和转移严重威胁着人类生命,正确认识和评估肿瘤的生物学行为有重要的临床意义。上皮性钙黏附蛋白(Ecad)和β连环素(βcat)的异常表达在肿瘤浸润转移过程中发挥着重要作用。本研究的目的是探讨它们在非小细胞肺癌中的表达及其与非小细胞肺癌分型、分化、转移和预后的关系。方法采用免疫组织化学(SP)法,检测129例非小细胞肺癌组织中Ecad及βcat的表达。结果Ecad及βcat在非小细胞肺癌组织中的异常表达率分别为62.0%和65.1%。Ecad在鳞癌中的异常表达率显著高于腺癌(P<0.05);Ecad及βcat在低分化非小细胞肺癌中的异常表达率显著高于中高分化肺癌(P均<0.05);Ecad及βcat在Ⅲ、Ⅳ期非小细胞肺癌中的异常表达率显著高于Ⅰ、Ⅱ期(P均<0.01);伴有淋巴结转移的非小细胞肺癌中Ecad及βcat异常表达率显著高于不伴有淋巴结转移者(P<0.05,P<0.01)。Ecad及βcat正常表达的肺癌患者5年生存率显著高于异常表达的肺癌患者(P<0.05,P<0.01)。结论Ecad及βcat的异常表达与非小细胞肺癌分化、分期、转移密切相关。检测它们的表达对预测患者预后有重要意义。

膀胱尿路上皮癌组织中E盒结合锌指蛋白2、E-钙黏附蛋白的表达变化及其意义

目的观察膀胱尿路上皮癌组织中E盒结合锌指蛋白2(ZEB2)和E-钙黏附蛋白(E-cadherin)的表达变化,并探讨其意义。方法选取57例份膀胱尿路上皮癌患者的肿瘤组织标本为观察组,15例份正常膀胱组织标本为对照组,采用免疫组化SP法检测两组ZEB2和E-cadherin蛋白。分析ZEB2、E-cadherin蛋白表达与膀胱尿路上皮癌临床病理参数的关系及二者表达的相关性。结果观察组、对照组ZEB2蛋白表达阳性率分别为50.9%(29/57)、13.3%(2/15),二者相比,P<0.05。观察组、对照组E-cadherin蛋白表达阳性率分别为33.3%(19/57)、80%(12/15),二者相比,P<0.05。ZEB2蛋白表达与膀胱尿路上皮癌患者TNM分期、是否存在淋巴结转移情况有关,P均<0.05。E-cadherin蛋白表达与膀胱尿路上皮癌患者病理分级、TNM分期有关,P均<0.05。Spearman等级相关性分析表明膀胱尿路上皮癌组织中ZEB2、E-cadherin蛋白的表达呈负相关(r=-0.611,P=0.000)。结论膀胱尿路上皮癌组织中ZEB2蛋白高表达、E-cadherin蛋白在膀胱尿路上皮癌组织中低表达。ZEB2、E-cadherin的异常表达可能与膀胱尿路上皮癌的发生、发展有关。

人成釉细胞瘤中上皮性钙黏附蛋白和β-连环素的表达

目的 :研究成釉细胞瘤 (ameloblastoma ,AB)中上皮性钙黏附蛋白 (E -cad)及 β-连环素 ( β -cat)的表达探讨其生物学意义。方法 :免疫组化 (SP法 ) ,分别对AB72例 (原发 3 4例 ,复发 3 2例 ,恶性 6例 )E -cad、AB5 9例 (原发 2 2例、复发 3 1例 ,恶性 6例 ) β -cat进行了研究。 结果 :在正常口腔粘膜上皮细胞膜有E -cad和β -cat的完整表达 ,在AB中的星网状层及外周层细胞均有E -cad和β -cat的表达。表达强度无明显差异 ,在不同组织及病变中E -cad和 β -cat有不同的表达 (P <0 .0 0 1)伴随AB的复发与恶变 ,E -cad和 β -cat表达强度下降和丢失 ,浆、核的异位表达增加 ,三者相比P <0 .0 5。结论 :E -cad和 β-cat的表达水平与AB的细胞分化程度成负向关系 。

基于生物信息学的植物乳酸杆菌表层黏附蛋白的筛选及鉴定

目的:筛选、鉴定及验证植物乳酸杆菌CGMCC No.1258表层黏附蛋白.方法:用盐酸胍结合超速离心法提取表层膜蛋白,通过HRP标记的黏蛋白作抗体Western blot找到含有黏附蛋白的条带进行质谱分析,生物信息学的TPP软件分析获得可能的蛋白,进行蛋白的分段表达克隆,并对纯化的蛋白用Western blot进行再次鉴定找到靶蛋白.同时将黏蛋白连接的sepharose 4B柱提取菌体黏附蛋白,通过制备的靶蛋白多克隆抗体对菌体黏附蛋白作Western blot进一步验证.结果:表层蛋白提取后,电泳及Western blot结果显示30-33 kDa处可及HRP标记的黏蛋白结合的阳性条带,随后进行质谱及TPP分析获得的蛋白为:(1)A型GTP连接蛋白;(2)丙酮酸氧化酶;(3)细胞分裂激活蛋白;(4)整合膜蛋白;(5)后期能力蛋白.并进行克隆表达及分段表达,并在此后的Western blot鉴定中呈强阳性条带显示靶蛋白是整合膜蛋白的第2段.在应用该靶蛋白制备的多克隆抗体进一步Western blot验证试验中发现同菌体黏附蛋白相作用的强阳性条带.结论:植物乳酸杆菌表层黏附蛋白为整合膜蛋白,并且该蛋白的黏附区域位于其第2段氨基酸序列中.

慢性丙型肝炎患者血清可溶性血管黏附蛋白-1含量与转氨酶、透明质酸水平的相关性分析

目的:观察慢性丙型肝炎(CHC)患者血清可溶性血管黏附蛋白(sVAP-1)、透明质酸(HA)水平变化,分析血清sVAP-1与ALT、AST及HA水平的关系,探讨sVAP-1在CHC发病中的作用。方法:纳入CHC患者88例,根据血清HCV RNA载量将患者分为2组:血清HCV RNA(-)患者30例为CHC1组,血清HCV RNA(+)患者58例为CHC2组;纳入健康人30例作为正常对照组(NC组);ELISA法检测血清sVAP-1、HA水平;全生化仪检测肝功能;实时荧光定量PCR法检测血清HCV RNA载量。采用单因素方差分析进行多组均数间比较,指标间相关性用pearson线性相关分析。结果:CHC1、CHC2和NC组血清sVAP-1水平分别为(112.75±39.00)、(154.24±45.88)和(72.23±35.82)ng/mL(F=38.76,P<0.01);血清HA水平分别为(87.03±24.95)、(132.98±33.54)和(75.07±24.09)ng/mL(F=47.44,P<0.01);随着ALT水平的增高,CHC患者sVAP-1、HA浓度逐渐升高(均P<0.01);血清sVAP-1与ALT、AST及HA水平呈正相关(r=0.711、0.628、0.816,均P<0.001)。结论:血清sVAP-1可能与CHC患者肝脏炎性损伤、肝纤维化的发生密切相关。

上皮性钙黏附蛋白及基质金属蛋白酶-9在皮肤黑色素瘤及色素痣中的表达及意义

目的:探讨皮肤黑色素瘤及色素痣中上皮性钙黏附蛋白(E-cadherin)及基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的表达及意义。方法:应用免疫组织化学Envision二步法检测48例皮肤黑色素瘤及20例色素痣组织中E-cadherin与MMP-9的表达,研究其与黑色素瘤进展转移的关系。结果:E-cadherin及MMP-9在皮肤黑色素瘤与色素痣中表达比较,差异均有统计学意义(P<0.01),E-cadherin和MMP-9的表达与肿瘤浸润深度及淋巴结转移有关(P<0.05),二者在黑色素瘤中的表达呈显著负相关(r=-0.45,P<0.01)。结论:MMP-9及E-cadherin表达与黑色素瘤发生、发展有关,MMP-9上调可能与E-cadherin下调共同促进了黑色素瘤的浸润及淋巴结转移。

血清可溶性上皮型钙黏附蛋白与胃癌侵袭转移的关系

目的:探讨血清可溶性上皮型钙黏附蛋白(soluble epithelial cadherin,sE-cad)的含量变化与胃癌侵袭转移及复发的关系。方法:以ELISA法检测158例胃癌患者及30例正常对照者血清sE-cad与CEA的含量,并检测胃癌患者术后1个月sE-cad与CEA含量的变化。术后随访3年,肿瘤复发患者复查血清sE-cad与CEA含量。分析血清sE-cad含量变化与胃癌病理特征的关系。结果:胃癌组和复发转移组血清sE-cad、CEA含量均显著高于正常对照组(P<0.01)。术后1个月sE-cad含量降至正常范围(P﹥0.05),而CEA含量仍显著高于正常范围(P<0.01)。血清sE-cad含量与肿瘤分化程度、TNM病理分期、有无淋巴结转移、有无远处转移、浸润深度均相关(P<0.01)。结论:血清sE-cad可成为具有一定临床价值的新型胃癌肿瘤标志物,有助于术后复发的监测和预后评价。

上皮性钙黏附蛋白在人角膜上皮中的表达研究

目的研究上皮性钙黏附蛋白(Ecadherin)在人角膜上皮中的分布。方法低钙培养基培养人角膜缘干细胞,并取人角膜中央上皮及角膜边缘上皮组织,分别使用免疫组织化学及免疫细胞化学方法检测Ecadherin在人角膜中央上皮、角膜边缘上皮及低钙培养的人角膜缘干细胞中的分布情况。结果Ecadherin在角膜边缘上皮全层细胞即处于分化阶段的短暂扩充细胞中大量表达,在抑制干细胞分化、促进增殖的低钙培养的人角膜缘干细胞中表达减少,在终末分化细胞即角膜中央上皮细胞中没有表达。结论Ecadherin在处于分化阶段的角膜上皮细胞中有大量的表达。