长链非编码RNA P53、P21在大鼠模型动脉粥样硬化中的应用

本研究旨在深度剖析长链非编码RNA P53和P21在大鼠动脉粥样硬化模型中的作用及应用潜能。择取60只大鼠,随机平均划分为正常组与粥样硬化组,借由构建大鼠动脉粥样硬化模型,综合运用多种实验技术(如免疫组织化学染色、实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法、酶联免疫分析等)及仪器(如彩色多普勒超声诊断仪),对两组中P53和P21的表达状况、调控机制及其与疾病演进的关联予以系统性且全方位的解析。研究成果有望为动脉粥样硬化的诊断与治疗提供新颖且极具价值的靶点与策略。This study aims to deeply analyze the role and application potential of long non-coding RNA P53 and P21 in rat atherosclerosis model. 60 rats were selected and randomly divided into normal group and atherosclerosis group. By constructing rat atherosclerosis model, a variety of experimental techniques (such as immunohistochemistry staining, real-time fluorescence quantitative PCR, protein blotting, enzyme-linked immunosorbent assay, etc.) and instruments (such as color Doppler ultrasound diagnostic instrument) were used to systematically and comprehensively analyze the expression status, regulatory mechanism and relationship between P53 and P21 and disease progression in the two groups. The research results are expected to provide novel and valuable targets and strategies for the diagnosis and treatment of atherosclerosis.

肾虚血瘀证大鼠模型的建立及补肾活血方补肾益精活血化瘀功效研究

目的:通过建立肾虚血瘀证大鼠模型并基于方证相应研究补肾活血方的补肾益精、活血化瘀功效。方法:将48只雌性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、阳性药组、补肾活血方低剂量组(0.72 g/kg)、补肾活血方中剂量组(1.44 g/kg)、补肾活血方高剂量组(2.89 g/kg),每组8只。除正常对照组外,各组从第1天开始,上午灌胃造模药羟基脲溶液(450 mg/kg),连续14 d,从第4天上午开始加用肾上腺素0.3 mg/(kg·d)皮下注射至第14天,制备大鼠肾虚血瘀模型。观察大鼠的一般状态,检测子宫和卵巢脏器指数、卵泡数目、黄体数量,血清雌二醇(E_(2))、卵泡刺激素(FSH)、抑制素B(INHB)、红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)、红细胞比容(HCT)、血栓素(TXB-2)、内皮素(ET-1)的水平,血浆红细胞压积、红细胞聚集指数、红细胞变形指数。结果:与正常对照组比较,模型组子宫指数和卵巢指数均下降(P<0.001),卵泡数目下降(P<0.05),黄体数目上升(P<0.05),血清E_(2)、FSH含量均降低,INHB含量升高(P<0.001),RBC、HGB、HCT含量均降低(P<0.001),血浆红细胞压积、红细胞聚集指数、红细胞变形指数均升高(P<0.01,P<0.001),血清ET-1、TXB-2含量均升高(P<0.001)。与模型组比较,给药组卵巢指数均上升(P<0.01,P<0.001),而子宫指数除补肾活血方高剂量组,其他给药组均上升(P<0.05);给药组卵泡数目均上升(P<0.05,P<0.01,P<0.001),补肾活血方各剂量组黄体数量降低(P<0.05);给药组血清E_(2)、FSH均升高(P<0.01,P<0.001)、INHB含量均降低(P<0.001),补肾活血方各剂量组RBC、HGB、HCT含量均升高,差异有统计学意义;给药组血清ET-1、TXB-2含量均降低(P<0.001),血浆红细胞压积和红细胞聚集指数均降低(P<0.001),红细胞变形指数除了补肾活血方高剂量组,其余给药组均降低(P<0.05)。结论:首次通过灌胃羟基脲结合皮下注射肾上腺素建立大鼠肾虚血瘀证模型,补肾活血方可以改善卵巢功能和激素水平,具有补肾益精、补血功效,且通过改变血液流变学的异常,改善内皮细胞功能,降低血栓素,从而达到活血化瘀之功。

两种常用压力性损伤大鼠模型的建立方法与效果评价

目的通过比较两种不同的压力性损伤大鼠模型的建立方法,探索更合适的压力性损伤动物模型制备方法。方法将18只雄性SD大鼠随机分为对照组(n=6)、模型A组(n=6)和模型B组(n=6)。对照组对模拟造模部位脱毛后进行碘伏处理。模型A组采用单纯深部组织异物植入法进行纵向加压;模型B组使用磁铁加压法进行横向加压,记录制备各组大鼠产生压力性损伤模型的全程时间及各分期时间,观察大鼠的一般情况,并进行成模率、死亡率、感染率的比较。结果肉眼观察到模型A组和模型B组均逐渐出现受压部位红肿、溃烂,出现渗血、渗液并伴有坏死现象。模型A组与模型B组产生压力性损伤全程时间比较:两组之间差异有统计学意义(P<0.05)。模型A组与模型B组产生压力性损伤各期时间比较:Ⅰ期两组之间差异无统计学意义(P>0.05);Ⅱ期两组之间差异有统计学意义(P<0.05);Ⅲ期两组之间差异有统计学意义(P<0.05);Ⅳ期两组之间差异有统计学意义(P<0.05)。对照组大鼠精神、运动评分与模型A组、模型B组比较有显著性差异(P<0.05)。模型A组大鼠与模型B组大鼠一般状态有明显区别,均出现毛色黯淡、活跃度下降的现象。模型A组大鼠与模型B组成模率为100%。模型A组死亡率、感染率高于模型B组,分别为33.34%、16.70%。结论两种方式均可成功制备压力性损伤Ⅳ期模型,二者既有共性也有各自特点,磁铁加压法用时短,大鼠一般状态良好,死亡率和感染率低,适合短时间内干预性研究;单纯深部组织异物植入法用时长,需要大鼠有一定耐受性,感染率高,死亡率高,可运用于长期的观察类压力性损伤大鼠的研究。

三种心力衰竭大鼠模型的病理差异及中医证候评价

目的对多柔比星(doxorubicin,DOX)、高血压和异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)诱导的心力衰竭(以下简称“心衰”)大鼠模型在造模过程、病理特点等方面进行比较,并对其中医证候进行评价,以助研究者选择适当的模型。方法30只雄性Dahl盐敏感性大鼠为高血压心衰模型组(8%NaCl高盐饲料喂养,连续喂养20周);60只雄性SD大鼠随机均分为DOX心衰模型组(DOX1.5 mg/kg,每周2次,腹腔注射,共7周)和ISO心衰模型组[ISO 5 mg/(kg·d),连续7 d,腹腔注射,再继续饲养3周];另取10只雄性SD大鼠作为空白对照组。对大鼠心脏、肾脏、肝脏进行HE染色,对心肌细胞进行Masson染色;用ELISA法检测大鼠血清N末端脑钠肽前体(N-terminal pro-brain natriuretic peptide,NT-proBNP)水平;用超声心动图评估大鼠的心脏功能;结合自然状态和一般体征探讨3种心衰大鼠模型的中医证型。结果与空白对照组比较,DOX心衰模型组大鼠活动量减少、体温降低、水肿明显;高血压心衰模型组大鼠精神不振、尿量减少并且水肿;ISO心衰模型组大鼠活动减少、体温下降、大便稀软;DOX心衰模型组和高血压心衰模型组的肾脏均有较严重的病理损伤,ISO心衰模型组仅有心脏损伤;3种心衰模型组血清NT-proBNP均增加(P<0.05)、左室射血分数(left ventricular ejection fractions,LVEF)和左室短轴缩短率(left ventricular fraction shortening,LVFS)均降低(P<0.05)。DOX心衰模型组和ISO心衰模型组中医证候为阳虚证,高血压心衰模型组中医证候为气阴两虚证。结论根据大鼠的宏观表现和微观指标,3种模型病理有较大差异,应慎重选择;DOX和ISO心衰模型可能为阳虚证,高血压心衰模型可能为气阴两虚证。

醒神解郁汤对卒中后抑郁大鼠模型IL-33、IL^(-18)、IL^(-1β)影响的实验研究

目的研究醒神解郁汤对卒中后抑郁(PSD)大鼠炎症因子白介素(IL)-33、IL^(-18)、IL^(-1β)水平的影响,探究其治疗PSD的可能机制。方法从50只雄性SD大鼠中随机抽取8只大鼠为假手术组,其余大鼠建立PSD模型。将造模成功并符合神经学评分标准的大鼠随机分为PSD组、醒神解郁汤低剂量组、醒神解郁汤高剂量组及舍曲林组,每组8只。醒神解郁汤低、高剂量组与舍曲林组在PSD模型建立后分别给予醒神解郁汤低剂量(18.72 g·kg^(-1)·d^(-1))、高剂量(37.44 g·kg^(-1)·d^(-1))与舍曲林(5.142 mg·kg^(-1)·d^(-1))灌胃,假手术组、PSD组在相同时间段以等体积质量分数为0.9%的氯化钠溶液灌胃,每天1次,连续14 d。治疗前后记录大鼠体质量、强迫游泳静止不动时间,测定糖水消耗水平,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测大鼠血清IL-33、IL^(-18)、IL^(-1β)水平,采用Western blot法检测大鼠患侧海马体IL-33、IL^(-18)、IL^(-1β)蛋白含量。结果与假手术组比较,PSD组大鼠体质量明显减少,强迫游泳静止不动时间增长,糖水消耗量下降,血清及患侧海马体IL-33水平明显降低,IL^(-18)及IL^(-1β)水平显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与PSD组比较,醒神解郁汤低剂量组、高剂量组大鼠体质量明显增加,强迫游泳静止不动时间缩短,糖水消耗量上升,血清及患侧海马体IL-33水平显著升高,IL^(-18)及IL^(-1β)水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论醒神解郁汤可通过调节炎症因子IL-33、IL^(-18)、IL^(-1β)水平,改善PSD模型大鼠神经功能状态及抑郁样行为。

基于大鼠模型的磁压榨吻合与机械压榨吻合的对比实验研究

目的基于大鼠回肠侧侧吻合模型进行磁压榨吻合与机械压榨吻合的对比实验研究,比较2种吻合方式的效果差异。方法将40只大鼠随机平均分为实验组与对照组进行回肠侧侧吻合。实验组使用磁压榨吻合装置(Magnetic Compression Device,MCD),对照组使用机械压榨吻合装置(Simple Compression Device,SCD),吻合装置直径均为6m m。结果在手术时间方面,MCD组耗时显著少于SCD组(P<0.001),这表明MCD在手术操作性上较SCD具有一定优势;MCD组与SCD组在存活率(P=0.548>0.05)、吻合口形成时间(P=0.062>0.05)、吻合口大小(P=0.754>0.05)、爆破压(P=0.533>0.05)、吻合口抗张强度(P=0.336>0.05)方面差异均无统计学意义。结论磁压榨吻合与机械压榨吻合均安全、可靠,且在磁压榨吻合过程中,磁力起主导作用。

基于病证结合特点构建寒热错杂型溃疡性结肠炎大鼠模型的实验研究

目的以中医病证结合特点为依据,建立寒热错杂型溃疡性结肠炎(UC)大鼠模型。方法48只SPF级SD大鼠被随机分为空白组、大承气汤组、模型1~4组,每组8只。空白组大鼠正常饲养;大承气汤组以及各模型组大鼠均给予大承气汤灌胃10 d诱导虚寒证,随后采用不同剂量、浓度的2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)与乙醇的混合液(1∶1)进行UC造模(模型1~4组),建立寒热错杂型UC大鼠模型。考察模型组大鼠的一般状态、寒热错杂表现[体温、粪便含水量、三碘甲状腺原氨酸(T3)及甲状腺素(T4)水平]和UC模型评价指标[疾病活动指数(DAI)、肠质量指数、结肠损伤程度、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-4、IL-10、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、髓过氧化物酶(MPO)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平],评价上述模型的有效性。结果与空白组相比,大承气汤组大鼠灌胃10 d后体温显著下降(P<0.01)、粪便含水量显著升高(P<0.01)、血清中T3和T4水平显著下降(P<0.01),提示虚寒证模型成功建立。再继续采用TNBS/乙醇混合液造模后,与大承气汤组相比,模型1~4组大鼠T_(3)和T_(4)水平显著升高(P<0.01),提示寒热错杂模型成功建立。与空白组相比,各模型组大鼠DAI评分、结肠组织形态损伤评分显著升高(P<0.05、P<0.01);其中,模型1组(TNBS剂量70 mg/kg,乙醇体积分数50%)大鼠促炎症细胞因子(IL-1β、TNF-α、IL-6)水平与MPO水平显著升高(P<0.01),抗炎细胞因子(IL-4、IL-10)水平显著降低(P<0.01),提示寒热错杂型UC模型成功建立,且效果最优。结论采用大承气汤诱导虚寒证后,再以TNBS/乙醇联用诱导UC模型,建立了寒热错杂型UC大鼠模型,该模型可广泛应用于相关疾病或药物的实验研究,对于深入了解UC的病理机制、评估中药及其他干预手段的疗效、提高UC精准化治疗的效果具有重要意义。

非酒精性脂肪肝基因改造小鼠模型的研究进展

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是由除酒精以外的肝损伤因素导致,以肝细胞脂肪变性为主要特征,与胰岛素抵抗和2型糖尿病密切相关的临床综合征,能诱发涉及多个系统的并发症。近些年,随着生活方式的改变,我国NAFLD发病率迅速上升,因此易操作、周期短且符合人类发病机制的动物模型一直为国内外研究热点。基因改造小鼠因缺乏重要的受体配体或基因过表达导致内分泌紊乱,易发展成以肥胖、胰岛素抵抗等为特点的代谢紊乱综合征,方便建立符合人类NAFLD特征的小鼠模型。本文基于基因改造的NAFLD小鼠模型进行综述,为后续NAFLD研究提供参考。

一种新的射血分数保留型心力衰竭大鼠模型构建方法

目的:优化射血分数保留型心力衰竭(heart failure with preserved ejection fraction,HFpEF)大鼠模型构建方法,为研究HFpEF提供实验模型。方法:10周龄,Zucker糖尿病脂肪/自发性高血压心力衰竭肥胖(obese zucker diabetic fatty/spontaneously hypertensive heart failure F1 hybrid,ZSF1-obese)大鼠和ZSF1瘦型(ZSF1-lean)大鼠分为三组,分别为实验组[(ZSF1-obese大鼠,饮水中给予一氧化氮合酶抑制剂(inhibition of constitutive nitric oxide synthase,L-NAME),n=6]、经典模型组(ZSF1-obese大鼠,普通水,n=3)、空白对照组(ZSF1-lean大鼠,普通水,n=4)。三组均以普通饲料饲养。实验组给药10周后采集三组的血压、葡萄糖耐量、心脏超声、心脏磁共振成像、生化指标数据。结果:实验组在给药10周后收缩压和舒张压分别达到(155.0±6.6)mmHg(1mmHg=0.133kPa)和(119.4±10.9)mmHg,比起经典模型组明显升高(分别为P=0.0001和P=0.0143),达到高血压标准,而经典模型组和对照组均没有达到高血压标准。心脏超声结果显示三者均呈现射血分数保留(均P>0.05),实验组和经典模型组有相似的舒张功能障碍、心肌肥厚和糖耐量受损(P>0.05)。生化指标也显示实验组和经典模型组存在相似的脂肪肝、肾功能减退。结论:与传统的ZSF1大鼠直接作为HFpEF模型相比,联合L-NAME的ZSF1大鼠作为HFpEF模型能更全面呈现HFpEF的疾病特征,包括高血压,舒张功能障碍、糖耐量受损等表型。

沉默GATA4对多囊卵巢综合征大鼠模型卵巢颗粒细胞的影响

目的:探讨沉默GATA结合蛋白4(GATA-binding protein 4,GATA4)表达对多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)大鼠模型卵巢颗粒细胞增殖与凋亡、分泌功能及炎症反应的影响及相关机制。方法:制备PCOS模型,分离培养PCOS模型大鼠卵巢颗粒细胞并将其分为对照组(Ctrl组)、siRNA-NC组、siRNA-GATA4组,检测转染后三组卵巢颗粒细胞细胞中GATA4表达和细胞增殖与凋亡情况,采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞上清液中激素和炎症因子含量,Western Blotting法检测细胞中活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved caspase-3)、磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)、磷酸化的丝氨酸苏氨酸激酶(p-serine threonine kinase,p-AKT)蛋白表达。结果:siRNA-GATA4组卵巢颗粒细胞增殖率、GATA4、PI3K、p-AKT蛋白表达量较Ctrl组明显减少,细胞凋亡率、cleaved caspase-3蛋白表达量、细胞上清液中雌二醇(estradiol,E2)、黄体生成素(luteinizing hormone,LH)、睾酮(testosterone,T)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、IL-1β及肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平较Ctrl组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),siRNA-NC组与Ctrl组卵巢颗粒细胞增殖率、细胞凋亡率、GATA4、cleaved caspase-3、E2、LH、T、IL-6、IL-1β、TNF-α、PI3K及p-AKT比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:沉默PCOS大鼠模型中GATA4表达,可抑制卵巢颗粒细胞增殖,促进其凋亡,加剧激素分泌异常和炎症反应,其机制可能与下调PI3K/AKT信号通路有关。

非肥胖型多囊卵巢综合征大鼠模型的建立及评价研究

目的建立符合临床特征的、稳定的非肥胖型多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)大鼠模型。方法采用脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone,DHEA)皮下注射法建立PCOS大鼠模型。将3周龄雌性SD大鼠分为正常组、6 mg/kg DHEA造模组、60 mg/kg DHEA造模组,造模组每日按照相应剂量进行DHEA皮下注射,正常组每日给予甘油皮下注射,连续21 d,以卵巢组织病理学为金标准进行模型评价,明确DHEA致PCOS大鼠模型的最佳造模剂量。在此基础上,选取DHEA最佳造模剂量,分别设立停止造模组和继续造模组,进行28 d的模型观察,考察模型维持情况,其中停止造模组不再继续给予DHEA,继续造模模型组每48 h给予60 mg/kg DHEA皮下注射。评价指标包含大鼠体重、动情周期、空腹血糖和血清胰岛素、卵巢组织病理形态和血清性激素水平。结果(1)与正常组相比,6 mg/kg DHEA造模组与60 mg/kg DHEA造模组体重无显著性差异,但二者动情周期均失去规律性,卵巢组织中可见较多囊状扩张的大卵泡,少见成熟卵泡,颗粒细胞层数减少且排列稀疏无序,黄体数量减少;且60 mg/kg DHEA造模组血清T、E_(2)水平显著升高(P<0.05)。(2)停止造模组:模型组(A_(2)组)与正常组(A1组)相比,两周后恢复规律的动情周期,卵巢组织中可见各级生长卵泡和黄体,囊性卵泡减少,颗粒细胞层数增加,可见成熟卵泡,卵母细胞局部形态完整,且E_(2)、AMH水平降低(P<0.05)。(3)继续造模组:模型组(B2组)与正常组(B1组)相比,长期处于动情后期,卵巢组织中可见较多囊状扩张的大卵泡,少见成熟卵泡,颗粒细胞层数减少且排列稀疏无序,黄体数量明显减少,血清LH、LH/FSH、T水平升高(P<0.05)。结论连续21 d皮下注射60 mg/kg DHEA,能够成功构建符合临床特征的非肥胖型PCOS大鼠模型,在此基础上每48 h给予60 mg/kg DHEA皮下注射能够保持模型的稳定性。

精胺后处理上调线粒体自噬保护脑缺血/再灌注损伤小鼠模型的分子机制研究

目的 探讨精胺后处理保护脑缺血/再灌注损伤(I/RI)小鼠模型的疗效及其分子机制。方法 60只6~8 w龄C57BL小鼠随机分为6组(每组10只):(1)对照(Control)组;(2)假手术(Sham)组;(3)模型(MCAO)组;(4)模型+精胺治疗(MCAO+Spm)组;(5)MCAO+Spm+Adv shRNA-Drp-1组;(6)MCAO+Spm+Adv shRNA-NT组。构建大脑中动脉闭塞(MCAO)小鼠模型。TTC(2,3,5-氯化三苯基四氮唑)染色脑切片测定脑梗死体积。尼氏(Nissl)染色脑组织切片测定神经元死亡情况。ELISA测定活性氧自由基(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平。腺病毒转染敲低脑组织动态相关蛋白-1 (Drp-1)。Western blot测定脑组织Drp-1、B淋巴细胞瘤基因-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤基因-2(Bcl-2)、PTEN诱导激酶1(PINK1)和自噬相关蛋白(Parkin-1)的表达情况。结果 与Sham组相比,MCAO组脑梗死体积所占百分比升高(P<0.05),Nissl阳性细胞所占百分比降低(P<0.05),ROS和MDA水平升高(P<0.05),SOD水平降低(P<0.05),Drp-1、Bax、PINK1和Parkin-1的表达水平升高(P <0.05),Bcl-2表达水平降低(P<0.05)。与MCAO组相比,MCAO+Spm组脑梗死体积所占百分比降低(P<0.05),Nissl阳性细胞所占百分比增多(P <0.05),ROS和MDA水平降低(P <0.05),SOD水平升高(P <0.05),Drp-1、Bcl-2、PINK1和Parkin-1的表达水平升高(P<0.05),Bax的表达水平降低(P<0.05)。与MCAO+Spm组相比,MCAO+Spm+Adv shRNA-Drp-1组Drp-1和Bax表达水平降低,Bcl-2、PINK1和Parkin-1的表达水平升高(P <0.05)。结论 Spm后处理通过Drp-1上调线粒体自噬发挥保护I/RI损伤小鼠模型的功效。

神经干细胞来源的外泌体促进线粒体在阿尔茨海默病小鼠模型中的生物发生和恢复异常的蛋白分布

线粒体功能障碍是阿尔茨海默氏病的一个标志。我们之前的研究表明,神经干细胞来源的细胞外囊泡改善了APP/PS1小鼠皮质的线粒体功能。因为阿尔茨海默氏症会影响整个大脑,所以需要进一步的研究来阐明整个大脑中线粒体代谢的改变。在这里,我们研究了神经干细胞来源的外泌体治疗后多个重要的线粒体生物发生相关细胞因子在多个脑区域的表达,并结合全脑清除.

对不同方式注射碘酸钠年龄相关性黄斑变性大鼠模型的新见解

年龄相关性黄斑变性(age-related macular degeneration,AMD)是一种对中老年人视力产生进行性不可逆性损伤的眼科常见病、多发病。目前,不仅AMD的发病机制尚未完全清楚,而且并无有效治愈之法。为此研究人员建立了多种AMD动物模型用于研究,其中应用最为广泛的就是碘酸钠(NaIO_(3))大鼠模型。而通过不同注射方式诱导的NaIO_(3)大鼠模型会存在一定的差异性。因此本文介绍了NaIO_(3)在大鼠视网膜产生类似于AMD样损伤的原因和表现并进一步对中外学者通过不同注射方式建立的AMD大鼠模型进行综述,以期为AMD的研究提供新的见解。

磁共振靶向成像检测心肌纤维化大鼠模型中TGF-β1表达的实验研究

目的构建载转化生长因子-β1(transforming growth factor beta-1,TGF-β1)的超小超顺磁性氧化铁(ultrasmall supperparamagnetic iron oxide,USPIO)靶向探针(USPIO-anti-TGF-β1),探究其表征及磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)靶向检测大鼠心肌纤维化(myocardial fibrosis,MF)模型中TGF-β1表达的可行性。材料与方法选择40只雄性SD大鼠,其中30只采用异丙肾上腺素(isoprenaline,ISO)皮下注射法建立MF模型,另外10只作为健康对照组。通过超声评估大鼠模型建立情况。将造模成功的30只大鼠随机分为实验组、单纯对照组及空白对照组,每组10只;构建USPIO-anti-TGF-β1靶向探针,通过尾静脉注入实验组大鼠体内,单纯对照组及空白对照组分别注入相同剂量的USPIO和生理盐水,并于注射12 h后行T2序列扫描。扫描完成后取大鼠心肌标本行病理学分析。采用独立样本t检验对给药前后的MRI信号强度变化进行分析。结果MRI示实验组给药前心肌信号尚均匀,给药12 h后心内膜下心肌可见信号减低区,二者相对信号强度具有明显差异(0.72±0.12 vs.0.62±0.10,P<0.01);单纯对照组与空白对照组给药前后心肌信号未见明显减低(0.73±0.12 vs.0.71±0.12,P=0.81;0.70±0.13 vs.0.74±0.13,P=0.52)。普鲁士蓝染色显示实验组MF区域与给药后MRI所示信号减低区相符合,免疫组化可见MF区域TGF-β1的阳性表达,普鲁士蓝染色显示心肌细胞中有大量铁颗粒的沉积,证实USPIO-anti-TGF-β1靶向探针的存在。结论通过USPIO-anti-TGF-β1靶向探针进行MRI在体检测MF大鼠模型中TGF-β1的表达可行,为临床监测TGF-β1的表达及抗MF治疗方案的选择和疗效评估提供了实验依据。

参附注射液基于TLRs信号通路对慢性心力衰竭大鼠模型保护作用的机制研究

目的探讨参附注射液对慢性心力衰竭大鼠模型的保护作用以及Toll-like受体(TLRs)信号通路在其中的作用。方法构建大鼠心衰模型,并随机将40只大鼠分为对照组、参附注射液低剂量组、参附注射液高剂量组和模型组。使用心肌细胞分别进行了实时定量PCR和Westernblot分析,检测Toll-like受体4(TLR4)、髓样分化因子(MyD88)、肿瘤坏死因子受体相关分子6(TRAF6)的mRNA和蛋白表达。结果参附注射液高剂量组中,TLR4、MyD88和TRAF6的mRNA表达水平明显下降(低剂量组降低不显著)。参附注射液高剂量组中,TLR4、MyD88、TRAF6蛋白表达水平显著下降(低剂量组降低不显著)。结论参附注射液在慢性心力衰竭大鼠模型中有保护心肌作用,它可能是通过抑制炎症反应以及心肌纤维化来实现的,其机制与TLRs信号路径有关。

制备神经源性膀胱大鼠模型的术前准备和术后护理

目的概述脊髓完全横断后神经源性膀胱大鼠模型术前准备中需要注意的事项及术后护理心得。方法购买雌性SD大鼠35只,横断S3-S4脊髓节段,建立逼尿肌无反射型神经源性膀胱大鼠模型,在术前、术后积极实施相关护理措施。重点涉及手术前后的常规护理、术后尿道感染等并发症的防治及饲养管理等方面的内容。结果所有大鼠均在S3-S4脊髓节段横断脊髓,术后成活率为82%(包含1只膀胱破裂和2只互相撕咬,3只大鼠死于脓尿后败血症,术后48 h成活率为100%)。结论成熟的手术方法和熟练的手术操作对模型制作固然重要,精心的护理和完善的准备却是保障动物生命安全以及术后迅速恢复的关键环节。

6-羟基多巴胺损毁单侧内侧前脑束和单侧纹状体的帕金森病大鼠模型早期和晚期行为学

目的比较6-羟基多巴胺损毁单侧内侧前脑束(MFB)和单侧纹状体的帕金森病大鼠模型在不同时期行为学的差异。方法将62只成年雄性SD大鼠随机分为4组:1位点纹状体损毁模型组(n=18)、4位点纹状体损毁模型组(n=18)、MFB损毁模型组(n=18)和假手术组(n=8)。通过甲基苯丙胺诱导的旋转实验、溴隐亭诱导的旋转实验和步行实验比较损伤后早期(4周后)和晚期(6个月后)大鼠行为学的变化,并通过免疫组织化学和结合分析实验计算病灶侧阳性多巴胺神经元脱失率和多巴胺转运蛋白、D2受体结合率。结果甲基苯丙胺诱发1位点纹状体损毁模型组、4位点纹状体损毁模型组和MFB损毁模型组大鼠均产生朝向病灶同侧的旋转;溴隐亭诱发纹状体损毁模型产生朝向病灶同侧的旋转,而MFB损毁模型组则产生朝向病灶对侧的旋转。成模早期和晚期不同模型组组间比较以及同一模型组中成模早期和晚期比较,旋转圈数的差异均无统计学意义。步行实验结果显示,同一模型组中,成模早期和晚期病侧肢体运动启动时间明显长于健侧肢体(P<0.001),病侧肢体步长长度明显短于健侧肢体(P<0.001),病侧肢体前后步伐调整数明显少于健侧肢体(P<0.001);同一模型组中,病侧肢体成模早期与晚期、健侧肢体成模早期与晚期比较,上述结果均无统计学差异。而多巴胺神经元脱失率、多巴胺转运蛋白及D2受体结合率在不同时期的3种模型病变侧呈现出与行为学实验结果不一致的动态变化过程。结论帕金森病大鼠模型的行为学活动并非仅由某些单一多巴胺能参数决定,而是由整个多巴胺能系统的综合效应控制。

3种方法建立阳虚型慢传输型便秘大鼠模型的比较研究

目的采用病证结合评价方法对比研究3种阳虚型STC大鼠模型建立方法,为中医药防治提供理想的实验动物模型。方法64只SD大鼠,分为空白组和模型组,采用盐酸洛哌丁胺结合0℃冰水复合灌胃法(M-1组)、盐酸洛哌丁胺联合大黄水煎液灌胃法(M-2组)、白醋与0℃冰水交替灌胃+盐酸洛哌丁胺灌胃法(M-3组),各16只,分别建立阳虚型STC大鼠模型,空白组(16只)给予等体积蒸馏水灌胃,造模期间观察大鼠一般情况,每周固定时间测定肛温、饮食量、自主活动量、粪便Bristol评分及含水率,模型建立后检测各组大鼠首粒黑便排出时间、肠道推进率,HE染色法观察大鼠结肠病理改变,PAS染色检测大鼠结肠黏液变化,ELISA法、免疫组化法检测结肠5-HT、VIP、SP含量及蛋白表达。结果造模后各模型组大鼠均出现精神萎靡、倦怠懒动、弓背蜷缩等表现。造模期间各模型组大鼠出现死亡,死亡率依次为M-3组>M-2组>M-1组。与空白组相比,M-1组在造模第3周进食量、自主运动量明显降低(P<0.01),造模第4周肛温、粪便含水率明显降低(P<0.01),造模第5周粪便Bristol评分明显降低(P<0.01);M-2组在造模第3周肛温明显下降(P<0.01),进食量、自主运动量明显降低(P<0.01),第6周粪便Bristol评分、含水率明显降低(P<0.01);M-3组在造模第1周自主运动量明显降低(P<0.01),造模第2周进食量明显降低(P<0.01),造模第4周肛温、粪便Bristol评分、粪便含水率明显下降(P<0.01);HE染色显示各模型组大鼠结肠无明显病理改变;与空白组相比,PAS染色发现各模型组大鼠结肠黏液层厚度明显减少,排序依次为M-3<M-1<M-2,同时各造模组大鼠首粒黑便排出时间增加、肠道推进率显著降低(P<0.01),结肠5-HT、SP含量及蛋白表达显著下降(P<0.01),M-1组结肠VIP含量及蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论3种造模方法均能建立阳虚型STC大鼠模型,但以盐酸洛哌丁胺联合0℃冰水灌胃法建立的大鼠模型具有死亡率低、安全性较好、阳虚证候表现稳定,大便性状改变明显,肠道动力障碍病理变化显著的优点,是阳虚型STC发病机制及相关中医药药物作用实验研究的理想模型。

6-羟基多巴胺损毁单侧内侧前脑束与单侧纹状体大鼠模型的病变早期比较

目的 比较6-羟基多巴胺(6-OHDA)损毁的单侧内侧前脑束(MFB)与单侧纹状体大鼠模型成模4周后多巴胺(DA)系统中神经递质功能变化。方法 选择62只成年雄性Sprague-Dawley大鼠,随机分为4组:1位点模型组(n=18,1个位点纹状体损毁)、4位点模型组(n=18,4个位点纹状体损毁)、MFB模型组(n=18,MFB损毁)和假手术对照组(n=8)。运用免疫组织化学酪氨酸羟化酶(TH)染色方法统计阳性DA神经元脱失率,运用体外放射配体-受体结合实验、行为学实验和小动物正电子发射断层扫描(PET)检测四组模型DA转运蛋白(DAT)和D2受体的放射活性结合率的变化。结果 TH免疫组化染色结果显示,1、4位点模型组和MFB模型组病灶侧TH阳性细胞脱失率分别为19.1%、 84.7%、97.1%,提示模型制作成功。DAT和D2受体检测结果显示:与假手术对照组相比,1、4位点模型组及MFB模型组病侧DAT放射活性结合率均下降(P<0.05、P<0.05和P<0.01),且4位点模型组的下降程度明显高于1位点模型组(P<0.05),MFB模型组的下降程度明显高于1、4位点模型组(P<0.01);与假手术对照组相比,1、4位点模型组病侧D2受体放射活性结合率均下降(P<0.05),MFB模型组病侧D2受体放射活性结合率升高(P<0.05)而1、4位点模型组间的下降程度比较无统计学差异。DAT和D2受体在假手术对照组大鼠病侧与健侧的分布无差异。甲基苯丙胺可诱导3个模型组产生朝向病灶同侧的旋转,但3个模型组之间的旋转差异无统计学意义;溴隐亭可诱发1、4位点模型组产生朝向病灶同侧的旋转,但引发MFB模型组朝向病灶对侧的旋转,1、4位点模型组之间的旋转差异无统计学意义;步行实验结果显示,3个模型组病侧肢体运动启动时间明显长于健侧、步长长度明显短于健侧、步伐调整数明显少于健侧(P<0.001),但3个模型组间病侧的启动时间、步长长度和步伐调整数比较后差异无统计学意义。结论 纹状体和MFB两种单侧损毁模型DA神经递质功能及行为学方面表现出不同的病理生理过程。MFB损毁模型类似于人类原发性帕金森病,而纹状体损毁模型则类似于某些帕金森综合征。