齐留通对胃癌SGC-7901细胞生长的影响

目的:观察5-脂氧合酶抑制剂齐留通对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡的影响,初步探讨齐留通影响胃癌细胞生长的机制。方法:MTT法测定齐留通对胃癌SGC-7901细胞增殖的影响;TUNEL染色法计数细胞凋亡率;RT-PCR和免疫细胞化学检测齐留通处理前后SGC-7901细胞Bax、Bcl-2和caspase-3 mRNA和其蛋白表达的改变。结果:齐留通以时间剂量依赖的方式抑制SGC-7901细胞生长;TUNEL染色法显示6.2×10-5mol/L、3.1×10-5mol/L齐留通作用72h后细胞凋亡率为19.6%±6.3%和28.9%±2.3%,均显著高于对照组0.6%±0.1%(P<0.01);RT-PCR和免疫细胞化学显示6.2×10-5mol/L齐留通作用胃癌SGC-7901细胞72h后,可显著促进Bax、caspase-3 mRNA和其蛋白的表达(P<0.05),抑制Bcl-2 mRNA及其蛋白的表达(P<0.05)。结论:齐留通能抑制胃癌SGC-7901细胞增殖,并通过促进Bax和caspase-3的表达,抑制Bcl-2表达,诱导其凋亡,从而抑制胃癌SGC-7901细胞生长。

齐留通片在健康人体内的药动学

目的研究齐留通在中国健康人体内单次和多次给药的药动学。方法12名健康志愿者,单次口服齐留通片0.6g或多次口服齐留通片0.6g·次^(-1),每曰4次,连续5d,在设计的时间点取静脉血。采用HPLC-UV法测定血药浓度,研究齐留通的药动学。结果单次口服齐留通片0.6g,平均血药浓度-时间变化规律符合单室模型,主要药动学参数如下:c_(max)为(6.6±s 2.0)mg·L^(-1);t_(max)为(1.9±0.3)h;t_(1/2)为(3.5±1.8)h;AUC_(0-6)为(19±6)mg·h·L^(-1),AUC_(0～12)为(25±8)mg·h·L^(-1);AUC_(0-∞)为(27±10)mg·h·L^(-1);CL/F为(26±8),L·h^(-1)。除t_(1/2)和t_(max)外,其余主要药动学参数在性别间有显著差异(P<0.05)。连续口服齐留通0.6g达到稳态后,主要药动学参数如下:c_(max)^(ss)为(7.4±1.6)mg·L^(-1);c_(min)^(ss)为(2.2±1.0)mg·L^(-1);c_(av)^(ss)为(3.5±1.0)mg·L^(-1);t_(max)^(ss)为(1.2±0.3)h;AUC_(0-6)^(ss)为(21±6)mg·h·L^(-1);AUC_(0-12)^(ss)为(26±8)mg·h·L^(-1);AUC_(0-x)^(ss)为(28±10)mg·h·L^(-1);t_(1/2)为(3.1±1.1)h;DF为(1.5±0.4)。连续给药5d,c_(max)、AUC、t_(1/2)等无明显增加(P>0.05),性别间除t_(max)^(ss)、t_(1/2)和DF外,主要药动学参数有显著差异(P<0.05),女性明显高于男性。结论齐留通片在人体内吸收迅速,分布广泛。中国健康志愿者体内的药动学参数在性别间有明显差异,多次给药后体内无明显蓄积现象。

齐留通减轻小鼠小胶质细胞介导的鱼藤酮对PC12细胞的毒性作用

目的：观察5-脂氧酶选择性抑制剂齐留通对小胶质细胞介导的鱼藤酮神经毒性的影响.方法：以鱼藤酮预处理的小鼠小胶质BV2细胞条件培养液培养PC12细胞,通过MTT法和乳酸脱氢酶（LDH）释放分析PC12细胞损伤和活性变化,Hoechst/碘化丙啶荧光双染检测PC12细胞死亡,并评估齐留通对小胶质细胞介导细胞毒性的作用.结果：1、3、10 nmol/L鱼藤酮对PC12细胞无直接毒性,但是其预处理的BV2细胞条件培养液间接诱导PC12细胞形态改变、活性下降,LDH释放和细胞死亡明显增加;0.01、1μmol/L齐留通能有效减轻小胶质细胞介导的鱼藤酮细胞毒性作用.结论：5-脂氧酶抑制剂齐留通能减轻小胶质细胞介导的鱼藤酮神经毒性,提示5-脂氧酶通路在小胶质细胞炎症诱导的神经细胞死亡中有重要作用.

齐留通对胰腺癌细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨齐留通阻断5-脂氧合酶(5-LOX)代谢途径对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法将人胰腺癌细胞SW 1990与不同浓度齐留通(浓度分别为40,30,20,10,5,3和1μg.mL-1)共同孵育,以不加齐留通的细胞为对照组。采用MTT法和流式细胞仪(FCM)AnnexinⅤ/PI双染法检测各组SW 1990细胞增殖和凋亡比例,FCM检测细胞周期。结果培养48 h后,40和30μg.mL-1齐留通组对胰腺癌细胞增殖的抑制作用明显强于对照组,且均差异有极显著性(均P<0.01);培养72 h后,40,30和20μg.mL-1齐留通组对胰腺癌细胞的抑制较对照组显著增强(均P<0.01)。其他检测结果亦表明,齐留通可抑制SW 1990细胞增殖,促进细胞凋亡,该作用呈浓度和时间依赖性。与对照组相比,齐留通作用18 h后G0/G1期细胞比例较对照组明显增高(P<0.01),G2/M期、S期细胞所占比例降低。结论齐留通能抑制胰腺癌细胞增殖并诱导细胞凋亡,使细胞DNA合成受抑制,产生G1期阻滞。

抗哮喘新药齐留通的合成

目的:合成抗哮喘新药齐留通。方法:以2-乙酰基苯并噻吩为起始原料,经3步反应合成齐留通。结果:目标化合物经~1H-NMR,^(13)C-NMR,FT-IR 和MS 确证其结构,HPLC 纯度在99.0%以上。结论:本方法原料易得,操作简便,总收率达50%。

高效液相色谱法测定人血浆中齐留通

目的建立一种HPLC—UV测定人血浆中齐留通的方法,研究齐留通片单剂量给药的人体药动学。方法 血样经液-液萃取(二氯甲烷-无水乙醇,9:1)后,采用BDS C18色谱柱(200 mm×4．6 mm,5 μm)分离,以乙 酰苯胺为内标,流动相为磷酸二氢钠(20 mmol·L-1,pH 4．0)-乙腈-四氢呋喃(75:20:5,v／v／v),流速为 1．5mL·min-1,检测波长为260 nm,柱温为35℃。12名健康志愿者(男女各半),单剂量口服齐留通片0．6 g 后,在规定的时间点取静脉血,并研究其药物动力学。结果 齐留通与内标分离度好,内源性杂质不干扰测定。 标准曲线:C=1．332 0 X -0．027 92,r=0．999 7,血浆中齐留通在0．0781～20．0 mg·L-1与峰面积比线性关 系良好,定量限为0．0781 mg·L-1。齐留通的萃取回收率:82．6％～91．4％(n=15),内标的萃取回收率为 82．9％～94．5％(n=15)。方法回收率为95．8％～108．7％(n=5),日内RSD为6．4％～11．5％(n=5);日间 RSD为4．0%～8．2％(n=15)。单剂量服用齐留通0．6 g的主要药物动力学参数如下:Gmax为(6．62±2．02)mg ·L-1;tmax为(1．9±0．3)h;t1 2为(3．54±1．81)h;AUC0-2为(25．03±8．31)mg·h·L-1。结论 该法简 便、灵敏、准确可靠,可用于齐留通在人体内的药物动力学研究。齐留通片在人体内吸收迅速,分布广泛。药物 动力学参数在性别间没有明显差异。

齐留通和塞来昔布对实验性口腔癌抑制作用的研究

目的通过局部应用5-Lox抑制剂齐留通和Cox-2抑制剂塞来昔布,研究它们对DMBA诱发的金黄地鼠口腔癌的抑制作用。方法用0.5%的DMBA石蜡油涂于地鼠左侧颊囊,每周3次,共涂6周。从第7周开始分别给地鼠左侧颊囊局部涂抹3%和6%的齐留通、3%和6%的塞来昔布及3%齐留通与3%塞来昔布的混合物,每周3次,连续18周。结果通过局部应用3%和6%的齐留通,鳞状细胞癌的发病率从76.9%分别下降到45·8%(11/24,P<0.05)和32.1%(9/28,P<0.01);应用3%和6%的塞来昔布分别下降到57.6%(15/26,P>0·05)和50.0%(12/24,P<0.05);用3%齐留通与3%塞来昔布的混合物组,鳞状细胞癌的发病率降至36%(9/25,P<0.01)。用药后齐留通组的白三烯B4水平降低;塞来昔布组的前列腺素E2水平降低;联合用药组前列腺素E2和白三烯B4同时降低。结论齐留通和塞来昔布能够抑制DMBA诱发的金黄地鼠口腔癌的发生。齐留通和塞来昔布预防肿瘤的机制可能与其抑制异常花生四稀酸代谢酯氧化酶和环氧合酶途径有关。

5-脂氧合酶抑制剂齐留通对N-甲基-D-门冬氨酸诱导的小鼠脑损伤的保护作用

[目的]观察5-脂氧合酶(5-LOX)抑制剂齐留通对N-甲基-D-门冬氨酸(NMDA)皮层注射诱导的小鼠脑损伤的影响。[方法]NMDA(100 nmoL)皮层直接注射建立脑损伤模型,用干湿重法评价脑水肿,脑切片TTC染色检测梗死体积,甲苯胺蓝染色法评价神经元的损伤。以NMDA拮抗剂氯胺酮(30mg.kg-1)为阳性对照药,3、10、30 mg.kg-1齐留通在NMDA皮层注射前30 min腹腔注射给药1次,NMDA注射后24 h评价上述指标。[结果]干湿重法显示皮层注射NMDA并未引起脑水含量的变化,齐留通对脑水含量没有影响;NMDA(100nmoL)皮层注射能诱导大面积脑梗死,中、高剂量的齐留通(10、30mg.kg-1)和氯胺酮(30 mg.kg-1)能明显降低梗死灶体积;NMDA诱导神经元变性,中、高剂量的齐留通和氯胺酮减轻神经元变性,增加损伤区神经元数量。[结论]5-LOX抑制剂齐留通对NMDA皮层注射诱导的小鼠脑损伤有保护作用。

齐留通对急性坏死性胰腺炎大鼠中性粒细胞活化的影响

背景：5-脂氧合酶（5-LOX）是将花生四烯酸、亚油酸和其他多不饱和脂肪酸转变为具有生物活性的代谢产物如自三烯类的限速酶，从而影响细胞信号转导、结构和代谢。然而关于其在重症急性胰腺炎（SAP）中作用的研究尚少。目的：研究选择性5-LOX抑制剂齐留通对急性坏死性胰腺炎（ANP）大鼠中性粒细胞活化的作用。方法：将54只Sprague—Dawley大鼠随机分为假手术组、ANP组和齐留通组。以5％牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射诱导ANP模型。各组大鼠分别于6h、12h和24h处死。行胰腺组织病理学评分，以酶联免疫吸附测定（ELISA）检测血清可溶性细胞间黏附分子-1（sICAM-1）、可溶性E-选择素（sE-选择素）和可溶性P-选择素（sP-选择素）水平．以免疫组化染色检测胰腺缉织ICAM-1、E-选择素和P-选择素的表达，常规方法检测胰腺组织髓过氧化物酶（MPO）活性和血清淀粉酶水平。结果：与假手术组相比，ANP组同时间点胰腺组织病理学评分、廊清sICAM-1、sE-选择素和sP-选择素水平、胰腺组织ICAM-1、E-选择素和P-选择素表达以及胰腺组织MPO活性和血清淀粉酶水平均显著增高（P＜0．05）。经齐留通预处理后，除外6h组的组织病理学评分，上述各项指标均较同时间点ANP组显著降低（P＜0．05）。结论：选择性5-LOX抑制剂齐留通能通过抑制中性粒细胞活化而有助于减轻ANP大鼠胰腺组织学损伤。

齐留通对大鼠心肌缺血再灌注炎症损伤的抑制作用观察

目的探讨5-脂氧合酶(5-LO)选择性抑制剂齐留通(zileuton)对缺血再灌注心肌的保护作用及其可能机制。方法健康成年雌性SD大鼠30只,随机分为假手术组(S组,n=10)、缺血再灌注组(I/R组,n=10)、齐留通组(Z组,n=10),采用结扎前降支造成缺血45min、松开结扎线灌注120min的方法建立缺血再灌注模型。Z组于手术前15min给予3mg/kg齐留通。再灌注结束后处死动物,HE染色观察心肌的病理损伤情况,TUNEL法检测心肌细胞凋亡率,ELISA法检测血浆中白三烯B4(LTB4)、IL-1β、TNF-α的含量,Western blotting和免疫荧光法检测中性粒细胞中的5-LO分布变化。结果与I/R组比较,齐留通处理可以明显减轻缺血再灌注所致的心肌病理损伤,降低心肌细胞凋亡率,降低血浆中炎症因子LTB4、IL-1β和TNF-α的水平,抑制5-LO的激活转位,差异有统计学意义(P<0.05),但各组5-LO表达总量无明显差异(P>0.05)。结论齐留通对缺血再灌注心肌具有一定的保护作用,其机制可能与抑制5-LO转位激活,进而减轻炎症损伤、抑制心肌凋亡有关。

顶空气相色谱法测定齐留通中有机溶剂残留量

目的建立测定齐留通中有机溶剂环己烷、乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷和甲苯含量的顶空气相色谱法。方法采用10%FFAP(聚乙二醇硝基苯)+1%H3PO3(183cm×2mm)填充柱、程序升温和外标的方法。结果各组分的线性关系良好(r>0.9990),回收率均在95%～105%,最低检测限分别为31.00、63.00、9.00、13.00和8.70ng。结论该方法操作简单、实用,结果准确可靠。

齐留通干预ALOX5对RSV感染后小鼠气道炎症与AHR的影响

目的观察齐留通干预花生四烯酸5脂氧合酶(ALOX5)蛋白对呼吸道合胞病毒(RSV)感染引起的气道炎症与气道高反应性(AHR)的影响。方法6~8周雌性Balb/c小鼠随机分为对照组、RSV组和RSV+齐留通组,感染后第5天以Western blot检测各组肺组织中ALOX5蛋白水平。苏木精-伊红(HE)染色观察肺部病理损伤;检测各组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数及分类计数;全身体积描述记法检测小鼠气道反应性;ELISA检测BALF中cys-LTs、IL-6、IL-8水平;探针法RTPCR检测肺组织中RSV A2 N基因拷贝数。结果RSV感染后第5天,小鼠肺组织中ALOX5蛋白水平升高,于齐留通干预后降低。齐留通可显著改善RSV感染后小鼠肺部病理损害、BALF中炎症细胞募集及AHR;齐留通干预后BALF中cys-LTs、IL-6、IL-8水平显著降低,但RSV N基因拷贝数无改变。结论齐留通可抑制ALOX5蛋白表达,减少炎症因子产生,改善RSV感染后小鼠气道炎症与AHR。

塞来昔布联合齐留通对ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化的影响

目的:探讨环加氧酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布联合5-脂加氧酶(5-LO)抑制剂齐留通对ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化(AS)病变的影响及机制。方法:雄性ApoE^(-/-)小鼠随机分成AS模型组、塞来昔布组(80 mg/kg/d)及塞来昔布联合齐留通(400 mg/kg/d)组(高脂饲料喂养),野生型雄性C57BL/6J小鼠为正常对照组(普通饲料喂养),每组12只。每日灌胃给药18周后,取血测定血脂水平,小动物B超下测量主动脉弓斑块面积比(%)、主动脉全长油红O染色测量阳性斑块面积比(%)及主动脉根部切片苏木精-伊红(HE)染色测量斑块面积比(%)和内中膜厚度(IMT)并观察AS病理形态学改变,ELISA测定主动脉匀浆花生四烯酸(AA)代谢产物前列腺素E2(PGE2)和白三烯(LTs)[包括白三烯B4(LTB4)和半胱氨酰白三烯(CysLTs)]含量。结果:与正常对照组比较,AS模型组小鼠血清总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)和高密度脂蛋白(HDL-C)水平明显升高(P<0.05或P<0.01),但总甘油三酯(TG)水平无明显改变(P>0.05);塞来昔布组及塞来昔布联合齐留通组血脂各指标与AS模型组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。小动物B超、主动脉全长油红O染色及主动脉根部切片HE染色病理学观察及定量检测结果均表明AS模型组小鼠形成了明显的主动脉AS病变,塞来昔布加重AS病变,塞来昔布联合齐留通减轻塞来昔布加重的AS病变(均P<0.05或P<0.01)。AS模型组小鼠主动脉匀浆PGE2、LTB4和CysLTs含量均较正常对照组显著升高(P<0.01);与AS模型组相比,塞来昔布组小鼠主动脉匀浆PGE2含量显著降低,而LTB4和CysLTs含量则显著升高(P<0.01);与塞来昔布组相比,塞来昔布联合齐留通组主动脉匀浆PGE2含量无明显改变(P>0.05),但LTB4和CysLTs含量明显降低(P<0.01)。结论:塞来昔布上调LTs加重ApoE^(-/-)小鼠AS病变的作用可被5-LO抑制剂齐留通逆转。

基于FAERS的齐留通的药物警戒评价

目的:基于美国FDA不良事件报告系统(FDA adverse event reporting system,FAERS)分析和评价齐留通的临床用药风险,为临床齐留通的用药安全提供参考。方法:利用OpenVigil工具在FAERS的Open-FDA数据库中检索2004年1月1日—2022年9月30日上报的有关齐留通的不良事件,采用报告比值比法和贝叶斯可信传播神经网络法分析齐留通的不良事件发生特点及其风险。结果:在Open-FDA数据库中共计挖掘出有关齐留通的不良事件报告215例,其中患者性别多为女性(158例,占73.49%),致患者住院或严重住院、残疾等严重不良事件共58例(占26.98%);215例报告共涉及26个信号,共映射在8个SOC中,其中主要的SOC分别为“呼吸、胸腔和纵膈疾病”(87例,占40.66%)“、皮肤及皮下组织疾病”(43例,占20.00%)和“实验室指标异常”(46例,占21.40%,均与肝功能损害有关);信号强度检测显示,强警戒信号有13个(其中与肝功能损害有关的有5个,与呼吸功能异常相关的有4个),中度警戒信号有11个。结论:基于FAERS的数据提示,齐留通的用药风险主要表现为肝功能损害和呼吸系统异常,临床在进行相关治疗时应加强监护,确保患者的用药安全。

齐留通在急性坏死性胰腺炎腺泡细胞凋亡中的作用

5-脂氧合酶（5-Lipoxygenase，5-LOX）是脂肪酸氧化代谢的重要酶类，近年的大量研究已经证实，5-LOX在许多肿瘤的发生和发展中都起到重要作用。而关于急性胰腺炎（AP）时，5-LOX在胰腺腺泡细胞凋亡中作用的研究却鲜有报道。本文旨在探讨5-LOX抑制剂与AP腺泡细胞凋亡的关系和意义。

COPD大鼠肺组织中LTB4水平、5-LO mRNA表达及齐留通的干预作用

目的探讨慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)大鼠模型肺组织中白三烯B4(LeukotrieneB4,LTB4)含量与5-脂氧合酶(5-LO,5-lipoxygenase)mRNA水平的变化,以及给予齐留通干预的影响。方法 36只健康雄性Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、药物组,采用被动吸烟法制作COPD大鼠模型,给予药物组鼻饲齐留通,测定肺功能,各组肺组织匀浆检测其LTB4含量及髓过氧化物酶(Myeloperoxidase,MPO)活性,RT-PCR法检测5-LO mRAN的表达。结果模型组、药物组的0.3秒用力呼吸容积(Forced expiratory volume in the 0.3 second,FEV0.3)/用力肺活量(Forced vital capacity,FVC)%较对照组显著下降(P<0.001),吸气相阻力(Inspiratory phase resistance,Ri)和呼气相阻力(expiratory phase resistance,Re)较对照组显著增加(P<0.001,P<0.05);模型组较药物组FEV0.3/FVC%下降程度更低,Ri、Re更高,两纽间差异有显著性(P<0.05)。比较各纽大鼠肺纽织LTB4水平,MPO活性及5-LOmRNA表达:模型组、药物组较对照组显著升高(P<0.001);与模型组比较,齐留通干预使得三项指标均有显著降低(P<0.001)。结论 LTB4及5-LO参与COPD的气道炎症过程。5-LOX抑制剂齐留通可部分抑制减少COPD大鼠肺组织中LTB4产生,其机制可能为抑制5-LO表达。

超临界流体色谱拆分齐留通对映体

目的研究超临界流体色谱对齐留通对映体的分离效果。方法考察确定5种手性柱中分离效果最佳的柱子,在该柱上考察改性剂的种类、浓度、温度及背压对分离度的影响。结果采用Chiralpak AD-H柱、改性剂为异丙醇,异丙醇在流动相中比例为18%、背压为140 bar、温度为303 K时,齐留通对映体达到最佳分离,分离度为11.5,出峰时间分别为4.59、7.35min。结论所用超临界流体色谱的方法简单、快捷、经济有效,适用于齐留通对映体的分离。