齿垢密螺旋体与慢性牙周炎关系的研究进展

齿垢密螺旋体(Treponema denticola,Td)是一种革兰氏阴性厌氧菌,属解糖密螺旋体。慢性牙周炎(chronic periodontitis,CP)是一种由细菌侵犯牙周组织而引起的慢性炎症,细菌是CP发生发展的始动因子,堆积在牙面及龈沟内的细菌及其产物会诱发炎症反应,为细菌的繁殖提供有利条件,使细菌进一步向龈下扩展,从而破坏牙周组织。Td被认作中等证据的牙周致病菌,其在正常牙周组织中检出率较低,但在CP患者中检测率高,且与牙周袋深度和探诊出血程度密切相关,在CP的发生发展中扮演着重要角色。由于Td在形态学特征上与其他牙周致病菌有明显区别,故本文就Td的生物学特征、在CP中的致病情况、检测情况及治疗情况的研究做一综述。

侵袭性牙周炎龈沟液中有机酸与牙龈卟啉单胞菌和齿垢密螺旋体的关系

目的:分析侵袭性牙周炎(aggressive periodontitis,AgP)患者龈沟液中牙龈卟啉单胞菌和齿垢密螺旋体对有机酸浓度的影响,初步探讨有机酸在AgP疾病中的作用。方法:共20例AgP患者和14例健康对照者纳入本研究,每位研究对象每象限选一个位点采集龈沟液,分离上清液采用高效毛细管电泳仪检测琥珀酸、乙酸、丙酸、丁酸和异戊酸,分离沉淀物采用PCR技术检测牙龈卟啉单胞菌和齿垢密螺旋体,并分析其电泳条带的灰度值作为该微生物的PCR产物量。结果:AgP组龈沟液中琥珀酸、乙酸、丙酸、丁酸和异戊酸的浓度,牙龈卟啉单胞菌、齿垢密螺旋体的检出率和PCR产物量均显著高于健康对照组,其中在牙龈卟啉单胞菌检出组中丁酸浓度显著高于未检出组[2.87(0.99,4.36)mmol/L vs.0.33(0.00,1.44)mmol/L,P<0.05],琥珀酸、乙酸、丙酸、丁酸和异戊酸浓度均与牙龈卟啉单胞菌产物量呈正相关(r值分别为0.334,0.548,0.411,0.493,0.273,P<0.05)。齿垢密螺旋体检出组中有机酸浓度均高于未检出组,琥珀酸1.67(1.15,2.11)mmol/L vs.0.80(0.48,1.06)mmol/L,乙酸31.95(23.77,43.13)mmol/L vs.12.51(7.57,15.69)mmol/L,丙酸11.86(6.55,14.98)mmol/L vs.2.82(1.71,7.03)mmol/L,丁酸3.45(2.41,4.78)mmol/L vs.0.54(0.00,1.56)mmol/L,异戊酸2.23(1.05,3.85)mmol/L vs.0.62(0.00,2.33)mmol/L,琥珀酸、乙酸、丙酸和丁酸与齿垢密螺旋体产物量呈显著正相关(r值为0.443,0.702,0.625,0.557,P<0.05)。结论:AgP患者龈沟液中琥珀酸、乙酸、丙酸和丁酸的浓度在一定程度上反映了牙龈卟啉单胞菌和齿垢密螺旋体的产物量,可以作为判断AgP发生与进展的指标。

不同牙周状况龈下菌斑中齿垢密螺旋体的分布

目的:分析慢性牙周炎、牙龈炎患者和牙周健康者龈下菌斑中齿垢密螺旋体的分布情况,探讨该微生物与不同牙周状况的关系。方法:收集12例慢性牙周炎、5例牙龈炎患者和5例牙周健康者,共70个位点的龈下菌斑,采用TaqMan 16S rRNA实时荧光定量PCR技术检测齿垢密螺旋体的分布。结果:慢性牙周炎病变位点齿垢密螺旋体检出率是86%,牙龈炎的是86%,牙周健康的是100%,3组检出率之间的差异没有统计学意义;微生物的检出量经对数转换后,3组之间及两两比较均有统计学意义。结论:TaqMan实时荧光定量PCR技术检测微生物灵敏度高,检出率高;龈下菌斑中齿垢密螺旋体与牙周状态密切相关。

16S rDNA多重PCR检测牙龈卟啉单胞菌、伴放线放线杆菌和齿垢密螺旋体及混合感染与慢性牙周炎病变程度关系(英文)

目的 建立多重16S rDNA PCR方法用以同时检测慢性牙周炎(CP)临床标本中牙龈卟啉单胞菌(Pg)、伴放线放线杆菌(Aa)和齿垢密螺旋体(Td),并了解不同感染情况与慢性牙周炎严重程度的关系。方法 采集152例CP患者牙周袋标本,并按Hugoson的方法将其分为轻、中和重度三类,另采集30例牙周健康者龈沟标本作为正常对照。上述临床标本置于200μl裂解缓冲液中,100℃冰浴10min后取10μl上清液直接作为PCR的模板。采用常规酚-氯仿法提取Pg ATCC33277株、Aa Y4株、Td FM株和E.coli DH5α株的DNA分别作为PCR的阳性和阴性对照。采用Pg、Aa和Td 16S rDNA特异性引物,建立多重PCR检测上述标本。3例Pg、Aa和TdPCR结果均阳性患者牙周袋标本目的扩增片段T-A克隆后测序。采用X2检验分析Pg、Aa和/或Td感染率与牙周炎严重程度之间的关系。结果 所建立的多重16S rDNA PCR最低可检出10个Pg、20个Aa和20个Td细胞。Pg、Aa和Td 16S rDNA扩增片段测序结果与已报道的相应序列比较,相似性分别高达99.45％、97.08％和96.59％。30例牙周健康者龈沟标本中,仅有1例(3.3％)Pg、2例(6.7％)Aa的16S rDNA扩增结果阳性,其余标本均阴性。152例CP患者牙周袋标本中,147例(96。7％)检出Pg、Aa和/或Td的16S rDNA,5例(3.3％)扩增结果均阴性。

齿垢密螺旋体PCR检测与牙周炎病变程度关系

目的 建立龈下菌斑标本中齿垢密螺旋体二重PCR临床快速检测方法 ,了解齿垢密螺旋体感染与慢性牙周炎 (CP)病变程度的关系。方法 对 15 8例不同病变程度的慢性牙周炎龈下菌斑标本 ,采用PCR检测标本中齿垢密螺旋体 16SrDNA和特征性外膜蛋白基因tdpA。结果 85 4%标本 16SrDNA阳性 ,77 2 %tdpA阳性 ,14 6%两者均阴性 ,未发现tdpA阳性而 16SrDNA阴性的标本。重度CP龈下菌斑标本 16SrDNA和tdpA检出率均高于中度CP ,中度CP龈下菌斑标本 16SrDNA和tdpA检出率均明显高于轻度者。结论 二重PCR可用于牙周炎龈下标本中齿垢密螺旋体的临床快速诊断 ,齿垢密螺旋体感染与牙周病变程度密切相关。

齿垢密螺旋体

齿垢密螺旋体是螺旋体科密螺旋体属的专性厌氧微生物。本文从生物学性状、特征蛋白和酶类、与牙周病的关系等几个方面综述了齿垢密螺旋体的研究进展。大量的研究表明,齿垢密螺旋体是重要的牙周可疑致病菌之一,与牙周病的发生发展密切相关。

二重PCR检测龈下菌斑中齿垢密螺旋体感染及其与牙周炎病变程度的关系

目的 建立龈下菌斑标本中齿垢密螺旋体二重PCR临床快速检测方法,了解齿垢密螺旋体感染与慢性牙周炎病变程度之间的关系。方法 采取158例不同病变程度的慢性牙周炎龈下菌斑标本,用终浓度为1％的Triton X-100 100℃水浴10 min处理标本以制备DNA模板。采用PCR检测标本中齿垢密螺旋体16S rDNA和特征性外膜蛋白基因tdpA。采用卡方检验分析齿垢密螺旋体感染与慢性牙周炎(CP)不同病变程度的关系。结果 85.4％(135/158)标本16S rDNA阳性,77.2％(122/158)tdpA阳性,14.6％(23/158)两者均阴性,未发现tdpA阳性而16S rDNA阴性的标本。重度CP龈下菌斑标本16S rDNA和tdpA检出率均高于中度cP(r2=4.03,5.71;P<0.05),中度CP龈下菌斑标本16S rDNA和tdpA检出率均明显高于轻度(X2=9.32,16.06,P<0.01)。结论 所建立的二重PCR可用于牙周炎龈下标本中齿垢密螺旋体的临床快速诊断,齿垢密螺旋体感染与牙周病变程度密切相关。

齿垢密螺旋体精氨酸激酶TDE2037的原核表达与纯化

目的:构建齿垢密螺旋体TDE2037基因的原核表达质粒,表达及纯化TDE2037精氨酸激酶蛋白。方法:以齿垢密螺旋体基因组DNA为模板,PCR扩增TDE2037基因,PCR产物经限制性内切酶消化后,由T4 DNA连接酶连接原核表达载体pET-21a以及pET28a-SUMO,连接产物分别转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达目的蛋白,采用镍柱亲和层析法纯化目的蛋白,并使用分子排阻预装柱提高蛋白纯度。结果:成功构建TDE2037基因的原核表达质粒,经测序与基因库(Genbank)的TDE2037序列一致,在大肠杆菌BL21(DE3)中成功诱导表达目的蛋白,融合蛋白由pET-21a-TDE2037表达形成包涵体;由pET28a-TDE2037-SUMO表达部分形成包涵体,部分为可溶蛋白。镍柱亲和层析法成功纯化目的蛋白。结论:成功构建齿垢密螺旋体TDE2037基因的原核表达质粒,并表达纯化了重组融合目的蛋白,为下一步研究奠定基础。

齿垢密螺旋体糜蛋白酶样蛋白酶复合物及其致病作用

齿垢密螺旋体作为龈下菌斑红色复合体中的一员,与牙周炎症密切相关。其表面的糜蛋白酶样蛋白酶复合物(CTLP)是齿垢密螺旋体的一个重要的毒力因子。CTLP参与介导了齿垢密螺旋体的多种致病机制,包括对组织细胞和组织蛋白的黏附及侵入,与其他牙周致病菌协同形成致密生物膜,产生细胞毒作用,破坏上皮屏障、侵入深层牙周组织,降解组织蛋白,调节宿主源性蛋白酶的激活,引发宿主的免疫调控紊乱,具有多方面的致病作用。深入研究CTLP,有助于诠释口腔螺旋体的致病机制,丰富牙周病的病因及发病机制。

感染根管中齿垢密螺旋体PCR检测及其与临床症状的关系

目的了解感染根管中齿垢密螺旋体的定植情况及其与临床症状的关系。方法采用16S rDNA PCR方法,检测53例慢性根尖周炎患者的感染根管内标本中齿垢密螺旋体。结果齿垢密螺旋体的检出率为24.53%(13/53),其中有症状组18.18%(6/33),无症状组35.00%(7/20);经Fisher确切概率检验,P=0.200,两组间齿垢密螺旋体检出率差异无统计学意义。结论齿垢密螺旋体可能是根尖周炎的病原体之一,但与临床症状关系尚未确定。

基于real-timePCR的齿垢密螺旋体含量与慢性牙周炎严重程度的关系研究

背景:口腔密螺旋体与慢性牙周炎的发生发展密切相关。其中齿垢密螺旋体被认为是中等证据的致病菌,常在牙周炎患者龈下菌斑中检出,但在牙周健康人群中也能检测到,其致病性可能与在牙周的定植数量有关。目的:探讨齿垢密螺旋体与慢性牙周炎不同发展阶段以及相应的牙周临床指标的关系。方法:选择2015年7月至2016年8月在航空总医院口腔科收治的132例慢性牙周炎患者和40例牙周健康者,按照临床检查资料评估,将慢性牙周炎患者分为轻度组(n=41)、中度组(n=46)和重度组(n=45)。收集所有患者的龈下菌斑,应用Taq Man实时荧光定量PCR技术,检测龈下菌斑中齿垢密螺旋体的检出率、相对检出量和所占比例。结果与结论:(1)齿垢密螺旋体在健康人(100%)和慢性牙周炎患者(100%)之间检出率差异无显著意义;(2)慢性牙周炎组齿垢密螺旋体的相对数量及所占比例均显著高于健康组(P<0.000 1),轻、中和重度慢性牙周炎组之间两两比较差异均具有统计学意义(P<0.05);(3)齿垢密螺旋体检出量和所占比例与牙周探诊深度呈显著正相关(P<0.000 1),当探诊深度≥7 mm时,齿垢密螺旋体检出量明显升高(P<0.05),齿垢密螺旋体所占比例也显著升高(P<0.01);(4)结果表明,齿垢密螺旋体在健康人和慢性牙周炎患者的龈下菌斑中普遍存在。龈下菌斑中齿垢密螺旋体定植水平和所占比例与牙周炎严重程度、牙周探诊深度密切相关。定植数量越高,所占比例越多,则患者罹患牙周炎越严重。实时荧光定量PCR对牙周病病因、诊断及治疗研究具有应用前景。

齿垢密螺旋体的研究进展

齿垢密螺旋体是口腔螺旋体致病菌中的一员,已被证实与某些感染性牙周病、牙髓病有关,并在其发生发展过程中起了重要的作用。本综述将从齿垢密螺旋体的结构特征、生物学特性、致病因子以及其与牙周病和牙髓病之间的关系等方面作一综述。

慢性牙周炎患者龈下菌斑中齿垢密螺旋体的PCR检测

目的:探讨龈下菌斑中齿垢密螺旋体(Td)的检出率与慢性牙周炎临床指标的关系。方法:取58例慢性牙周炎患者患病部位及相对健康部位龈下菌斑,用终浓度为1%的TritonX100及100℃水浴10min处理标本从而制备DNA模版,对齿垢密螺旋体16srRNA保守区片段进行扩增。结果:58例患者中47例(81.0%)患病部位PCR为阳性,8例(13.8%)相对健康部位PCR为阳性。结论:(1)齿垢密螺旋体在慢性牙周炎患者龈下菌斑中患病部位检出率高于相对健康部位,是慢性牙周炎致病菌之一,且随Td检出率的增高,慢性牙周炎的严重程度有逐渐加重趋势。(2)PCR检测Td敏感性强、特异性高。

齿垢密螺旋体主要外鞘蛋白的结构和作用机制

主要外鞘蛋白(Mosp)广泛存在于密螺旋体的菌体表面,常以低聚物的形式存在,分别由葡萄糖、半乳糖、谷氨酰胺、氨基半乳糖和岩藻糖组成。Mosp的中央结构域,在介导细菌与宿主蛋白的黏附中起着至关重要的作用。Mosp竞争性地抑制齿垢密螺旋体与具核梭杆菌和牙龈卟啉单胞菌的结合,即Mosp在齿垢密螺旋体与牙周致病菌共聚中起着类黏附蛋白的作用。Mosp的细胞毒性即成孔效应,包括营养摄取,转运细菌产物至感染的宿主细胞,介导细胞的杀伤作用。Mosp可通过影响成纤维细胞、中性粒细胞的细胞骨架破坏其迁移运动能力,而成纤维细胞的迁移与牙周结缔组织的改建和愈合相关,中性粒细胞又是牙周固有免疫的关键细胞,可牵制致病菌的扩散。深入研究Mosp的作用机制,可为降低齿垢密螺旋体的致病性提供新的思路,为控制牙周炎的进展奠定坚实的理论基础。

齿垢密螺旋体与口腔疾病关系的研究进展

齿垢密螺旋体(Treponema denticola,T.denticola),是人类口腔中一种重要的密螺旋体致病菌。早期研究发现齿垢密螺旋体与牙周病的发生发展密切相关,随着近年来技术手段的发展,众多研究显示齿垢密螺旋体不仅可通过多种机制参与牙周病的发生发展,而且在多种口腔疾病发生发展进程中发挥重要作用。齿垢密螺旋体在牙髓根尖周病、种植体周围疾病中高度检出,其表面蛋白也在口腔肿瘤样本中普遍存在。本文就齿垢密螺旋体在牙周病、牙髓根尖周病、种植体周围疾病、口腔肿瘤等方面的研究进展作一综述,并总结相关作用机制:齿垢密螺旋体可通过糜蛋白酶样蛋白酶复合物(chymotrypsin-like protease complex,CTLP)、主要外鞘蛋白(major outer sheath protein,Mosp)、Td92、LOS等多种表面蛋白引起机体免疫调节紊乱,破坏上皮屏障,诱导骨吸收,促进炎症的发生发展;还可通过表面FhbB脂蛋白逃脱补体介导的杀伤作用;还可能通过调节肿瘤微环境促进口腔肿瘤的发生发展等。

不同引物检测慢性牙周炎龈下菌斑中齿垢密螺旋体

目的:利用两个不同引物对慢性牙周炎患者患病部位及相对健康部位龈下菌斑中齿垢密螺旋体(Td)进行检测,以了解Td在慢性牙周炎患者不同部位的分布及Td检出率与牙周炎临床指标的关系。方法:收集58例慢性牙周炎患者患病部位及相对健康部位龈下菌斑标本,利用PCR分别扩增53 kDa外膜蛋白表达基因tdpA片段及16 s rRNA保守区片段。结果:58个患病部位龈下菌斑标本中tdpA及16 s rRNA扩增的阳性率分别为58.6%和81.0%,而相对健康部位龈下菌斑标本中PCR阳性率分别为8.62%及15.5%,患病部位Td检出率高于相对健康部位(P<0.001),16 s rRNA基因片段引物检出率高于tdpA基因片段(P<0.05)。临床附着丧失≥5 mm的患牙龈下菌斑标本中Td的检出率高于临床附着丧失<5 mm标本(P<0.05),不同牙周袋深度及牙龈指数标本的Td检出率之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:在慢性牙周炎患者活动部位龈下菌斑中Td检出率高于相对健康部位;Td感染与慢性牙周炎关系密切;利用16s rRNA保守区片段对齿垢密螺旋体进行检测检出率高于tdpA基因片段。

齿垢密螺旋体外膜蛋白与牙周炎研究进展

齿垢密螺旋体(T.d)被认为是牙周炎可疑致病菌之一,其外膜蛋白在牙周炎发病机制中起主要作用。本文就齿垢密螺旋体外膜蛋白在牙周炎发病过程中的作用作一简要综述。

齿垢密螺旋体在慢性牙周炎龈下菌斑中的分布

目的:采用聚合酶链反应(PCR)技术,检测慢性牙周炎患者患病部位和相对健康部位龈下菌斑中齿垢密螺旋体(Treponema denticola,Td),了解齿垢密螺旋体在不同部位龈下菌斑中的分布情况,并探讨其检出率与慢性牙周炎的关系。方法:选择58例慢性牙周炎患者患病部位和相对健康部位龈下菌斑,对齿垢密螺旋体tdpA基因片段进行扩增和克隆测序。结果:34例(58.6%)患病部位PCR为阳性,相对健康部位中5例(8.62%)PCR为阳性,患病部位齿垢密螺旋体检出率高于相对健康部位(P<0.001)。对tdpA基因克隆后测序,结果与B last比对与Gen Bank中已登陆的tdpA基因同源性为94%。结论:在慢性牙周炎患者患病部位龈下菌斑中,齿垢密螺旋体检出率高于相对健康部位,与慢性牙周炎关系密切,利用PCR方法检测Td,简便、特异性高。

COPD患者口腔和呼吸道内牙龈卟啉单胞菌、齿垢密螺旋体和福赛坦菌的同源性分析

目的分析慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者口腔和呼吸道内牙龈卟啉单胞菌(Pg)、齿垢密螺旋体(Td)和福赛坦菌(Tf)的同源性,探讨牙周炎与COPD之间的关系。方法收集53例急性加重期COPD患者,采集龈下菌斑及呼吸道分泌物,同时进行牙周指标的检查。通过16S r DNA序列分析,构建患者口腔及呼吸道内Pg、Td和Tf的系统进化树,进行同源性分析。结果 53例患者中,5例患者口腔和呼吸道内Pg具有同源性,6例患者Td具有同源性,3例患者Tf具有同源性。结论 COPD患者口腔和呼吸道内Pg、Td和Tf具有同源性,COPD患者呼吸道内的这3种病原体均来自于口腔。

PCR检测龈下菌斑中齿垢密螺旋体与牙周组织破坏的关系

目的 建立龈下菌斑标本中齿垢密螺旋体PCR临床快速检测方法 ,了解齿垢密螺旋体感染与慢性牙周炎牙周组织破坏程度之间的关系。方法 81例慢性牙周炎患者每例采取 2个不同患牙牙位的龈下菌斑标本 ,用终浓度为 1%的TritonX 10 0 10 0℃水浴 10min处理标本以制备DNA模板 ,用PCR检测标本中齿垢密螺旋体特有的相对分子质量 (Mr)为 5 3× 10 3 外膜蛋白基因 (tdpA)扩增片段。结果 6 7例患者 ( 82 .7% )的 2份龈下菌斑标本齿垢密螺旋体tdpAPCR均为阳性 ,9例患者( 11.1% )的其中 1份龈下菌斑标本可见目的扩增片段 ,5例患者 ( 6 .2 % )的 2份龈下菌斑标本PCR均为阴性 ,16 2例龈下菌斑PCR检测总阳性率为 88.3% ( 143 16 2 )。牙槽骨吸收 >2 3和牙周袋深度≥7mm患牙龈下标本的PCR阳性率较高 (P <0 .0 5 ) ,牙龈指数与PCR阳性率无明显关系 (P >0 .0 5 )。结论 PCR检测tdpA基因可用于慢性牙周炎龈下标本中齿垢密螺旋体的临床快速诊断 ,齿垢密螺旋体感染与牙周组织破坏密切相关。