龙血素B通过P38MAPK信号通路调控MC3T3-E1成骨分化和骨形成的机制

目的:探究龙血素B对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1细胞)成骨分化和骨形成的影响以及其通过P38MAPK信号通路调控成骨分化和骨形成的机制。方法:培养MC3T3-E1细胞,加入不同浓度(0、15、30、60、90、120μmol/L)龙血素B,采用CCK8法和流式细胞术(FCM)检测不同时间(24h、48h、72h)MC3T3-E1细胞增殖能力和凋亡情况,确定龙血素B促MC3T3-E1细胞成骨最佳的药物浓度及作用时间。培养MC3T3-E1细胞并分为空白组(不作干预),龙血素B组(加入龙血素B共培养),龙血素B+阻断剂组(加入龙血素B和P38抑制剂SB203580共培养),进行干预实验;采用碱性磷酸酶(ALP)活性检测试剂盒测定各组细胞ALP活性,qRT-PCR法检测各组细胞骨桥蛋白(OPN)基因、骨钙素(OCN)基因、骨唾液蛋白(BSP)基因表达水平,茜素红染色法观察各组细胞骨形成能力。结果:龙血素B可促进MC3T3-E1细胞增殖并抑制其凋亡,效果与浓度和干预时间相关,在90μmol/L浓度下干预48h促MC3T3-E1细胞生长作用最强;干预结束后第1、3、5天,龙血素B组细胞ALP活性较空白组升高,龙血素B+阻断剂组细胞ALP活性较龙血素B组降低(P<0.05);龙血素B组细胞OPN、OCN、BSP基因表达水平较空白组升高,龙血素B+阻断剂组细胞OPN、OCN、BSP基因表达水平较龙血素B组降低(P<0.05);干预结束后第21天,龙血素B组细胞钙化结节区域面积较空白组增大,龙血素B+阻断剂组细胞钙化结节区域面积较龙血素B组减小(P<0.05)。结论:龙血素B可提高MC3T3-E1细胞增殖活性,并通过激活P38MAPK信号通路促进MC3T3-E1细胞成骨分化和骨形成。

龙血素B在模拟失重大鼠体内的血浆药物动力学研究

目的研究模拟失重大鼠灌胃龙血竭后有效成分龙血素B的血浆药物动力学。方法采用3周尾吊大鼠模型模拟失重状态,单次灌胃给予10.6 g/kg龙血竭后,收集各个时间点血浆样本,HPLC-MS/MS法测定尾吊大鼠血浆中龙血素B的含量,并求算药物动力学参数。结果龙血素B在模拟失重大鼠体内血药浓度-时间曲线下面积(AUC0-T)为(23.4±12.4)μg/L·h,达峰时间(Tmax)为(0.33±0.11)h,达峰浓度Cmax(2.77±0.71)μg/L,表观分布容积(Vc)为(677.6±111.6)L/kg。生物半衰期(T0.5)为(8.47±1.7)h。结论本文首次报道了龙血素B在模拟失重大鼠体内的药物动力学参数,为龙血竭对抗空间疾病的相关研究提供了药动学数据。

直观推导式演进特征投影法测定不同方法提取的国产血竭中龙血素B的含量

利用HPLC DAD产生的二维数据和化学计量学方法———直观推导式演进特征投影法 (HELP) ,解析了不同提取方法得到的国产血竭中的重叠色谱峰 ,并对其中的指标性成分———龙血素B进行了含量测定 ,结果满意。这表明化学计量学方法与现代分析手段有机结合 。

应用近红外光谱定量分析模型测定国产血竭中龙血素A、龙血素B含量

目的用近红外光谱技术快速测定国产血竭中龙血素A、龙血素B含量。方法根据国产血竭在5284~4169.34 cm-1、7131.47~5943.53 cm-1、8913.37~7470.88 cm-1内的近红外吸收光谱,采用偏最小二乘法（PLS）建立了校正模型。采用二阶导数预处理方法时能最有效地提取光谱的信息。结果龙血素A的校正集相关系数为0.9749,校正集标准偏差（RMSEC）为0.1720,预测集相关系数为0.9857,预测集标准偏差（RMSEP）为0.1450;龙血素B校正集相关系数为0.9933,校正集标准偏差（RMSEC）为0.0526,预测集相关系数为0.9872,预测集标准偏差（RMSEP）为0.0604。结论近红外光谱技术快速简便,适合中药指标成分的快速分析。

模拟失重效应下龙血素B在大鼠体内的药物动力学及排泄

比较正常重力与模拟失重效应下大鼠口服龙血素B的血浆药物动力学及排泄差异.大鼠吊尾21d模拟失重效应,单次灌胃给予25mg/kg龙血素B.于系列时间点收集静脉血,并分时间段收集尿液、粪便和胆汁,采用HPLC-MS方法测定各样本中龙血素B含量,并求算药物动力学参数和排泄量.模拟失重效应下龙血素B的血药浓度-时间曲线下面积(AUC0-t)、血药峰浓度(Cmax)、达峰时间(tmax)、表观分布容积(Vd)、消除速率常数(Ke)以及生物半衰期(T1/2)与正常重力组相比均出现显著变化,说明模拟失重效应明显改变龙血素B在大鼠体内的药物动力学过程.尿液、粪便和胆汁中龙血素B的排泄量也在增加,但与正常重力相比不明显.

HPLC测定龙血竭中龙血素A和龙血素B的含量

目的建立龙血竭中龙血素A和龙血素B的含量测定方法。方法采用HPLC法,用C18柱,乙腈-1%冰醋酸溶液(37∶63)为流动相,检测波长275nm,柱温30℃。结果方法线性关系良好,平均加样回收率龙血素A为100.25%,RSD=1.2%(n=6);龙血素B为101.32%,RSD=1.7%(n=6)。结论所用方法简便易行,结果准确,可用于龙血竭药材的质量控制。

龙血素B抑制大鼠背根神经节细胞辣椒素诱发的电流反应

目的探讨龙血素B对大鼠背根神经节细胞辣椒素诱发的辣椒素受体电流的影响。方法采用全细胞膜片钳技术在急性分离的大鼠背根神经节细胞上观察龙血素B对辣椒素诱发的辣椒素受体电流的影响。结果①在-60mV的钳制电位下,辣椒素受体拮抗剂辣椒卓平可以完全抑制辣椒素受体电流;②不同浓度的龙血素B溶液对辣椒素诱发的受体电流具有浓度依赖的抑制作用;2.0、4.0、8.0和16.0μmol.L-1的龙血素B溶液对辣椒素诱发的受体电流峰值的抑制率分别为15.36%±2.12%、36.41%±2.43%、76.26%±2.16%和96.69%±3.21%(n=10,P<0.05),半数抑制浓度(IC50)为4.9μmol.L-1,Hill系数为2.29。结论龙血素B可以明显抑制辣椒素诱发的辣椒素受体电流,影响痛觉信息的传入,这可能是以龙血素B为重要成分的中药血竭产生镇痛作用的机制之一。

龙血竭中龙血素A与龙血素B在大鼠体内的组织分布研究

目的研究龙血竭中龙血素A、龙血素B在大鼠体内的组织分布情况。方法按100 g大鼠给予龙血竭250 mg,灌胃给药,用HPLC法测定不同时间点的组织浓度。结果龙血素A、B在肝脏及肾脏浓度最高,然后依次是肺、脾、心、脑。结论龙血素A、B在大鼠体内主要分布于血流量大的脏器。

毛细管区带电泳法分析不同来源血竭中龙血素A和龙血素B

在系统优化了电解质溶液的pH、组成、浓度及仪器条件的基础上,建立了一种测定不同来源血竭中龙血素A和龙血素B的毛细管区带电泳(CZE)方法。采用20 kV的分离电压,25℃的毛细管柱温,211 nm的检测波长以及5 s的压力(3 447 Pa)进样时间,在20 mmo l/L的Na2B4O7缓冲溶液(用NaOH调节pH到9.98,含有10%(v/v,下同)乙腈、5.0%乙二醇和1.0%正丁醇)中,龙血素A和龙血素B在15 min内得到了有效分离与检测。方法的线性范围对于龙血素A和龙血素B分别为1.0～100.0 mg/L和0.5～100.0 mg/L。将该方法用于天然血竭及人工诱导血竭中龙血素A和龙血素B的测定,相对标准偏差在0.6%～3.8%之间,加标回收率在95.1%～105.8%之间。方法具有简单、快速、重现性较好和准确度较高的优点,可以用于血竭样品中龙血素A和龙血素B的测定。

高效液相色谱法测定龙血竭丸中龙血素B的含量

目的用高效液相色谱（HPLC）法测定龙血竭丸中龙血素B的含量，建立含量测定方法。方法冰醋酸溶液（1→90）-乙腈（61：39）为流动相，流速为1ml／min，柱温为室温，检测波长260nm。结果龙血素B浓度在14～84μg／ml范围内呈良好的线性关系，r=0．9999，n=6，龙血素B的加样回收率99．88％，RSD=0．314％。结论该方法简便，准确，可靠，便于生产时制剂的质量控制。

影响国产血竭中龙血素B含量测定的干扰成分的分离鉴定

目的 HPLC法测定龙血素B含量时鉴定其近旁杂质峰的结构 ,便于进行龙血竭的质量控制。方法 HPLC法确定龙血素B及近旁杂质峰位置 ,硅胶柱层析用于龙血素B近旁杂质峰的分离 ,质谱和核磁共振用于结构鉴定。结果 龙血素B近旁杂质峰为龙血素A。结论 龙血素A与龙血素B结构相近 ,用HPLC法很难完全分开 ,有必要对原来质量标准进行修订。

国产及进口龙血竭原料中总黄酮、龙血素A、龙血素B含量的测定

比较国产及迚口龙血竭原料中总黄酮、龙血素A、龙血素B的含量。龙血素A、龙血素B采用高敁液相色谱法(HPLC)法测定,色谱柱安捷伦ZORBAX Eclipse XDB C18(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-1%冰醋酸(40∶60),流速1.0 mL/min,柱温25℃,检测波长为280 nm。总黄酮用50%乙醇超声提取,紫外-可见分光光度法测定。结果龙血素A在0.0216~0.1948μg范围内呈线性关系,回归斱程为Y=-0.7836X+1.825 1,r=0.999 8,龙血素B在0.0201~0.1811μg范围内呈线性关系,回归斱程为Y=-0.4785X+1.0548,r=0.9997,不同批次的龙血竭原料中龙血素A含量在0.021%~0.177%,龙血素B含量在0.018%~0.075%,总黄酮含量在4.287%~8.531%。结论该斱法快速、准确,为龙血竭及其原料的质量控制提供了科学依据。

HPLC法测定龙血竭结肠定位片中龙血素B的含量

目的建立龙血竭结肠定位片中龙血素B的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法。色谱柱:DIKMA Platisil ODS(250mm×4.6mm,5μm);流动相:乙腈-冰醋酸(1→90)(40∶60);柱温:30℃;检测波长:275mm;流速:1.0mL·min-1。结果龙血素B在1.50～13.54μg·mL-1之间线性关系良好(r=0.999 9),平均回收率为99.8%(RSD为1.0%,n=6)。结论该方法操作简单,准确,重复性好,可用于该制剂的含量测定。

龙血素B化学对照品研究

从中药龙血竭中提取、分离、纯化制备龙血素B,经UV、IR、NM R、M S和TLC、HPLC等方法测定结构和纯度。结果得到结构正确、纯度达到99%以上、符合中药化学对照品技术要求、可作为龙血素B的化学对照品。

龙血竭胶囊中龙血素B的含量测定及比较

目的 用HPLC法测定龙血竭胶囊中龙血素B的含量,简化前处理,并对市售不同品牌的龙血竭胶囊中龙血素B的含量进行比较。方法 选用色谱柱Eclipse XDB-C18（5μm,4.6 mm×150 mm,Agilent）,乙腈-0.4%磷酸溶液（35∶65）为流动相,流速为1 ml/min,柱温30℃,检测波长275 nm。结果 龙血素B在6.2-31.5μg/ml范围内与峰面积线性关系良好（r=0.999 99,n=5）,龙血素B的加样回收率99.66%（RSD=1.48%）。结论 该方法简便,准确,可靠,便于日常生产时制剂的含量控制,且市售中不同品牌的龙血竭胶囊中龙血素B的含量均符合国家标准（不低于0.6 mg/粒）。

高效液相色谱法测定龙血竭滴丸中龙血素B的含量

目的：建立测定龙血竭滴丸中龙血素B含量的测定方法——高效液相色谱法（HPLC）。方法：采用反相高效液相色谱法，Diamonsil-C18色谱柱，流动相为乙腈-0．4％磷酸溶液（45：55），检测波长为275nm，流速为1.0ml／min，柱温为30℃。结果：龙血素B在8．28-99．36ng范围内与峰面积呈线性关系（r=0．9996），该制剂中龙血素B的平均回收率为99．03％，RSD为2．09％（n=5）。结论：HPLC法简便，准确，可靠，可用于该龙血竭滴丸的质量控制。

HPLC法测定龙血竭软胶囊中龙血素B的含量

目的建立龙血竭软胶囊中龙血素B含量测定方法。方法采用Symmetry C18色谱柱;流动相为乙腈-冰醋酸溶液(1→90)(42:58),流速为1mL.min-1;检测波长为260nm;柱温为40℃;用外标法定量。结果龙血素B在0.2246～2.9198μg范围内有良好的线性关系(r=0.9999),平均加样回收率为98.5%。结论所建方法简单、可靠,可用于龙血竭软胶囊的质量控制。

剑叶龙血树化学诱导结血物中龙血素A、龙血素B的测定及诱导剂效果评价

目的建立高效液相测定剑叶龙血树人工诱导结血物中龙血素A、B的方法,用于筛选有效的剑叶龙血树结血诱导剂。方法高效液相色谱法(HPLC)法,色谱柱安捷伦ZORBAX Eclipse XDB C18(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-1%冰醋酸(40∶60),流速1.0 m L/min,柱温25℃,检测波长为280 nm。结果龙血素A在0.021 6~0.194 8μg范围内呈线性关系,回归方程为Y=-0.783 6X+1.825 1,r=0.999 8,龙血素B在0.020 1~0.181 1μg范围内呈线性关系,回归方程为Y=-0.478 5X+1.054 8,r=0.999 7,不同诱导剂诱导所得龙血素A含量在0.013%~0.099%,龙血素B含量在0.044%~0.097%。结论该方法快速、准确,可用于剑叶龙血树人工诱导结血物中龙血素A、B的检测,茉莉酸甲酯(50 mg/L)-苯甲酸(2 g/L)、硫酸镁(5%)-苯甲酸(2 g/L)、3吲哚丁酸(5 mg/L)-苯甲酸(2 g/L)、的诱导结血效果较好。

龙血素B对三叉神经节河豚毒素不敏感型钠通道电流的调制作用

目的研究血竭重要成分龙血素B对小鼠三叉神经节河豚毒素不敏感(TTX-R)钠电流的作用。方法采用酶解法分离小鼠三叉神经节细胞,应用全细胞膜片钳技术,观察龙血素B对单个三叉神经节(trigem inal ganglion TG)细胞TTX-R钠电流幅值的影响。结果龙血素B对TTX-R钠电流呈浓度依赖性抑制,且抑制作用可逆;高浓度的龙血素B(0.2mmol/L)加速TTX-R钠通道电流的失活过程,延迟其复活过程,对激活过程无显著影响。结论龙血素B显著抑制TTX-R钠电流,且这种抑制作用发生在钠通道的失活过程而非激活过程,这种作用可能是其镇痛作用的机理之一。

龙血素B对肝星状细胞增殖及细胞外基质分泌的影响

目的观察龙血素B对大鼠肝星状细胞(HSC)增殖及细胞外基质分泌的影响。方法用不同浓度的龙血素B处理大鼠HSC;MTT法计算药物的抑制率;放射免疫法测定细胞上清中透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)和Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)。结果随药物浓度的升高,龙血素B对HSC-T6增殖的抑制作用逐渐增强,有明显的量效关系。细胞上清中HA、LN和Ⅳ-C的含量与对照组相比降低,其中龙血素B浓度为0.300μg/μL时降低最明显。结论龙血素B可抑制HSC-T6增殖,并不同程度抑制HA、LN和Ⅳ-C的分泌。