膝骨关节炎不同证候患者关节液BMP-2和CTGF浓度特点及其与证候程度间的相关性研究

目的研究膝骨关节炎肝肾亏虚证和痰瘀互结证患者关节液骨形态发生蛋白-2(BMP-2)和结缔组织生长因子(CTGF)的浓度特点及其与证候程度间的相关性。方法留取并测定89例膝骨关节炎不同证候患者关节液BMP-2和CTGF的浓度,应用中医证候评分量表量化证候程度,分析关节液BMP-2和CTGF的浓度特点及其与证候程度间的相关性。结果膝骨关节炎痰瘀互结证和肝肾亏虚证患者年龄、身高、体质量、生命体征、病程比较上差异未见统计学意义(P>0.05);膝骨关节炎肝肾亏虚证患者关节液BMP-2的浓度水平显著高于痰瘀互结证患者(z=-2.212,P<0.05);膝骨关节炎肝肾亏虚证患者关节液CTGF的浓度水平显著低于痰瘀互结证患者(z=-2.072,P<0.05);膝骨关节炎肝肾亏虚证患者关节液CTGF浓度水平与中医证候评分呈负相关(r^(2)=0.240,P<0.05)。结论膝骨关节炎痰瘀互结证和肝肾亏虚证患者关节液BMP-2和CTGF浓度特点不同,肝肾亏虚证患者关节液CTGF浓度可以在一定程度上反映其证候的严重程度,上述发现与中医病因病机的分析相一致,其作用机制可能与转化生长因子β(TGF-β)/Smad信号通路的激活程度不同有关。

负载BMP-2 壳聚糖水凝胶在大鼠完全脱位牙再植愈合中的研究

目的:研究负载骨形态发生蛋白(BMP-2)壳聚糖水凝胶在大鼠脱位牙再植愈合中的成骨作用。方法:24只SD大鼠随机分为4组。A组为空白对照组,牙槽窝仅注入生理盐水;B组为实验对照组1,牙槽窝注入壳聚糖水凝胶;C组为实验对照组2,牙槽窝注入BMP-2试剂;D组为实验组,牙槽窝注入负载BMP-2的壳聚糖水凝胶。全麻下完整拔出大鼠上颌右侧中切牙,刮除牙周膜,拔除牙髓,根尖孔打入vitapex,玻璃离子封闭根尖孔,4组分别注入设定的试剂然后再植入牙槽窝并固定。2个月后取带有上颌前牙的牙槽骨,脱钙后包埋、切片、HE染色,光镜下观察各组样本中牙周膜愈合、骨性愈合、炎症性吸收的分值,应用SPSS 24.0软件对数据进行统计处理。结果:D组的牙周膜愈合分值高于A、B、C组,差异均有统计学意义(P<0.05);D组的炎症吸收分值低于A、B、C组,差异均有统计学意义(P<0.05),其余组间牙周膜愈合与炎症性吸收两两比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:负载BMP-2壳聚糖水凝胶能有效促进大鼠脱位牙再植后牙周缺损的修复。

骨质疏松性椎体压缩性骨折患者血清BMP-2,Runx2水平对术后骨折延迟愈合的预测价值

目的探讨骨质疏松性椎体压缩性骨折(Osteoporotic vertebral compressibility fracture,OVCF)患者血清骨形态发生蛋白-2(Bone morphogenetic protein-2,BMP-2)、核心结合因子2(Runt-related transcription factor 2,Runx2)水平对术后骨折延迟愈合的预测价值。方法选取2020年1月-2023年4月徐州医科大学附属淮安医院骨科收治的260例OVCF患者为研究对象,均采用经皮椎体成形术(Percutaneous vertebroplasty,PVP)或椎体后凸成形术(Percutanous kyphoplasty,PKP)治疗,根据术后3个月骨折愈合情况分延迟愈合组、正常愈合组。分析OVCF患者术后骨折延迟愈合的影响因素及血清BMP-2,Runx2水平对术后骨折延迟愈合的预测价值。绘制决策曲线和临床影响曲线,评价血清BMP-2,Runx2水平对术后骨折延迟愈合的价值。结果260例患者术后无失访,22例出现骨折延迟愈合,发生率为8.46%(22/260)。延迟愈合组年龄、吸烟比率、合并糖尿病比率、合并甲状腺疾病比率、有椎体裂隙征比率大于正常愈合组,骨密度T值、术前和术后3个月血清BMP-2,Runx2水平小于正常愈合组,差异有统计学意义(P<0.05)。合并糖尿病、有椎体裂隙征是OVCF患者术后骨折延迟愈合的独立危险因素,骨密度T值、BMP-2,Runx2是OVCF患者术后骨折延迟愈合的独立保护因素(P<0.05)。BMP-2,Runx2联合预测OVCF患者术后骨折延迟愈合对应AUC值为0.856。阈值在0.10~0.63范围内,BMP-2,Runx2联合评估模型评估OVCF患者术后骨折延迟愈合的净受益率优于单独检测。在阈值概率为0.26时,被该模型划分入高风险的人数与真阳性人数基本达成一致。结论OVCF患者血清BMP-2,Runx2水平降低,二者联合检测对术后骨折延迟愈合具有较高的预测效能。

载硅烷和BMP-2的多孔钛表面构建及其成骨活性评价

目的探究钛材纳米多孔表面载硅烷和骨形态发生蛋白-2(BMP-2)的制备方法和制备表面促成骨能力评价。方法采用碱热处理、硅烷化修饰和BMP-2固定,构建硅烷和BMP-2修饰的纳米多孔表面,扫描电子显微镜、X射线光电子能谱、红外光谱和水接触角检测分别表征制备过程中表面形貌、元素、官能团和亲水性的变化,免疫荧光观察固定的BMP-2,细胞活性测试和细胞荧光染色分析表面促成骨细胞黏附和增殖能力,碱性磷酸酶活性评估促细胞成骨能力。结果材料表征手段证实硅烷和BMP-2成功固定在纳米多孔钛表面,细胞评价证实制备表面不但显著增强成骨细胞的黏附和增殖,而且大幅提升成骨细胞的成骨活性。结论该修饰方法构建的表面对成骨细胞具有更好的相容性,有望改善钛基种植体的骨整合能力。

维生素K_(2)对2型糖尿病大鼠模型血管钙化的影响及机制研究

目的:探讨维生素K_(2)对2型糖尿病大鼠模型血管钙化的影响及其机制。方法:6周龄Wistar雄性大鼠30只,适应性喂养7 d后,随机抽取10只作为阴性对照组,喂饲普通饲料,注射等量的柠檬酸缓冲液;其余大鼠在高脂高糖饲料持续喂养4周后通过腹腔注射链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型,糖尿病模型诱导成功后依据分层随机分组原则将大鼠分为糖尿病组和糖尿病+维生素K_(2)组,分别喂饲高脂饲料和含维生素K_(2)的高脂饲料,阴性对照组继续喂饲普通饲料。喂养13周后,处死大鼠,取样,测量血糖及血管中钙浓度;采用Von Kossa染色法进行组织病理学检测;采用qRT-PCR和Western blot法分别测定低氧诱导因子-1α (hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)、丙酮酸脱氢酶激酶4 (pyruvate dehydrogenase kinase4,PDK4)、基质Gla蛋白(matrix Gla protein,MGP)和骨形态发生蛋白-2 (bone morphogenetic protein-2,BMP-2)的mRNA和蛋白的相对表达量。结果:与阴性对照组比较,糖尿病组和糖尿病+维生素K_(2)组大鼠血糖值均显著升高(P<0.01),2组比较差异无统计学意义(P>0.05);3组血管钙浓度比较差异无统计学意义(P>0.05)。Von Kossa染色显示阴性对照组大鼠呈现正常大鼠血管结构,糖尿病组大鼠血管中膜弹性纤维间可见大量棕黑色钙化斑,糖尿病+维生素K_(2)组则无钙化斑或只有少量的棕黑色钙化斑。糖尿病组PDK4、MGP和BMP-2的mRNA和蛋白相对表达量均高于阴性对照组(P<0.05),HIF-1α的mRNA和蛋白相对表达量比较差异无统计学意义;糖尿病+维生素K_(2)组仅PDK4蛋白相对表达量与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);糖尿病组与糖尿病+维生素K_(2)组上述指标比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:2型糖尿病可能通过增加PDK4表达引起BMP-2、MGP表达增加,引起血管钙化,维生素K_(2)能抑制糖尿病引起的血管钙化。

壳聚糖/BMP-2质粒温敏水凝胶复合体生物相容性及修复大鼠颅骨缺损的研究

目的 构建壳聚糖(CS)/骨形态发生蛋白2(BMP2)质粒温敏水凝胶复合体CS/壳聚糖纳米粒(CSn)(pDNA-BMP2)-GP,研究其生物相容性及其在大鼠颅骨缺损再生中的作用。方法 将1 mL CS/CSn-GP复合体注入18只SD大鼠左、右后肢大腿肌袋内,于第3天、第1、2、4、6、9周随机处死3只大鼠,取注射部位及邻近组织,苏木精和伊红染色后观察其炎症反应。将32只SD大鼠按照随机数字表法分为两组:CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP组、CS/CSn-GP组,各16只。在大鼠颅骨人字缝的左右两侧,各做一直径为5 mm的骨缺损,在每只实验鼠左侧的颅骨缺损区不放入任何材料,作为空白组,右侧分别植入各组材料。术后分别于第4、8周时随机处死6只大鼠,取出样本进行CT测量颅骨缺损面积及苏木精和伊红染色评价骨再生情况。结果 苏木精和伊红切片显示,复合体注入肌袋后,未见明显炎症反应;术后第4、8周,在骨修复质量及速度上,CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP组明显优于空白组和CS/CSn-GP组。术后第4、8周,颅骨缺损面积CT结果显示:CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP组骨缺损面积分别为(0.06683±0.00248)、(0.02017±0.00816)S/cm^(2),均明显低于空白组[(0.15033±0.01748)、(0.05150±0.01183)S/cm^(2)]和CS/CSn-GP组[(0.12650±0.00706)、(0.03883±0.00422)S/cm^(2)],差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 CS/CSn-GP复合修复体系组织相容性良好,可作为良好的组织工程支架。壳聚糖/BMP-2质粒温敏水凝胶复合修复体系CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP可以诱导大鼠颅骨临界尺寸骨缺损内的新骨形成,骨质量优于其他组。

藤黄健骨丸调控BMP-2/Smad信号通路治疗绝经后骨质疏松症

目的观察藤黄健骨丸对绝经后骨质疏松症模型大鼠的治疗作用。方法将72只雌性大鼠随机分为6组,分别为假手术组(SHAM)、模型组(OVX)、仙灵骨葆胶囊组(XLGB)、藤黄健骨丸低剂量组(THJGW-L)、藤黄健骨丸中剂量组(THJGW-M)及藤黄健骨丸高剂量组(THJGW-H)。手术造模3 d后给药,除假手术组、模型组灌胃蒸馏水外,其余4组均按照相应剂量灌胃药物。连续灌胃8周后,分别检测大鼠术后各阶段体质量、子宫和肾脏重量、骨强度值,观察股骨病理变化。Western-blot法检测大鼠股骨中Runx2、BMP-2和Smad1蛋白表达水平。结果实验结果显示,藤黄健骨丸可以增加去卵巢大鼠的子宫和肾脏重量,能够提高去卵巢大鼠的股骨荷载力,改善骨微结构,增加钙离子沉积,增加骨细胞数量。Western-blot结果显示去势大鼠骨组织中Runx2、BMP-2和Smad1相对蛋白水平降低,经过藤黄健骨丸治疗后,Runx2、BMP-2和Smad1相对蛋白水平显著升高。结论藤黄健骨丸可以提高去势大鼠骨强度,改善骨组织形态,其作用机制可能与调控BMP-2/Smad信号通路来促进骨形成,对绝经后骨质疏松症有一定的治疗作用。

壳聚糖/BMP-2质粒温敏水凝胶复合体促犬牙槽骨再生的研究

目的 进行壳聚糖/BMP-2质粒温敏水凝胶复合体系CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP的构建,对犬牙槽骨再生中此复合体系的作用进行分析。方法 将4只比格犬第2、3前磨牙建立牙周炎模型,实验牙齿随机划分为3组:CS/CSn-GP组、CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP组、空白对照组。CS/CSn-GP组注入不含BMP-2的壳聚糖水凝胶复合体(CS/CSn-GP);CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP组注入壳聚糖/BMP-2质粒温敏水凝胶复合体CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP,空白对照组不注入任何材料。8周后处死,采用Masson染色法观察牙周炎部位牙槽骨再生状况;钙钴法观察骨缺损部位碱性磷酸酶(ALP)表达状况。结果 Masson染色显示CS/CSn-GP组与CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP组,均有不同程度的牙槽骨再生,CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP组再生显著;钙钴法显示CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP组ALP强阳性,CS/CSn-GP组ALP弱阳性,空白对照组为阴性。3组ALP阳性部位着色的平均光密度值比较,CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP组> CS/CSn-GP组>空白对照组,两两比较P均﹤0.05。结论 CS/CSn-GP复合修复体系对牙槽骨再生有着积极影响,包载pDNA-BMP-2后,有着更显著的促牙槽骨再生作用。

BMP⁃2/Smad信号通路探讨金匮肾气丸对BMSCs成骨分化的影响

目的观察金匮肾气丸含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨分化的影响并探讨其发生的作用机制。方法制备金匮肾气丸含药血清,CCK⁃8法筛选出最佳浓度的金匮肾气丸含药血清对BMSCs向成骨分化的影响。将BMSCs分为空白组(control组)、成骨诱导组(OIS)、空白血清组(ROIS组)及含药血清组(JKSQ⁃OIS),分别对各组BMSCs进行成骨诱导。连续干预14 d及21 d后,分别进行碱性磷酸酶(ALP)染色和茜素红染色镜下观察各组碱性磷酸酶活性和成骨矿化水平;连续干预14 d后,实时荧光定量PCR(q⁃PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测各组BMSCs中骨形态发生蛋白2(BMP⁃2)、Smad1、ALP、Runt相关转录因子2(runt⁃related transcription factor 2,Runx2)及成骨细胞特异性转录因子(Osterix,OSX)mRNA和蛋白的相对表达量。结果与control组相比,OIS组与ROIS组出现点状矿化结节,ALP染色轻微变深,ALP和Runx2 mRNA及蛋白的表达上升(P<0.05,P<0.01),OSX的表达上升但不明显(P>0.05);与OIS组相比,JKSQ⁃OIS组矿化结节成片分布,ALP染色明显加深,BMP⁃2、Smad1、ALP和Runx2 mRNA及蛋白的表达上升(P<0.05,P<0.01),OSX mRNA及蛋白表达有上升趋势(P>0.05)。结论金匮肾气丸含药血清可能通过调控BMP⁃2/Smad信号通路,上调ALP、Runx2和OSX的表达,促进BMSCs向成骨分化,改善OP。

BMP-2/Smads/Osterix信号在氟化钠诱导大鼠成骨细胞增殖分化中的作用研究

目的探讨氟化钠对大鼠颅骨成骨细胞增殖分化的影响,并进一步研究BMP-2/Smads/Osterix信号的调控机制。方法选择新生SD大鼠(24 h以内)颅骨,分离大鼠颅骨中的成骨细胞,进行体外原代培养。分别用不同浓度的氟化钠作用于成骨细胞,用噻唑蓝(MTT)、碱性磷酸酶观察氟化钠对大鼠成骨细胞的影响,并用蛋白印迹法测定BMP-2蛋白、Smad1/5/9蛋白、Osterix蛋白的表达。结果与对照组相比,低剂量的氟化钠(0.25mmol/L、0.50 mmol/L)暴露于成骨细胞,成骨细胞增殖明显、碱性磷酸酶活性增强,而当高剂量的氟化钠(2.00mmol/L、4.00 mmol/L)刺激成骨细胞,成骨细胞的增殖明显受到抑制、碱性磷酸酶活性降低;与对照组比较,低剂量氟化钠浓度为0.50 mmol/L时,BMP-2蛋白、Smad1/5/9蛋白、Osterix蛋白的表达水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论低浓度氟化钠可通过BMP-2/Smads/Osterix信号促进大鼠成骨细胞的增殖和分化,高浓度氟化钠则抑制成骨细胞的增殖分化。

BMP-2和FGF-2对小鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的影响

目的：观察骨形成蛋白（BMP-2）和成纤维细胞生长因子2（FGF-2）对小鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）向成骨细胞分化的影响。方法：取3-18月雄性C57BL/6J小鼠（共50只）的骨髓细胞,分离贴壁培养后,用免疫磁珠法纯化,并鉴定为MSCs后,再进行贴壁培养24h后,分别在成骨细胞诱导培养液中加入100μg/LBMP-2和0.5nmol/LFGF-2持续诱导7、14、21d后,进行碱性磷酸酶染色、碱性磷酸酶活性检测,Vonkossa染色以及茜素红染色,并用递转录荧光定量PCR法检测向成骨细胞分化的标志性基因（Runx2/cbfa1、Alp、collagen-1、osteocalcin）的表达情况。结果：BMP-2刺激组的ALP活性以及钙化结节明显高于对照组,Runx2/cbfa1,ALP,collage-1,osteocalcin的mRNA呈高表达;FGF-2刺激组的ALP活性以及钙化结节也高于对照组,Runx2/cbfa1、Alp、collagen-1、osteocalcin的mRNA表达量也高于对照组,但不如BMP-2明显。结论：BMP-2和FGF-2在不同程度上促进体外培养的小鼠MSCs向成骨细胞方向分化。

川芎嗪对膝骨性关节炎大鼠软骨BMP-2、Smad1及BMP-2mRNA、Smad1mRNA表达的影响

目的观察川芎嗪治疗膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)大鼠模型关节软骨中骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)、Smad1表达的变化,并探讨川芎嗪治疗KOA的作用机制。方法制作大鼠膝关节炎模型,将建模成功的大鼠纳入模型对照组,常规饲养,川芎嗪高剂量组、川芎嗪低剂量组、阳性对照组行灌,正常组和模型组行等量生理盐水治疗6 w,实验结束后,各组大鼠分别行HE切片软骨Mankin评分、Western Blot检测软骨组织BMP-2、Smad1及实时荧光定量PCR检查BMP-2mRNA、Smad1mRNA的变化。结果各组软骨Mankin评分中,川芎嗪各剂量组和阳性对照组均较空白组高(P<0.05),均较模型组低(P<0.05),且川芎嗪高剂量组<阳性对照组<川芎嗪低剂量组(P<0.05)。正常组、川芎嗪各剂量组及阳性对照组中软骨BMP-2、Smad1及BMP-2mRNA、Smad1mRNA相对表达量较模型组均高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);与阳性对照组相比,川芎嗪高剂量组BMP-2、Smad1及BMP-2mRNA、Smad1mRNA表达量明显高于阳性对照组(P<0.05),而川芎嗪低剂量组其表达则均低于阳性对照组。结论川芎嗪可能通过上调早期KOA大鼠BMP-2mRNA及Smad1mRNA基因的表达,从而促进BMP-2及Smad1蛋白的表达,这可能是在某种程度上减轻关节软骨退变、修复软骨损伤作用的机制之一。

尿毒症血液透析患者Treg/Th17功能失衡影响血管钙化因子BMP-2表达的研究

目的探讨尿毒症血液透析患者Treg/Th17细胞功能是否发生失衡及其对血管钙化因子BMP-2表达的影响。方法选取66例尿毒症血液透析患者(MHD组)、30例尿毒症未并发心血管疾病且未透析患者(WHD组)和20例健康志愿者,将MHD组患者分为并发心血管疾病(MHD1,n=36)和未并发心血管疾病(MHD2,n=30)。流式细胞术测单个核细胞中Treg和Th17细胞比例,实时荧光定量PCR测Foxp3和ROR-γt mRNA表达,ELISA测单个核细胞上清液中炎症因子IL-17、IL-10和血管钙化因子BMP-2水平。结果与健康者相比,尿毒症患者出现Treg/Th17细胞功能失衡和BMP-2分泌异常,主要表现为Treg和Th17细胞比例、Foxp3和ROR-γt表达、IL-17和BMP-2水平均增高(P<0.05),而IL-10水平减低(P<0.05),这一失衡亦表现在WHD与MHD组、MHD1与MHD2组间。透析者IL-17、BMP-2水平均与Treg细胞比例呈负相关(P<0.05),而与Th17细胞比例呈正相关(P<0.05),其中BMP-2与IL-17、IL-10水平分别呈正相关和负相关(P<0.05)。结论尿毒症血液透析患者Treg/Th17细胞失衡使微炎症因子分泌异常,进而加剧血管钙化,导致加速性动脉粥样硬化和心血管疾病发生。

富血小板血浆联合骨髓间充质干细胞对兔股骨头坏死BMP-2/Smads通路的影响

目的研究富血小板血浆联合骨髓间充质干细胞对兔股骨头坏死BMP-2/Smads通路的影响。方法随机将40只新西兰兔随机分为模型组、富血小板血浆(3%)组、骨髓间充质干细胞(1×106/m L)组、富血小板血浆(3%)+骨髓间充质干细胞(1×106/m L)组。建立兔股骨头坏死模型,术后4w分别向各组股骨头内髓芯减压后注射富血小板血浆、骨髓间充质干细胞。另设空白组10只新西兰兔。空白组与模型组不注射任何物质作为对照。造模后第14周,取材。通过HE染色观察兔股骨头骨髓腔内的病理学及骨陷窝空缺率变化情况。酶联免疫(ELISA)法检测血清中血管内皮生长因子(VEGF)的含量。蛋白免疫印迹(Western blot)法检测股骨头中BMP-2、Smad1、Smad5、Runx2的蛋白水平的变化。结果与模型组相比,各治疗组骨髓腔内骨小梁变粗,脂肪细胞减少,骨细胞增多,骨陷窝空缺率降低(P<0.05);各治疗组兔血清VEGF的含量增加,股骨头中BMP-2、Smad1、Smad5、Runx2的蛋白水平提高。结论富血小板血浆与骨髓间充质干细胞可调节BMP-2/Smads信号通路,促进股骨头骨细胞增殖,减少骨陷窝空缺率。

慢性肾脏病5期患者血清BMP-2及BMP-7与颈动脉钙化的相关性研究

选取慢性肾脏病5期(CKD5期)住院患者52例,予以颈动脉多普勒检查,并记录颈动脉中膜厚度以评估血管钙化情况,同期健康体检人员40例为对照组。参加者均检测血清骨形态蛋白2(BMP-2)、骨形态蛋白7(BMP-7)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、钙(Ca)、磷(P)、全段PTH(iPTH)指标。结果显示病例组血清BMP-7低于对照组,BMP-2高于对照组。病例组中颈动脉钙化发生率高于对照组,与高BMP-2、低BMP-7相关;血清BMP-2与BMP-7呈负相关性。

BMP-2活性多肽体外定向诱导大鼠BMSCs向成骨方向分化的实验研究

[目的]骨形成蛋白-2（BMP-2）具有较强的诱导大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）向成骨方向定向分化的能力。天然的BMP-2数量有限，结构复杂，限制了其广泛应用。本实验设计合成了BMP-2活性多肽，体外试验探讨其对BMSCs向成骨方向定向诱导成骨分化的能力，评价BMP-2活性多肽的诱导成骨效应。[方法]实验分2组，诱导组和非诱导组。取4周的Wistar大鼠分离培养BMSCs，传至第3代时，实验组，改用成骨诱导培养基（DMEM完全培养基＋BMP-2活性多肽200μg／ml）。非诱导组，仍采用DMEM完全培养基。继续培养2～4周，采用细胞爬片培养、碱性磷酸酶活性和钙含量测定、实时定量PCR检测Ⅰ型胶原（Col—Ⅰ）及骨桥蛋白（OPN）mRNA的表达，评价BMP-2活性多肽的体外诱导成骨能力。[结果]诱导组BMSCs生长良好，表现出与典型的成骨细胞相似的形态特征和生物学特性，ALP活性上升，钙含量增加，Col-Ⅰ和OPN的mRNA呈高表达。非诱导组，成骨特性不明显。[结论]合成的BMP-2活性多肽能有效地促进BMSCs向成骨方向分化，是组织工程化骨中理想的诱导成骨的细胞因子。具有与天然BMP-2类似的骨诱导活性，具有广阔的应用前景。

胰岛素样生长因子1对成骨细胞中BMP-2、BMP-7基因表达的影响

目的 研究胰岛素样生长因子1(IGF-1)对成骨细胞中BMP-2、BMP-7基因表达的影响,探讨IGF-1促进成骨细胞增殖、分化的分子机理。方法 以不同浓度的IGF-1刺激分离培养的大鼠成骨细胞,提取细胞总RNA,RT-PCR扩增BMP-2及BMP-7基因cDNA,同时扩增管家基因β-actin作为内对照。扫描PCR产物电泳照片,计算BMP-2/β-actin及BMP-7/β-actin的积分光密度比值,推算BMP-2及BMP-7基因的相对表达水平。结果 IGF-1可以在转录水平增加大鼠成骨细胞中BMP-2及BMP-7基因的表达,并呈明显的剂量依赖关系。结论IGF-1促进成骨细胞增殖、分化的作用可能是通过增加BMP-2及BMP-7基因的表达来实现的。

BMP-2、bFGF在牵引成骨中的表达及意义

目的 :通过两种不同术式的比较 ,研究骨形态发生蛋白 - 2 (BMP - 2 )、碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)的表达水平和成骨的关系 ,探讨牵引成骨的成骨机制。方法 :2 8只狗随机分为牵引成骨组和直接延长组各 12只及正常对照组 4只 ,用免疫组化染色方法观察比较BMP - 2、bFGF在两组牵引第 6天、固定 2周、固定 8周时的表达情况。结果 :两组在牵引第 6天骨断端附近的新生编织骨边缘基质及周缘的活跃的成骨细胞、骨膜下及牵开区增生活跃的间充质细胞、成纤维细胞、胶原纤维基质均可见BMP - 2、bFGF强阳性的染色 ,染色平均灰度比较均无统计学差异 (P >0 .0 5 ) ;牵引后固定 2周 ,牵引组新生编织骨边缘的成骨细胞、软骨细胞、牵开区纤维结缔组织仍可见BMP - 2、bFGF阳性染色 ,而直接延长组的BMP - 2、bFGF在牵开区的染色强度明显降低 (P <0 .0 5 ) ;牵引后固定8周 ,BMP - 2、bFGF在牵引组和直接延长组的组织中的染色强度均明显减弱 ,染色灰度比较均无统计学差异 (P >0 .0 5 )。结论 :在下颌骨牵引成骨过程中 ,在机械的牵引力和微创伤等多种因素刺激下 ,局部牵开区BMP - 2和bFGF持续高表达。两种生长因子可能共同参与促进了牵开区大量新骨的形成。

阿仑膦酸钠对成骨细胞BMP-2信号通路的影响

二膦酸盐不仅特异性抑制破骨细胞,同时对成骨细胞也起一定的作用.用酶消化法取乳鼠颅盖骨进行成骨细胞培养,分为空白对照组、阿仑膦酸钠高、中、低剂量组.从BMP-2/Smads/Runx2/Osterix信号通路角度观察二膦酸盐对成骨细胞分化的作用.结果显示:比色法结果显示干预2和4d后各剂量阿仑膦酸钠组的碱性膦酸酶(AKP)显著增加,其中中剂量组表达最高,各组明显高于空白对照组(p<0.05),第6天各剂量阿仑膦酸钠组AKP逐渐下降,与空白对照组比较,无统计学意义(p>0.05);ELISA结果显示随着天数增加各剂量阿仑膦酸钠组的BMP-2逐渐增加,其中中剂量组表达最高,各组明显高于空白对照组(p<0.05),干预2和4d后各剂量阿仑膦酸钠组的I型胶原(Collagen Type I)显著增加,其中中剂量组表达最高,各组明显高于空白对照组(p<0.05),第6天各剂量阿仑膦酸钠组Collagen Type I逐渐下降,空白对照组随着天数逐渐增加,但均低于同时期用药组(p<0.05);荧光定量PCR(qPCR)检测结果显示BMP-2、Smad1/5、Runx2和Osterix mRNA表达在干预后,随着时间的延长,逐渐上升;阿仑膦酸钠组的含量高于同期的空白对照组.提示阿伦膦酸钠能刺激成骨细胞增殖,增强BMP、AKP活性,通过BMP-2/Smads/Runx2/Osterix通路上调相关基因表达,促进成骨细胞分化.

补肾活血方对兔膝骨关节炎病变软骨BMP-2/gremlin表达的影响

目的观察家兔膝骨关节炎模型关节软骨BMP-2/gremlin的表达情况及补肾活血方的调节作用。方法 48只实验用家兔随机分为治疗组、阳性对照组和阴性对照组,每组16只。治疗组和阳性对照组行右膝关节前交叉韧带横断手术(ACLT)造模,阴性对照组行右膝模拟造模手术。治疗组造模后给予补肾活血方灌胃治疗,阳性对照组造模后给予制动干预,阴性对照组行模拟手术后给予生理盐水灌胃。在术后第4、8周各组各处死8只家兔,观察膝关节损伤软骨肉眼改变,取组织标本经石蜡包埋切片后行常规苏木精-伊红染色观察软骨组织的病理变化,Real time PCR法及免疫组化法检测BMP-2、gremlin的表达。结果补肾活血方可减轻兔膝骨关节炎模型关节软骨形态学损害。治疗组和阳性对照组第4、8周软骨中BMP-2及gremlin表达量明显高于阴性对照组(P<0.05),且阳性对照组较治疗组gremlin同期表达增多(P<0.05);第8周阳性对照组标本中BMP-2表达持续稳定,但gremlin表达水平较第4周明显上升(P<0.05)。结论补肾活血方对兔ACLT模型关节软骨中修复保护性细胞因子BMP-2的表达有上调作用,同时抑制BMP-2拮抗因子gremlin过度表达,对骨关节炎修复有良好的调节作用。