P38/caspase-3介导的MEF2C信号通路参与大鼠脑缺血再灌注损伤

目的观察大鼠脑缺血再灌注后海马CA1区肌细胞促进因子(MEF)2C磷酸化(激活)和蛋白水平的变化规律,并探讨其可能的分子机制。方法采用SD大鼠四动脉结扎模型,用免疫印迹法检测蛋白表达,给药组大鼠在缺血前20min脑室给药。结果脑缺血再灌注可诱导MEF2C激活,6h达高峰;其蛋白表达在再灌后期(3～5d)明显下降。Caspase-3蛋白和激活的caspase-3(17ku)水平在再灌后期均显著增加;Caspase-3特异性抑制剂Ac-DEVD-CHO可明显阻止再灌3d的MEF2C蛋白表达降低。P38激酶抑制剂SB202190不但抑制再灌注6h的MEF2C激活,而且也降低了再灌注3d的caspase-3激活;但胞外信号调节激酶(ERK)5的反义寡核苷酸未显著影响MEF2C的磷酸化水平。结论P38/caspase-3依赖的MEF2C信号通路可能参与了大鼠脑缺血再灌注诱发的神经元凋亡过程。

EB病毒潜伏性膜蛋白1促原代MEF细胞永生化的作用及机制

为了探讨EB病毒潜伏性膜蛋白1(LMP1)促原代小鼠胚胎成纤维(MEF)细胞增殖规律及作用机制,构建包含野生型LMP1和其TNFR相关死亡区(TRADD)结合区即羧基末端384～386氨基酸置换(YYD→ID)的突变型LMP1逆转录病毒,感染原代培养的MEF细胞,动态观察各细胞在传代培养过程中细胞动力学和形态学变化。发现对照细胞(MEF-LNSX)传至P8～P10时出现明显的生长阻滞;携突变型LMP1的细胞(MEF-LMP1TRADD)自P10起倍增时间逐渐延长,P19时出现明显生长阻滞;而携野生型LMP的细胞(MEF-LMP1)倍增时间逐渐降低并发生了永生化。Westernblot检测发现MEF-LNSX细胞CyclinA表达自P4起明显降低,MEF-LMP1TRADD细胞自P10显著增高后快速降低,MEF-LMP1自P10显著增高后一直维持在较高水平。结果表明:LMP1能促进MEF细胞增殖并诱导体外永生;LMPTRADD则仅能诱导MEF细胞的早期增殖。提示羧基末端区(TRADD)是LMP1促MEF细胞永生的重要活性部位,上调CyclinA表达可能是其作用机制之一。

肺炎链球菌分离株红霉素耐药erm、mef基因检测研究

目的 :了解引起苏州地区儿科临床肺炎链球菌 (Sp)分离株红霉素耐药的状况。方法 :设计、优化与红霉素耐药相关的红霉素核糖体甲基化酶基因 (erm )和主动外排转运体基因 (mef)PCR检测体系 ,对 2 0 0 2年 9月～ 2 0 0 3年 4月呼吸道感染患儿痰标本中分离到的 2 3株Sp菌 (红霉素敏感表型 3例、中敏 3例、耐药 17例 )进行检测。结果 :红霉素耐药、中敏、敏感Sp菌分别检出耐药基因 94.1% (16 17)、10 0 %、3 3 .3 % (1 3 )。ermB基因PCR检出率 43 .5% (10 2 3 ) ;ermA ermB基因通用兼并引物PCR检出率 69.6% (16 2 3 ) ;mefA基因PCR检出率 2 6.1% (6 2 3 ) ;erm或 和mef基因检出率 87.0 % (2 0 2 3 )。携带erm基因的耐药表型率 93 .3 % (14 15) ,其中单独ermA基因为 10 0 % (4 4) ;ermB +ermA B基因为 87.5% (14 16)。单独携带mef基因的耐药表型率 50 % (2 4) ,而erm或 和mef基因为 80 % (16 2 0 )。结论 :本地区Sp菌株中存在ermA、ermB和mef基因 ;三者单独或共同表达均可致Sp菌红霉素耐药 ;

bFGF诱导MEF生成的条件培养基对人胚胎干细胞生长的影响

为了探讨低浓度bFGF诱导小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)生成的条件培养基对人胚胎干细胞(hESC)生长分化的影响,以系列浓度的bFGF作用于MEF上,收集条件培养基(bFGF-MCM),用于hES2细胞的无滋养层培养。以不添加bFGF而收集的MEF条件培养基(MCM)为阴性对照,同样浓度的bFGF添加于SR培养基(bFGF-SR)为空白对照。通过形态学特征和碱性磷酸酶染色法对hES2的生长分化状态进行评估。结果发现,培养一周内,未分化hES2克隆的比率,阴性对照为23%;空白对照组为13%-31%。当bFGF浓度为0.1,0.3,1,4ng/ml时,bFGF-MCM组未分化克隆的比率分别为44%,74%,77%和78%,与阴性和空白对照组相比,未分化克隆的比率均有不同程度提高,差异有统计学意义(P<0.01)。该结果揭示了经bFGF诱导的MEF细胞所产生的条件培养基具备了维持hES细胞正常生长而不分化的能力。对bFGF-MCM的深入分析,有望更好地了解hESC的生长与分化机制。

基于MEF的机场安检系统外部接口平台的设计与实现

针对安检系统各子系统与外部系统交互信息的接口方式不同,但其交互的消息格式均遵循一定的消息规范协议,且安检各子系统处理消息逻辑也基本相同的特点,本文提出了机场安检系统外部接口平台的设计与实现,该平台实现了基于.NET 2.0的轻量级MEF的编程框架,支持动态拓展和装载不同接口访问器,实现不同接口方式下的消息交互,解决安检系统与外部系统有多种接口方式维护不同接口程序问题。实践表明,该平台能够兼容Socket、MQ、Web Services等不同接口方式,实现安检各子系统同外部系统信息交互。

以太网业务MEF2.0认证研究与实现

MEF CE 2.0认证一直广受国际大型运营商和设备商的关注与支持,成为新一代以太网业务互联互通、透明传送管理的标准。通过对MEF CE 2.0认证相关的标准、方法及技术细节的深入研究,总结并提供了认证测试相关的业务范围、定义、操作流程、测试拓扑、测试项目与指标等,并在实际业务认证中得以验证实现,可为电信运营商进行类似国际认证提供技术参考。

Research Progress on MEF2B Gene in Human and Animals

Myocyte enhancer factor 2B （MEF2B） gene belongs to myocyte enhancer factor 2 （MEF2） gene family. They are all widely expressed in muscle and nerve tissues of human and animals. MEF2B plays an important role in the growth of muscle, development and differentiation of nerve system and liver fibrosis. This re- view mainly focused on the structural characteristics, tissue distribution, biological functions and research progress of MEF2B gene in human and animals.

p53对MEF细胞中波段紫外线损伤中miR-465表达的影响

目的研究中波段紫外线(UVB)损伤时,p53对MEF细胞的miR-465表达的影响。方法实验采用野生型小鼠胚胎成纤维细胞(MEFp53+/+)和p53缺失的小鼠胚胎成纤维细胞(MEFp53-/-),首先分别验证了这两株细胞的p53蛋白表达的差异;其次分别观察了这两种细胞在50 J/m2的UVB照射后孵育不同时间细胞存活率的改变及miR-465差异表达的情况。结果 MEFp53-/-的p53表达水平呈缺失状态;经50 J/m2UVB照射后,两种细胞的存活率均在照后2 h出现显著降低,至照后24 h未见明显恢复,且MEFp53-/-的存活率在照后多个时间点低于MEFp53+/+细胞;MEFp53+/+中miR-465的表达下调而MEFp53-/-中miR-465的表达则上调,在照后2、4、6和12 h升高均超过2倍。结论 UVB照射能引起MEF细胞存活率下降,且MEFp53-/-的存活率在多个时间点低于MEFp53+/+;p53基因对UVB照射后miR-465的表达具有负向调节作用。

基于MEF的卫星遥感监测产品集成框架实现

传统的遥感监测分析系统集成了大量专业的图像处理算法,但没有针对特定领域监测分析业务进行梳理和建模,算法、模型和功能复用性、扩展性较差,系统在应用推广中困难较大。为此,提出基于管理扩展框架技术的卫星遥感监测产品集成框架,对于特定领域范围内的监测分析算法、模型、业务应用等动态、灵活地按需集成到应用框架上。通过建立该应用框架,实现业务连贯性处理的同时缩短影像处理周期,并提高代码的复用率和系统的灵活性及可扩展性。由于该应用框架按需动态扩展的特性,可将其向其他各相关领域进行推广。

Silverlight 4.0中应用MEF实现组件动态加载的研究

针对Silverlight生成的xap包文件过大这一问题,提出了按业务逻辑进行分割的策略,并采用MEF技术实现业务功能的按需动态加载,给出具体实现思路与步骤。结果表明,使用MEF能使基于Silverlight的应用系统转换为动态组合、按需下载,进一步增强用户体验。

LPS激活TLR4抑制BMP9诱导iMEFs成骨分化

目的研究脂多糖(LPS)激活的Toll样受体4(TLR4)信号对骨形态发生蛋白9(BMP9)诱导永生化小鼠胚胎成纤维细胞(i MEFs)成骨分化的影响。方法细胞免疫荧光检测TLR4/NF-κB信号通路的激活;LPS,BAY11-7082和BMP9处理iMEFs,ALP染色和活性检测i MEFs早期成骨分化能力;茜素红S染色检测晚期成骨分化能力;半定量PCR和Western blot检测晚期成骨基因OCN和OPN表达;Western blot检测Smad1/5/8磷酸化水平;半定量PCR和Western blot检测成骨关键转录因子Runx2和Dlx5的表达。结果 LPS成功激活TLR4/NF-κB信号通路;LPS抑制BMP9诱导的ALP染色和活性(P<0.01)、钙盐沉积、OCN的mRNA和蛋白质表达(P<0.05)、OPN的mRNA(P<0.01)和蛋白质(P<0.05)表达、Smad1/5/8信号通路激活(P<0.01)、Runx2的mRNA和蛋白质表达(P<0.05)、Dlx5的mRNA(P<0.01)和蛋白质(P<0.05)表达,BAY11-7082可以部分逆转LPS的抑制作用(P<0.05)。结论 LPS激活TLR4可以通过NF-κB信号通路抑制BMP9诱导的iMEFs成骨分化。

基于MEF技术的设备控制软件界面平台设计与实现

针对大型设备控制软件系统各模块间耦合度高导致可扩展性差的问题,提出了基于托管可扩展框架(MEF)技术的设备控制软件界面(GUI)平台设计方案;介绍了MEF技术的基本工作原理和核心概念,详述了软件界面平台实现方法。通过建立此软件界面平台,实现了在相对较短的时间内以一种标准的模式构建设备插件式应用程序,降低了系统的耦合性,提高了界面可复用性及系统的可扩展性。

泛素结合酶E2变体蛋白对MEFs细胞衰老的影响

目的探讨泛素结合酶E2变体蛋白(UBE2V1)对MEFs细胞衰老的影响。方法Western blot检测UBE2V1在年轻(2月龄)和年老小鼠(24月龄)各组织中的表达差异,以荧光定量PCR及Western blot检测UBE2V1在年轻和衰老MEFs细胞中表达的差异,荧光定量PCR和Western blot验证Ube2v1基因的siRNA沉默效果,β-半乳糖苷酶染色检测Ube2v1表达下调对MEFs细胞衰老的影响,Edu和Alarmar Blue检测Ube2v1基因沉默后MEFs细胞增殖能力的变化。结果UBE2V1在衰老小鼠的心脏、肝脏、肾脏和脑组织中表达下调,同时在衰老的MEFs细胞中也明显表达下调,在年轻细胞中沉默Ube2v1基因后β-半乳糖苷酶染色结果显示衰老的细胞数量明显增加,且Edu和Alarmar Blue检测发现Ube2v1基因沉默后MEFs细胞增殖能力显著下降。结论沉默Ube2v1可通过抑制MEFs细胞增殖,从而促进细胞衰老。

基于无监督学习的金属表面高光去除算法研究

金属材料表面的高光会严重破坏图像的连续性,产生一定的伪边缘,导致高光区域的纹理细节减弱甚至消失,干扰后续表面的区域分割和缺陷检测等操作。针对现有高光去除方法效率低、损失大、易失真、金属高光数据难标定等问题,提出了一种基于卷积神经网络(CNN)的无监督感知增强网络模型。使用生成对抗的方法生成大量拥有高光特征信息的金属图像,用于增加训练集中高光金属图像数据集的数量;在上下文聚合网络中引入细节增强模块(detail enhance model,DEM)和色彩增强模块(color enhance model,CEM)提高低分辨率权重图中的特征细节保留率;评估函数采用多尺度结构相似性函数代替原有结构相似性函数,解决在图像尺寸过大时细节不敏感的问题。实验表明,所提模型相比其他多曝光图像融合模型,在融合速度领先情况下,融合图像的互信息和平均梯度等评估指数提升10%左右,能够保留更多的纹理特征信息。

慢病毒介导的外源基因体外投递系统的建立

目的针对不同哺乳类细胞建立相应的慢病毒体外感染体系,以建立慢病毒介导的外源基因体外投递系统。方法按Invitrogen公司推荐的标准程序进行慢病毒(携带EGFP基因)包装(脂质体介导的瞬时转染)、超速离心浓缩和保存等,随后用病毒上清或浓缩后的病毒感染293FT细胞,24～48h后荧光显微镜下观察是否见绿色荧光以证实慢病毒是否成功生产;将携带EGFP基因的病毒上清或浓缩后的病毒分别加入内含293FT细胞、小鼠ES细胞、小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)或小鼠睾丸生殖细胞的培养板孔内,感染6～12h后,用相应培养基替换感染液,数天后荧光显微镜下观察是否见绿色荧光以证实慢病毒是否成功感染不同哺乳类细胞。结果按标准程序生产的携带EGFP基因慢病毒(病毒上清或浓缩后的病毒)成功高效率感染293FT细胞、MEFs或小鼠睾丸生殖细胞;用浓缩后的病毒(携带EGFP基因)感染小鼠ES细胞,亦可获得EGFP阳性的ES细胞克隆。结论熟练掌握了慢病毒包装、浓缩及鉴定等技术,同时针对不同哺乳类细胞建立了相应的慢病毒介导的外源基因体外传递系统,这些为相关后续研究打下了良好的基础。

人胚胎成纤维细胞与小鼠胚胎成纤维细胞生物学特性比较

探讨人胚胎成纤维细胞用于人胚胎干细胞体外长期培养的可行性 ,以含 10 %胎牛血清的 DMEM(低糖 )溶液为培养基 ,对人胚胎成纤维细胞的生长形态、对胰酶的敏感性、生长曲线及细胞周期进行研究 ,并与小鼠胚胎成纤维细胞作比较。结果显示 ,人胚胎成纤维细胞和小鼠胚胎成纤维细胞在体外均为贴壁生长型细胞 ,与小鼠胚胎成纤维细胞相比 ,人胚胎成纤维细胞生长更旺盛 ,且细胞寿命更长 ;在室温条件下 ,对 0 .2 5 %胰酶更敏感 ,消化时间不宜超过 3min。提示人胚胎成纤维细胞不仅在生长状况上与小鼠胚胎成纤维细胞类似 ,而且作为人胚胎干细胞体外长期培养的饲养层 ,在使用期限上优于后者 。

肺炎链球菌对大环内酯类抗生素耐药情况及耐药基因研究

目的调查上海地区肺炎链球菌对红霉素的敏感度,研究肺炎链球菌对大环内酯类抗生素耐药机制。方法对中山医院57株临床分离肺炎链球菌进行红霉素药敏试验;应用聚合酶链反应(PCR)技术对上海4所医院中分离的53株红霉素耐药肺炎链球菌检测耐药基因(ermB,mefA,mefE)。结果57株肺炎链球菌中12株(21.0%)敏感,3株(5.3%)中介,42株(73.7%)耐药。53株红霉素耐药肺炎链球菌中,ermB基因、mefE基因、mefA基因分别在51株(96.2%)、22株(41.5%)和1株(1.9%)中检测到。其中21株(39.6%)同时检测到ermB基因和mefE基因,1株(1.9%)同时检测到ermB基因和mefA基因,1株(1.9%)未检测到ermB基因、mefE基因或mefA基因。结论上海地区肺炎链球菌对大环内酯类抗生素耐药率较高。ErmB介导的靶位改变是最常见的耐药机制,mef(特别是mefE)介导外排机制引起者也较常见。

微涡旋絮凝-逆流气浮-纳滤集成工艺去除水中腐殖酸的研究之二——以聚合氯化铁(PFC)为絮凝剂

试验研究了微涡旋絮凝-逆流气浮-纳滤集成工艺去除水中腐殖酸的工艺特征和效果.试验结果表明,微涡旋絮凝-逆流气浮工艺去除水中腐殖酸时,在聚合氯化铁（PFC）的最佳投药点0.62 mmol·L^-1（Fe^3＋）下,出水水质符合纳滤膜系统预处理单元的要求,而且该工艺需要PFC絮凝剂的量较低.该预处理系统与纳滤系统组合的集成工艺可以使水中的腐殖酸有机物浓度大大降低,且含TQ56-36FC型纳滤膜的流程1比含M-N1812A型纳滤膜的流程2效果好.前者出水的TOC值可达0.48 mg·L^-1,CODMn值为0.64～0.69mg·L^-1,UV254值为0,且有95%以上的脱盐率.后者出水的TOC值为0.61～1.00mg·L^-1,CODMn值为0.72～0.97mg·L^-1,UV254值为0～0.0109,脱盐率很低.另外,尽管保安过滤/活性炭预处理有利于纳滤膜出水水质的提高,但活性炭柱的存在也降低了纳滤膜对有机物的去除率.动态实验结果表明,该集成工艺在本试验中运行周期为72h.水中颗粒物粒度分布表明,原水、絮凝后和气浮出水中颗粒物粒度分布的中位直径（d50）分别为2～5 μm、21 μm和16μm;经过保安过滤器或保安过滤器/活性炭柱,水样中的颗粒物的d50为0到几个μm;经过纳滤膜后,出水基本无颗粒物.初步研究表明,微涡旋絮凝过程中投药量对絮体的分形维数有着显著影响.

ID1启动子的构建及其在不同细胞系中的表达

目的观察不同细胞系中ID1启动子活性的表达的不同。方法以大鼠的基因组DNA为模板克隆了长度为1742bp(-1765/+88)的大鼠ID1启动子序列,将其连接到带有luciferase报告基因的PGL3-basic载体上,构建PGL3-ID1启动子序列。测序正确后,用磷酸钙共沉淀法转染大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)、A549细胞、F10细胞、MEF细胞和MC3T3细胞。转染36h后,收取细胞应用荧光素酶报告基因系统检测PGL3-ID1报告基因的表达。结果构建成功的PGL3-ID1启动子在A549细胞、F10细胞、MSCs细胞、MEF细胞中的表达明显增高,尤以A549和F10的表达最为显著;在MC3T3细胞中表达不明显。结论 ID1启动子的活性与细胞的分化程度密切相关,可能对细胞的增殖和分化起了关键性的调控作用。

小鼠胚胎成纤维细胞对Lewis肺癌细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)是否具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性。方法原代培养MEF并经细胞免疫组化法鉴定α-SMA的表达情况;收集培养48h无血清高糖DMEM培养基上清并制备条件培养基MEF-CM,根据实验中Lewis肺癌细胞(LLC)细胞培养基不同,分为MEF条件培养基组、DMEM组,应用MTT法检测不同培养基对LLC增殖率的影响;再根据5-Fu作用与否,进一步应用流式细胞仪检测不同培养基对LLC凋亡的影响。结果成功获得原代培养的MEF,表达α-SMA;MEF-CM较DMEM能够明显促进LLC细胞增殖(P<0.05);MEF-CM较DMEM能够明显抑制LLC细胞凋亡,并能够明显拮抗5-Fu的肿瘤杀伤作用(P<0.05)。结论 MEF是一种活化的成纤维细胞,具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性,有促进LLC增殖及抑制凋亡的作用,可以作为肿瘤相关成纤维细胞用于肿瘤微环境的研究。