旋毛虫钙网蛋白对小鼠巨噬细胞和大鼠PBMC免疫功能的影响

[目的]本文旨在研究旋毛虫钙网蛋白(TsCRT)对宿主免疫系统的影响。[方法]将原核表达纯化的重组旋毛虫钙网蛋白(rTsCRT)进行Western Blot验证;将rTsCRT与小鼠巨噬细胞共孵育,检测该蛋白对小鼠巨噬细胞增殖、NO释放和凋亡的影响;将rTsCRT与大鼠外周血单核细胞(PBMC)共孵育,检测该蛋白对大鼠PBMC转录因子和细胞因子的影响。[结果]Western blot结果显示,rTsCRT可以被感染旋毛虫的大鼠血清所识别;rTsCRT可促进小鼠巨噬细胞的增殖和NO的分泌,抑制小鼠巨噬细胞的凋亡;rTsCRT下调大鼠PBMC转录因子T-bet、Gata-3和PU.1的转录水平,上调Foxp3、Ahr、RORγt和Bcl-6的转录水平;rTsCRT上调大鼠PBMC细胞因子IFN-γ、IL-17、IL-10、TGF-β、Il-9和IL-22的转录水平,下调IL-4和IL-21的转录水平。[结论]旋毛虫钙网蛋白可刺激宿主产生Th1、Th17、Treg、Th9和Th22等多种类型的免疫反应,抑制Th2和Tfh免疫,对宿主免疫调节作用复杂。

乙型肝炎病毒感染患者PBMC表面PD-1、Caspase-9在不同病情阶段中临床表达意义

目的探究乙型肝炎患者不同阶段的外周血单个核细胞(PBMC)表面程序性死亡受体-1(PD-1)、半胱氨酸天冬氨酸酶-9(Caspase-9)水平,寻找其临床表达意义。方法选取湘潭市中心医院感染性疾病与肝病科2020年3月至2022年9月进行治疗的224例乙型肝炎患者,根据其病情阶段将所有患者分成乙型肝炎轻度组(n=83)、乙型肝炎中度组(n=76)和乙型肝炎重度组(n=65)。另取同期肝癌患者21例作为肝癌组,同期健康体检人员70例归入健康组。比较各组乙型肝炎患者肝功能指标,PBMC表面PD-1、Caspase-9水平,统计分析不同病情阶段与PBMC表面PD-1、Caspase-9水平的关系以及其对于病情阶段的预测价值。结果乙型肝炎轻度组、乙型肝炎中度组、乙型肝炎重度组患者以及肝癌患者的谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、乙型肝炎DNA(HBV-DNA)都显著高于健康组,乙型肝炎轻度组、乙型肝炎中度组、乙型肝炎重度组和肝癌组AST、ALT依次升高,并且各组之间差异有统计学意义(P<0.05)。乙型肝炎轻度组、乙型肝炎中度组、乙型肝炎重度组患者以及肝癌组患者PBMC表面PD-1、Caspase-9水平明显高于健康组(P<0.05)。乙型肝炎轻度组、乙型肝炎中度组、乙型肝炎重度组和肝癌组Caspase-9水平依次降低,各组之间差异有统计学意义(P<0.05)。乙型肝炎轻度组、乙型肝炎重度组和肝癌组PBMC表面PD-1依次升高,各组差异有统计学意义(P<0.05);中度组PD-1和轻度组差异无统计学意义(P>0.05)。PBMC表面PD-1与AST、ALT呈正相关,与HBV-DNA呈负相关,而Caspase-9水平与AST、ALT呈负相关,与HBV-DNA呈正相关,PBMC表面PD-1、Caspase-9水平联合检测重度乙型肝炎发展为肝癌的AUC值为0.911,敏感度为90.31%,特异度为89.63%。结论乙型肝炎患者不同阶段的PBMC表面PD-1、Caspase-9水平有显著差异,且两者表达水平与肝功能指标存在相关性,进行PD-1、Caspase-9的联合检测可以对重度乙型肝炎发展为肝癌进行预测。

PBMC中HBV cccDNA与HBV宫内感染关系的研究

目的 :对外周血单个核细胞 (peripheralbloodmononuclearcells,PBMC)中乙型肝炎病毒 (HBV)共价闭合环状DNA (covalentlyclosedcircularDNA ,cccDNA)进行扩增 ,并对其产物直接测序鉴定 ,以证实PBMC为HBV肝外复制的场所 ,从而进一步证实PBMC感染为乙型肝炎宫内感染的途径之一。方法 :选择性PCR扩增PBMC中HBVcccDNA ,并对 1例阳性产物直接测序鉴定 ,测序结果与GeneBank中已知序列进行同源性比较。结果 :HBsAg阳性孕妇PBMCHBVcccDNA的检出率为 9 .93% ,新生儿PBMCHBVcccDNA的检出率为 4 . 5 8% ,PBMCHBVcccDNA与公布的已知序列的同源性为 10 0 %。结论 :PBMC为HBV肝外复制的场所 ,PBMC感染很可能是乙肝宫内感染的传播机制之一。

5种免疫增强剂对猪PBMC增殖反应的影响

采用胸腺素、黄芪多糖、人胎盘组织液、人重组白细胞介素 2 ( r IL-2 )及左旋咪唑 ,以不同浓度刺激体外培养不同时间的猪外周血单个核细胞 ( PBMC) ,结果证明这几种佐剂均对猪 PBMC有明显刺激作用 ,且与浓度有依赖关系 ,浓度过高时对其有抑制作用 ,适宜的浓度为 1 0 4倍稀释度。时间因素的影响较小 ,但培养 36h加入各种佐剂后 PBMC增殖反应未见增强。 PBMC代表机体总的细胞免疫水平 ,通过佐剂对体外培养的PBMC增殖反应水平影响的测定 ,为动物用免疫佐剂和免疫增强剂的筛选提供了一种有效方法。

IL-12、IL-7、IL-2体外协同诱导人PBMC增殖和PBMC杀瘤活性的实验研究

研究了重组ＩＬ１２、ＩＬ７、ＩＬ２协同对健康人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）的体外增殖和杀瘤活性的影响。结果表明，高浓度ＩＬ２与低浓度ＩＬ２协同可引起ＰＢＭＣ明显增殖，若在该培养体系中加入低浓度的ＩＬ２，可使这种增殖效应显著增强。如果加大ＩＬ１２剂量时会产生更强的细胞毒活性，并呈现剂量依赖关系。在此培养条件下的培养上清中亦检出了较高水平的ＩＦＮγ。对培养３～１４ｄ的协同刺激细胞表型分析显示，ＣＤ５６抗原阳性细胞百分率呈递增趋势，提示ＣＤ５６＋的ＮＫ细胞构成了产生增殖和杀伤效应的主要细胞群体。

慢性乙型肝炎患者PBMCs中ROG、GATA3和T-bet mRNA水平及其意义

目的探讨慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)中转录因子ROG、GATA3和T-bet m RNA水平变化及意义。方法收集135例慢性乙型肝炎患者(轻度45例、中度42例、重度48例)和15例健康志愿者(正常对照组)的外周血,分离单个核细胞,提取总RNA,用实时定量PCR的方法检测ROG、GATA3和T-bet m RNA水平。应用SPSS16.0软件进行统计分析。结果慢性乙型肝炎轻度、中度组和重度组患者外周血PBMCs中T-bet m RNA表达水平均明显高于健康对照组人群,组内比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。慢性乙型肝炎重度组患者外周血PBMCs中ROG m RNA表达水平明显高于健康对照组人群、轻度组和中度组患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。而轻度组、中度组患者和健康对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。慢性乙型肝炎中度组和重度组患者外周血PBMCs中GATA3 m RNA表达水平明显高于健康对照组人群和轻度组患者,差异均具有统计学意义(P<0.05);而轻度组和健康对照、中度组患者和重度组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。慢性乙型肝炎轻度、中度组和重度组患者T-bet/GATA3比值明显高于健康对照组人群,差异均具有统计学意义(P<0.05);但3组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。ROG表达水平与GATA3和T-bet/GATA3比值均无相关性(P>0.05)。结论 ROG、GATA3和T-bet在慢性乙型肝炎患者外周血PBMCs中表达水平上调,并参与疾病的发生和疾病进展。ROG在纠正和维持Th1/Th2的新平衡状态过程中起重要作用。

丙型肝炎病毒感染患者PBMC细胞因子的分泌水平

目的 :检测丙型肝炎病毒 (HCV)感染患者外周血单个核细胞(PBMC)体外培养后 ,培养上清中细胞因子分泌的水平 ,以反映HCV患者体内的免疫状况。方法 :患者PBMC培养上清中的细胞因子 (IL 2、IL 4、IL 10、IL 12、TNF γ、TNF α)采用ELISA进行检测。结果 :(1)HCV感染患者的PBMC培养 72h后 ,细胞因子检测结果表明 :与正常对照组相比较 ,HCV患者PBMC培养上清中TNF γ、IL 10和TNF α的水平明显升高 ,而没有检测到IL 2、IL 4、和IL 12的分泌产物。 (2 )轻、中度慢性肝炎 ,以及代偿期、失代偿期肝硬化患者间细胞因子的水平未见明显差异。结论 :(1)HCV感染患者体内细胞因子的分泌倾向于Th2型细胞因子占优势。 (2 )HCV感染患者PBMC分泌IL

红花多糖对人PBMC增殖活性及分泌细胞因子的影响

[目的]探讨红花多糖(SPS)对人外周血单个核细胞(PBMC)的增殖作用及PBMC诱生细胞因子的影响。[方法]采集健康成人外周血,常规分离PBMC,体外与不同浓度的SPS共同培养,检测PBMC的增殖活性及白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和干扰素-γ(IFN-γ)的水平。[结果]SPS对PBMC增殖有促进作用,以1.25g/L和0.625g/L剂量组增殖活性增加明显(P<0.05);红花多糖(SPS)各组IL-2和IFN-γ水平明显高于对照组(P<0.05),而各组TNF-α的水平无显著性差异。[结论]SPS可促进PBMC的增殖,提高IL-2和IFN-γ水平,增强免疫功能。

携带microRNA-383重组慢病毒的包装及其上调PBMCs中Foxp3mRNA的表达

目的包装携带microRNA-383(miR-383)的重组慢病毒,并观察其对正常人外周血单个核细胞(peripheral bloodmononuclear cells,PBMCs)中Foxp3 mRNA转录的影响。方法将4个串联的miRNA-383前体序列亚克隆入慢病毒转移载体pHAGE-CMV-MCS-IZsGreen,构建重组载体,命名为pHAGE-miR-383。将pHAGE-383、包装质粒psPAX2与包膜质粒pMD2.G共转染入HEK 293T细胞进行重组慢病毒包装。进而分别采用定量PCR和RT-PCR检测慢病毒miR-383和Mock感染48 h后细胞中的miR-383的表达和转录因子Foxp3 mRNA的转录水平。结果定量PCR证实携带miR-383的重组慢病毒包装成功,滴度为1×107 TU/ml。以MOI为5的慢病毒感染HEK 293T细胞后miR-383表达明显增多。RT-PCR结果显示,miR-383能够上调PBMCs中Foxp3 mRNA的表达。结论成功包装出含有miR-383前体序列的重组慢病毒,而且慢病毒miR-383能够上调PBMCs中Foxp3 mRNA的转录水平,为进一步研究其对调节性T细胞的调控作用奠定基础。

不同手法针刺足三里穴对人PBMC的STAT5信号转导途径的作用

目的研究不同手法针刺对外周血单核细胞(PBMC)细胞信号转导子和转录活化子(STAT5)mRNA和DNA的结合能力的影响。方法将30例健康受试者分补法针刺组(补足三里)、泻法针刺组(泻足三里)、正常对照组各10例。采集外周血经Ficoll-Hypaque梯度离心获得PBMC,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)进行STAT5mRNA半定量检测;凝胶阻滞电泳(EM-SA)分析PBMC中STAT5与DNA结合活性。结果补法针刺足三里穴可显著提高人PBMC的STAT5mRNA基础转录水平和STAT5与特定DNA的结合能力(P<0·01),但泻法针刺足三里穴的试验结果与健康人正常水平无显著性差异(P>0·05)。结论补法针刺免疫调节作用有细胞因子及JAK/STAT信号转导途径的参与,但影响STAT5mRNA转录水平及DNA结合的原因并不明了。

PDCD5基因在初诊Graves'病患者PBMCs中表达情况的初步研究

目的探讨促凋亡基因PDCD5 mRNA在初诊Graves'病(GD)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中的表达。方法半定量RT-PCR法检测53例初诊GD患者外周血单个核细胞PDCD5 mRNA表达的阳性率和表达水平。结果35例PDCD5 mRNA在GD患者PBMCs中表达呈阳性,阳性率为66.1%,较正常对照者(55.6%)升高;其表达水平(1.01±0.13)显著高于正常对照(0.52±0.13,P<0.05),且GD患者高T3水平组PDCD5 mRNA的表达显著高于低T3水平组(P<0.05)。结论PDCD5 mRNA在GD患者PBMC表达升高,可能与GD淋巴细胞凋亡异常有关。

紫草多糖抑制LPS活化PBMC表达炎症相关因子的基因转录

目的：研究紫草多糖对LPS活化外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cells,PBMC）表达TNF-α、IL-10、IL-18相关因子的影响及其可能的信号通路。方法：LymphopreTM（1.077 g/ml）淋巴细胞分离液离心分离正常健康人PBMC,紫草多糖处理正常健康人的PBMC或LPS活化的PBMC,利用Real-time RT-PCR法检测TNF-α、IL-10、IL-18、IL-18BP、IL-18Rα、IL-18Rβ基因转录水平,通过Western blot检测PBMC中ERK磷酸化水平。结果：紫草多糖可增强PBMC TNF-α、IL-10、IL-18Rα、IL-18Rβ的转录,与LPS处理的PBMC相近。紫草多糖处理LPS活化的PBMC,在处理早期（4小时）可抑制LPS活化的PBMCTNF-α及IL-18的表达,抑制率达15%50%（P〈0.05）;并可抑制LPS诱导的ERK磷酸化,抑制率达27%61%（P〈0.05）。结论：紫草多糖可能是通过抑制PBMC的MAPK信号通路进而抑制LPS诱导的炎症相关因子TNF-α等高表达。

抗病毒治疗对Ⅰb型慢性丙肝患者PBMC IL-10、IL-12水平变化影响的研究

目的研究派罗欣联合利巴韦林抗病毒治疗对Ⅰb型慢性丙肝患者外周血单个核细胞(PBMC)分泌IL-10、IL-12水平的影响,分析IL-10、IL-12水平变化与病毒学应答结果之间的相关程度,探讨IL-10、IL-12作为抗病毒疗效评价指标的可能性。方法选取血清HCV-RNA阳性的Ib型慢性丙肝患者60例,依据病毒载量将其分为3组,低病毒载量组(1.0×103IU/ml<HCV-RNA≤1.0×104IU/ml)19例、中病毒载量组(1.0×104IU/ml<HCV-RNA≤1.0×106IU/ml)23例、高病毒载量组(HCV-RNA>1.0×106IU/ml)18例,给予聚乙二醇干扰素α-2a联合利巴韦林抗病毒治疗48周,另选HCV-RNA阴性的慢性HCV感染者15例,健康献血员15例作为对照组;在抗病毒治疗前、4周、12周、48周、结束后24周取空腹静脉血,分离外周血单个核细胞,培养72小时后收集分泌物,离心取上清液,应用ELISA法检测所有研究对象的PBMC IL-10、IL-12水平。结果 HCV-RNA阳性组的慢性HCV感染者外周血PBMCIL-10水平显著高于HCV-RNA阴性组和健康献血员组,差异有统计学意义(组间F=18.67,P<0.05);三组间IL-12水平差异无统计学意义(组间F=2.15,P>0.05)。PBMC IL-10、IL-12的水平变化与病毒学应答具有相关性,应答越迅速,IL-10水平下降越明显,IL-12升高越明显。结论慢性HCV感染者细胞免疫倾向于Th2型;有效的抗病毒治疗可快速提升前炎症因子IL-12的水平,使细胞免疫方向移向Th1型;PBMC IL-10、IL-12水平变化对干扰素联合利巴韦林治疗慢性丙肝的疗效预测具有一定的参考价值。

耐力训练及补充中药多糖对大鼠PBMC分泌细胞因子和血清中细胞因子含量的影响

目的:探讨6周耐力训练及补充多糖提取物对大鼠血清中3种细胞因子水平和PBMC分泌3种细胞因子能力的影响。方法:120只雄性Wistar大鼠随机分为6组:耐力训练+黄芪多糖组、耐力训练+牛膝多糖组、单纯耐力训练组、安静+黄芪多糖组、安静+牛膝多糖组、安静对照组。大鼠进行6周递增负荷游泳训练后,观察大鼠血清中IL-2、IL-4、IL-10水平的改变以及外周血单个核淋巴细胞(PBMC)分泌IL-2、IL-4、IL-10能力的变化。结果:长期耐力训练后可造成大鼠血清IL-下降、IL-4、IL-10升高,PBMC分泌IL-4能力增高,表明长期耐力训练后Th1和Th2两型细胞的功能失衡。6周耐力训练同时补充黄芪多糖和牛膝多糖提取物能防止大鼠血清IL-2的明显下降及IL-4、IL-10升高;防止大鼠PBMC分泌IL-4的明显增高结论:长期耐力训练能引起辅助T细胞(Th)两个亚型Th1和Th2两型细胞功能失衡,这可能是长期耐力训练引起运动性免疫低下的原因之一。牛膝多糖和黄芪多糖提取物对耐力训练大鼠Th1和Th2型细胞平衡有一定的调节作用。

红花多糖对人PBMC和CD8＋T细胞增殖作用的影响

目的探讨红花多糖（safflower polysaccharide，sPs）体外对人外周血单个核细胞（PBMC）和CD8＋T细胞增殖作用的影响。方法采用葡聚糖-泛影葡胺密度梯度离心法（ficoll-hypaque density gradient centrifugation）从健康成人外周血中分离PBMC，在体外与不同浓度的SPS共同培养，用3H-TdR法检测PBMC增殖活性；流式细胞术检测CI）8＋T细胞的增殖情况。结果SPS能够促进PBMC增殖，尤其1．25g·L-1和0．625g·L-1。两组PBMC增殖作用明显，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）；SPS对CD8＋T细胞的增殖有促进作用，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论SPS可促进PBMC、CD8＋T细胞的增殖，增强机体非特异性和特异性免疫功能。

CD58对猪PBMC转化的作用

应用ＭＴＴ比色法，测定了由ＳＲＢＣ膜及ＰＲＢＣ膜提取的ＣＤ５８对猪ＰＢＭＣ转化的影响。结果证明，两种ＣＤ５８成分均能显著提高ＰＨＡ－Ｐ对ＰＢＭＣ的激活作用（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５），单独应用也表现出对ＰＢＭＣ的活化效应，且上述作用具有剂量依赖性。ＣＤ５８浓度达２．５ｇ·Ｌ－１时作用最强（Ｐ＜０．０５），超过该浓度则活化作用减弱，其作用的规律与ＲＢＣ一致。比较分析表明，猪源ＣＤ５８在最佳剂量时，单独刺激作用或对ＰＨＡ－Ｐ诱导的ＰＢＭＣ转化的协同作用均显著大于绵羊源ＣＤ５８（Ｐ＜０．０５），ＰＲＢＣ的协同刺激作用也大于ＳＲＢＣ．

IL-12对狼疮肾炎PBMC中信号传递分子STAT_3、STAT_4的作用

目的 :为了探讨IL 12对狼疮肾炎PBMC发挥生物学作用的细胞内信号传递机制。方法 :采用MTT、免疫沉淀、免疫印迹等方法 ,检测IL 12对PBMC增殖及STAT3、STAT4的作用 ,并比较在狼疮肾炎活动期、静止期的差别。结果 :发现与正常人对照及静止期相比 ,IL 12对活动期PBMC不需要IL 2的预诱导 ,可促进PBMC增殖并在短时间内激活STAT3、STAT4,而IL 2对STAT4无作用。结论 :表明IL 12对PBMC的作用可通过STAT3、STAT4途径发挥 ,活动期PBMC存在异常活化 ,这可能是IL

慢性HCV感染患者PBMC体外Th1类细胞因子分泌及其相关因素分析

目的:研究慢性HCV(丙型肝炎病毒)感染患者外周血单个核细胞(PBMC)体外Th1类细胞因子的分泌,进一步了解HCV感染慢性化和肝损伤机制.方法:体外培养慢性HCV感染患者PBMC72h后,ELISA检测培养上清Th1类细胞因子(IL-2,IFN-γ,TNF-α),荧光定量PCR检测患者血清HCV RNA含量,RT-PCR检测HCV RNA亚型.结果:与正常人相比,IFN-γ在HCV RNA阴性患者中明显增高,而在RNA阳性患者中无明显升高.TNF-α则不论RNA滴度的高低均较正常人显著增高.RNA阳性患者ALT(丙氨酸氨基转移酶),AST(门冬氨酸氨基转移酶)水平明显高于阴性患者.不同HCV基因型感染的患者IFN-γ,TNF-α的分泌无显著差异.结论:IFN-γ在清除病毒中起重要作用,TNF-α是引起肝脏损伤的重要因素之一.

山羊ESC培养上清液对PBMC和PBL转化及分泌活性的影响

【目的】探索山羊子宫内膜基质细胞(ESC)培养上清,对山羊外周血单核细胞(PBMC)和外周血淋巴细胞(PBL)的转化与分泌活性的影响。【方法】分离山羊PBMC和PBL,制备原代ESC(ESC0)及永生化传至30代的ESC(ESC30)培养上清,将不同培养上清与PHA组合刺激PBMC与PBL转化,应用MTT法检测ESC0及ESC30培养上清对PBMC和PBL转化的作用,ELISA检测PBMC和PBL分泌IL-2I、L-4的相对含量。【结果】ESC0及ESC30上清可刺激PBMC/PBL转化并分泌IL-2和IL-4,抑制PHA-P诱导的PBMC/PBL增殖及IL-2的分泌,但对PHA-P引起的PBMC/PBL分泌IL-4有促进或协同作用。【结论】ESC能通过旁分泌作用影响PBMC和PBL的转化与分泌活性,优势活化Th2型淋巴细胞,在子宫局部免疫调节中发挥重要作用。

转染NY-ESO-1特异性TCR增强人PBMC对NY-ESO-1阳性肿瘤细胞的特异性细胞毒性

目的探讨体外转导NY-ESO-1特异性T细胞受体至人外周血淋巴细胞中,是否可增强转导后细胞体外特异性识别并杀伤肿瘤细胞的能力。方法将NY-ESO-1特异性TCR质粒(pCDNA3.1-ESO-TCR)体外电转入新分离的正常人PBMC中,RT-PCR法鉴定转导是否成功;采用流式细胞仪分析转导后PBMC表型;用特异性NY-ESO-1b抗原肽(p157-165)刺激转导PBMC后,用ELISPOT法检测PBMC分泌IFN-γ的能力,用实时无标记动态细胞分析仪检测PBMC特异性细胞毒性作用。结果电转后PBMC能够扩增出特异性TCR片段;电转pCDNA3.1-ESO-TCR质粒的PBMC细胞表面特异性TCR表达率高于电转空载体的PBMC的表达率(P<0.05);经多肽刺激后,电转目的质粒的PBMC分泌IFN-γ的斑点数明显多于电转空载体的PBMC(P<0.05);转导后PBMC特异性细胞毒性作用明显强于电转空载体的PBMC。结论经NY-ESO-1特异性TCR基因修饰的PBMC对NY-ESO-1阳性HepG2细胞的体外特异性杀伤作用有明显提高,为进行下一步肝癌过继性免疫研究提供了基础资料。