IFN-β通过STAT1诱导SARI表达抑制AML细胞增殖并促进凋亡

目的:探讨IFN-β诱导SARI表达对急性粒细胞性白血病(AML)细胞增殖、凋亡的作用,并筛选其潜在的调控分子。方法:qPCR、Western blot筛选SARI低表达的AML细胞作为实验细胞株;不同浓度IFN-β干预AML细胞,于不同时间采用qPCR、Western blot检测SARI表达,选取IFN-β作用的适当浓度和时间;采用RNA-Seq转录组测序及KEGG富集分析初步筛选IFN-β诱导AML细胞SARI表达的潜在调控分子;通过相应分子抑制剂联合IFN-β处理AML细胞,MTS法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡;明确该分子参与IFN-β诱导SARI表达对AML细胞增殖及凋亡的作用。结果:HL60和NB4细胞SARI表达相对较低,选为实验细胞株;1 ng/ml IFN-β作用12 h后AML细胞SARI表达升高且细胞增殖被抑制,凋亡增多;筛选STAT1为IFN-β诱导SARI表达的潜在调控分子;抑制STAT1后,IFN-β对AML细胞SARI表达、增殖抑制、凋亡促进的作用被明显逆转。结论:IFN-β可通过STAT1诱导AML细胞SARI表达,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。

天麻素通过CCR5/JAK1/STAT1信号通路抑制缺血缺氧新生小鼠小胶质细胞介导的炎症反应

目的:探究天麻素(GAS)通过C-C趋化因子受体5(CCR5)对新生小鼠缺血缺氧性脑损伤(HIBD)后小胶质细胞JAK1/STAT1信号通路及其介导的炎症反应的影响。方法:选择新出生10 d的C57BL/6J小鼠48只,随机分为假手术(sham)组、HIBD模型组和HIBD与GAS联合处理(HIBD+GAS)组;体外培养BV-2小胶质细胞,分为对照(Con)组、氧糖剥夺(OGD)组、OGD+GAS组、GAS组、Maraviroc(MVC)组、OGD+MVC组和OGD+MVC+GAS组。通过RT-qPCR检测CCL4和CCR5的mRNA表达变化,Western blot检测CCR5、p-JAK1、p-STAT1、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)蛋白的表达变化,免疫荧光双标染色检测CCR5、p-JAK1和p-STAT1的表达变化。结果:(1)与sham组相比,HIBD组小鼠缺血侧胼胝体区CCL4和CCR5的mRNA水平,以及CCR5、p-JAK1和p-STAT1的蛋白水平明显增高(P<0.05),而HIBD+GAS组中CCL4和CCR5 mRNA水平,以及CCR5、p-JAK1和p-STAT1的蛋白水平显著低于HIBD组(P<0.05)。(2)与Con组相比,OGD组BV-2细胞中CCR5、p-JAK1和p-STAT1蛋白水平明显增高(P<0.05),而OGD+GAS组BV-2细胞中CCR5、p-JAK1和p-STAT1蛋白水平显著低于OGD组(P<0.05)。(3)CCR5拮抗剂MVC在0~80μmol/L范围内不会导致显著的BV-2细胞死亡。与OGD组相比,MVC+OGD组p-JAK1、p-STAT1、TNF-α和IL-1β蛋白水平显著降低(P<0.05),而MVC+OGD组与OGD+MVC+GAS组无明显差异。结论:GAS可通过靶向CCR5抑制小胶质细胞p-JAK1/p-STAT1通路及相关炎症因子的表达,发挥神经保护作用。

从“湿热致瘀”角度探讨幽门螺旋杆菌感染对慢性萎缩性胃炎Hedgehog及NOX/NF-κB/STAT1信号通路的影响

目的比较幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染与非Hp感染的慢性萎缩性胃炎(Chronic atrophic gastritis,CAG)患者胃黏膜病理状态与刺猬蛋白-细胞表面受体Ptch-G蛋白偶联受体样蛋白Smo-胶质瘤相关癌基因同源蛋白Gli(Hedgehog信号通路,Hh-Ptch-Smo-Gli)及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶/核因子κB/转录信号转导子和转录活化子1(NOX/NF-κB/STAT1)信号通路相关因子表达差异,探究Hp促进CAG“炎癌转化”的生物学机制。方法纳入符合标准的43名CAG患者,分为CAG伴Hp感染组(Hp+CAG组,n=21)、CAG不伴Hp感染组(Hp-CAG组,n=22),观察两组患者胃黏膜苏木精-伊红(HE)染色组织形态学改变,采用蛋白质免疫印迹(Western blot)检测胃黏膜NOX1、NOX2、NOX4、STAT1、P65、p-P65相对表达量;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测胃黏膜胶质瘤相关癌基因同源蛋白1 mRNA(Gli1 mRNA)、胶质瘤相关癌基因同源蛋白2 mRNA(Gli2 mRNA)、胶质瘤相关癌基因同源蛋白3 mRNA(Gli3 mRNA)、音猬因子mRNA(Shh mRNA)、G蛋白偶联受体样蛋白mRNA(Smo mRNA)、细胞表面受体Ptch mRNA(Ptch mRNA)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶1 mRNA(NOX1 mRNA)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶2 mRNA(NOX2 mRNA)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4 mRNA(NOX4 mRNA)、核因子κB mRNA(NF-κB mRNA)水平。结果两组患者胃组织HE染色结果:Hp+CAG组患者胃黏膜上皮细胞部分坏死脱落,表面欠光整,腺体数量减少,排列紊乱,可见肠上皮化生,固有层内可见弥漫性淋巴细胞、中性粒细胞浸润;Hp-CAG组患者淋巴细胞和中性粒细胞浸润程度较Hp+CAG组轻。RT-qPCR检测结果:与Hp-CAG组相比,Hp+CAG组患者胃黏膜Gli1 mRNA、Shh mRNA、Smo mRNA、Ptch mRNA水平显著降低(P<0.01);Gli2 mRNA、Gli3 mRNA、NOX1 mRNA、NOX2 mRNA、NOX4 mRNA、NF-κB mRNA水平显著增高(P<0.01)。Western blot检测结果:与Hp-CAG组相比,Hp+CAG组患者胃黏膜NOX1/GAPDH(内参)、NOX2/GAPDH、NOX4/GAPDH、p-P65/GAPDH相对表达量明显增高(P<0.01),STAT1水平显著降低(P<0.01),两组P65/GAPDH相对表达量的差异没有统计学意义(P>0.05)。结论Hp感染后可能通过抑制Hh-Ptch-Smo-Gli信号通路,并使NOX/NF-κB/STAT1信号通路异常活化,导致胃黏膜长期炎症,促进萎缩及肠上皮化生,增加癌变风险。

敲低IFI30通过激活STAT1抑制U251人胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移并促进其凋亡

目的 构建γ干扰素诱导蛋白30(IFI30)表达抑制的U251细胞,探讨IFI30表达受到抑制后对细胞生物学功能的影响及机制。方法 在线设计敲低靶点并合成3条小干扰RNA(siRNA),转染后通过实时定量PCR技术检测抑制效率,选取抑制效率最高的siRNA序列构建短发夹RNA (shRNA)质粒。重组质粒与包装质粒共转染HEK293T细胞制备慢病毒。用慢病毒感染胶质瘤U251细胞,经嘌呤霉素筛选得到阳性细胞。采用CCK-8实验、5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EdU)实验和集落形成实验分析细胞增殖活性,流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡,Transwell^(TM)实验检测细胞侵袭、划痕实验检测细胞迁移。Western blot法检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)和神经钙黏蛋白(N-cadherin)、信号转导子与转录激活子1(STAT1)。结果 筛选到有效的靶点序列并成功建立IFI30表达抑制的U251细胞。敲低IFI30的表达抑制U251细胞增殖,G0/G1期细胞比例增加,S期减少,细胞凋亡明显增加,细胞的侵袭和迁移能力降低。同时,U251细胞cyclin D1、Bcl2和N-cadherin的表达降低,E-cadherin, STAT1磷酸化表达增加。结论 敲低IFI30通过促进STAT1活化抑制U251细胞增殖、侵袭和迁移并促进其凋亡。

STAT1对肺结核大鼠巨噬细胞凋亡及MAPK/NF-κB信号通路的机制研究

目的探讨信号转导和转录激活因子1(STAT1)对肺结核大鼠巨噬细胞凋亡及MAPK/NF-κB信号通路的影响。方法将40只大鼠按照随机数字表达分为4组,即Control组、PTB组、STAT1-ASO组和STAT1-ASO+Anisomycin组,每组10只。计数肺组织结核分枝杆菌菌落;收集支气管肺泡巨噬细胞收集,流式细胞仪检测肺组织巨噬细胞细胞凋亡;HE染色检测肺组织病理学变化;ELISA检测血清中IL-6、IL-1β、TNF-α水平比较;检测肺组织中SOD、MDA水平;蛋白质印迹法检测创面组织中p38 MAPK、p-p38 MAPK、p65 NF-κB、p-p65 NF-κB蛋白表达。结果与Control组比较,PTB组大鼠肺组织结核分枝杆菌菌落数(9.12±0.81)、巨噬细胞凋亡率[(51.27±4.16)%]、血清中IL-6(215.42±15.33)、IL-1β(73.62±6.04)、TNF-α(81.24±5.79)水平、肺组织中MDA含量(9.54±1.72)及p-p38 MAPK/p38 MAPK(0.92±0.12)、p-p65 NF-κB/p65NF-κB比值(0.87±0.10)均明显增加,肺组织中SOD活性(31.27±2.85)明显降低(P<0.05);与PTB组比较,STAT1-ASO组大鼠肺组织结核分枝杆菌菌落数(3.87±0.40)、巨噬细胞凋亡率(8.91±0.43)、血清中IL-6(40.91±3.46)、IL-1β(21.54±1.79)、TNF-α水平(20.35±1.87)、肺组织中MDA含量(2.69±0.72)及p-p38 MAPK/p38 MAPK(0.45±0.07)、p-p65 NF-κB/p65 NF-κB比值(0.39±0.06)明显减少,肺组织中SOD活性(72.15±6.81)明显升高(P<0.05);与STAT1-ASO组比较,STAT1-ASO+Anisomycin组大鼠肺组织结核分枝杆菌菌落数(8.75±0.74)、巨噬细胞凋亡率(42.86±3.75)、血清中IL-6(192.11±13.61)、IL-1β(67.33±5.24)、TNF-α水平(75.26±5.11)、肺组织中MDA含量(9.01±1.65)及p-p38 MAPK/p38 MAPK(0.87±0.10)、p-p65 NF-κB/p65NF-κB比值(0.80±0.09)均明显增加,肺组织中SOD活性(36.49±3.01)明显降低(P<0.05)。结论抑制STAT1活化可抑制肺结核大鼠巨噬细胞凋亡,其作用机制可能和抑制MAPK/NF-κB信号通路活化有关。

当归补血汤含药血清抑制JAK2/STAT1/3信号通路诱导人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡的机制研究

目的基于JAK2/STAT1/3信号通路探讨当归补血汤含药血清对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(HFLS-RA)增殖、凋亡的影响及机制。方法将Wistar大鼠随机分为空白组、雷公藤多苷组(9.45 mg·kg^(-1))及当归补血汤高、中、低剂量组(15、7.5、3.75 g·kg^(-1)),连续灌胃给药7 d,制备大鼠空白血清及含药血清。将HFLS-RA细胞随机分为6组,即空白组(10%空白组大鼠血清培养基)、模型组(20 ng·mL^(-1)TNF-α+10%空白组大鼠血清培养基)、雷公藤多苷组(20 ng·mL^(-1)TNF-α+10%雷公藤多苷组大鼠血清培养基),以及当归补血汤含药血清低、中、高剂量组(20 ng·mL^(-1)TNF-α+10%当归补血汤低、中、高剂量组大鼠血清培养基);按照分组设置加入终质量浓度为20 ng·mL^(-1)的TNF-α,1 h后加入相应含药(或空白)血清处理24 h。采用CCK-8法检测HFLS-RA细胞增殖活性;流式细胞术(Annexin V-FITC/PI双染法)检测HFLS-RA细胞凋亡情况;RT-PCR法检测细胞中Bax、Bcl-2、caspase-3 mRNA表达;ELISA法检测细胞上清液中白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素15(IL-15)水平;Western Blot法检测细胞中Bax、Bcl-2、caspase-3、p-JAK2、p-STAT3、p-STAT1蛋白表达水平。结果与空白组比较,模型组HFLS-RA细胞的增殖活性显著升高(P<0.01),细胞凋亡率明显下降(P<0.05),IL-6、IL-15水平显著升高(P<0.01);Bax、caspase-3 mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.01),而Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.01),Bax/Bcl-2比值显著降低(P<0.01);细胞p-JAK2、p-STAT1、p-STAT3蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。与模型组比较,雷公藤多苷组及当归补血汤含药血清各剂量组HFLS-RA细胞的增殖活性均显著降低(P<0.01),细胞凋亡率显著升高(P<0.05,P<0.01),IL-6、IL-15水平均显著降低(P<0.01);Bax、caspase-3mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.01),而Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05,P<0.01),Bax/Bcl-2比值显著升高(P<0.01);当归补血汤含药血清中、高剂量组HFLS-RA细胞的p-JAK2、p-STAT1、p-STAT3蛋白表达水平均显著降低(P<0.01)。结论当归补血汤含药血清对TNF-α诱导HFLS-RA细胞增殖有显著的抑制作用,并可促使其凋亡,其机制可能与抑制JAK2/STAT1/3信号通路转导有关。

异欧前胡素通过NF-κB和JAK1/STAT1信号通路抑制巨噬细胞M1极化发挥抗炎镇痛作用

目的探讨异欧前胡素抗炎镇痛作用的潜在药理作用机制。方法通过醋酸致小鼠扭体模型观察异欧前胡素的镇痛作用,采用二甲苯致小鼠耳肿胀模型观察抗炎作用;通过脂多糖(LPS,100 ng·mL^(-1))+干扰素-γ(IFN-γ,20 ng·mL^(-1))诱导小鼠巨噬细胞系RAW264.7构建M1极化模型,分别采用CCK8法、Real-time PCR法、ELISA法测定异欧前胡素对RAW264.7细胞增殖、M1极化标志蛋白(CD86和iNOS)的mRNA水平及白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平的调控作用;通过Western blot法检测NF-κB和JAK1/STAT1信号途径相关蛋白表达水平。结果异欧前胡素(30和60 mg·kg^(-1))能有效减少醋酸致扭体次数,抑制小鼠耳郭肿胀。异欧前胡素(20和40μmol·L^(-1))能抵抗LPS/IFN-γ诱导的RAW264.7细胞M1极化,抑制细胞增殖,降低IL-6和TNF-α的表达,并能有效地降低NF-κB和JAK1/STAT1信号途径相关蛋白磷酸化和转录。结论异欧前胡素可通过调节NF-κB和JAK1/STAT1信号通路抑制巨噬细胞M1极化,发挥抗炎镇痛作用。

促红细胞生成素通过调控STAT1-caspase3信号通路治疗激素性股骨头坏死的实验研究

目的 探索促红细胞生成素(EPO)通过调节信号转导与转录激活子1(STAT1)-半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase3)通路对激素性股骨头坏死SANFH的治疗机制。方法 将40只SD大鼠随机分为阴性对照组、阳性对照组、模型组、治疗组。模型组和治疗组大鼠左臀肌注射地塞米松针,阴性和阳性对照组注射0.9%氯化钠溶液,治疗组和阳性对照组的大鼠尾部静脉分别缓慢注射EPO 500 U/kg。治疗结束后比较各组大鼠病理切片空骨陷窝率,并检测各组骨组织p-STAT1和C-Caspase 3蛋白表达水平,及STAT1和Caspase 3的mRNA表达水平。结果 与两对照组相比,模型组及治疗组中大鼠股骨头空骨陷窝率、骨组织中p-STAT1和C-Caspase 3蛋白表达水平及STAT1和Caspase 3的mRNA表达水平均显著升高(P<0.05)。与模型组比较,治疗组大鼠以上指标均显著降低(P<0.05)。结论 EPO通过抑制关节内STAT1、Caspase 3的表达水平,调控STAT1-Caspase 3信号通路来治疗SANFH。

宁心涤痰汤通过STAT1/LXR-α通路介导的巨噬细胞内质网应激治疗支架内再狭窄的机制研究

目的观察宁心涤痰汤对STAT1/LXR-α信号通路介导的巨噬细胞内质网应激的影响,从而阐明其抑制支架内再狭窄的分子机制。方法人急性单核细胞白血病细胞(THP-1)体外诱导分化成巨噬细胞后分为空白组、模型组、宁心涤痰汤组和辛伐他汀组。通过ox-LDL诱导构建泡沫细胞模型,并给予相应的药物进行干预。分别采用Western blotting和ELISA法检测各组巨噬细胞STAT1/LXR-α通路与内质网应激相关蛋白的表达水平和炎症因子的含量。构建巨噬细胞与血管平滑肌细胞共培养体系,通过CCK8法和划痕实验检测各组平滑肌细胞增殖和迁移能力的改变。结果与空白组相比,模型组巨噬细胞中p-STAT1、p-PERK、p-elf2α及CHOP蛋白的表达及细胞上清中肿瘤坏死因子-6(IL-6)、人单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量均显著升高,LXR-α蛋白表达显著降低,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,宁心涤痰汤组能够显著抑制巨噬细胞中p-STAT1、p-PERK、p-elf2α及CHOP蛋白的表达和上清中IL-6、MCP-1和TNF-α的含量,上调LXR-α蛋白的表达,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。此外,与空白组相比,模型组平滑肌细胞增殖与迁移率显著增加(P<0.01);与模型组比较,宁心涤痰汤组能够显著抑制平滑肌细胞增殖与迁移率,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论宁心涤痰汤通过促进STAT1/LXR-α通路的活化从而抑制巨噬细胞内质网应激,达到治疗PCI后支架内再狭窄的作用。

基于IL-27/STAT1信号通路探讨五味子多糖对毛细支气管炎小鼠Th1/Th2失衡的影响

目的基于IL-27/STAT1信号通路探讨五味子多糖对毛细支气管炎小鼠Th1/Th2失衡的影响。方法小鼠两侧鼻内滴100μL呼吸道合胞病毒(RSV)建立毛细支气管炎模型,对照组则鼻内滴入HeLa细胞上清液,2 d后将造模成功的小鼠随机分为模型组、阳性组(雾化吸入20 mg/kg布地奈德溶液)及五味子多糖低、中、高剂量组(灌胃25、50、100 mg/kg五味子多糖),给予相应药物干预1周。HE染色观察肺组织病理形态,ELISA法检测肺泡灌洗液中IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-6、IL-10水平,流式细胞术检测Th1、Th2细胞比例,Western blot法检测肺组织IL-27、STAT1蛋白表达。结果与对照组比较,模型组小鼠肺泡结构不清晰,肺组织损伤评分升高(P<0.05);肺泡灌洗液中IL-2、IFN-γ水平,肺组织CD4^(+)IFN-γ^(+)细胞百分比、Th1/Th2比例和IL-27、STAT1蛋白表达均降低(P<0.05);肺泡灌洗液中IL-4、IL-6、IL-10水平,肺组织CD4^(+)IL-4+细胞百分比升高(P<0.05)。与模型组比较,五味子多糖中、高剂量组小鼠肺组织损伤评分降低(P<0.05);肺泡灌洗液中IL-2、IFN-γ水平,肺组织CD4^(+)IFN-γ^(+)细胞百分比、Th1/Th2比例、IL-27及STAT1蛋白表达均升高(P<0.05);肺泡灌洗液中IL-4、IL-6、IL-10水平,肺组织CD4^(+)IL-4+细胞百分比降低(P<0.05),且呈剂量依赖性。结论五味子多糖可纠正毛细支气管炎模型小鼠Th1/Th2失衡,可能与激活IL-27/STAT1信号通路有关。

清肺口服液黄酮类组分对呼吸道合胞病毒感染小鼠IFN-α/JAK1/STAT1信号通路的影响

目的基于IFN-α/JAK1/STAT1信号通路探讨清肺口服液黄酮类组分抗呼吸道合胞病毒(RSV)感染的作用机制。方法36只雌性清洁级BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组、利巴韦林组及清肺口服液黄酮类组分低、中、高剂量组(黄酮组分低、中、高剂量组),每组6只。除正常组外,其余组经鼻予RSV病毒液造模,造模成功后给药,各给药组予相应药物灌胃,正常组和模型组予等体积生理盐水,共4 d。HE染色观察小鼠肺组织病理变化,ELISA检测血清α干扰素(IFN-α)含量,RT-PCR检测肺组织RSV-F、Janus酪氨酸蛋白激酶1(JAK1)和信号传导与转录激活因子1(STAT1)mRNA表达,Western blot及免疫组化染色检测肺组织JAK1和STAT1蛋白表达。结果与正常组比较,模型组小鼠肺组织明显充血,有大量炎性细胞浸润,血清IFN-α含量明显增加(P<0.001),肺组织RSV-F、JAK1和STAT1 mRNA表达明显升高(P<0.01),JAK1和STAT1蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.001)。与模型组比较,利巴韦林组及黄酮组分各剂量组小鼠肺组织病理损伤状况明显改善,肺组织RSV-F mRNA表达明显降低(P<0.05);黄酮组分高剂量组血清IFN-α含量明显增加,肺组织JAK1和STAT1 mRNA及蛋白表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。结论清肺口服液黄酮类组分具有抗RSV感染作用,其机制可能与上调IFN-α表达,激活JAK1/STAT1信号通路,增强机体免疫功能有关。

转录因子STAT1对癌症相关基因Gas6的调控研究

目的:研究信号转导和转录激活因子1(signal transducer and activator of transcription 1,STAT1)对癌症相关生长抑制特异性基因6(growth arrest specific 6,Gas6)的影响及其机制。方法:应用数据库预测乳腺癌的基因聚类分析结果,并预测Gas6与STAT1在多种癌症中的相关性;通过染色质免疫沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)实验检测STAT1是否可与Gas6启动子结合,应用数据库预测STAT1在Gas6启动子上的结合位点并突变其关键碱基,通过双萤光素酶报告基因实验检测结合位点突变对Gas6启动子活性的影响,同时分别检测敲低或过表达STAT1对Gas6启动子和突变的Gas6启动子活性的影响;通过实时荧光定量PCR技术和蛋白质免疫印迹技术分别检测敲低或过表达STAT1对Gas6 mRNA及蛋白表达的影响。结果:Gas6基因在乳腺癌中高表达;Gas6与STAT1在多种癌症中有正相关趋势;Gas6启动子序列包含STAT1的结合位点,并且有调控Gas6启动子活性的功能性结合位点。转录因子STAT1可在转录水平对癌症相关基因Gas6进行正向调控。结论:癌症相关基因Gas6是转录因子STAT1的直接靶基因。

RBX1通过STAT1调控葡萄膜黑色素瘤免疫相关基因

目的·探索RBX1(ring-box protein 1)在葡萄膜黑色素瘤(uveal melanoma,UVM)肿瘤细胞中对免疫相关基因的调控作用。方法·通过检索癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库分析RBX1在肿瘤中的表达水平以及与临床分期、生存预后的相关性。使用靶向RBX1的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)分别在UVM细胞系92.1、OMM2.3和MEL290中瞬时敲低RBX1,并对瞬时敲低RBX1的92.1细胞进行转录组测序,分析si RBX1转染细胞与对照细胞的差异表达基因,并采用基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)对差异基因进行分析,探究RBX1与肿瘤免疫相关基因的关系。在分析结果的基础上,通过实时荧光定量PCR(qPCR)分别检测瞬时敲低RBX1的92.1、OMM2.3和MEL290细胞系中信号转导与转录激活因子1(signal transducer and activator of transcription 1,STAT1)及其下游的CXC趋化因子配体9(C-X-C motif chemokine ligand 9,CXCL9)和CXCL10的mRNA表达水平,并通过Western blotting检测92.1细胞中STAT1及p-STAT1蛋白表达水平。在瞬时敲低RBX1的细胞系OMM2.3和MEL290中,分别加入5 nmol/L或10 nmol/L的STAT1抑制剂fludarabine,处理48 h后通过qPCR检测CXCL9和CXCL10的mRNA表达水平。结果·TCGA数据库分析表明:与正常组织相比,RBX1在多种肿瘤中高表达,在肾上腺皮质癌和UVM中显著高表达;且这2种肿瘤分期晚的患者,RBX1表达水平更高,同时RBX1表达水平高的患者的总生存期更短(均P<0.05)。对瞬时敲低RBX1的92.1细胞和对照细胞进行转录组测序,获得差异基因,并且GSEA结果显示,RBX1参与调控肿瘤免疫相关通路。热图分析显示RBX1敲低后STAT1表达水平上升。在92.1、OMM2.3和MEL290细胞系中,qPCR结果显示RBX1敲低后STAT1、CXCL9和CXCL10的mRNA表达水平上升,Western blotting结果显示在92.1细胞系中敲低RBX1后STAT1及p-STAT1表达水平上升。加入STAT1抑制剂后,OMM2.3和MEL290细胞系中的CXCL9和CXCL10 mRNA上调表达被抑制。结论·RBX1在UVM细胞中可能通过STAT1调控CXCL9和CXCL10的表达,参与肿瘤免疫调控。

牙龈组织中巨噬细胞M1/M2极化相关因子的表达对重度慢性牙周炎患者的临床意义

目的探究重度慢性牙周炎患者牙龈组织中巨噬细胞M1/M2极化相关因子的表达及临床意义。方法收集96例重度慢性牙周炎患者的病损牙龈组织为研究组,并收集同一时间段80例健康牙龈组织(阻生牙冠方覆盖的牙龈组织)为对照组。比较两组患者牙龈组织中巨噬细胞M1/M2极化相关因子表达水平。治疗6个月后,根据重度慢性牙周炎患者治疗效果,分为疗效不佳组和疗效良好组。比较2组患者的临床资料,分析牙龈组织中巨噬细胞M1/M2极化相关因子对慢性牙周炎患者治疗效果的预测价值。结果研究组牙龈组织中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA、信号传导及转录激活因子1(STAT1)mRNA、精氨酸酶Ⅰ(ArgⅠ)mRNA及信号传导及转录激活因子6(STAT6)mRNA表达量均高于对照组(P<0.05)。96例重度慢性牙周炎患者治疗6个月后疗效不佳发生率为12.50%。疗效不佳组附着丧失(AL)、简化牙石指数(CI-S)、iNOS mRNA、STAT1 mRNA、ArgⅠmRNA及STAT6 mRNA表达量均高于疗效良好组(P<0.05)。CI-S、iNOS mRNA、STAT1 mRNA及ArgⅠmRNA均为影响重度慢性牙周炎患者治疗效果的危险因素(P<0.05)。牙龈组织中iNOS mRNA、STAT1 mRNA及ArgⅠmRNA表达量对慢性牙周炎患者治疗效果进行预测的最佳截断点分别为1.16、1.21、0.87,曲线下面积(AUC)分别为0.772、0.776、0.812。结论牙龈组织中巨噬细胞极化相关因子iNOS mRNA、STAT1 mRNA及ArgⅠmRNA对重度慢性牙周炎预测价值高,临床中具有一定的参考价值。

STAT1反义寡核苷酸对肺纤维化大鼠肺泡巨噬细胞分泌TNF-α、IL-8和NO的影响

目的:探讨STAT1(signaltransducerandactivatoroftranscription1)反义寡核苷酸(ASON)对博莱霉素(BLM)致肺纤维化1周大鼠肺泡巨噬细胞(AM)分泌TNF-α、IL-8和NO的影响。方法:取Wistar大鼠5只,向气管内灌注BLM复制肺纤维化模型后7d处死动物,通过支气管肺泡灌洗获取AM,并分为STAT1ASON组、STAT1正义寡核苷酸(SON)组、地塞米松(dexamethasone,DEX)组和空白对照组。分别用ASON、SON和DEX干预AM(空白对照组只加培养基),然后检测AM分泌TNF-α、IL-8和NO的能力。结果:用STAT1ASON处理AM后的培养上清中,TNF-α、IL-8和NO的含量减少,与空白对照组、SON组及DEX组相比较差异显著(P<0.05);DEX组AM的培养上清中,TNF-α、IL-8和NO的含量明显低于空白对照组和SON组(P<0.05);而空白对照组和SON组培养上清中,TNF-α、IL-8和NO的含量却无统计学意义(P>0.05)。结论:STAT1ASON和DEX能使AM分泌TNF-α、IL-8和NO的能力下降,且STAT1ASON的作用强于DEX。STAT1可作为肺纤维化治疗的靶目标。

二烯丙基二硫上调p21、STAT1和CAMTA1诱导人白血病HL-60细胞分化

目的应用抑制性消减杂交(SSH)研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)诱导人白血病HL-60细胞分化的分子机制。方法在前期工作中,我们成功地构建了具有高消减效率的DADS诱导白血病分化的cDNA文库,本实验通过挑取文库中的30个克隆制备质粒并酶切分析、测序和同源性检索。结果18个克隆均具有100～600bp左右的插入片段,测序分析发现10个差异表达基因,分别与细胞周期、信号转导、代谢、RNA结合等有关。RT-PCR验证其中上调的3个基因:p21、STAT1和CAMTA1,结果与SSH相符。结论p21、STAT1和CAMTA1表达上调与DADS诱导白血病分化密切相关。

肺间质纤维化大鼠肺泡巨噬细胞STAT_1的活化及其依赖性免疫应答基因ICAM-1的表达

目的:探讨肺泡巨噬细胞(AM)中STAT1(signal transducersand activators of transcription 1)的活化在大鼠肺间质纤维化中的作用。方法:50只健康雌性Wistar大鼠随机分成博莱霉素(BLM)组和生理盐水(NS)组各25只,气管内分别灌注BLM和NS。用Western-blot法测定AM中STAT1活化的动态变化;用免疫组化染色法测定AM的ICAM-1(intercellular adhesionmolecule-1)的表达。结果:NS组中的AM内只有少许STAT1活化,气管内灌注BLM后1d,AM中STAT1的活化即开始显著增高,于第7天达高峰,以后逐渐下降,但28 d后仍高于NS组(P<0.05)。NS与BLM组的AM中表达ICAM-1的细胞数增高的模式,与AM中STAT1活化的模式相同。AM中STAT1活化的程度与AM中ICAM-1的表达呈正相关(r=0.913,P<0.01),而后者又与肺组织炎症的积分呈正相关(r=0.947,P<0.01)。结论:实验性肺间质纤维化大鼠AM中存在STAT1的异常活化,并参与了肺泡炎和肺纤维化的形成。

EPO干预后大鼠脑缺血再灌注区域STAT1和STAT3蛋白表达与细胞凋亡

目的研究促红细胞生成素(EPO)对大鼠局灶性脑缺血再灌注区域干预后STAT1、P-STAT1、STAT3、P-STAT3蛋白表达及细胞凋亡的影响。方法雄性SD大鼠120只,随机分为假手术组(A)、单纯脑缺血再灌注组(B)、脑缺血再灌注+生理盐水组(C)、脑缺血再灌注+EPO组(D),采用大脑中动脉线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型。D组、C组分别于脑缺血刚开始时腹腔注射EPO或等量生理盐水,TTC染色观察大鼠脑缺血再灌注后脑梗死体积的变化,应用Western blot及免疫组织化学染色检测STAT1、P-STAT1、STAT3、P-STAT3蛋白表达水平的变化。采用末端转移酶介导的Dutp缺口末端标记法(TUNEL)检测神经细胞凋亡的变化。结果TTC显示EPO干预组脑梗死体积较未干预组明显缩小,STAT1、STAT3蛋白在正常脑组织中表达,且脑缺血再灌注及EPO干预对二者表达水平均无显著影响,而P-STAT1、P-STAT3在正常脑组织中表达较低,脑缺血再灌注后PSTAT1、P-STAT3蛋白表达增加。与B、C组比较,EPO干预后P-STAT3表达明显增加(P<0.05),P-STAT1有所减少(P>0.05),凋亡细胞数量较未干预组明显减少(P<0.05)。结论 EPO干预引发大鼠脑缺血再灌注区域PSTAT3表达的增加及P-STAT1表达的降低可能与神经细胞凋亡有关。

麻黄水提物对哮喘豚鼠气道炎症和气道上皮细胞STAT1信号传导影响

目的探讨麻黄水提物对哮喘豚鼠气道炎症和气道上皮细胞信号转录因子与转录活化因子1(STAT1)表达水平及其信号传导途径的调控作用。方法将36只豚鼠随机分为三组:哮喘组、麻黄煎剂组及生理盐水组(正常对照组),每组各12只。用卵蛋白腹腔注射致敏及雾化吸入激发建立哮喘模型,给予麻黄水煎剂干预治疗。用ELISA法测定其支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素-5(IL-5)浓度,用SABC免疫组化测定气道上皮细胞STAT1表达,同时观察BALF炎性细胞数及豚鼠肺组织病理学改变,分析其相关性。结果麻黄煎剂组豚鼠肺内炎症改变明显减轻,其BALF中白细胞总数、嗜酸性粒细胞数、IL-5浓度,明显低于哮喘组,两组比较差异有显著性,哮喘组BALF中IL-5含量与支气管上皮细胞STAT1表达均明显升高,且呈正相关关系,但麻黄煎剂组STAT1的表达与哮喘组比较差异无显著性。结论麻黄水提物对哮喘豚鼠气道炎症有明显的调控作用,其作用机制可能与抑制IL-5的表达和炎性细胞聚积有关,但麻黄不能有效抑制STAT1的表达和信号传导异常。

STAT1和STAT2在磷脂酰乙醇胺诱导肝癌HepG2细胞生长抑制中的作用

目的探讨磷脂酰乙醇胺(PE)诱导肝癌HepG2细胞生长抑制中STAT1和STAT2的作用。方法实验以人肝癌细胞系HepG2为材料,分别设置了空白对照组、0.125、0.25、0.5和1 mmol/L PE处理组。应用MTT法检测细胞生长,荧光免疫组化检测细胞内STAT1和STAT2表达。结果与对照组相比,PE各处理组对HepG2细胞生长的抑制作用具有剂量依赖性,并可诱导STAT1和STAT2高表达,而AG490可以部分逆转PE的效应。结论 STAT1和STAT2参与了PE诱导HepG2细胞的生长抑制过程。