白花丹素通过调节TGF-β1/Smad2及Nrf2/NOX4通路改善博来霉素诱导的肺纤维化

目的:探究白花丹素(plumbagi,PL)对博来霉素诱导的肺纤维化(pulmonary fibrosis,PF)的保护作用及其可能性机制。方法:将60只雄性C57BL/6小鼠随机分为:对照组(Control)、博来霉素组(bleomycin,BLM)、PL低剂量组(1 mg/kg)、PL高剂量组(2 mg/kg)。采用气管内注射BLM(3 mg/kg)复制小鼠PF模型,腹腔注射PL(1或2 mg/kg)3周,处死动物。HE与Masson染色观察肺组织形态学变化及胶原沉积情况。检测小鼠肺组织中超氧化物歧化酶(superoxide dis‐mutase,SOD)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)和羟脯氨酸(hydroxy‐proline,HYP)活性或含量。酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测小鼠肺组织中白介素-6(interleukin-6,IL-6)含量。免疫组化检测小鼠肺组织中核因子相关因子2(nuclear factor related factor 2,Nrf2)和NADPH氧化酶4(reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase 4,NOX4)阳性细胞表达。Western blotting检测α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、I型胶原(collagen Ⅰ,Col Ⅰ)、Ⅲ型胶原(collagen Ⅲ,Col Ⅲ)、IL-6、转化生长因子-β_(1)(transforming growth factor-β_(1),TGF-β_(1))、p-Smad2、Nrf2和NOX4的蛋白表达。结果:与BLM组相比,PL治疗可减轻小鼠肺间质损伤及细胞外基质沉积,降低HYP含量(P<0.01,P<0.05),降低α-SMA、Col Ⅰ和Col Ⅲ的蛋白表达(P<0.01,P<0.05),减少IL-6的分泌(P<0.01),提高机体抗氧化能力(增强SOD和GSH的活性,减少MDA含量,P<0.01,P<0.05),显著下调TGF-β_(1)、p-Smad2和NOX4阳性细胞及蛋白表达(P<0.01,P<0.05),上调Nrf2阳性细胞及蛋白表达(P<0.01,P<0.05)。结论:PL可能通过调节TGF-β_(1)/Smad2及Nrf2/NOX4信号通路减轻炎症反应与胶原沉积,提高机体抗氧化能力,从而延缓PF进程。

红花黄色素调节TGF-β1/Smads通路对糖尿病心肌病大鼠心肌纤维化的影响

目的:探讨红花黄色素(SY)对糖尿病心肌病(DCM)大鼠心肌纤维化的影响及潜在机制。方法:采用高糖高脂饮食联合链脲佐菌素腹腔注射的方法复制DCM大鼠模型,设正常(Normal)组、模型(Model)组、SY组、转化生长因子-β1(TGF-β1)抑制剂SB431542组和SY+SB431542组,每组8只。SY组1次/d腹腔注射10mg/kg SY,SB431542组1次/d灌胃0.1mg/kg SB431542,SY+SB431542组1次/d腹腔注射10mg/kg SY+灌胃0.1mg/kg SB431542,Normal组和Model组1次/d腹腔注射生理盐水。治疗14d后,测定空腹血糖(FBG)水平,通过心脏超声检测心功能,酶联免疫吸附(ELISA)法测定血清乳酸脱氢酶(LDH)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、基质裂解素2(ST2)水平,计算心脏指数(CI),苏木素-伊红(HE)、马森(Masson)染色观察心肌组织病变和纤维化状况,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测TGF-β1、果蝇母源抗皮肤生长因子蛋白2/3(Smad2/3)、磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3)、Smad7、胶原Ⅰ型和Ⅲ型(Collagen-Ⅰ、Collagen-Ⅲ)蛋白表达。结果:与Model组比较,SY组、SB431542组和SY+SB431542组大鼠FBG水平明显降低(P<0.05);心功能明显改善[左心室射血分数(LVEF)和短轴缩短率(LVFS)明显升高,左心室收缩/舒张末期内径(LVIDs、LVIDd)明显降低(P<0.05)];血清LDH、cTnI、AngⅡ、ST2水平、CI均明显降低(P<0.05);心肌纤维断裂,细胞空泡样变、坏死、数量减少,胞核深染等病变以及心肌纤维化状况均明显改善,胶原容积分数(CVF)明显降低(P<0.05);心肌组织TGF-β1、Collagen-I、Collagen-Ⅲ表达量及p-Smad2/3∕Smad2/3比值明显降低,Smad7表达量明显升高(P<0.05)。SY+SB431542组对各检测指标的影响均明显优于SY组和SB431542组(P<0.05)。结论:SY具有抑制DCM大鼠心肌纤维化的作用,可能与下调TGF-β1/Smads通路,减轻细胞外基质沉积(ECM)有关。

自体黄韧带干预TGF-β1/Smad3信号通路抑制兔硬膜外纤维瘢痕形成的实验研究

目的通过对不同组别的兔分别行椎板切除术,对比其各组术后3、6周TGF-β1、Smad3蛋白表达量以及两者相应的mRNA表达水平,从而探讨自体黄韧带抑制腰椎术后硬膜外纤维瘢痕形成与TGF-β1/Smad3信号通路的关系。方法将于内蒙古医科大学实验动物中心购买的48只6~8月龄的日本大白兔,分为保留黄韧带组,自体脂肪回置组,不保留黄韧带组,对不同组别进行手术造模。术后对每组间的实验动物分别饲养3、6周后进行处死(3、6周各处死8只)。采用Western blot蛋白定量分析、RTPCR技术测定各组样本中的TGF-β1、Smad3蛋白含量及mRNA表达水平,并将以上数据分别进行组间比较,分析其差异性。结果①Western blot检测结果:3、6周保留组TGF-β1、Smad3蛋白表达量小于不保留组和脂肪组(P<0.05),不保留组和脂肪组之间并未发现明显差异。②RT-PCR结果显示:对于TGF-β1、Smad3两者的mRNA表达量而言,3、6周保留组明显小于不保留组和脂肪组(P<0.05),不保留组和脂肪组之间并未见明显差异。结论腰椎手术术后,会形成不同程度的硬膜外纤维瘢痕。若在术中保留自体黄韧带,可减少硬膜外成纤维细胞的形成,其机制与TGF-β1/Smad3信号通路有关。

益气活血方调控METTL3/HAND2/TGF-β1信号轴对冠心病气虚血瘀证大鼠的影响

目的观察益气活血方调控METTL3/HAND2/TGF-β1信号轴对冠心病气虚血瘀证大鼠的影响。方法将48只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、益气活血方组和西药(单硝酸异山梨酯)组,每组12只。除假手术组外,其余各组采用左冠状动脉前降支结扎结合游泳力竭法制备冠心病气虚血瘀证大鼠模型。造模结束后,益气活血方组及西药组灌胃干预28d。观察大鼠一般状况,采集心电图,超声心动图检测大鼠心功能,血液流变学检测血瘀程度,HE染色观察心肌组织形态,免疫组化法检测心肌组织甲基化转移酶3(METTL3)、转化生长因子(TGF)-β1、Smad2、Smad3表达,RT-PCR和Western blot检测心肌组织METTL3、心脏神经嵴衍生物表达蛋白2(HAND2)、TGF-β1、Smad2、Smad3mRNA和蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠出现精神萎靡、行动迟缓、嗜睡、体质量降低等气虚表现,心电图ST段显著抬高,左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS)下降(P<0.01),左室舒张末期容积(LVEDV)、左室收缩末期容积(LVESV)、左室舒张末期内径(LVEDd)、左室收缩末期内径(LVEDs)升高(P<0.01),红细胞聚集指数、卡松黏度及全血黏度升高(P<0.01);心肌细胞肿大、坏死,心肌纤维排列紊乱,心肌组织有炎性细胞浸润,心肌组织METTL3、TGF-β1、Smad2、Smad3mRNA和蛋白表达均升高(P<0.05,P<0.01),HAND2 mRNA和蛋白表达均降低(P<0.01)。与模型组比较,益气活血方组和西药组大鼠精神状态明显改善,心电图ST段明显回落,LVEF、LVFS升高(P<0.01),LVEDV、LVESV、LVEDd、LVEDs下降(P<0.05,P<0.01),红细胞聚集指数、卡松黏度及全血黏度下降(P<0.01);心肌纤维排列整齐,心肌细胞结构及形态改善,炎性细胞浸润减少,心肌组织METTL3、TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA和蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),HAND2mRNA和蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01)。结论益气活血方能减轻冠心病气虚血瘀证大鼠心肌组织病理损伤,提高心功能,抑制炎症反应,其作用机制可能与调控METTL3/HAND2/TGF-β1信号轴有关。

中药调控TGF-β1/Smad信号通路防治肝纤维化的研究进展

肝纤维化(Hepatic fibrosis,HF)是各种慢性肝病向肝硬化进展的必经阶段,不及时治疗将发展为肝硬化,甚至肝癌。因此,延缓或逆转HF具有重要临床意义。目前,西医尚无针对HF治疗的特效药物,故寻找新的治疗方案势在必行。TGF-β1/Smad信号通路是影响HF进展的关键通路,本文以TGF-β1/Smad信号通路为切入点,梳理、总结近年来该信号通路对炎症反应、细胞凋亡、氧化应激、细胞自噬、细胞外基质失衡等HF病理过程的调控作用,并对中药通过抑制TGF-β1/Smad信号通路治疗HF的相关研究予以综述,旨在揭示中药的作用靶点,为中医药防治HF及其现代化研究提供新的思路和策略。

基于TGF-β1/Smads信号通路探究强肝软坚丸对肝纤维化大鼠肝脏的保护作用

[目的]基于转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smads信号通路探究强肝软坚丸对肝纤维化(HF)大鼠肝脏的保护作用。[方法]将Wistar大鼠分为对照组、HF组、强肝软坚丸组、秋水仙碱组、SRI-011381组、强肝软坚丸+SRI-011381组,每组12只。除对照组外,其他组大鼠均通过腹腔注射1.5 mL/kg 50%四氯化碳(CCl4)橄榄油溶液的方式构建HF模型,建模成功后,进行给药处理,给药每日1次,持续6周。检测大鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性及Ⅳ型胶原蛋白(CIV)、Ⅲ型前胶原蛋白(PC-Ⅲ)、层粘连蛋白(LN)、透明质酸(HA)含量;苏木精-伊红(HE)、马松(Masson)染色分别检测肝脏组织病理变化、肝纤维化情况;免疫组化检测大鼠肝脏组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)阳性细胞数;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝脏组织中TGF-β1、p-Smad2/3蛋白表达。[结果]与对照组相比,HF组大鼠肝组织病理损伤及肝纤维化严重,血清中ALT、AST活性、CIV、PC-Ⅲ、LN、HA含量、肝组织中α-SMA阳性细胞数及TGF-β1、p-Smad2/3蛋白表达升高(P<0.05);与HF组相比,强肝软坚丸组、秋水仙碱组大鼠肝组织病理损伤及肝纤维化有所改善,血清中ALT、AST活性、CIV、PC-Ⅲ、LN、HA含量、肝组织中α-SMA阳性细胞数及TGF-β1、p-Smad2/3蛋白表达降低,SRI-011381组对应指标变化趋势与上述相反(P<0.05);与强肝软坚丸组相比,强肝软坚丸+SRI-011381组大鼠肝组织病理损伤及肝纤维化加剧,血清中ALT、AST活性、CIV、PC-Ⅲ、LN、HA含量、肝组织中α-SMA阳性细胞数及TGF-β1、p-Smad2/3蛋白表达升高(P<0.05)。[结论]强肝软坚丸可能通过抑制TGF-β1/Smads信号通路改善大鼠HF。

芦丁对TGF-β1诱导的心肌成纤维细胞纤维化的影响

[目的]探究芦丁对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的心肌成纤维细胞(CFs)纤维化及TGF-β1/Smad信号通路的影响。[方法]构建TGF-β1诱导的CFs细胞模型,设置组别为:对照组(完全培养基+细胞)、模型组(含10 ng/mL TGF-β1+细胞)、阳性对照组(10 ng/mL TGF-β1+10μmol/L卡托普利和细胞)和给药组(10 ng/mL TGF-β1+200μg/mL的芦丁和细胞)。采用蛋白免疫印迹法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vim)、纤连蛋白(FN)、胶原蛋白Ⅰ(CollageⅠ)、胶原蛋白Ⅲ(CollageⅢ)、TGF-β1/Smad通路相关蛋白的表达情况;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)法检测Acta 2、Vim、FN、ColⅠ1a1、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)的基因表达水平;采用免疫荧光技术检测关键蛋白α-SMA的表达及定位来探究芦丁对TGF-β1诱导的CFs纤维化的影响。[结果]用TGF-β1诱导CFs后,成功激活Vim、FN、CollageⅠ、CollageⅢ、TGF-β1/Smad信号通路相关蛋白的表达,200μg/mL芦丁干预后,抑制了Vim、FN、CollageⅠ、CollageⅢ、TGF-β1/Smad信号通路相关蛋白和mRNA的激活从而缓解了心肌纤维化的发生;免疫荧光实验结果显示:与对照组相比,TGF-β1模型组中α-SMA绿色荧光强度显著增强;200μg/mL芦丁组与模型组相比,α-SMA绿色荧光强度明显减弱。[结论]本研究结果表明200μg/mL芦丁通过抑制TGF-β1诱导的Vim、FN、CollageⅠ、CollageⅢ、α-SMA以及TGF-β1/Smad信号通路相关蛋白和mRNA的表达,从而缓解心肌纤维化。

基于TGF-β1/Smad3信号通路探究真武汤对风湿性心脏病大鼠心肌纤维化和免疫紊乱的影响

目的:研究真武汤对风湿性心脏病(RHD)大鼠转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smads信号通路及免疫紊乱的影响。方法:将60只Lewis大鼠随机分为正常组、RHD组、曲美他嗪组及真武汤组,每组15只。建立灭活A组-β型溶血性链球菌(GSA)诱导的大鼠风湿性心脏病模型。各组大鼠每天以相应药物灌胃1次,持续6周。检测大鼠心率;HE染色观察心脏组织病理改变;苦味酸-天狼猩红染色检测心脏组织纤维化;酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清脑尿钠肽(BNP)、肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、IL-10水平;Western blotting法检测心脏组织中TGF-β1、p-Smad3、Ⅰ型胶原蛋白(COL-Ⅰ)、基质金属蛋白酶1(MMP-1)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、诱导型一氧化氮合酶(i NOS)、环氧合酶-2(COX-2)相对表达量;免疫荧光法检测心脏组织中TGF-β1、Smad3、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(vimentin)阳性表达。结果:正常组大鼠心肌细胞形态正常;RHD组大鼠心肌细胞排列紊乱且松散,可见大量肌纤维断裂,胞浆染色不均;与RHD组比较,曲美他嗪组、真武汤组大鼠心肌损伤有所改善。RHD组大鼠心脏组织相对纤维化面积占比高于正常组(P<0.05);曲美他嗪组、真武汤组大鼠心脏组织纤维化面积占比均低于RHD组(P<0.05)。RHD组大鼠心率低于正常组(P<0.05);曲美他嗪组、真武汤组大鼠心率均高于RHD组(P<0.05)。RHD组大鼠血清BNP、LDH、CK-MB、TNF-α、IL-1β、IL-6水平高于正常组(P<0.05),IL-10水平低于正常组(P<0.05);曲美他嗪组、真武汤组大鼠血清BNP、LDH、CK-MB水平均低于RHD组(P<0.05);真武汤组大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平低于RHD组,IL-10水平高于RHD组(P<0.05);真武汤组大鼠血清LDH、CK-MB水平低于曲美他嗪组(P<0.05)。RHD组大鼠心脏组织TGF-β1、Smad3、α-SMA、Vimentin阳性表达水平高于正常组(P<0.05);曲美他嗪组、真武汤组大鼠心脏组织TGF-β1、Smad3、α-SMA、Vimentin阳性表达水平均低于RHD组(P<0.05);真武汤组大鼠心脏组织Smad3阳性表达水平低于曲美他嗪组(P<0.05)。RHD组大鼠心脏组织TGF-β1、p-Smad3、COL-Ⅰ、MMP-1、NLRP3、iNOS、COX-2蛋白相对表达量高于正常组(P<0.05),Smad7、TIMP-1蛋白相对表达量低于正常组(P<0.05);曲美他嗪组大鼠心脏组织MMP-1、NLRP3蛋白相对表达量低于RHD组(P<0.05),Smad7、TIMP-1蛋白相对表达量高于RHD组(P<0.05);真武汤组大鼠心脏组织TGF-β1、p-Smad3、COL-Ⅰ、MMP-1、NLRP3、iNOS、COX-2蛋白相对表达量低于RHD组(P<0.05),Smad7、TIMP-1蛋白相对表达量高于RHD组(P<0.05);真武汤组大鼠心脏组织TGF-β1、p-Smad3、COL-Ⅰ蛋白相对表达量低于曲美他嗪组(P<0.05)。结论:真武汤可能通过负反馈调节TGF-β1/Smad3信号通路,抑制免疫炎症反应,改善RHD大鼠心肌纤维化,减轻心肌病理损伤。

产后轻度子宫脱垂发生的危险因素及补中益气汤对血清TGF-β1、MMP-2、miRNA-30d的影响分析

【目的】分析产后轻度子宫脱垂发生的危险因素及补中益气汤对血清转化生长因子β1(TGF-β1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、微小RNA-30d(miRNA-30d)的影响。【方法】通过盲法、便利抽样、对照原则,回顾性收集唐山市妇幼保健院2020年1月至2022年1月接诊的80例产后轻度子宫脱垂患者,将其设为子宫脱垂组;另收集80例同期在唐山市妇幼保健院就诊的产后无子宫脱垂患者,将其设为健康组。以问卷调查的方式收集2组患者的分娩方式、年龄、产次、孕周、新生儿体质量和体质量指数(BMI)等基本信息,通过单因素分析、多因素Logistic回归分析探讨产后子宫脱垂的危险因素。再根据是否配合中药补中益气汤治疗将子宫脱垂组患者分为观察组和对照组,每组各40例。对照组采用电刺激生物反馈治疗,观察组在对照组的基础上给予补中益气汤治疗,疗程为1个月。观察2组患者治疗前后盆底功能及血清TGF-β1、MMP-2、miRNA-30d水平的变化情况,并评价2组患者的临床疗效。【结果】(1)单因素分析结果显示,与健康组相比,子宫脱垂组患者的年龄较大,产次多为2次及以上,分娩方式多为经阴道分娩,超重/肥胖(BMI≥24.0 kg/m^(2))及会阴撕裂情况占比较高,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。(2)多因素Logistic回归分析结果显示,年龄、分娩方式、产次、会阴撕裂情况、BMI是导致产后子宫脱垂发生的危险因素(P<0.01)。(3)补中益气汤对疗效的影响方面,治疗1个月后,观察组的总有效率为95.00%(38/40),对照组为77.50%(31/40);组间比较(χ^(2)检验),观察组的疗效明显优于对照组(P<0.05)。(4)补中益气汤对盆底功能的影响方面,治疗后,2组患者的宫颈口与处女膜缘距离、最大阴道内压、阴道肌电压、Ⅰ类及Ⅱ类肌纤维盆底肌收缩时间均较治疗前明显改善(P<0.05),且观察组的改善幅度均明显优于对照组(P<0.01)。(5)补中益气汤对血清学指标的影响方面,治疗后,2组患者的血清TGF-β1水平均较治疗前升高(P<0.05),血清MMP-2、miRNA-30d水平均较治疗前降低(P<0.05),且观察组对血清TGF-β1水平的升高幅度及对血清MMP-2、miRNA-30d水平的降低幅度均明显优于对照组(P<0.01)。【结论】产后子宫脱垂的发生与年龄、分娩方式、产次、会阴撕裂情况、BMI等有关;在电刺激生物反馈疗法的基础上给予补中益气汤治疗,可有效改善患者盆底功能,调节血清TGF-β1、MMP-2、miRNA-30d表达,临床疗效显著。

益肾养阴固精方对2型糖尿病肾病气阴两虚证患者TGF-β1、S1P、NLRP3炎症小体及胰岛β细胞功能的影响

【目的】探讨益肾养阴固精方(左归丸化裁)在2型糖尿病肾病气阴两虚证治疗中的应用价值,观察其对炎症反应、胰岛β细胞功能及肾功能的影响。【方法】将2020年5月至2023年7月在陕西中医药大学附属医院就诊的162例2型糖尿病肾病气阴两虚证患者按随机数字表法随机分为观察组和对照组,每组各81例。对照组给予降压、护肾等西医常规治疗,观察组在对照组的基础上联合益肾养阴固精方治疗,疗程为12周。观察2组患者治疗前后中医证候总积分、胰岛素敏感指数、胰岛素分泌指数、24 h尿蛋白定量(24hUTP)及血清糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹胰岛素(FINS)、空腹血糖(FBG)、血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、转化生长因子β1(TGF-β1)、NLRP3炎症小体、白细胞介素6(IL-6)、超氧化物歧化酶(SOD)、1-磷酸鞘氨醇(S1P)水平的变化情况,并比较2组患者的临床疗效。【结果】(1)治疗12周后,观察组的总有效率为93.83%(76/81),对照组为83.95%(68/81),组间比较,观察组的疗效明显优于对照组(χ^(2)=9.163,P<0.05)。(2)治疗后,2组患者的胰岛素敏感指数、胰岛素分泌指数均较治疗前升高(P<0.05),中医证候总积分均较治疗前降低(P<0.05),且观察组对胰岛素敏感指数、胰岛素分泌指数的升高幅度及对中医证候总积分的降低幅度均明显优于对照组(P<0.05)。(3)治疗后,2组患者的血清HbA1c、FINS、FBG、SCr、BUN及24hUTP水平均较治疗前降低(P<0.05),且观察组对血清HbA1c、FINS、FBG、SCr、BUN及24hUTP水平的降低幅度均明显优于对照组(P<0.05)。(4)治疗后,2组患者的血清TGF-β1、IL-6、NLRP3炎症小体水平均较治疗前降低(P<0.05),血清S1P、SOD水平均较治疗前升高(P<0.05),且观察组对血清TGF-β1、IL-6、NLRP3炎症小体水平的降低幅度及对血清S1P、SOD水平的升高幅度均明显优于对照组(P<0.05)。【结论】对于2型糖尿病肾病气阴两虚证患者而言,联合益肾养阴固精方治疗有助于减轻炎症反应,改善胰岛β细胞功能,调节血糖水平,改善肾功能,提高临床疗效。

金雀异黄素通过调控TGF-β1/Smad3信号通路对2型糖尿病大鼠心肌纤维化的影响

目的 探讨金雀异黄素减轻糖尿病大鼠心肌纤维化的作用及潜在机制。方法 通过高脂饮食结合腹腔注射链脲菌素(STZ)法建立大鼠2型糖尿病(T2DM)模型,并随机分为模型组、二甲双胍组(100 mg/kg)及金雀异黄素低、高剂量组(50、100 mg/kg),另设正常组给予常规饮食,每组10只。各给药组灌胃给药8周,检测体质量、心功能、心脏质量及心脏指数,血清CK-MB、AST及LDH活性,观察心肌纤维化程度,心肌组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad同源物3(Smad3)mRNA和蛋白表达,心肌组织Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)和Ⅲ型胶原(CollagenⅢ)蛋白分布及表达。结果 与模型组比较,金雀异黄素各剂量组大鼠体质量、每搏输出量(SV)及射血分数(EF)升高(P<0.01),心脏指数、左心室收缩末期内径(LVIDs)、血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)活性降低(P<0.05,P<0.01),心肌组织胶原相对面积及CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白表达均降低(P<0.05,P<0.01),心肌组织TGF-β1、Smad3 mRNA和蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),金雀异黄素高剂量组左心室舒张末期内径(LVIDd)降低(P<0.05)。结论 金雀异黄素可通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路,减轻2型糖尿病大鼠心肌纤维化作用,进而发挥保护心脏效应。

基于miRNA21-5p调控TGF-β1/Smads信号通路探讨苓桂气化方抗射血分数保留心力衰竭心肌纤维化的机制

目的基于miRNA21-5p调控转化生长因子-β1(transforming growth factor beta 1,TGF-β1)/Smads信号通路探讨苓桂气化方抗射血分数保留心力衰竭(heart failure with preserved ejection fraction,HFpEF)心肌纤维化的机制。方法40只4周龄自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)平均分为HFpEF组、沙库巴曲缬沙坦组(LCZ696,0.018 g·kg^(-1))、苓桂气化方低剂量组(LGQH-L,3.87 g·kg^(-1))和苓桂气化方高剂量组(LGQH-H,7.74 g·kg^(-1)),给予高脂、高盐及高糖饮食16周及腹腔注射链脲霉素溶液8周建立HFpEF大鼠模型。10只威斯塔京都(Wistar Kyoto,WKY)大鼠和10只SHR大鼠作为对照组,以普通饲料喂养至实验结束。造模成功后,WKY、SHR和HFpEF组给予等剂量生理盐水,其他3组按照预先规定的干预措施,每天灌胃1次,持续6周。干预结束后,行超声心动图测量左心室(left ventricle,LV)前壁厚度(LV end-diastolic anterior wall thickness,LVAWd)、LV后壁厚度(LV end-diastolic posterior wall thickness,LVPWd)、LV舒张末内径(LV end-diastolic internal diameter,LVIDd)、LV射血分数(LV ejection fraction,LVEF)、LV舒张早期二尖瓣流入峰值速度(E)、舒张晚期二尖瓣流入峰值速度(A)和LV舒张早期二尖瓣环运动速度(e'),并计算E/A和E/e';酶联免疫吸附试验检测血清心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)、B型利钠肽(B-type brain natriuretic peptide,BNP)及半乳糖凝集素3(Galectin-3,Gal-3);病理切片进行苏木精伊红及马松染色观察心肌肥厚及纤维化,并计算LV室壁厚度(LV wall thickness,LVWT)、胶原体积分数(collagen volume fraction,CVF)及血管周围纤维化比率(perivascular fibrosis ratio,PFR);实时定量聚合酶链反应检测LV心肌miRNA21-5p及TGF-β1/Smads信号通路相关mRNA表达;蛋白印迹检测LV心肌TGF-β1/Smads信号通路相关蛋白表达。结果与对照组比较,HFpEF组的LVAWd、LVPWd、LVIDd、E/A、E/e'、ANP、BNP、Gal-3、LVWT、CVF和PFR显著升高(P<0.05或P<0.01);LV心肌miR-NA21-5,α-SMA、CollⅠ、CollⅢ、TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA表达和α-SMA、CollⅠ、CollⅢ、TGF-β1、P-Smad2/3蛋白表达显著上调(P<0.05或P<0.01);Smad7 mRNA及蛋白表达显著下调(P<0.05或P<0.01)。与HFpEF组比较,苓桂气化方呈剂量依赖性减少LVAWd、LVPWd、LVIDd、E/A、E/e'、ANP、BNP、Gal-3、LVWT、CVF和PFR(P<0.05或P<0.01);下调miRNA21-5p,α-SMA、CollⅠ、CollⅢ、TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA表达和α-SMA、CollⅠ、GF-β1、P-Smad2/3蛋白表达(P<0.05或P<0.01);上调Smad7 mRNA及蛋白表达(P<0.05或P<0.01)。结论苓桂气化方可能通过靶向miRNA21-5p调控TGF-β1/Smads信号通路抑制心肌纤维化,从而减轻HFpEF大鼠LV重塑和舒张功能障碍,是治疗HFpEF的有效中药复方。

糖皮质激素调控哮喘大鼠气道重塑中TGF-β_1/Smad信号通路的研究

目的观察糖皮质激素对哮喘大鼠气道重塑中转换生长因子β1(TGF-β1)/Smad信号通路的作用。方法以卵清白蛋白(OVA)致敏与激发建立哮喘大鼠气道重塑模型。SPF级♂SD大鼠40只分为对照组(A组)、哮喘组(B组)、布地奈德组(C组)和地塞米松干预组(D组),每组10只。应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定血清和支气管肺泡灌洗液(BALF)中TGF-β1的浓度,免疫组化法检测肺组织TGF-β1、P-Smad2、P-Smad3、Smad6和Smad7蛋白的表达。结果与A组比较,B组支气管壁厚度(Wat)、平滑肌厚度(Wam)、血清、BAFL中TGF-β1的浓度、P-Smad2和P-Smad3的蛋白表达均增高,Smad6、Smad7的蛋白表达低于A组,经布地奈德组和地塞米松干预后,Wat、Wam、血清、BAFL中TGF-β1的浓度、TGF-β1、P-Smad2和P-Smad3的蛋白表达均下降,Smad6、Smad7的蛋白表达增强。C组和D组Wat、Wam、血清、BAFL中TGF-β1的浓度、TGF-β1P-Smad2、P-Smad3、Smad6和Smad7的蛋白表达比较无明显差异。免疫组化显示TGF-β1和Smad6蛋白表达于胞质,Smad7、P-Smad3和P-Smad2蛋白表达于胞质和胞核,主要表达于支气管上皮细胞、平滑肌细胞、成纤维细胞及散在的炎性细胞。大鼠肺组织中Smad6蛋白和Smad7蛋白表达呈正相关,P-Smad2蛋白和P-Smad3蛋白表达呈正相关。结论糖皮质激素可通过调控TGF-β1/Smad信号通路而拮抗哮喘气道重塑。

白茅根不同提取物对阿霉素肾病大鼠的保护作用及对TGF-β_1、NF-κB p65分子表达的影响

目的:研究白茅根不同提取物对阿霉素肾病大鼠的影响及其机制。方法:SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、泼尼松阳性对照组及白茅根石油醚部位组、乙酸乙酯部位组、正丁醇部位组、水部位组,一次性尾静脉注射阿霉素(ADR)复制阿霉素肾病模型,灌胃给药8 w。于造模前1 d及造模后每周末将大鼠放入代谢笼中,收集24 h尿液,全自动生化仪检测尿蛋白含量。于末次给药24 h后,眼眶取血,全自动生化仪检测血清尿素氮(BUN)、肌酐(CRE)、胆固醇(TCHO)、甘油三酯(TG)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)含量;ELISA法检测血清TNF-α含量,免疫组化法检测肾组织TGF-β1、NF-κB p65的表达;光镜下观察肾脏组织病理学改变。结果:与模型组比较,白茅根提取物乙酸乙酯部位组大鼠24 h尿蛋白在第6、7、8周显著降低,TP、ALB含量显著升高,炎性细胞因子TNF-α含量以及TGF-β1、NF-κB p65阳性率显著降低;正丁醇部位组、水部位组TG含量显著降低,24 h尿蛋白含量分别在7、6周显著降低;光镜下病理形态学观察显示乙酸乙酯部位、正丁醇部位、水部位组大鼠肾组织损伤明显改善。结论:白茅根不同提取物对阿霉素肾病大鼠有不同程度的保护作用,其中乙酸乙酯部位组作用最强,其作用机制可能是通过降低TGF-β1以及NF-κB p65的表达,抑制TNF-α的活性,进而改善阿霉素肾病大鼠肾组织病变。

黄芩素对TGF-β_1体外诱导肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的影响

目的观察黄芩素(黄芩苷元,baicalein,BAE)对TGF-β1体外诱导肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的影响。方法体外培养人胚胎肺成纤维细胞(WI-38),TGF-β1诱导后,通过Western blot检测细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)相关蛋白表达的变化,同时采用免疫组化法观察细胞形态变化。TGF-β1体外诱导肺成纤维细胞WI-38成肌成纤维细胞模型,再给予不同剂量的黄芩素,检测转化过程中相关蛋白α-SMA、collagen 1、Smad 2、p-Smad 2的表达变化。结果与模型组相比,黄芩素2 000nmol.L-1～125 nmol.L-1对TGF-β1体外诱导肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化有抑制作用。黄芩素组以剂量依赖性下调α-SMA(P<0.01)、collagen 1(P<0.01)、Smad 2(P<0.05)、p-Smad 2(P<0.05)蛋白的表达。结论黄芩素对TGF-β1体外诱导肺成纤维细胞向肌成纤维细胞的分化过程中有一定的抑制作用,该作用与下调α-SMA,抑制细胞内胶原合成及干预TGF-β/Smads信号通路有关。

Se和VE对大鼠心肌组织TGF-β_1mRNA表达的影响

目的探讨Se和VE对大鼠心肌组织TGF鄄β1mRNA表达的影响。方法通过Se和VE缺乏的半合成人工饲料喂养大鼠,采用RT鄄PCR检测TGF鄄β1mRNA在心肌组织的表达特点。结果Se和VE联合缺乏组大鼠心肌可见散在微小灶状心肌坏死。与补Se补VE组比较,Se或VE单项缺乏组TGF鄄β1mRNA表达已有所增高(P<0.01),Se和VE联合缺乏组TGF鄄β1mRNA表达增高最显著(P<0.001)。结论Se和VE缺乏可诱导大鼠心肌组织TGF鄄β1mRNA表达上调,TGF鄄β1可能亦参与了Se和VE联合缺乏所致心肌损伤的病理过程。

密蒙花总黄酮对去势雄鼠干眼症泪腺TGF-β_1及其基因表达的影响

目的观察密蒙花总黄酮对去势雄鼠导致干眼症泪腺TGF-β1及其基因表达的影响。方法90只健康1月龄SPF级Wistar雄性大鼠切除双侧睾丸及附睾建立干眼症模型;30只匹配大鼠切开阴囊而不切除睾丸作为假手术组。手术1周后,雄激素治疗组用丙酸睾酮注射液1 mg/kg股四头肌内注射,每3日1次(30只模型鼠);密蒙花总黄酮治疗组以密蒙花总黄酮0.02 g/kg与生理盐水混悬液灌胃,每日1次(30只模型鼠);正常组(30只正常鼠)、假手术组、模型组(30只)以生理盐水灌胃,每日1次。造模1、3、5个月后各组随机抽取10只大鼠处死,取双眼泪腺组织免疫组织化学法检测TGF-β1的表达,采用实时定量PCR(real-time PCR)法荧光定量检测TGF-β1mRNA的表达。结果造模5个月后,正常组和假手术组大鼠泪腺组织细胞中几乎无TGF-β1阳性表达,而模型组、雄激素治疗组和密蒙花总黄酮治疗组大鼠泪腺组织细胞中TGF-β1大量阳性表达,表现为大量棕黄色颗粒沉着。正常组、假手术组大鼠泪腺组织细胞中TGF-β1的平均光密度值(OD)高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);密蒙花总黄酮治疗组和雄激素治疗组大鼠泪腺组织细胞中TGF-β1的平均OD值大于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);密蒙花总黄酮治疗组的大鼠泪腺组织细胞中TGF-β1的平均OD值小于雄激素治疗组,差异有统计学意义(P<0.05)。TGF-β1mRNA在不同组大鼠泪腺组织细胞中的表达差异比较与TGF-β1表达相同(P<0.05)。结论密蒙花总黄酮可抑制去势雄鼠干眼症泪腺炎症反应,上调TGF-β1mRNA的表达以增加TGF-β1的合成是其作用途径之一。

虎杖对肺纤维化大鼠肺组织中TGF-β_1表达的影响

目的:观察博莱霉素致肺纤维化大鼠中转化生长因子(TGF-β1)的表达及虎杖对其影响。方法:SD大鼠120只,随机分成正常对照组、模型组、虎杖预防组各30只,7d治疗组20只和28d治疗组10只。除正常对照组给予生理盐水外,其余各组均予气管内注射博来霉素诱导肺纤维化。虎杖预防组、7d治疗组和28d治疗组胃饲受试药物4g.kg-1.d-1,其余两组则予生理盐水灌胃。用RT-PCR和免疫组化观察各组大鼠肺组织TGF-β1mRNA和TGF-β1蛋白的表达。结果:与模型组比较,虎杖预防组和7d治疗组羟脯氨酸含量下降明显(P<0.05或P<0.01),TGF-β1mRNA和TGF-β1蛋白表达较模型组减弱(P<0.05或P<0.01)。结论:虎杖抑制肺组织中TGF-β1的表达,可能是虎杖抑制肺纤维化的作用机制之一。

大黄素对肺纤维化大鼠TGF-β_1及smad_(3/7)信号通路的影响

目的:观察大黄素抗博莱霉素诱导大鼠肺纤维化的作用机制。方法:选用健康Wistar大鼠60只,随机分为空白组、模型组、强的松组、大黄素高、中、低剂量组,采用博莱霉素气管内吹入法,制备肺纤维化模型,于实验第29天留取标本,用免疫组化技术检测转化生长因子β1(TGF-β1)及smad3、smad7的表达。结果:大黄素中、低剂量组大鼠TGF-β1、smad3表达减弱,smad7表达明显增强。结论:大黄素的中、低剂量组能够减轻博莱霉素导致的大鼠肺纤维化程度,其作用机制与调控TGF-β1的smad3/7信号转导蛋白表达有关。

丹参联合川芎嗪对肺纤维化大鼠肺组织TGF-β_1表达及羟脯氨酸含量的影响

目的观察丹参联合川芎嗪注射液腹腔注射对博来霉素(BLM)致肺纤维化大鼠肺组织转化生长因子-β1(TGF-β1)表达及羟脯氨酸含量的影响。方法将90只成年雄性SD大鼠,随机分为6组:生理盐水(NS)组、BLM组、地塞米松(DM)组,中药干预组(A组、B组、C组)。NS组气管内灌注NS,BLM组、DM组及中药干预组(A组、B组、C组)气管内灌注BLM,随后NS组和BLM组每日腹腔注射NS,DM组每日腹腔注射DM,中药干预组(A组、B组、C组)每日给予不同剂量丹参和川芎嗪复合制剂腹腔注射,分别于气管内灌注药物后第7天,第14天和第28天处死每组大鼠各5只,左肺多聚甲醛固定后行HE染色、Masson染色进行肺泡炎及肺纤维化程度的判定;免疫组化法测定肺组织中TGF-β1的表达;右肺行肺组织羟脯氨酸含量的测定;血清用于检测肝肾功能。结果①NS组大鼠各时间点肺组织未发现肺泡间隔水肿、炎性细胞浸润及纤维化的形成。BLM组大鼠第7天时肺泡腔内可见大量炎性细胞浸润,第14天时炎症细胞减少,肺泡间隔内成纤维细胞显著增多,肺泡结构破坏,第28天时肺纤维化程度进一步加重,形成广泛纤维化。与BLM组比较,DM组大鼠各时间点肺泡炎及纤维化程度减轻(P<0.05)。A组大鼠肺泡炎和肺纤维化程度与BLM组类似(P>0.05)。B组、C组第14天肺泡炎及肺纤维化程度明显低于BLM组(P<0.05)。B组、C组第28天肺纤维化程度明显低于BLM组(P<0.05)。②与NS组比较,BLM组、DM组及中药干预组(A组、B组、C组)肺组织中TGF-β1的表达水平和羟脯氨酸含量明显升高(P<0.05)。③与BLM组比较,DM组及中药干预组(B组、C组)肺组织中TGF-β1的表达水平及羟脯氨酸含量明显降低(P<0.05)。④大鼠血清肝肾功能检测结果显示各组两两比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论丹参联合川芎嗪腹腔注射能减轻BLM所致肺纤维化大鼠肺泡炎和肺纤维化程度,其机制可能与抑制肺组织TGF-β1的表达,减少羟脯氨酸含量有关。