尖锐湿疣患者人乳头瘤病毒11型L1基因的克隆及序列分析

目的克隆和分析HPV11的晚期表达基因序列L1及其编码的氨基酸序列,为HPV感染的检测和基因工程疫苗研制提供基础。方法采用PCR技术扩增了1例尖锐湿疣患者疣组织中HPV 11 L1基因,并对其进行了克隆及全序列分析。结果本例尖锐湿疣临床标本HPV 11 L1基因与GenBank收录的原型(收录号:M14119)比较有8个碱基变异。结论 中国地区尖锐湿疣HPV 11 L1基因存在着变异。

鹅源血清11型鸭疫里默氏杆菌分离株生物学特性分析

从福建漳州某鹅场死亡鹅体内分离到1株细菌,经形态观察、生化试验和PCR鉴定确定为鸭疫里默氏杆菌。凝集试验表明其为血清11型菌株,该菌对阿莫西林、氨苄青霉素、氟苯尼考、复方新诺明、头孢唑啉、氧氟沙星、壮观霉素和左氧氟沙星敏感,对丁胺卡那霉素、多黏菌素、红霉素、环丙沙星等12种药物不敏感,属于多重耐药的鸭疫里默氏杆菌。

人乳头瘤病毒11型L1基因原核表达系统的构建及鉴定

目的构建人乳头瘤病毒11型(HPV11)L1原核表达系统pBAD(B)鄄HPV11L1,表达HPVL1蛋白,为进一步制备基因工程疫苗奠定基础。方法PCR法从尖锐湿疣组织标本中扩增人乳头瘤病毒11型L1基因片段,克隆至pBluescript质粒,并测序。将其从克隆重组质粒中切下连入表达载体,建立pBAD(B)鄄HPV11L1原核表达重组质粒,在大肠杆菌宿主菌Top10中,经阿拉伯糖诱导,表达融合蛋白L1,经SDS鄄PAGE电泳和Westernblot进行鉴定。结果3株HPV11L1经测序发现变异一致,每株均有2个核苷酸变异,但未影响氨基酸变化。经SDS鄄PAGE鉴定L1蛋白相对分子质量为59×103,与预期值相同,Westernblot证明表达蛋白能与单克隆抗体反应,成功构建了pBAD(B)鄄HPV11L1原核表达系统。结论所构建的pBAD(B)鄄HPV11L1原核表达系统能够高效表达HPV11L1蛋白。

人乳头瘤病毒11型DNA中CpG基序甲基化状态分析及生物活性的研究

目的 对人乳头瘤病毒 11型全核苷酸序列的CpG基序 (CpGmotifs)进行分析 ,为阐明尖锐湿疣的发病机制和提高DNA疫苗的效能奠定理论基础。方法 对从pBR32 2 HPV11重组质粒上酶切下来的HPV11全长DNA进行计算机分析 ,包括分类、计数和定位 ;并用限制性内切酶PCR法分析HPV11DNA中CpG基序的甲基化状态 ,即分别用甲基化敏感的限制性内切酶AccⅡ、HaeⅡ和HpaⅡ对HPV11DNA进行酶切消化 ,再以HpaⅡ切割位点侧翼序列为引物 ,以HpaⅡ酶切产物为模板 ,用聚合酶链反应 (PCR)扩增HPV11DNA片断 ,并用HPV11DNA刺激表达有pCIneo TLR9的HEK2 93细胞 ,ELISA法检测TNF al pha、IFN alpha和IL 12的分泌。结果 CpG的“C”的侧翼为两个嘌呤 ,“G”的侧翼为两个嘧啶 ,在HPV11中共 14个。HPV11全基因组被AccⅡ切成 2个片断、被HaeⅡ切成 3个片断、被HpaⅡ切成 5个片断 ,而且以HpaⅡ酶切产物为模板进行PCR扩增 ,未能得到相应的片断。HPV 11DNA刺激有人TLR9表达的HEK2 93细胞后能检测到TNF alpha、IFN alpha和IL 12的分泌。结论 乳头瘤病毒 11型DNA中含有GACGTT等非甲基化的CpG基序 。

人乳头瘤病毒11型E6的原核表达

目的 构建、克隆人乳头瘤病毒 11型 (HPV11)E6蛋白基因 ,并进行表达、纯化和鉴定。方法 用PCR法 ,从尖锐湿疣 (CA)标本中扩增出HPV 11型E6蛋白基因 ,与 pET3 2a载体连接成重组表达质粒pET3 2a/E6;重组质粒转入BL2 1大肠杆菌 ,经诱导表达硫氧还蛋白E6融合蛋白 (Trx E6) ;该蛋白经 3SNTAResin纯化柱纯化 ,SDS PAGE和WesternBlotting检测鉴定。 结果 经酶切及序列分析鉴定 ,重组质粒 pET3 2a/E6成功构建 ,诱导后高表达Trx E6融合蛋白 ,WesternBlotting鉴定证实表达蛋白分子量为 3 60 0 0D的Trx E6融合蛋白。结论 获得高表达、高纯度的HPV11E6蛋白 ,为该蛋白的功能及免疫学分析及CA的疫苗研究打下了基础。

2型和11型鸭疫里默氏菌二价灭活苗的研制

为研制血清2型和11型鸭疫里默氏菌（Riemerella anatipestifer,RA）二价灭活疫苗,以RA1325株（2型）和RA1229株（11型）为菌种,经培养、灭活、浓缩,混合后制成二价灭活油乳剂疫苗。将疫苗皮下接种7日龄番鸭,免疫后7、14、21、56、63、70、77 d进行攻菌试验,测定疫苗的免疫原性。免疫后每隔7 d用ELISA方法测定血清中的抗体。结果表明,疫苗免疫后14 d产生良好保护,保护率超过80%,免疫持续期可达60 d。免疫后14~63 d抗体效价处于较高水平,说明研制的二价灭活疫苗能对血清2型和11型RA引起的鸭疫里默氏菌病产生良好的预防效果。

ZSM-11型沸石的晶粒大小对催化反应的影响

考察了HZSM-11型沸石晶粒大小对甲苯乙基化,二甲苯异构化、甲苯歧化等反应的活性及选择性以及对正己烷裂解反应活性的影响。发现小晶粒样品对提高芳烃的反应活性有利,而大晶粒对选择性有利,对正己烷裂解活性则相反。发现这种差异与样品的酸量大小无关,而与其晶内扩散阻力有很大关系。这仍是因不同晶粒大小样品的微孔长度不同所引起的结果。

人乳头瘤病毒16型和11型L1基因双价重组杆状病毒转移质粒的构建及鉴定

目的 :构建人乳头瘤病毒 16型与 11型 L 1基因双价重组杆状病毒转移质粒并对其进行鉴定。方法 :采用 PCR法从尖锐湿疣组织标本中扩增人乳头瘤病毒 11型晚期基因 L 1,并对其进行克隆测序 ;利用基因重组技术将人乳头瘤病毒 16型和 11型 L 1晚期基因共同装入杆状病毒转移载体中 ,分别位于强启动子 Ppolh和弱启动子 P10之下 ;利用酶切和 PCR技术对双价重组杆状病毒转移质粒进行鉴定。结果 :PCR扩增法获得尖税湿疣组织中感染的人乳头瘤病毒 11型的 L1基因 ,得到人乳头瘤病毒 16型 L1和 11型 L1基因双价重组杆状病毒转移质粒 ,经酶切电泳鉴定验证重组成功。结论 :本研究成功构建了双价重组杆状病毒转移质粒 ,为进一步构建双价 L 1蛋白表达系统进而建立双价基因工程亚单位疫苗打下基础。

表现为少年帕金森综合征的遗传性痉挛性截瘫11型1例报道

目的报道1例首发症状为少年帕金森综合征的遗传性痉挛性截瘫11型(SPG11)患儿。方法描述1例13岁发病的27岁男性患者的临床资料。结果患者首发为抖动、肢体僵硬,逐渐出现运动迟缓、行走困难,服用左旋多巴类药物有效。MRI示胼胝体萎缩和侧脑室周围白质脱髓鞘改变;肌电图示神经传导速度正常。基因检测提示SPG11基因存在两处杂合突变:c.5867-1G>C和c.3687-2A>G。家系分析显示突变分别来自父方和母方,为复合杂合突变。结论 SPG11可以帕金森综合征为首发表现,少年起病的帕金森综合征患儿有必要进行全面基因筛查。

WHEC-11型防腐溶垢成膜剂的应用研究

通过高压釜实验确定了WHEC - 11型停炉保护缓蚀剂现场应用时的最佳工艺参数。此缓蚀剂与传统缓蚀剂相比 ,成膜快、用量少 ,还可溶解老垢 ,且形成的膜不影响锅炉启动时的汽水品质。

人乳头瘤病毒11型L2NE7E6融合蛋白的原核表达及其诱发的T细胞免疫反应

目的:在原核表达系统中表达人乳头瘤病毒11型(HPV11)L2NE7E6融合蛋白,纯化蛋白后免疫小鼠,检测其诱发的T细胞免疫水平,并筛选HPV11 E6、E7特异的T细胞表位肽。方法:用重叠PCR方法构建HPV11L2NE7E6融合基因并插入原核表达质粒,在大肠杆菌中经IPTG诱导表达融合蛋白L2NE7E6,用SDS-PAGE和West-ern印迹鉴定融合蛋白的表达。Q柱纯化蛋白后免疫C57BL/6小鼠,分别用覆盖HPV11 E6和E7蛋白序列的肽库,采用酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测其诱发的E7、E6特异的T细胞免疫反应,并筛选E7、E6特异的T细胞表位肽。结果:在原核表达系统中有效表达了HPV11 L2NE7E6融合蛋白,蛋白纯化后免疫C57BL/6小鼠,分别能检测到针对HPV11 E6、E7肽库刺激产生的特异性T细胞免疫反应。经肽池筛选到1条强的E6 T细胞表位肽E6aa41-55(AEI-YAYAYKNLKVVW);而E7只筛选到2条弱的T细胞表位肽,分别为E7aa53-67(QILTCCCGCDSNVRL)和E7aa73-87(DGDIRQLQDLLLGTL)。结论:HPV11 L2NE7E6融合蛋白能诱发小鼠产生E6、E7特异性细胞免疫反应,可作为尖锐湿疣免疫治疗候选疫苗。

DG75/3.82-11型循环流化床锅炉设计特点

燃用福建无烟煤之DG 75/3.82 - 11型循环流化床 (CFB)锅炉在运行中表现出燃料适应性广、负荷调节性能好、燃烧效率高、连续运行时间长等优点 ,在设计上采取了以下设计特点 :中物料循环倍率、高炉膛低流速、炉膛出口段布置蒸发受热面、风力播煤结构、风道点火器 ,同时也存在炉膛挂焦、过热蒸汽温度、灰量不平衡等问题。

人乳头瘤病毒11型早期蛋白E6和E7基因的克隆及序列分析

目的:从尖锐湿疣(CA)标本中克隆出人乳头瘤病毒11型(HPV11)早期蛋白E6、E7基因,并进行序列测定及编码氨基酸序列分析,为HPV感染的检测和基因工程疫苗研究奠定基础。方法:用PCR法,从CA标本中扩增出HPV11E6、E7基因,与载体pGEX-6P-1连接成重组质粒pGEX-6P-1E6、pGEX-6P-1E7,酶切鉴定及双脱氧法测序观察其变异状况。结果:克隆出HPV11早期蛋白E6、E7基因,成功构建重组质粒pGEX-6P-1E6、pGEX-6P-1E7。本研究克隆出的HPV11E7基因与GenBank标准株序列完全相同,E6基因有两个位点的变化。结论:本研究克隆出的HPV11E6、E7基因与标准株基本相同,这将为进一步研究E6、E7基因的表达、免疫活性及流行病学奠定基础。

男性尖锐湿疣患者疣体和手指人乳头瘤病毒6/11型DNA的检测

目的:确定男性尖锐湿疣患者疣体和手指人乳头瘤病毒6/11型的感染。方法:采用PCR荧光法对46例男性尖锐湿疣患者疣体和手指进行HPV6/11型核酸定性、定量检测,同时以20名无尖锐湿疣的男性手指作对照。结果:尖锐湿疣患者39例疣体(39/46=84.78%)阳性,手指25例(25/46=54.35%)阳性。无尖锐湿疣患者的手指仅2人阳性,差异有显著性意义(P<0.05)。HPV6/11型疣体病毒载量为6.60x10^7±3.77×10~8,病毒载量与病程长短无相关性;尖锐湿疣患者的手指病毒载量为5.72×10~3±1.75×10~4,低于疣体的病毒载量(P<0.05)。结论:男性尖锐湿疣患者的手指携带HPV6/11型,其在尖锐湿疣的传播意义有待研究。

基于直11型机的故障诊断与预测管理系统技术研究

介绍了直11型机结构,直11型机故障诊断与预测管理系统(FDPMS)的诊断能力和FDPMS采用的故障诊断与预测方法,介绍了FDPMS的硬件设计方法、地面分析与管理软件设计方法,以及演示验证情况,并给出了研究结论。

DG75/3.82-11型循环流化床锅炉设计特点及改进

燃用福建无烟煤之DG75/3.82-11型循环流化床(CFB)锅炉在运行中表现出燃料适应性广、负荷调节性能好、燃烧效率高、连续运行时间长等优点,在设计上采取了以下设计特点:中物料循环倍率、高炉膛、炉膛出口段布置蒸发受热面、风力播煤结构、风道点火器,同时对存在的灰量不平衡、过热蒸汽温度等问题采取相应改进措施并提出优化设计建议。本文对燃用福建无烟煤CFB锅炉的设计与发展具有参考意义。

D1100-11型造气鼓风机技术改造

针对国内采用煤制气工艺的部分中氮肥生产厂发生的造气鼓风机出力不足的现象 ,根据不同的系统工作状况对原风机的叶轮进行重新设计施工 ,不改变机组其余部分 ,以起到增压扩容的效果 。

乳头瘤病毒11型完整基因组成功转染角质形成细胞并促其增殖

构建含人乳头瘤病毒11型(Human papillomavirus type11,HPV11)完整开放读码框(Open reading frame,ORF)基因组的质粒并对其功能进行初步验证,为构建HPV11转基因动物模型奠定基础。分别构建重组质粒pQE-Trisystem-EGFP/HPV11(pE/H)、pQE-Trisystem-EGFP/1.1copyHPV11(pE/1.1H),将pE/1.1H、pE/H、闭环状HPV11基因组分别转染原代人角质形成细胞(Keratinocyte,KC)并进行检测。在质粒上成功构建了目的序列,转染后在pE/1.1H组、pE/H组、HPV11组中检测到HPV11E6基因的表达;在pE/1.1H组、pE/H组中检测到荧光;HPV11组、pE/H组、pE/1.1H组具备促细胞增殖功能,实验组间比较pE/1.1H组稍弱(P<0.01),但与对照组相比均差异极显著(P<0.01)。将具有完整ORF的HPV11基因组(1.1copyHPV11)成功构建于质粒上,其具备野生型HPV11病理表型;为研究低危型HPV致病机理提供了实验材料和方法学指导;为进一步构建HPV11转基因小鼠奠定了基础。