β-1,3/α-1,3-葡聚糖与益生菌复配物的润肠通便功能

为探讨β-1,3/α-1,3-葡聚糖与益生菌复配对便秘小鼠通便作用的影响,将小鼠随机分为5组:阴性对照组、模型组、β-1,3/α-1,3-葡聚糖与副干酪乳酸杆菌质量比1∶1组、β-1,3/α-1,3-葡聚糖与鼠李糖乳杆菌质量比1∶1组、β-1,3/α-1,3-葡聚糖与乳双歧杆菌质量比1∶1组。除对照组外,其余组别均采用盐酸洛哌丁胺建立小鼠便秘模型。观察各组小鼠首粒黑便排出时间、6 h黑便粒数、粪便质量、粪便含水量及小肠墨汁推进率。结果表明:与模型组相比,3组处理组均能显著缩短便秘小鼠的首粒黑便排出时间,显著增加粪便质量、粪便粒数、墨汁推进率及粪便含水量。其中β-1,3/α-1,3-葡聚糖与副干酪乳杆菌1∶1组改善便秘效果优于β-1,3/α-1,3-葡聚糖与鼠李糖乳杆菌、乳双歧杆菌质量1∶1组。研究表明,β-1,3/α-1,3-葡聚糖与益生菌复配能有效促进便秘小鼠肠道蠕动,促进排便,具有润肠通便作用。

β-1,3-葡聚糖内切酶合成、制备及应用研究进展

β-1,3-葡聚糖内切酶是一类广泛存在于细菌、真菌和某些植物中,并能够水解β-葡聚糖产生不同分子量葡聚糖的酶。低分子量葡聚糖具有抗菌、抗氧化、免疫调节和抗肿瘤的生理活性,已在医药、食品、化工等多个领域显现良好的应用前景。目前生产低分子量葡聚糖的方法主要包括物理、化学和酶降解法。相较于物理和化学降解法,酶降解法具有催化效率高、反应条件温和、收率高及对环境友好等特点,但现阶段已开发的β-1, 3-葡聚糖内切酶的酶活性和稳定性仍无法满足工业化生产的需求。因此,开发适用于工业化生产的β-1,3-葡聚糖内切酶,已成为跨越通过降解高分子量葡聚糖制备低分子量葡聚糖技术壁垒的关键。本文系统介绍了β-1,3-葡聚糖内切酶的合成调节、特点、用于低分子量葡聚糖的制备以及工艺的优化等方面的研究进展,为促进β-1,3-葡聚糖内切酶的研究和工业化应用提供参考。

禾谷镰孢菌β-1,3-葡聚糖合成酶催化亚基GLS2异源表达体系的建立

本研究旨在利用草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda昆虫细胞Sf9-杆状病毒表达系统筛选禾谷镰孢菌Fusarium graminearum β-1,3-葡聚糖合成酶催化亚基GLS2在昆虫细胞中的异源表达载体和分离纯化所用的去污剂,为后续研究该蛋白与药剂的结合模型提供基础。通过对杆状病毒表达质粒pFastBac进行设计和改造、利用同源重组的方法构建质粒、使用昆虫细胞表达系统对重组蛋白进行异源表达、筛选适合提取目的蛋白的去污剂等方法,得到适合禾谷镰孢菌β-1,3-葡聚糖合成酶催化亚基GLS2异源表达的载体和分离目的蛋白的方法。结果表明,载体pFastBac-GP67-8×His-GFP-TEV-FgGLS2、pFastBac-HA-8×His-GFP-TEV-FgGLS2、pFastBacGP67-6×His-2×Strep-TEV-FgGLS2和pFastBac-FgRHO-TEV-8×His均可在草地贪夜蛾昆虫细胞Sf9表达系统中进行表达,其中:GP67-8×His-GFP-TEV-FgGLS2融合蛋白可以用去污剂十二烷基二甲胺氧化胺(dodecyldimethylamine oxide,DDAO)从细胞膜上分离,HA-8×His-GFPTEV-FgGLS2融合蛋白可以用去污剂十二烷基-β-D-麦芽糖苷(n-dodecyl-β-maltoside, DDM)、十烷基-β-D-麦芽糖苷(n-decyl-β-maltoside, DM)或DDAO从细胞膜上分离,GP67-6×His-2×Strep-TEV-FgGLS2融合蛋白可以用去污剂DM或DDAO从细胞膜上分离。本研究首次成功地在草地贪夜蛾昆虫细胞Sf9表达系统中表达了β-1,3-葡聚糖合成酶催化亚基GLS2,FgRHO蛋白可促进FgGLS2的稳定表达,并筛选到适合FgGLS2提取的去污剂DDAO。

哈茨木霉产水解热凝胶的内切β-1,3-葡聚糖酶的分离纯化

结合多种分离方法,从哈茨木霉(Trichoderma harzianum Rifai ACCC30371)的发酵产物中分离得到一种对不溶性多糖热凝胶具有较高水解活性的内切β-1,3-葡聚糖酶。结果表明,哈茨木霉发酵液经50%饱和度硫酸铵沉淀预处理后,依次经过HiPrep 26/10 desalting层析柱脱盐、QFF阴离子交换层析柱去除杂质蛋白,最终经Superdex 75凝胶柱纯化获得纯度较高的内切β-1,3-葡聚糖酶。最终酶活回收率为6.63%,内切酶比酶活由6.86U/mg提高到133.01U/mg,纯化倍数达到19.39倍。MALDI-TOF-TOF鉴定结果表明,该内切酶与产自绿色木霉的endoglucanase存在较高的同源性。

酵母β-1,3-葡聚糖研究进展

对酵母β-1,3-葡聚糖的提取工艺和衍生化方法的研究动态进行了综述,并对各种方法的优越性进行了比较,简述了β-1,3-葡聚糖在食品、化妆品、医学、动物养殖及饲料工业中的用途,提出了β-1,3-葡聚糖研究发展的方向。

啤酒废酵母中β-1,3-葡聚糖的提取工艺

研究采用酶-碱法从经超声波处理的废酵母残渣中提取β-1,3-葡聚糖的工艺,通过正交试验得出理想的酶处理工艺条件:酶添加量208 U/g,温度50℃、pH 6,酶解8 h,蛋白质去除率为62.82%,每L废酵母液中可回收0.348 g多肽、氨基酸的蛋白水解液;碱处理工艺条件:用30 mL质量分数为2%NaOH溶液在70℃处理酶解后的沉淀物5 h。所得β-1,3-葡聚糖纯度为90.50%,得率为11.00%,经紫外光谱、薄层层析和性质分析为高纯度的β-1,3-葡聚糖。

小菜蛾幼虫血淋巴中β-1,3-葡聚糖结合蛋白的分离及其对根虫瘟霉侵染的免疫活性

用亲和沉淀法从小菜蛾 (Plutellaxylostella)幼虫血淋巴中分离获得 2种β 1,3 葡聚糖结合蛋白 ,分子质量分别为 75 9ku和 83 2ku ,主要存在于幼虫血浆中 ,但血细胞中未检出 .研究表明 ,β 1,3 葡聚糖结合蛋白能特异性地识别β 1,3 葡聚糖 ,并显著激活幼虫血淋巴中的酚氧化酶原 (ProPO) ,与昆布多糖共存时所激活的酚氧化酶 (PO)活性显著高于两者单独存在时的PO活性 .与 4株根虫瘟霉 (Zoophthoraradicans)菌丝裂解液共存时 ,β 1,3 葡聚糖结合蛋白能激活幼虫血淋巴中的ProPO ,使PO活力显著高于该菌原生质体裂解液所激活的PO活性 .显然 ,β 1,3 葡聚糖结合蛋白只有特异性地识别根虫瘟霉细胞壁中的β 1,3 葡聚糖后才能激活幼虫血淋巴中的ProPO ,表明虫霉原生质体可逃避寄主免疫反应 .此外 ,β 1,3 葡聚糖结合蛋白对不同菌株所激活的PO活性存在差异 ,各菌株所激活的PO活性由高到低依次为 :ARSEF1342 >ARSEF2 6 99>F9910 1>ARSEF110 0 ,这与各菌株对小菜蛾的毒力强弱相一致 。

β-1,3-葡聚糖对感染大肠杆菌肉鸡肠道氧化还原状态、菌群状态和免疫功能的影响

试验选择90只1日龄AA肉鸡随机分成3组,分别饲养于隔离器中。处理1和2饲喂基础日粮,处理3饲喂添加葡聚糖的试验日粮。处理2和3在8、9和10日龄连续口服感染大肠杆菌O780.5mL(浓度为1×1010cfu/mL)。处理1组鸡在8、9和10日龄口腔接种等剂量的灭菌PBS。结果表明,大肠杆菌O78感染会显著降低鸡生长速度(P<0.05),提高死亡率,使感染初期小肠氧化损伤,显著降低肠道乳酸菌数和肠道sIgA量(P<0.05),但显著提高感染初期血清特异性IgG和感染后期空肠sIgA和血清特异性IgG水平(P<0.05)。而日粮添加葡聚糖降低肉鸡死亡率,缓解因感染引起的生长速度降低,减轻肠道氧化损伤,增强肠黏膜抗氧化能力,显著提高感染后期肠道乳酸细菌数量和感染后期血清特异性IgG水平。

以甘油为碳源生产低分子质量β-1,3-葡聚糖的发酵工艺

首次利用Agrobacterium sp.ATCC 31749进行适应性驯化得到1株可单菌发酵生产低分子质量β-1,3-葡聚糖的菌株Agrobacterium sp.WS-8E3T,优化前其利用甘油生产低分子质量β-1,3-葡聚糖的产量为1.648 g/L。针对驯化菌株进行了摇瓶发酵条件的优化,结果表明,甘油初始质量浓度为20 g/L,并在甘油残余量为10 g/L左右时补加20 g/L甘油,最佳复合氮源配比为4 g/L酵母粉以及3 g/L硫酸铵,最佳装液量为75 mL/500 mL,最佳产糖pH为6.30。7 L发酵罐放大验证实验中,菌体生长期最佳pH为7.0,甘油为20 g/L;产糖期pH为6.3,甘油为30 g/L,在此条件下低分子质量β-1,3-葡聚糖产量达到8.03 g/L,相比未优化前提高了386.7%。产品红外光谱分析结果与热凝胶一致,单糖组成为单一葡萄糖,聚合度分布在18~22。研究首次采用单菌发酵策略,显著提高了低分子质量β-1,3-葡聚糖的产量,为进一步低成本、大规模地发酵生产低分子质量β-1,3-葡聚糖提供了理论依据。

酵母β-1,3-葡聚糖提取方法及生物活性

对酵母β-1,3-葡聚糖的提取方法进行综述,对各种方法的特点进行比较。简述酵母β-1,3-葡聚糖具有提高免疫力、抗肿瘤、抗辐射、降低胆固醇等生物活性。

真菌β-1,3-葡聚糖基转移酶研究进展

真菌葡聚糖作为细胞壁的重要组成部分,与菌丝形成、菌体生长等众多过程密切相关,同时还具有显著的增强免疫、调节肠道菌群、预防心血管疾病等功能。真菌中最重要的葡聚糖主要由β-1,3-糖苷键连接的主链和不同比例和聚合度的β-1,3和/或β-1,6-糖苷键连接的支链构成。GH72家族的β-1,3-葡聚糖转移酶具有切割和转移葡聚糖糖链的能力。在真菌葡聚糖合成过程中,β-1,3-葡聚糖转移酶通过切割和转移线性葡聚糖链,对其结构进行分支化修饰,形成丰富的分支结构。影响葡聚糖的水溶性、分散性和细胞壁的结构和功能等。该文主要对几种真菌中GH72家族葡聚糖基转移酶的研究现状进行综述,以期为理解真菌葡聚糖的合成途径和葡聚糖合成相关酶系的催化机制提供一定的参考。

羧甲基-β-1,3-葡聚糖对人B淋巴母细胞的辐射防护作用

利用X射线辐照经羧甲基-β-1,3-葡聚糖预处理的人B淋巴母细胞(Human B lymphoblasts,HMy2.CIR),探究羧甲基-β-1,3-葡聚糖对辐射损伤的防护作用。采用CCK-8法检测细胞存活率,并筛选出最佳给药浓度和孵育时间(0.1μg/mL,72 h);流式细胞仪检测羧甲基-β-1,3-葡聚糖对辐照后HMy2.CIR细胞凋亡的影响;微核实验检测羧甲基-β-1,3-葡聚糖对辐照后HMy2.CIR细胞微核形成的影响;彗星实验检测对DNA损伤程度和修复的影响。结果表明,羧甲基-β-1,3-葡聚糖对HMy2.CIR无细胞毒性并具有增殖促进作用;羧甲基-β-1,3-葡聚糖能够抑制辐射造成的凋亡率和微核率的增加,降低DNA损伤程度,加快损伤DNA的修复。羧甲基-β-1,3-葡聚糖对HMy2.CIR细胞辐射损伤有防护作用,其机制可能与抑制辐射诱导的细胞凋亡和DNA损伤有关。

饲料添加β-1,3-葡聚糖对凡纳滨对虾生长性能、血清代谢、免疫相关基因表达和抗亚硝酸氮应激能力的影响

实验旨在研究β-1,3-葡聚糖的不同投喂方式对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)生长、血清代谢和抗亚硝酸氮应激能力的影响。选用480尾初体重(0.43±0.01) g的凡纳滨对虾,随机分为4组,即G0(全程投喂基础饲料)、G1组(全程投喂0.1%β-1,3-葡聚糖饲料)、G2组(0.1%β-1,3-葡聚糖饲料7d+基础饲料7d循环)和G3组(0.1%β-1,3-葡聚糖饲料14d+基础饲料14d循环)。在养殖84d后,应用亚硝酸钠进行120h亚硝酸氮应激实验。结果显示,各实验组凡纳滨对虾生长性能和全虾营养成分没有显著性差异。在养殖84d后, G2和G3组凡纳滨对虾肝胰腺脂肪酶活性显著高于G0和G1组(P<0.05), G1、G2和G3组凡纳滨对虾血清胆固醇和甘油三酯含量显著高于G0组(P<0.05), G3组凡纳滨对虾肌肉脂多糖/?-1,3-葡聚糖结合蛋白(LGBP)、酚氧化物酶原(proPO)和超氧化物歧化酶(SOD)mRNA表达显著高于G0和G1组(P<0.05)。亚硝酸氮应激120h, G1、G2和G3组凡纳滨对虾累计死亡率显著低于G0组(P<0.05), G3组凡纳滨对虾累计死亡率显著低于G0、G1和G2组(P<0.05)。在亚硝酸氮应激120h后,与G0组相比, G1、G2和G3组凡纳滨对虾血清总蛋白含量显著升高(P<0.05),葡萄糖含量、谷丙转氨酶和谷草转氨酶活性显著降低(P<0.05);G3组凡纳滨对虾肌肉LGBP、proPO和SOD mRNA表达显著高于G0 (P<0.05), G1组凡纳滨对虾肌肉丝氨酸蛋白酶(SP)mRNA表达显著高于G0、G2和G3组(P<0.05)。结果表明, 14d间隔投喂0.1%β-1,3-葡聚糖可能通过促进能量代谢和LGBP、proPO和SOD mRNA表达提高凡纳滨对虾抗亚硝酸氮应激能力。

纤细裸藻β-1,3-葡聚糖异养发酵与生理功效的研究进展

纤细裸藻是我国于2013年批准的新资源食品,纤细裸藻具有极高的营养价值,含有氨基酸组成合理的蛋白质、具有特殊生理功效的β-1,3-葡聚糖三螺旋晶体、维生素E中活性最强的同分异构体α-生育酚、多不饱和脂肪酸、矿物质等。该文首先从纤细裸藻异养发酵条件因子优化与培养基质代谢机制两个方面研究进行归纳;其次对裸藻β-1,3-葡聚糖的发酵制备、纯化、结构分析等进行了介绍;最后从促进免疫力、抗病毒、抑制肿瘤等方面归纳了裸藻β-1,3-葡聚糖生理功效方面的研究进展。旨在为裸藻异养发酵的应用研究与基质代谢基础研究提供理论支持;为裸藻β-1,3-葡聚糖在食品、药物、化妆品、新材料等领域的开发应用提供支持。

(1-3)-β-D葡聚糖联合降钙素原、CD4^(+)T淋巴细胞多指标在艾滋病患者马尔尼菲篮状菌感染早期诊断临床研究

目的探讨(1-3)-β-D葡聚糖联合降钙素原(procalcitonin,PCT)、CD4^(+)T淋巴细胞多指标在艾滋病患者马尔尼菲篮状菌感染早期诊断临床研究。方法回顾性选取我院2020年1月—2022年6月住院的120例艾滋病患者为研究对象。依据实验室结果,将其分为马尔尼菲篮状菌感染确诊组(血或组织液培育养出马尔尼菲篮状菌),简称A组(62例),及马尔尼菲篮状菌感染临床诊断组[根据临床症状、体征、血常规及(1-3)-β-D葡聚糖、PCT、CD4^(+)T淋巴细胞多指标诊断],简称B组(58例)。检测患者(1-3)-β-D葡聚糖、PCT、CD4^(+)T淋巴细胞的表达水平,采用受试者工作特征(receiver-operating characteristic,ROC)曲线下面积(area under the curve,AUC)评估上述指标联合检测对艾滋病患者感染马尔尼菲篮状菌的诊断效能。结果A组的(1-3)-β-D葡聚糖和PCT水平均高于B组,CD4^(+)T淋巴细胞个数低于B组(P<0.05);(1-3)-β-D葡聚糖、PCT、CD4^(+)T淋巴细胞联合检测的AUC为0.933,(1-3)-β-D葡聚糖单独检测的AUC是0.812,PCT单独检测的AUC为0.883,CD4^(+)T淋巴细胞单独检测的AUC是0.810,(1-3)-β-D葡聚糖、PCT和CD4^(+)T淋巴细胞联合检测的AUC皆优于三项单独检测,表明(1-3)-β-D葡聚糖、PCT和CD4^(+)T淋巴细胞联合检测的诊断价值皆优于单一指标诊断,且联合检测的特异度、约登指数分别为92.43%和0.580,均高于三项单独检测。结论(1-3)-β-D葡聚糖联合PCT和CD4^(+)T淋巴细胞多指标对艾滋病马尔尼菲篮状菌感染具有非常高的临床诊断价值,能够帮助医生分析出高危风险患者,及时制定治疗方案,同时也承担预后效果的判断依据,对治疗艾滋病马尔尼菲篮状菌感染具有非常重要的研究价值。

血浆(1-3)-β-D葡聚糖诊断新生儿侵袭性真菌感染的价值

探讨在针对新生儿侵袭性真菌感染的诊断中使用血浆(1-3)-β-D葡聚糖能够产生的诊断效能。方法 选取2021年1月到2022年2月因为侵袭性真菌感染于医院寻求医疗干预的新生儿总共60例作为本次研究的一部分研究对象记为1组;另外选取60例健康婴儿作为2组;统计、对比两组患者的血浆(1-3)-β-D葡聚糖水平、CD4+T淋巴细胞数水平;整理PCR技术针对1组患者诊断结果,将其与血浆(1-3)-β-D葡聚糖诊断侵袭性真菌感染的诊断效能进行对比。结果 研究结果显示1组患者的血浆(1-3)-β-D葡聚糖水平、CD4+T淋巴细胞数水平较之于2组患者存在明显差异,1组患者血浆(1-3)-β-D葡聚糖水平更高,而CD4+T淋巴细胞数水平明显更低;P<0.05。在针对诊断效能的考察上,血浆(1-3)-β-D葡聚糖诊断效能和PCR诊断结果之间在灵敏度、特异度方面差异不大,P>0.05。结论 针对罹患侵袭性真菌感染的新生儿使用血浆(1-3)-β-D葡聚糖进行检查,一定程度上能够确保诊断结果的严谨程度,可使用。

血浆(1,3)-β-D葡聚糖检测在侵袭性真菌感染诊断中的价值分析

研究血浆(1,3)-β-D葡聚糖检测技术(G实验)应用于侵袭性真菌感染(IFI)诊断中的应用价值。方法 选择我院在2023年1月至2024年1月期间收治的100例高危型侵袭型真菌感染患者,应用MB-80微生物快速检测动态系统以及对应的试剂对患者的血浆(1,3)-β-D葡聚糖进行检测,分析真菌培养、G实验和联合检测结果;三种方法的诊断效能;三种方法的ROC曲线。结果 确诊IFI阳性共28例,阴性共72例;联合检测的诊断效能高于真菌培养或者G实验。联合检测面积高于单一检测。结论 在侵袭性真菌感染的诊断中,应用血浆(1,3)-β-D葡聚糖检测,诊断效能良好,在和传统真菌培养技术联合检测下,可进一步提升诊断效能。

源于木霉TP-24的β-1，3-葡聚糖酶提取纯化研究

为实现不溶性酵母β-1,3-葡聚糖的酶法改性增溶,对源于木霉TP-24的β-1,3-葡聚糖酶分离纯化进行研究。结果表明,用含有2%CaCl2的pH5.0醋酸缓冲液浸提固态发酵曲180min,所得粗酶液经2%活性炭脱色、(NH4)2SO4分段盐析、透析浓缩、Sephadex G-100层析分离,获得了高酶活的蛋白峰I和杂蛋白峰II。浓缩含酶组分进行SDS-PAGE电泳分析,酶蛋白呈单一谱带,分子量近似为54.56ku,酶比活力为342.95U/mg,相对于粗酶液纯化了28.67倍,酶的回收率为45.15%。

冬虫夏草寄主蒲氏钩蝠蛾β-1,3-葡聚糖识别蛋白家族的分子结构与功能分析

β-1,3-葡聚糖识别蛋白(βGRP)是昆虫响应真菌侵染的重要识别介质,能够识别并结合真菌细胞壁的β-1,3-葡聚糖从而激活体内的天然免疫系统。本文采用Protparam等生物信息学方法和工具对βGRP家族TpβGRP4a和TpβGRP4b基因及其编码蛋白的序列特征、分子结构、理化性质和生化功能等进行了预测分析。结果显示该基因的核苷酸序列全长分别为1 991 bp和1 681 bp,包括3'-UTR、ORF和5'-UTR序列,其蛋白分子式C2504H3832N672O736S15和C2094H3188N554O610S12,含496个和412个氨基酸残基,均以Gly含量最高,定位于分泌途径,无跨膜结构域,二级结构和三维模型解析完成,以随机卷曲为主,是含有21个碱基的信号肽和Glyco-hydro及Laminarinase功能域的亲水性蛋白质,而它们在稳定性、酸碱性和磷酸化位点存在不同,表明TpβGRP家族与目前已知βGR在昆虫对病原物的模式识别和免疫反应机制中的作用类似,但作用方式可能不同。本文为深入研究冬虫夏草寄主钩蝠蛾昆虫βGRP的生化特性和分子免疫学机理奠定基础,从而推动冬虫夏草资源的开发和保护,对丰富昆虫天然免疫体系也有积极意义。

羧甲基-β-1,3-葡聚糖对人肝癌HepG2细胞的放射增敏作用

本研究旨在探讨羧甲基-β-1,3葡聚糖(CMG)对人肝癌HepG2细胞X射线或^(12)C^(6+)离子束辐射敏感性的影响。首先用CCK-8法检测CMG对HepG2细胞的生长抑制情况,得到半数抑制浓度(IC50)为120.6μg/m L。用浓度为0.1×IC50的CMG预处理HepG2细胞24 h,再给予2 Gy X射线或^(12)C^(6+)离子束辐照(CMG+辐照组);CMG未处理组直接接受2 Gy X射线或^(12)C^(6+)离子束辐照(辐照组)。对比分析辐照组和CMG+辐照组细胞的克隆存活、DNA损伤、凋亡与周期分布、细胞内活性氧(ROS)水平。发现:与X射线辐照组相比,相同剂量的^(12)C^(6+)离子辐照组克隆存活率更小,DNA损伤和周期阻滞更加严重,细胞凋亡率和细胞内ROS水平也更高。与单独X射线或^(12)C^(6+)离子束辐照组相比,CMG+辐照组克隆存活率明显降低,细胞凋亡率随辐照后CMG作用时间的延长而明显增加,CMG使辐照后细胞内ROS维持在一个较高的水平,同时CMG明显加重了单独辐照诱导的DNA损伤和周期阻滞。结果表明,与X射线相比,HepG2细胞对相同剂量的^(12)C^(6+)离子辐射更敏感;CMG可增加HepG2细胞对X射线或^(12)C^(6+)离子辐射的敏感性;CMG可能通过增加受照HepG2细胞内的ROS水平,加剧辐照诱导的DNA损伤,促进辐射诱导细胞凋亡而起到辐射增敏作用。