不同浓度葡萄糖对3T3-L_1细胞分化及insig-1和insig-2 mRNA表达的影响

目的:观察不同浓度葡萄糖对小鼠前脂肪细胞(3T3-L1细胞)分化及insig-1和insig-2 mRNA基因表达的影响,探讨insig基因在脂肪细胞分化与代谢中的作用。方法:将3T3-L1细胞分别在高葡萄糖浓度(25mol/LG.S)、低葡萄糖浓度(5.5mol/LG.S)和甘露醇(19.5mol/L甘露醇+5.5mol/LG.S)中诱导分化,利用油红"O"染色检测脂肪细胞分化,RT-PCR和原位杂交法检测insig-1和insig-2 mRNA、脂肪细胞脂肪酸结合蛋白(AP2)mRNA表达的动态变化。结果:随着3T3-L1细胞的分化,insig-1和insig-2 mRNA和AP2 mRNA表达逐渐上调,低糖诱导组及甘露醇对照组细胞分化程度显著低于高糖诱导组,但两组insig-1和insig-2 mRNA的表达较高糖诱导组明显上调(P<0.05),而AP2 mRNA表达则下调;低糖诱导组与甘露醇对照组细胞分化程度及各基因表达无明显差别。结论:葡萄糖浓度可影响脂肪细胞分化;低糖时脂肪细胞分化及脂质沉积相对受抑制,可能与insig基因表达上调有关。

烧伤血清对3T3-L1前脂肪细胞增殖活性和成脂分化能力的影响

目的通过观察大鼠烧伤血清对3T3-L1前脂肪细胞增殖活性和成脂分化能力的影响,探索烧伤对脂肪代谢的影响。方法选择成年雄性SD大鼠48只,随机分为假伤组及烧伤1、4、7、14、21 d组,每组8只。各烧伤组大鼠背部制备30%总体表面积的Ⅲ度烫伤模型,分别于对应时间点收集血清;假伤组不作处理,取血清作为正常对照。采用各组血清培养3T3-Ll前脂肪细胞,MTT法检测细胞增殖活性,选择增殖能力最低组血清作为后续刺激血清。取3T3-Ll前脂肪细胞分别采用假伤血清(A组)、烧伤血清(B组)、假伤血清成脂诱导(C组)、烧伤血清成脂诱导(D组)培养。倒置显微镜下观察细胞生长情况,诱导培养7 d后行油红O染色,进行脂肪细胞计数并测量吸光度(A)值,实时定量PCR及Western blot检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(preoxisome proliferator-activated receptorγ,PPAR-γ)和脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase,LPL)基因及蛋白表达。结果 MTT检测示,与其余各组比较,烧伤4、7 d组细胞增殖能力显著降低(P<0.05),其中7 d组最低(P<0.05),取烧伤7 d组大鼠血清作为后续刺激血清。倒置显微镜观察示,培养后A、B组细胞形态无明显变化;诱导培养后C、D组细胞呈脂肪细胞样变,其中C组最显著。油红O染色示,C组细胞染色呈阳性,D组为弱阳性,余均为阴性;脂肪细胞计数以及A值比较示,A组高于B组、C组高于D组,差异均有统计学意义(P<0.05)。实时定量PCR及Western blot检测示,B组PPAR-γ基因相对表达量明显低于A组(P<0.05),但LPL基因相对表达量差异无统计学意义(P>0.05);PPAR-γ、LPL蛋白表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。D组PPAR-γ、LPL基因及蛋白表达量均显著优于C组(P<0.05)。结论大鼠烧伤7 d血清可致3T3-Ll前脂肪细胞成脂分化能力下降。