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丙型肝炎病毒5'端非编码区结构域Ⅰ、Ⅱ在其翻译启动活性中的作用具有细胞特异性
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作者 黄小晔 刘丽莎 +4 位作者 崔光晶 刘西霞 刘美佟 马琼山 刘水平 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1826-1829,共4页
目的分析在不同宿主细胞的翻译体系下,缺失不同片段的HCV 5'UTR翻译启动活性的差异。方法以脂质体介导基因转染技术,将截短型HCV 5'UTR调控Fluc的真核表达质粒与Rluc真核表达质粒p RL-TK共转染至不同的细胞中,转染后36 h:6提取... 目的分析在不同宿主细胞的翻译体系下,缺失不同片段的HCV 5'UTR翻译启动活性的差异。方法以脂质体介导基因转染技术,将截短型HCV 5'UTR调控Fluc的真核表达质粒与Rluc真核表达质粒p RL-TK共转染至不同的细胞中,转染后36 h:6提取细胞RNA,半定量RT-PCR检测目的质粒的转录水平;6用双荧光素酶报告基因检测系统检测Fluc基因相对表达活性,分析HCV 5'UTR缺失不同结构域后在不同翻译体系中翻译启动活性的差异。结果 6缺失5'端44个碱基的HCV 5'UTR的翻译启动活性分别与缺失前相比:在He La细胞和C6细胞中无明显影响,在L-02细胞中活性下降为46%,而在293T细胞则为缺失前的146%;6缺失5'端118个碱基后,HCV 5'UTR的活性分别与缺失前相比:在He La细胞中,缺失后活性仅为缺失前的49%,而在L-02细胞、C6细胞和293T细胞中,活性分别为缺失前的140%、160%和235%。在本研究使用的四种细胞中,p CNl的翻译启动活性的差异无统计学意义,p CNl-d2在293T细胞中活性最高,在L-02细胞中活性最低。p CNl-d3在293T、C6和L-2细胞中活性相近,但在He La细胞中的活性明显比其他细胞低。结论 HCV 5'UTR的DomainⅠ和DomainⅡ对其翻译启动活性的影响与宿主细胞种类相关,具细胞特异性。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 5'端非编码 翻译启动活性 细胞特异性
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庚型肝炎病毒5’端非编码区cDNA的序列分析 被引量:2
2
作者 李刚 姚集鲁 +2 位作者 陈青 彭文伟 汤文辉 《中国病毒学》 CSCD 1997年第3期224-228,共5页
为了解国CBV-C/HCV株的基因序列与国外分离株的同源性状况,对我国GBV-C/HCV的5’端非编码区(5’NCR)。cDNA进行了序列测定。参考国外发表的序列资料,在相对保守的5’NCR设计两对HGV特异性引物。采用热变性法提取云南省一个静脉吸毒... 为了解国CBV-C/HCV株的基因序列与国外分离株的同源性状况,对我国GBV-C/HCV的5’端非编码区(5’NCR)。cDNA进行了序列测定。参考国外发表的序列资料,在相对保守的5’NCR设计两对HGV特异性引物。采用热变性法提取云南省一个静脉吸毒者血浆中的GBV-C/HGVRNA逆转录为cDNA后进行巢式聚合酶链反应(PCR)扩增,获得238bp的片段。PCR产物纯化后直接经双脱氧链末端终止法测定核苷酸序列。与国外分离株比较,同源性为86.36%~90.9t%,微分区域变异较大。结果表明,所扩增片段属于GBV-C/HGV基因,所测序列可为引物设计据供依据。对核酸变异性分析有一定意义。 展开更多
关键词 庚型肝炎病毒 感染 序列分析 5'端非编码 CDNA
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大肠杆菌编码区5′端碱基的统计分析 被引量:7
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作者 李宏 罗辽复 《内蒙古大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 1998年第6期777-781,共5页
统计了大肠杆菌1288个编码序列开始的33个碱基位点(11个密码子)上各碱基出现的概率,发现第2、第3密码子各位点上的碱基概率分布与其它密码子上的碱基分布概率不一样;碱基G和T出现的概率从第4个密码子后呈现明显的3周... 统计了大肠杆菌1288个编码序列开始的33个碱基位点(11个密码子)上各碱基出现的概率,发现第2、第3密码子各位点上的碱基概率分布与其它密码子上的碱基分布概率不一样;碱基G和T出现的概率从第4个密码子后呈现明显的3周期分布.我们还研究了这些位点上的碱基概率分布与基因表达水平的关系,发现高表达基因和低表达基因在第2、第3密码子各位点上,其各种碱基的概率分布是有区别的;高表达基因碱基G和T的概率分布3周期性更明显. 展开更多
关键词 大肠杆菌 基因表达 编码5' 碱基 统计分析
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中国不同地区庚型肝炎病毒5′非编码区基因异质性分析
4
作者 闻守宾 谭文杰 +1 位作者 伊瑶 詹美云 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期109-113,共5页
为分析庚型肝炎病毒(HGV)5′非编码区(5′UTR)基因的异质性,确定中国不同地区HGV主要流行株的特点及其分布,本研究对来自江西、湖南、河南、河北、甘肃等地9株HGV5′UTR区进行基因扩增与序列测定。通过对5′... 为分析庚型肝炎病毒(HGV)5′非编码区(5′UTR)基因的异质性,确定中国不同地区HGV主要流行株的特点及其分布,本研究对来自江西、湖南、河南、河北、甘肃等地9株HGV5′UTR区进行基因扩增与序列测定。通过对5′UTR区154个核苷酸区段的序列进行分析,并与文献报导的其它25株(16株中国HGV、9株国外代表株)相应区段进行比较与系统树分析,结果表明:(1)中国不同地区HGV5′UTR区基因存在一定异质性,但不存在明显的地区分布差异;(2)对34株HGV5′UTR区的系统树分析,可分为3组,存在明显的地理分布特征;(3)绝大多数(除1株外)中国HGV分离株皆分在第三组,并可分为二个亚组。 展开更多
关键词 庚型肝炎病毒 5'编码 异质性
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Point mutation of 5' noncoding region of BCL-6gene in primary gastric lymphomas
5
作者 Da-LiuMin Xiao-YanZhou Wen-TaoYang Hong-FenLu Tai-MingZhang Ai-HuaZhen Pei-ZhengCao Da-RenShi 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2005年第1期51-55,共5页
AIM: To investigate the mutations of the 5' noncoding region of BCL-6 gene in Chinese patients with primary gastric lymphomas. METHODS: PCR and direct DNA sequencing were used to identify BCL-6 gene mutations in t... AIM: To investigate the mutations of the 5' noncoding region of BCL-6 gene in Chinese patients with primary gastric lymphomas. METHODS: PCR and direct DNA sequencing were used to identify BCL-6 gene mutations in the 5' noncoding region in 29 cases of gastric diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL) and 18 cases of gastric mucosa-associated lymphoid tissue (MALT) lymphoma as well as 10 cases of reactive hyperplasia of lymph node (LRH). RESULTS: Six of 29 gastric DLBCLs (20.7%), 4 of 18 gastric MALT lymphomas (22.2%) and 1 of 10 LRHs(10%) were found to have mutations. All mutations were single-base substitutions and the frequency of single-base changes was 0.20×1O^(-2)-1.02×1O^(-2)per bp. CONCLUSION: Point mutations in the 5' noncoding region of BCL-6 gene are found in Chinese patients with primary gastric DLBCLs and MALT lymphomas, suggesting that they may, in some extent, participate in the pathogenesis of primary gastric DLBCLs and MALT lymphomas. 展开更多
关键词 Gastric lymphomas BCL-6 gene 5' noncoding region Point mutation
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黑曲霉糖化酶高产和低产菌株糖化酶基因调控区的克隆及其分析比较 被引量:11
6
作者 钟丽婵 乔殿华 +1 位作者 唐国敏 杨开宇 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第3期181-186,共6页
以PCR合成的糖化酶高产菌株黑曲霉(Asp. niger)T21糖化酶基因5’近端非编码区588bp(EcoRI-BamHI)的序列为探针,从T21染色体DNA中克隆到近2.0kb的糖化酶基因5’端非编码区序列,并以此序列为探针从糖化酶低产菌株黑曲霉3.795(T21的诱变出... 以PCR合成的糖化酶高产菌株黑曲霉(Asp. niger)T21糖化酶基因5’近端非编码区588bp(EcoRI-BamHI)的序列为探针,从T21染色体DNA中克隆到近2.0kb的糖化酶基因5’端非编码区序列,并以此序列为探针从糖化酶低产菌株黑曲霉3.795(T21的诱变出发株)的染色体DNA中克隆到1.5kb的糖化酶基因5’端非编码区序列。该二序列的分析测定结果表明,其结构特征与文献报道的黑曲霉糖化酶基因5’端非编码区的基本一致,被称为“核心启动子”(Core promoter)的TATAAAT框及GCAAT框,分别在翻译起始点的-109bp及-178bp处。此外,在曲霉amdS,amyB基因中已发现有调控功能的CCAAT序列存在于-449bp和-799bp处。高产和低产菌株糖化酶基因5’端非编码区序列的分析比较结果表明,有9个部位的碱基发生了变化。此实验结果为进一步研究黑曲霉糖化酶基因在转录水平上的调控规律打下了基础。 展开更多
关键词 黑曲霉 糖化酶 5'端非编码 基因克隆
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丙型肝炎病毒基因组5'非编码区结构与功能研究进展 被引量:1
7
作者 徐东刚 《国外医学(分子生物学分册)》 CSCD 1995年第4期180-184,共5页
丙型肝炎病毒是经血源传播的一类肝炎病毒,其基因组为单股正链RNA,全长约为9.5kb,结构组成与黄热病毒和瘟病毒相似,它的5非编码区相对较长,一般为324-341个碱基。内含有数个小的开放阅读框。不同分离株在此区的同源性可高达98%,其一级... 丙型肝炎病毒是经血源传播的一类肝炎病毒,其基因组为单股正链RNA,全长约为9.5kb,结构组成与黄热病毒和瘟病毒相似,它的5非编码区相对较长,一般为324-341个碱基。内含有数个小的开放阅读框。不同分离株在此区的同源性可高达98%,其一级结构高度保守,并可形成特定的二级结构,在病毒基因的表达和复制中起重要的调节作用。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 5'编码
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2012年上海市徐汇区人肠道病毒5'非编码区序列分析
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作者 陶艳琳 赵雪涛 +1 位作者 沈小婷 王雅新 《中国卫生检验杂志》 北大核心 2014年第12期1756-1759,共4页
目的通过分析HEV的5'-UTR基因序列,确定上海市徐汇区手足口病(HFMD)病例中HEV的型别。方法采集2012年HFMD患儿标本,采用Real time-RT-PCR分别检测HEV、EV71和CoxA16核酸,初步鉴定其型别。从中挑选未能分型的HEV毒株扩增其5'-UT... 目的通过分析HEV的5'-UTR基因序列,确定上海市徐汇区手足口病(HFMD)病例中HEV的型别。方法采集2012年HFMD患儿标本,采用Real time-RT-PCR分别检测HEV、EV71和CoxA16核酸,初步鉴定其型别。从中挑选未能分型的HEV毒株扩增其5'-UTR进行核苷酸序列测定,运用DNAStar和MEGA5.2软件进行序列分析。结果26例标本均为HEV阳性:10例EV71阳性,5例CoxA16阳性,11例其他型HEV阳性。扩增11例未能分型的HEV标本的5'-UTR序列,9例测序成功,通过序列比对确定病毒型别:CoxA16 8例,CoxA10 1例。结论上海市徐汇区HFMD患儿的主要病原是EV71和CoxA16,也存在着其他型别的HEV,如CoxA10,应加强HEV基因亚型的分布及流行特点的监测。 展开更多
关键词 手足口病 人肠道病毒 5'编码
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肠道病毒71型基因组5'非编码区序列分析 被引量:2
9
作者 袁晓晶 温红玲 +6 位作者 高峰 许洪芝 司鲁莹 王东旭 宋艳艳 赵丽 王志玉 《山东大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2012年第9期127-132,共6页
目的了解2009年山东省临沂市分离的肠道病毒71型(EV71)基因组5'非编码区(5'UTR)序列特征,探讨基因组中引起神经毒性作用的候选位点。方法从手足口病患者的粪便标本中分离EV71,运用一步法逆转录聚合酶链反应扩增8个病毒株的5'... 目的了解2009年山东省临沂市分离的肠道病毒71型(EV71)基因组5'非编码区(5'UTR)序列特征,探讨基因组中引起神经毒性作用的候选位点。方法从手足口病患者的粪便标本中分离EV71,运用一步法逆转录聚合酶链反应扩增8个病毒株的5'UTR区,运用DNAstar和MEGA 4软件进行序列分析。结果 8个病毒株5'UTR区核苷酸为741~745 nt,核苷酸序列同源性介于97.0%~99.9%,8个病毒株的5'UTR区与C4亚型的同源性最高。序列比对发现,在5'UTR区第265 nt及703 nt处出现了核苷酸的突变(G265A,G703T)。遗传进化分析显示,8个病毒株序列与C4亚型的亲缘关系最为密切。结论此8个病毒株为C4亚型,核苷酸突变(G265A,G703T)可能与EV71的致神经毒性作用有关。 展开更多
关键词 手足口病 肠道病毒71型 5'编码 遗传进化分析 神经毒性
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2a型丙型肝炎病毒5′非编码区的RACE扩增及二级结构的分析
10
作者 秦兆习 丛旭 +3 位作者 蒋栋 哈明昊 陈红松 魏来 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期333-336,共4页
目的 获得真全长中国大陆 2a型丙型肝炎病毒 (HCV) 5′非编码区 (5′UTR)cDNA ,并分析其一级结构和二级结构 ,为进一步研究其在HCV复制、翻译中的调控机制、开发新的抗HCV药物奠定基础。方法 利用逆转录套式聚合酶链反应 (RT PCR)联... 目的 获得真全长中国大陆 2a型丙型肝炎病毒 (HCV) 5′非编码区 (5′UTR)cDNA ,并分析其一级结构和二级结构 ,为进一步研究其在HCV复制、翻译中的调控机制、开发新的抗HCV药物奠定基础。方法 利用逆转录套式聚合酶链反应 (RT PCR)联合限制性内切酶长度多态性分析(RFLP)初步筛选出 1例 2a型HCV感染者 ,采用cDNA末端快速扩增技术 (RACE)扩增出一条约 80 0bp的cDNA片段 ,A T克隆 ,用RFLP与PCR鉴定重组子 ,全自动序列分析仪测定插入子序列 ,RNAdraw预测二级结构。结果 RACE法获得真全长 2a型HCV 5′端序列。 5个克隆中 ,3个克隆含全长 5′UTR序列 ,与HCV 1,HC C2 ,HC J6 ,HC J8相比 ,同源性分别为 93.6 %~ 94 .4 % ,92 .1%~ 93.0 % ,98.8%~99 .7% ,96 .2 %~ 96 .5 % ,与 2a型标准株HC J6相比 ,2 1,170 ,2 2 2 ,2 4 7,339位不同 ,分别为G ,A ,C ,C ,T ,但这些突变不影响其二级结构。另外 2个克隆为 5′端缺失突变株 ,分别缺失 5 4bp和 14 4bp。结论 RACE技术快速、有效、实用 ,可有效获得病毒基因组的末端序列 ;依此获得中国大陆 2a型HCV的 5′UTRcDNA ;在感染者血液中存在 5′端部分缺失的HCV基因片段。 展开更多
关键词 2a型丙型肝炎病毒 二级结构 丙型肝炎 5'编码 序列分析 CDNA末端快速扩增技术 一级结构
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HCV5'非编码区基因分型与病毒复制水平的分析 被引量:1
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作者 王越 雷金娥 +6 位作者 段巍 江啸 穆丽君 惠凌云 史雯欣 周聪雅 杜忆华 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2017年第5期414-418,共5页
目的 研究丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus,HCV)的基因分型与各基因型的病毒复制水平,为判断病情及抗病毒治疗提供参考.方法 收集未经抗病毒药物治疗的抗-HCV阳性血清标本60份,经逆转录聚合酶链反应(Reverse Transcription Polymeras... 目的 研究丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus,HCV)的基因分型与各基因型的病毒复制水平,为判断病情及抗病毒治疗提供参考.方法 收集未经抗病毒药物治疗的抗-HCV阳性血清标本60份,经逆转录聚合酶链反应(Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)及核苷酸序列分析HCV的5'非编码区,对标本进行基因分型,并采用定量-PCR检测患者的血清HCV-RNA含量.统计学数据用Graphpad Prism 5.0和SPSS21.0软件进行分析.多组间的比较采用方差分析,两独立样本比较的t检验.结果 本研究人群中HCV各基因亚型的检出率依次为1b型48.3%(29/60)、3 a型23.3% (14/60)、1a型16.7% (10/60)和2a型10%(6/60),并检出一例2c亚型.HCV各基因亚型的血清平均病毒RNA含量的对数值log10(IU/ml)和标准差分别是:1a型5.46±1.19、1b型6.22±0.78、2a型5.47±0.65、3a型5.38±0.98 log10 (IU/ml).结论 本研究人群中1型HCV感染率显著高于2型和3型的感染率(P<0.01).1b亚型组血清HCV-RNA含量显著高于1a、2a和3a亚型感染人群的血清HCV-RNA含量(P<0.05).研究HCV准确的基因分型与血清HCV-RNA含量,有助于对各基因型丙型肝炎患者抗病毒治疗方案的制定. 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 5'编码 HCV基因分型 血清HCV-RNA含量
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Ⅰ型鸭肝炎病毒内部核糖体进入位点的结构与功能研究 被引量:2
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作者 赵伟 李传峰 +1 位作者 陈宗艳 刘光清 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期1-5,共5页
为验证Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-Ⅰ)基因组5'非编码区(UTR)是否含有内部核糖体进入位点元件,本研究利用体外翻译系统,结合细胞转染试验对DHV-Ⅰ5'UTR的结构和功能进行分析。结果表明:DHV-Ⅰ的5'UTR具有典型的内部核糖体结合元件(... 为验证Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-Ⅰ)基因组5'非编码区(UTR)是否含有内部核糖体进入位点元件,本研究利用体外翻译系统,结合细胞转染试验对DHV-Ⅰ5'UTR的结构和功能进行分析。结果表明:DHV-Ⅰ的5'UTR具有典型的内部核糖体结合元件(IRES)功能,能够内部起始下游蛋白的翻译,IRES元件位于360 nt~620 nt,共260个碱基。对IRES的二级结构进行预测和分析显示,DHV-ⅠIRES的结构与丙型肝炎病毒相似。利用定点突变方法,破坏IRES的颈环结构(SL)1、2以及IIIe区的关键性核苷酸,检测该突变对IRES功能的影响。研究结果显示,SL1、SL2和IIIe结构的破坏使得DHV-ⅠIRES的功能消失,表明SL1、SL2和IIIe区是维持IRES启动内部翻译起始功能的关键性结构域。 展开更多
关键词 Ⅰ型鸭肝炎病毒 5'编码 内部核糖体进入位点
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内部核糖体进入位点(IRES)调控多种癌细胞系中尾型同源盒转录因子2的翻译 被引量:1
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作者 高文青 李琪 +2 位作者 陈蕴 朱瑞宇 金坚 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期260-268,共9页
尾型同源盒转录因子2(caudal type homeobox transcription factor 2,CDX2)促进肠癌细胞增殖,并具有致瘤的潜能。然而,对于CDX2翻译水平的调控机制研究甚少。本研究基于转染及报告酶活性分析结果,首次证明CDX2 5'非翻译区(5'unt... 尾型同源盒转录因子2(caudal type homeobox transcription factor 2,CDX2)促进肠癌细胞增殖,并具有致瘤的潜能。然而,对于CDX2翻译水平的调控机制研究甚少。本研究基于转染及报告酶活性分析结果,首次证明CDX2 5'非翻译区(5'untranslated region,5'-UTR)存在内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site,IRES),并通过IRES在HEK293细胞以及肝癌、肠癌和卵巢癌等肿瘤细胞株中介导翻译起始。IRES介导的翻译机制与经典的帽依赖翻译途径(cap-dependent translation)不同,在一些IRES反式作用因子(IRES trans-acting factors,ITAFs)的作用下,不需要帽状结构,IRES可以直接招募核糖体小亚基,起始翻译。同时,肿瘤细胞内IRES介导的翻译方式可能是引起蛋白质异常表达的原因之一。通过Western印迹检测CDX2在4种肿瘤细胞系中的表达,发现CDX2的IRES活性与其在肿瘤细胞中蛋白质表达量正相关,其活性在耐药型卵巢肿瘤细胞株中最高。此外,CDX2 IRES元件的5'端截短及报告酶活性分析证明,CDX2 5'-UTR的活性中心位于68~147碱基之间,而位于5'末端的67个碱基形成一个远端茎环,抑制全长IRES的活性。定点突变68~147活性区域的实验结果揭示,3个茎环结构域(68GCCGGC73,88GCCAG92和114CUCUG118)是IRES元件中不可或缺的部分。上述结果证明,CDX2 5'-UTR具有IRES活性,其活性依赖于二级茎环结构。因此,可以针对特殊的茎环结构域进行研究,使之成为肿瘤药物作用靶点。 展开更多
关键词 尾型同源盒转录因子2 5'编码 内部核糖体进入位点
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Analysis of hypermutation of the 5' noncoding region in the BCL-6 gene
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作者 王林 刘建湘 +9 位作者 黄薇 王辉东 王建民 顾柏炜 陈竺 陈赛娟 许良中 杨文涛 金晓龙 柳红 《Chinese Medical Journal》 SCIE CAS CSCD 2001年第3期62-66,107,共6页
ObjectiveTo investigate BCL 6 gene mutations in Chinese populations with B cell non Hodgkin's lymphoma Methods Polymerase chain reaction (PCR), denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE) and direct D... ObjectiveTo investigate BCL 6 gene mutations in Chinese populations with B cell non Hodgkin's lymphoma Methods Polymerase chain reaction (PCR), denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE) and direct DNA sequencing were used to identify mutations in the 5' noncoding region of the BCL 6 gene in a total of 40 cases of diffuse large cell lymphoma (DLCL) and follicular lymphoma (FL) Results Nine cases were found to have base substitutions The incidence of BCL 6 gene mutation and the frequency of single base changes were approximately 25 7% and (0 56-1 10)×10 2 /bp, respectively Conclusions The 5' regulatory region of the BCL 6 gene undergoes frequent somatic hypermutation during lymphomagenesis and the identification of BCL 6 gene hypermutations provides a molecular marker for confirmatory diagnosis of B NHL 展开更多
关键词 BCL 6 gene · 5' noncoding region · hypermutation · diffuse large cell lymphoma · follicular lymphoma
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中国口服脊髓灰质炎减毒活疫苗安全性评估 被引量:6
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作者 赵蓉 张勇 +2 位作者 王东艳 祝双利 许文波 《中国计划免疫》 2006年第6期445-453,共9页
目的研究北京生物制品研究所(北京所)和中国医学科学院医学生物学研究所(昆明所)生产的口服脊髓灰质炎(脊灰)减毒活疫苗(OPV)减毒位点的基因特征,对比Sabin标准株,从基因序列的基础上研究OPV是否安全有效,从而为中国维持无脊灰状态OPV... 目的研究北京生物制品研究所(北京所)和中国医学科学院医学生物学研究所(昆明所)生产的口服脊髓灰质炎(脊灰)减毒活疫苗(OPV)减毒位点的基因特征,对比Sabin标准株,从基因序列的基础上研究OPV是否安全有效,从而为中国维持无脊灰状态OPV的使用和免疫策略提供科学依据。方法随机选取生产的不同批次OPV,先进行病毒分离和扩增,用中和试验定型,分出Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊灰疫苗病毒,然后用聚合酶链反应(PCR)得到各型脊灰疫苗病毒的5′非编码区(5′NTR区)和VP1蛋白编码区基因核苷酸片段,测序后,与各型脊灰Sabin标准株进行比较分析。结果两个所生产的OPV各型疫苗病毒的5′NTR区核苷酸序列与标准Sabin株各型别5′NTR区无差别,同源性为100%;VP1区核苷酸序列比较,北京所与昆明所OPVⅠ型VP1区与SabinⅠ型VP1区核苷酸序列同源性为100%;北京所OPVⅡ型VP1区与SabinⅡ型VP1区比较,有5个碱基变化,同源性为99.45%,昆明所OPVⅡ型VP1区与SabinⅡ型VP1区比较,有6个碱基变化,同源性为99.34%;北京所与昆明所OPVⅢ型VP1区与SabinⅢ型VP1区比较,都有2个碱基变化,同源性为99.78%。北京所与昆明所生产的OPV,3个型别的5′NTR区和VP1蛋白编码区基因核苷酸序列与标准Sabin株比较,所有神经毒力位点未发生变化,未发生毒力回复突变。结论中国北京所和昆明所生产的OPV是安全有效的,应对如何停止使用OPV,如何用脊灰灭活疫苗取代OPV进行前期研究工作。 展开更多
关键词 口服脊髓灰质炎减毒活疫苗 Ⅲ型脊髓灰质炎疫苗病毒 Sabin标准株 5'编码 VP1蛋白编码
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DNA sequences homologous to hepatitis C virus(HCV) in the extrachromosomal circular DNA in peripheral blood mononuclear cells of HCV-negative subjects 被引量:2
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作者 Reinhard H. Dennin Jian-Er Wo 《Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology)》 SCIE CAS CSCD 2019年第8期637-646,共10页
Objective: This study aimed to investigate DNA sequences that are substantially homologous to the corresponding RNA sequence sections of the hepatitis C virus (HCV). These DNA sequences are present in the whole DNA ex... Objective: This study aimed to investigate DNA sequences that are substantially homologous to the corresponding RNA sequence sections of the hepatitis C virus (HCV). These DNA sequences are present in the whole DNA extracted from peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) of HCV-negative subjects. We presumed that these experimentally proven 5'-noncoding region (5'-NCR) homologous DNA sequences could be contained in the extrachromosomal circular DNA (eccDNA) fraction as part of the whole cellular DNA. Methods: Home-made polymerase chain reaction (PCR) with whole cellular and isolated eccDNA, nucleotide basic local alignment search tool (BLASTn) alignments, and tests for patterns of methylation in selected sequence sections were performed. Results: The PCR tests revealed DNA sequences of up to 320 bp that broadly matched the corresponding sequence sections of known HCV genotypes. In contrast, BLASTn alignment searches of published HCV 5'-NCR sequences with human genome databases revealed only sequence segments of up to 36 bp of the 5'-NCR. The composition of these sequences shows missing base pairs, base pair mismatches as well as complete homology with HCV reference sequences. These short sequence sections are present in numerous copies on both the same and different chromosomes. The selected sequence region within the DNA sequences of the 5'-NCR revealed a broad diversity of individual patterns of methylation. Conclusions: The experimental results confirm our assumption that parts of the HCV 5'-NCR genomic RNA sequences are present at the DNA level in the eccDNA fraction of PBMCs. The tests for methylation patterns therein revealed individual methylomes which could represent an epigenetic feature. The respective sequence section might be subject to genetic regulation. 展开更多
关键词 Hepatitis C virus (HCV) 5'-Non-coding region (5'-NCR) Human genome Extrachromosomal DNA Circular DNA Pattern of methylation
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