5-羟色胺转运蛋白显像剂^(11)C-DASB的自动化合成及Micro PET/CT显像

目的:自动化合成5-羟色胺转运蛋白显像剂11 C-DASB并进行大鼠Micro PET/CT显像;方法:通过改变甲基化试剂、溶解前体溶剂及反应条件,得到优化的标记条件作为碳-11多功能合成模块的输入参数,进行自动化合成11 C-DASB,大鼠静脉注射11 C-DASB 45 min后进行显像;结果:采用11 C-CH3-Triflate作为甲基化试剂,通入新配制的含1mg去甲基DASB前体的500μL DMSO溶液内,80℃下加热2min,标准率为63.7%,大鼠显像表明,11 C-DASB特异性的浓聚于SERT富集区域;结论:经优化,11 C-DASB自动化合成可得到较高产率,大鼠显像表明,其特异性浓聚于SERT富集区域,有望作为5-羟色胺转运蛋白显像剂。

5-羟色胺转运蛋白显像剂的研究进展

中枢神经系统5-羟色胺神经元功能异常,特别是突触前膜的5-羟色胺转运蛋白(SERT)密度的变化常导致复杂的精神紊乱疾病。SERT的正电子发射断层(PET)和单光子发射断层(SPECT)活体显像剂有助于研究该系统的变化与精神紊乱疾病的关系,以及精神紊乱病人疗效的监测。本文综述了近年来SERT显像剂的最新研究进展,并指出了今后该类显像剂的发展趋势。

5-羟色胺转运蛋白及肥大细胞类胰蛋白酶对肠易激综合征发病的影响

目的:探讨5-羟色胺转运蛋白及肥大细胞类胰蛋白酶(MCT)在腹泻型肠易激综合征(IBS)及器质性胃肠病发病中的意义。方法:分别收集腹泻型IBS、结肠息肉、溃疡性结肠炎和结肠腺癌组织标本各10例,利用免疫组织化学SP法分别检测各组5-羟色胺转运蛋白及MCT表达水平。结果:与对照组5-羟色胺转运蛋白灰度值(154.8±10.5)相比,腹泻型IBS组(169.1±10.1,P﹤0.01)、溃疡性结肠炎组(173.0±8.4,P﹤0.01)灰度值升高,表达下降;结肠腺癌组(155.2±12.2,P﹥0.05)及结肠息肉组(148.4±11.7,P﹥0.05)无明显差异。与对照组MCT灰度值(116.4±8.6)相比,腹泻型IBS组(98.7±10.5,P﹤0.01)、溃疡性结肠炎组(101.8±7.5,P﹤0.01)灰度值降低,表达增加;结肠息肉组(111.4±12.0,P﹥0.05)、结肠腺癌组(110.0±9.3,P﹥0.05)无明显差异。5-羟色胺转运蛋白与MCT表达相关分析,两者之间呈负性相关(P﹤0.01)。结论:5-羟色胺转运蛋白表达下降和MCT表达升高与腹泻型IBS的发病有关;5-羟色胺转运蛋白及MCT可能与结肠腺癌和结肠息肉的发病无关。

肠易激综合征5-羟色胺转运蛋白基因多态性研究

目的:探讨5 羟色胺转运蛋白(serotoninreuptaketransporter, SERTor5 HTT)基因启动子区(5 HTTgene linkedpolymorphicregion, 5 HTTLPR)的插入/缺失片段与第2内含子可变数目串联重复序列(variablenum bertandemrepeats, VNTRs)多态性在广东汉族人群的分布及其与肠易激综合征(IBS)的相关性。方法:利用聚合酶链反应(PCR)技术检测87例符合罗马Ⅱ诊断标准的IBS患者和96例健康对照者外周血的SERT上述两个基因多态性。结果:肠易激综合征组SERT基因5 HTTLPR及VNTRs区的基因型多态分布与对照组间的差异无显著性(P>0. 05)。但其便秘型肠易激综合征(C IBS)组的L/L基因型频率比对照组明显升高( 25% vs7. 3%, P<0. 05)。结论: 5 羟色胺转运蛋白基因5 HTTLPR区及VNTRs区多态性与IBS不相关,但拥有L/L基因型的人群可能更易患C IBS。

5-羟色胺转运蛋白基因多态性与抑郁症临床表型的关联性

目的探讨5-羟色胺转运蛋白基因5-HTFLPR及STin2与抑郁症临床症状的关联性。方法研究共纳入401名中国汉族抑郁症患者，提取外周血基因组DNA，采用PCR分别对5-HTTLPR及STin2进行基因多态性分析；同时对每位患者进行HAMD-17及HAMA量表评估；然后进行关联性分析。结果（1）5-HTfLPR各基因型患者发病年龄分布差异有统计学意义（F=3．281，P=0．039），L／S组患者发病年龄最小，I／L组患者发病年龄最大。同时三组基因型患者的HAMA1条目（焦虑心境）得分差异具有统计学意义（P=0．010），其中L／S组患者得分[（2．34±0．80）分]显著高于S／S组患者[（2．08±0．85）分，校正P=0．018]。（2）STin2各基因型患者的HAMD10（精神性焦虑）、HAMA1（焦虑心境）、HAMA3（害怕）条目及精神性焦虑因子评分差异均具有统计学意义（P值分别为：O．014、0．044、0．036及0．006），其中12／10基因型组患者得分最高[分别为：（2．40±0．83）分、（2．38±0．90）分、（1．42±1．04）分、（14．60±4．26）分）]，与12／12组患者相比，HAMD10（精神性焦虑）条目[（2．11±0．77）分]及精神性焦虑因子得分[（12．96±3．78）分]均差异具有统计学意义（校正JP值分别为：0．018、0．006）。结论在中国汉族抑郁症人群中，5-HTTLPR与抑郁症发病年龄相关；5-HTFLPR及STin2两种基因多态性均与患者焦虑样症状表型存在关联，杂合子患者的焦虑症状更为突出，为抑郁症临床分型及优化治疗提供了一定线索。

痛泻安脾汤对腹泻型肠易激综合征大鼠5-羟色胺、5-羟色胺转运蛋白的影响

目的:观察痛泻安脾汤对腹泻型肠易激综合征(diarrhea irritable bowel syndrome,IBS-D)模型大鼠5-羟色胺(5-hydroxytrypta mine,5-HT)、5-羟色胺转运蛋白(serotonintransporter,SERT)影响。方法:48只雌雄各半的SPF级SD大鼠进行适应性饲养1周后,遵循随机原则将大鼠分为正常组12只,造模组36只(模型组、中药组、西药组),每组各12只,采用束缚+番泻叶灌胃法建立IBS-D肝郁脾虚证模型。造模成功后,正常组、模型组给予生理盐水灌胃,西药组给予阿洛司琼溶液,中药组给予痛泻安脾汤灌胃。酶联免疫吸附法检测血清5-HT水平,免疫组织化学法检测结肠组织、脑组织中5-HT、结肠组织SERT水平,Western blot法检测结肠组织中5-HT蛋白的表达。结果:血清5-HT水平比较:与正常组大鼠血清5-HT水平比较,模型组大鼠血清5-HT水平升高明显(P<0.05);与模型组大鼠大鼠血清5-HT水平比较,中药组、西药组均明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结肠组织Western blot检测结果比较:与模型组大鼠大鼠比较,中药组、西药组大鼠结肠5-HT蛋白表达显著降低(P<0.01);与正常组大鼠比较,模型组大鼠结肠5-HT蛋白表达水平升高(P<0.01)。结肠和脑组织(5-HT)免疫组织化学结果比较:与正常组大鼠比较,模型组大鼠5-HT水平升高明显(P<0.01);中药组、西药组血清5-HT水平显著低于模型组(P<0.01)。结肠免疫SERT结果比较:在模型组大鼠肠黏膜中SERT呈低表达状态,且显著低于正常组(P<0.01);中药组、西药组大鼠肠组织SERT表达水平显著高于模型组(P<0.01)。结论:痛泻安脾汤能够调节IBS-D大鼠5-HT、SERT水平,缓解腹痛、腹泻、腹胀等不适症状。

5-羟色胺转运蛋白基因多态性与精神分裂症的传递不平衡分析

目的 探讨 5 -羟色胺转运蛋白基因第 2内含子可变数目串联重复序列 (Intronic,variablenumber tandem repeat,Intronic VNTR)位点和启动子区 VNTR位点 (5 - HTTL PR)在精神分裂症发病机理中的作用。方法 应用传递不平衡分析方法对来自上海、西安和吉林的总计 314个精神分裂症简单核心家庭进行分析。结果 三地单独及合并样本的传递不平衡分析结果表明 ,这两个多态位点由杂合子父母传递给患病子女的等位基因频率差异无显著性。结论 5 -羟色胺转运蛋白基因上 Intronic VNTR和 5 - HT-TL PR多态位点在中国汉族人群精神分裂症发病机理中不起主要作用。

基于5-羟色胺转运蛋白和sigma-1受体的苯基哌嗪烷胺类化合物的设计、合成及抗抑郁活性研究

目的以5-羟色胺转运蛋白和sigma-1受体为靶点,设计合成苯基哌嗪烷胺类化合物及其衍生物,研究其体内外生物活性。方法以间氰基苯胺和氰基取代吲哚类化合物为起始原料,经还原胺化、烷基化反应,再与相应的苯基哌嗪类衍生物进行缩合制备系列化合物。经5-羟色胺再摄取抑制实验和sigma-1受体结合实验进行体外活性筛选,采用小鼠强迫游泳实验和小鼠悬尾实验对其中化合物39和42进行体内抗抑郁活性研究。结果与结论共合成36个未见文献报道的新化合物,经质谱和核磁共振氢谱确证结构。体内外药理研究表明:化合物39和42具有较强的5-羟色胺再摄取抑制作用和sigma-1受体高亲和力,Ki值分别为5.77 nmol·L^(-1)/49.95 nmol·L^(-1)和3.48 nmol·L^(-1)/3.30 nmol·L^(-1)。39在两种抑郁模型上均显示出良好的抗抑郁活性,具有作为新型抗抑郁活性分子进行深入研究的价值。

抑郁症易感性与5-羟色胺转运体基因的多态性

目的:探讨5-羟色胺转运体启动子区域基因多态性和抑郁症之间是否存在关联性。方法:运用聚合酶链反应和限制性片断长度多态性技术,检测抑郁症患者(患者组,n=60)和正常人(对照组,n=65)的5-羟色胺转运蛋白启动子区多态性的分布频率。结果:按意向处理分析,纳入结果分析患者组为60例,对照组为65人。①5-羟色胺转运蛋白启动子区基因型和等位基因频率比较:患者组和对照组5-羟色胺转运蛋白启动子区的S/S基因型频率分别为43.3%和20.0%,S等位基因频率分别为60.8%和43.8%,差异均有显著性(χ2=7.591,7.214;P<0.05)。②5-羟色胺转运蛋白启动子区基因多态性:所有被检测者共出现3种基因型:纯合子L/L(419bp,419bp)、杂合子S/L(375bp,419bp),S/S(375bp,375bp)。结论:抑郁症患者比正常人有较高频率的S/S基因型和S等位基因,5-羟色胺转运蛋白启动子区的S等位基因可能是抑郁症的易感基因之一。

天麻素对儿童多发性抽动症模型大鼠5-羟色胺系统的影响及相关机制

目的探讨天麻素对儿童多发性抽动症模型大鼠纹状体细胞外液5-羟色胺(5-HT)浓度的调节作用及其分子作用机制。方法将40只Wistar大鼠随机分为4组,即空白组、模型组、天麻素组、硫必利组,每组10只。除空白组予生理盐水5 mL/(kg·d)腹腔注射外,其余3组均予亚氨基二丙腈150 mg/(kg·d)腹腔注射制作多发性抽动症模型,造模共持续7 d。造模成功后,分别对大鼠进行药物干预。空白组、模型组均予生理盐水10 mL/(kg·d)灌胃,天麻素组予天麻素20 mg/(kg·d)灌胃,硫必利组予硫必利1 mg/(kg·d)灌胃,共持续8周。干预前后对大鼠的刻板行为进行行为学评价;收集各组脑脊液,分别应用微透析技术、高效液相色谱技术检测其纹状体细胞外液的5-HT、5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)浓度;处死大鼠,快速分离出纹状体,采用蛋白质免疫印迹技术测定大鼠纹状体5-HT转运体(SERT)蛋白表达。结果与空白组比较,模型组刻板运动增多、细胞外液5-HT浓度降低、SERT蛋白表达灰度值升高(P均<0.05)。与模型组比较,干预4周天麻组和硫必利组刻板运动开始减少(P均<0.05);干预8周后天麻组纹状体细胞外液5-HT浓度升高、SERT蛋白表达降低(P均<0.05),硫必利组纹状体细胞外液5-HT浓度、SERT蛋白表达无明显变化(P均>0.05)。各组纹状体细胞外液5-HIAA浓度比较差异无统计学意义(P均>0.05)。结论天麻素具有与硫必利相似的抑制儿童多发性抽动症模型大鼠刻板运动的作用,其作用机制可能与调节5-HT浓度、SERT蛋白表达量有关。

5-HTT基因多态性与情感障碍发病及SSRIs疗效的相关性分析

5-HTT基因多态性与情感障碍抑郁症发病及SSRIs疗效的相关性研究是目前研究的热点之一。关于5-HTT基因、5-HTTLPR(包括5-HTTLPR与5-HTT基因表达的调控密切相关、5-HTTLPR与情感障碍抑郁症的关系、5-HTTLPR与SS-RIs抗抑郁疗效的关系)、5-HTTLPR与SSRIs、5-HTT-3′UTRG/T值得进一步探讨,现就此作一综述。

P2X3受体介导电针调节肠易激综合征内脏痛大鼠结肠5-HT、SERT的作用研究

目的探讨嘌呤能配体门控离子通路3(purinergicligand-gatedionchannel 3,P2X3)受体介导电针对肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS)内脏痛大鼠结肠5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)、5-HT再摄取转运蛋白(serotonnin transporter,SERT)的调节作用。方法选取SPF级SD雄性大鼠,随机分为正常组、模型组、电针组、P2X3受体激动剂组、P2X3受体激动剂+电针组,通过三硝基苯磺酸(trinitrobrnzen sulfonic acid,TNBS)灌肠液灌肠制备IBS内脏痛大鼠模型。模型制备3周后运用电针、髓鞘内注射、电针和髓鞘内注射相结合等方法进行干预。采用结肠组织病理染色、腹部回撤反射(abdominal withdrawal reflex,AWR)评分观察IBS内脏痛模型是否制作成功,运用AWR评分、酶联免疫吸附法、蛋白质印迹法、实时荧光定量PCR等方法检测IBS大鼠内脏痛敏的变化及IBS大鼠结肠5-HT、SERT的表达变化。结果(1)电针能降低IBS大鼠在40、80 mmHg压力结直肠扩张(colorectal distention,CRD)刺激下的AWR评分(P<0.05,P<0.01);(2)电针能够下调IBS大鼠结肠5-HT的表达(P<0.01),上调结肠SERT蛋白和mRNA的表达(P<0.01);(3)P2X3受体被激活后,电针能够下调IBS大鼠结肠5-HT的表达(P<0.05),上调结肠SERT蛋白和mRNA的表达(P>0.05)。结论P2X3受体介导电针调节IBS内脏痛大鼠结肠中5-HT、SERT蛋白及mRNA的异常表达,可能是电针缓解IBS大鼠内脏痛外周敏化的机制之一。

溃疡性结肠炎患者结肠黏膜5-HT信号通路的变化特点

目的研究溃疡性结肠炎(UC)患者结肠黏膜5-羟色胺(5-HT)信号通路的变化,进一步了解UC的发病机制。方法经结肠镜检查获得UC患者和健康对照者的结肠黏膜活组织检查标本。用免疫荧光法和ELISA法分别检测肠嗜铬(EC)细胞数、5-HT含量和5-HT释放量。用RT-PCR和免疫荧光检测5-HT合成酶色氨酸羟化酶1(TPH1)和5-羟色胺再摄取转运蛋白(SERT)的基因表达。分析5-HT释放量与UC疾病活动度的相关性。结果与健康对照组相比,UC患者结肠黏膜嗜铬细胞数、5-HT含量、5-HT释放量和TPH1表达均显著增加,而SERT表达显著减少(P均<0.01)。此外,5-HT释放量与UC疾病活动度呈正相关(P<0.01)。结论UC患者结肠黏膜5-HT信号通路有多个环节发生变化,这些变化有助于了解UC的发病机制和开发新的治疗方法。

Ca^(2+)和突触融合蛋白1对突触前膜5-HT转运体转运活性的调控研究

目的:考察Ca2+和/或囊泡胞吐相关蛋白突触融合蛋白1(syntaxin 1)对5-HT转运体(SERT)转运功能的调控作用。方法:通过增加突触前膜外Ca2+水平和利用离子霉素促Ca2+内流,观察Ca2+对SERT活性和syntaxin 1/SERT复合体的影响;通过肉毒毒素C(BoNT/C)阻断syntaxin 1的作用,考察syntax-in 1对SERT转运功能的调控。结果:增加突触膜外Ca2+水平和/或促其内流将促进SERT的磷酸化,降低SERT的再摄取活性,促进蛋白激酶C(PKC)激动剂佛波酯(PMA)诱导的SERT磷酸化,降低功能性SERT/syntaxin 1复合体的水平;而BoNT/C预处理能阻断syntaxin 1的功能,显著抑制SERT的再摄取功能,减少功能性SERT/syntaxin1复合体的水平。结论:介导神经信号传递的Ca2+和调控囊泡膜融合和释放神经递质的syntaxin 1可能通过磷酸化SERT和调节SERT/syntaxin 1复合体的水平,调控SERT的再摄取活性。

痛泻要方通过调控结肠TPH1、SERT及肠道菌群改善腹泻型肠易激综合征症状

目的探讨痛泻要方调控结肠色氨酸羟化酶1(TPH1)、5-羟色胺转运体(SERT)及肠道菌群对腹泻型肠易激综合征(IBS-D)大鼠症状的影响。方法将42只SD大鼠随机分为对照组(7只)和造模组(35只)。造模组大鼠采用0.45 g/L的番泻叶药液[10mL/(kg·d)]灌胃联合慢性不可预知性应激的方法建立IBS-D模型。将造模成功的35只大鼠随机分为模型组、匹维溴铵组[15mg/(kg·d)]和痛泻要方低、中、高剂量组[3.75、7.5、15 g/(kg·d),以生药量计],每组7只。各药物组灌胃相应药液,每天1次,连续10 d。分别于造模前、造模后给药前、末次药物干预后评估各组大鼠的一般情况和体重变化情况;分别于造模后给药前、末次药物干预后检测其腹泻指数、内脏敏感性,观察其结肠组织病理变化,检测其结肠组织中5-羟色胺(5-HT)水平及蛋白表达情况和TPH1、SERT蛋白及mRNA的表达水平,并分析大鼠粪便样品中肠道菌群的多样性及物种组成变化。结果各组大鼠结肠组织均未见明显病理改变。与模型组比较,各药物组大鼠一般情况改善;痛泻要方中、高剂量组大鼠的日均体重增长量显著增加,腹泻指数、内脏敏感性和结肠组织5-HT、TPH1表达均显著降低或减少,结肠组织SERT表达显著增加(P<0.05或P<0.01);痛泻要方低剂量组大鼠腹泻指数、结肠TPH1蛋白表达、结肠5-HT蛋白阳性率均显著降低,SERT mRNA表达显著增加(P<0.05);痛泻要方的干预效果有剂量依赖趋势。与模型组比较,痛泻要方高剂量组大鼠的Chao1指数、Shannon指数均显著降低(P<0.05或P<0.01),厚壁菌门、乳酸杆菌属等有益菌显著增加,变形菌门、大肠杆菌属-志贺氏杆菌属、Rikenellaceae_RC9_gut_group等致病菌显著减少(P<0.05或P<0.01)。结论痛泻要方可通过抑制结肠组织中TPH1的表达并上调SERT的表达来降低5-HT水平、改善肠道菌群紊乱,从而改善IBS-D大鼠症状。

便秘型肠易激综合征SERT基因多态性研究

目的:探讨5-羟色胺转运蛋白(SERT)基因启动子区(5-HTTLPR)的插入/缺失片段与第2内含子可变数目串联重复序列(VNTRs)多态性与便秘型肠易激综合征(Constipation predominant irritable bowel syndrome,C-IBS)的相关性。方法:利用PCR检测84例符合罗马Ⅱ诊断标准的C-IBS患者和103例健康对照者外周血的SERT上述两个基因多态性。结果:便秘型肠易激综合征(C-IBS)的L/L基因型频率比对照组明显升高(25%vs7.8%,P<0.05)。结论:5-羟色胺转运蛋白基因5-HTTLPR区多态性可能与C-IBS相关,拥有L/L基因型的人群可能更易患C-IBS,而VNTRs区多态性则与C-IBS不相关。

天麻素可改善多发性抽动症模型大鼠的头部抽动行为

目的探讨天麻素对多发性抽动症(TS)模型大鼠头部抽动行为的影响及相关机制。方法采用1-(2,5-二甲氧基-4-碘苯基)-2-氨基丙烷(DOI)诱导法制备TS大鼠模型,将40只Wistar大鼠随机均分为4组:正常组(生理盐水灌胃)、TS模型组(从造模首日起,注射DOI后2 h以生理盐水灌胃)、TS+天麻素组(从造模首日起,注射DOI后2 h以30 mg/kg天麻素灌胃);TS+天麻素+CHIR-99021[糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)抑制剂]组(从造模首日起,注射DOI后2 h,先以2 mg/kg CHIR-99021腹腔注射,再以30 mg/kg天麻素灌胃),连续给药21 d。末次给药后,记录大鼠在30 min内的头部抽动次数,采用试剂盒检测纹状体5-羟色胺(5-HT)、5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)、多巴胺(DA)水平,免疫组化法检测黑质中DA神经元数量,Western blot法检测纹状体中5-羟色胺转运蛋白(SERT)、5-羟色胺2A受体(5-HT2AR)、5-羟色胺2C受体(5-HT2CR)表达及GSK-3β磷酸化情况。结果与正常组比较,TS模型组大鼠头部抽动次数、DA水平、DA神经元数量、SERT水平及p-S9-GSK-3β、p-S9-GSK-3β/t-GSK-3β水平增高,5-HT水平降低(P<0.05)。与TS模型组比较,TS+天麻素组大鼠头部抽动次数、DA水平、DA神经元数量、SERT水平及p-S9-GSK-3β、p-S9-GSK-3β/t-GSK-3β水平降低,5-HT水平升高(P<0.05)。与TS+天麻素组比较,TS+天麻素+CHIR-99021组大鼠头部抽动次数、DA水平、DA神经元数量、SERT水平及p-S9-GSK-3β、p-S9-GSK-3β/t-GSK-3β水平升高,5-HT水平降低(P<0.05)。结论天麻素可改善TS大鼠头部抽动行为,其作用机制可能是通过抑制GSK-3β的磷酸化,调节SERT表达,影响5-HT水平,进而抑制纹状体中DA的释放。

基于PET技术的强迫症大脑功能、代谢改变研究进展

强迫症病因尚不明确,神经环路异常是研究热点。正电子发射断层扫描(PET)作为一种新的影像技术,可以在活体状态及整体水平对大脑功能、受体、代谢进行评估。目前基于PET技术的研究结果显示,强迫症患者5-羟色胺转运蛋白结合潜力改变,5-羟色胺能、多巴胺能功能异常;强迫症患者治疗前后脑血流灌注和葡萄糖代谢发生改变。未来研究可联合多种脑成像技术,探索不同亚型﹑不同药物﹑不同治疗方法等对强迫症大脑功能及结构的影响。