芍药苷-6'-O-苯磺酸酯在甲醇中降解杂质结构解析和降解机制研究

目的:探究芍药苷-6’-O-苯磺酸酯在甲醇中的降解杂质,确证其结构,阐明降解机理。方法:将芍药苷-6’-O-苯磺酸酯溶于甲醇中,在加热的条件下生成降解杂质,通过硅胶柱层析和制备液相分离得到2个降解杂质,采用核磁共振、红外、质谱等技术确证杂质的结构,并对其降解机理进行推理。结果:鉴定了2个降解杂质结构,推测出芍药苷-6’-O-苯磺酸酯在甲醇中的降解机理。结论:为芍药苷-6’-O-苯磺酸酯的杂质研究提供了物质基础,同时也为其工艺路线的选择、分析方法开发以及质量研究与控制提供较为科学的依据。

顶空-气相色谱法测定芍药苷-6'-O-苯磺酸酯中的残留溶剂

目的:建立顶空-气相色谱法测定芍药苷-6’-O-苯磺酸酯中的6种残留溶剂的测定方法。方法:采用顶空-气相色谱法,HP-INNOWAX(0.530 mm×30 m,1μm)石英毛细管柱,氢火焰离子化检测器,载气为氮气,流速5 mL/min;柱温为程序升温,进样口温度为120℃,检测器温度260℃。顶空进样条件:顶空平衡时间为30 min,平衡温度80℃,定量环温度95℃,传输线温度90℃。结果:测定的6种有机溶剂完全分离,在相应浓度范围内线性关系良好。甲醇、乙醇、丙酮、三氯甲烷、乙酸乙酯和碳酸二甲酯的定量限分别是10.0 mg/kg,5.0 mg/kg,1.0 mg/kg,1.5 mg/kg,1.0 mg/kg和5.0 mg/kg,检测限分别是3.0 mg/kg,1.5 mg/kg,0.3 mg/kg,0.45 mg/kg,0.3 mg/kg和1.5 mg/kg。加标回收率、精密度、重复性和耐用性的RSD均小于10%。结论:本方法可以较好地用于测定芍药苷-6’-O-苯磺酸酯中的残留溶剂,对芍药苷-6’-O-苯磺酸酯的质量控制提供了科学依据。

2-[1-(1'-溴)-乙基]-2-(6'-甲氧基-2'-萘基)-1,3-二氧戊环的合成

以2-溴-1-(6'-甲氧基-2'-萘基)丙-1-酮为原料,乙二醇为缩酮化反应试剂,通过对溶剂和催化剂以及合成工艺参数等研究,得到了合成2-[1-(1'-溴)-乙基]-2-(6'-甲氧基-2'-萘基)-1,3-二氧戊环的优化工艺条件。研究结果表明,在优化的工艺条件下,产物的收率达到了85%。

光致变色化合物的研究——1,3,3-三甲基-6'-(-1-哌啶基)-螺[2H-吲哚-2,3'-[3H]吡啶[3,2-f][1,4]苯并噁嗪]的合成

The synthesis of an new photochromical compound,1,3,3 trimethyl 6′ (1 piperidinyl) spiro[2h indole 2,3′ [3H]pyridobenzoxazine (SP3),and an improved way for the synthesis of 6 hydroxyquinoline were descrided.The absorption spectrum of the colored metastable form SP3 shows prominent absorption peak at 560nm at 60℃?

6'-羟基爵床素A诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及其机制

目的探讨6＇-羟基爵床素A（JR6）对人肝癌Hep G2细胞凋亡的诱导作用及其机制。方法体外培养人肝癌Hep G2细胞,采用MTT法观察不同浓度的JR6和5-氟尿嘧啶（5-FU）对Hep G2细胞存活的作用,荧光显微镜观察Hoechst33258染色后细胞核形态改变,用流式细胞仪检测AnnexinⅤ-FITC/PI双染后Hep G2细胞的凋亡率,JC-1荧光染色观察药物对细胞线粒体膜电位的影响,Western蛋白质印迹法检测细胞凋亡相关蛋白细胞色素c、Bax和Bcl-2蛋白的表达。结果 JR6 6.1~196μmol·L-1和5-FU 3.4~192μmol·L-1分别作用Hep G2细胞48 h,对Hep G2细胞存活具有抑制作用,IC50分别为74.90和49.75μmol·L-1。JR6 12.3,49和196μmol·L-1作用Hep G2细胞48 h,细胞凋亡率明显增加,由正常对照组的（6.9±2.0）%增加至（13.8±2.0）%,（18.6±4.3）%和（32.4±3.2）%（P〈0.05,P〈0.01）。Hoechst33258染色结果显示,JR6 49和196μmol·L-1作用Hep G2细胞48 h,部分细胞出现细胞核固缩和染色质凝集等凋亡变化。线粒体膜电位检测结果发现,JR6 49和196μmol·L-1作用48 h能使Hep G2细胞线粒体膜电位水平明显降低（P〈0.05,P〈0.01）。线粒体凋亡相关蛋白的检测结果表明,JR6 12.3,49和196μmol·L-1作用Hep G2细胞48 h,胞浆细胞色素c表达增加,促凋亡蛋白Bax表达增加,抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低,且Bax/Bcl-2比值增加（P〈0.05,P〈0.01）。JR6 49μmol·L-1和5-FU组上述蛋白表达无明显差异。结论 JR6可能通过促进细胞色素c释放、打破Bcl-2/Bax平衡诱导Hep G2细胞凋亡。

新型氨基糖苷类修饰酶基因aac(6')-Ib-cr的研究进展

随着喹诺酮类药物在临床的广泛应用，喹诺酮类的耐药问题也受到了广泛的关注，细菌对喹诺酮类药物的耐药机制在20世纪90年代以前认为均是由染色体介导，如靶位改变、流出泵等。1998年，Martinez等最先报道临床分离菌株肺炎克雷伯菌中携带的质粒pM6252能介导细菌对喹诺酮类耐药，使人们对喹诺酮类耐药机制有了新的认识。

一株产超广谱β-内酰胺酶同时携带qnrB4和aac(6')-Ⅰb-suzhou型基因大肠埃希菌的鉴定

目的了解1株产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)同时携带qnrB4和aac(6')-Ⅰb-suzhou型基因大肠埃希菌的耐药机制。方法采用纸片扩散法检测1株分离于血液标本的大肠埃希菌对19种抗菌药物的敏感性,采用聚合酶链反应(PCR)检测6种耐药基因[qnrA、qnrB、qnrC、qnrS、qepA、aac(6')-Ⅰb],并对qnrB、aac(6')-Ⅰb基因测序后进行Blast比对分析。结果该菌株除对碳青霉烯类、酶抑制剂复合抗菌药物类敏感外,其余药物全部耐药;PCR发现该菌株同时携带qnrB和aac(6')-Ⅰb基因,经测序并分别与已在美国国立信息中心[NCBI]登录的DQ303921(qnrB4)和EF375621[aac(6')-Ⅰb-suzhou]型比对,同源性均>99%。结论该菌株多重耐药的机制与产ESBLs及携带qnrB4和aac(6')-Ⅰb基因有关。

2',5,6',7-四羟基二氢黄酮醇对内毒素诱导巨噬细胞活化的影响

目的检测2',5,6',7-四羟基二氢黄酮醇对细菌内毒素诱导的巨噬细胞RAW264.7释放TNF-α、IL-6及TNF-αmRNA表达的影响。方法 RAW264.7细胞经不同浓度(0、10、20、40、80、160 mg/L)2',5,6',7-四羟基二氢黄酮醇预处理后,ELISA法分别检测LPS(100μg/L)刺激的RAW264.7细胞释放TNF-α和IL-6的水平,Real-Time PCR法检测TNF-αmRNA的表达水平。MTT法检测2',5,6',7-四羟基二氢黄酮醇对RAW264.7细胞活力的影响,以排除实验用量2',5,6',7-四羟基二氢黄酮醇的细胞毒性作用。结果不同浓度的2',5,6',7-四羟基二氢黄酮醇预处理后,可显著抑制LPS诱导RAW264.7细胞释放TNF-α和IL-6,显著抑制TNF-αmRNA的表达,并都具有量效关系。MTT实验结果显示,低于320 mg/L浓度的2',5,6',7-四羟基二氢黄酮醇对RAW264.7细胞无明显的毒性作用。结论 2',5,6',7-四羟基二氢黄酮醇能够拮抗LPS对炎症反应细胞的刺激效应,有望成为脓毒症防治药物的候选药物前体。

LC-MS/MS法测定裸鼠肝脏中6'-羟基爵床定A的浓度

目的建立测定裸鼠肝组织中6'-羟基爵床定A浓度的LC-MS/MS法,并用于裸鼠的组织分布研究。方法色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18柱;流动相为水(含0.1%甲酸)-乙腈(含0.1%甲酸),梯度洗脱,流速0.5 ml.min-1,柱温为室温。采用ESI源,以多反应监测方式分别监测离子对m/z 410.8→136.9(6'-羟基爵床定A)和m/z 386.1→122.0(内标丁螺环酮)。肝组织匀浆后采用蛋白沉淀法进行预处理。结果 6'-羟基爵床定A在裸鼠肝组织中的线性范围为1.0～2000ng.ml-1,日内精密度RSD小于8.61%;日间精密度RSD小于8.15%,回收率在89.3%～98.3%范围内。结论该方法简单、灵敏、准确,适用于裸鼠肝组织中6'-羟基爵床定A的浓度测定及其组织分布研究。

2,2'-双氧代-4,4'-二苯基-5,5'-三亚甲基-6,6'-螺-双六氢嘧啶的绿色合成

以聚乙二醇-400为溶剂,以环己酮、苯甲醛、尿素为原料一锅煮合成2,2'-双氧代-4,4'-二苯基-5,5'-三亚甲基-6,6'-螺-双六氢嘧啶,探索催化剂及溶剂的用量、反应物配比、反应时间、反应温度对反应的影响,得到最佳反应条件为:n(环己酮)∶n(苯甲醛)∶n(尿素)=1.0∶2.5∶3.0、10 mL聚乙二醇-400、0.54 g对甲苯磺酸,反应温度100℃,反应时间5.0 h,产品收率为82.1%。

3,6'-二芥子酰基蔗糖联合tenuifoliside A协同抗抑郁作用及其机制的研究

目的研究远志中3,6'-二芥子酰基蔗糖(DISS)和tenuifoliside A(TFSA)协同抗抑郁作用及其初步作用机制。方法采用经典的行为绝望抑郁模型——小鼠悬尾实验,随机分为对照组、阳性药组、DISS 5、10 mg·kg^(-1)、TFSA 5、10mg·kg^(-1)、DISS 5 mg·kg^(-1)+TFSA 5 mg·kg^(-1)、DISS 5 mg·kg^(-1)+TFSA 10 mg·kg^(-1)、DISS 10 mg·kg^(-1)+TFSA 5 mg·kg^(-1)和DISS 10 mg·kg^(-1)+TFSA 10 mg·kg^(-1);灌胃给药7 d,观察DISS和TFSA单体及其合用对小鼠悬尾不动时间的影响;免疫组织化学方法检测小鼠海马及皮层内BDNF的表达;蛋白质印记法检测小鼠海马内CRTC1、CREB、p-CREB及BDNF的表达。结果 DISS和TFSA及其二者合用均可缩短悬尾小鼠的不动时间,其中DISS(10 mg·kg^(-1))和TFSA(10 mg·kg^(-1))组与单剂量药物组相比明显,并稳定缩短小鼠悬尾不动时间(P<0.05)。免疫组化实验中,DISS和TFSA及其合用组均可提高海马及皮层内BDNF的表达量(P<0.05),同时DISS和TFSA及其合用组可增加海马中CRTC1、CREB、p-CREB及BDNF蛋白的含量,其中合用组明显高于单药组(P<0.05)。结论 DISS与TFSA双药合用启动CREB共转录因子CRTC1,激活海马内CREB的磷酸化,进而增加其下游BDNF表达,发挥协同抗抑郁作用。

新试剂2-〔2'-(6'-甲基-苯并噻唑)偶氮〕-5-二甲氨基苯甲酸的酸碱平衡及其与铜(Ⅱ)显色反应的研究

本文研究了新显色剂2-[2′-(6′-甲基-苯并噻唑)偶氮]-5-二甲氨基苯甲酸(MBTAMB)与铜(Ⅱ)的显色反应及MBTAMB的酸碱平衡。试验表明MBTAMB在乙醇介质中,铜(Ⅱ)与MBTAMB形成1:1络合物,其λ_(max)为660nm,表观摩尔吸光系数为7.0×10~4L·mol^(-1)·cm^(-1),铜(Ⅱ)浓度在0～18μg/25ml范围内符合比尔定律。本法操作简便,可直接应用于铝合金及电镀废液中微量铜的测定,结果满意。

质粒介导aac(6')-Ib基因检测与喹诺酮类耐药

目的了解大肠埃希菌临床株对喹诺酮类抗菌药物耐药情况并分析质粒介导aac(6')-Ib基因存在与喹诺酮类药物耐药性的关系。方法采用纸片扩散法(K-B)对临床中段尿分离所得121株大肠埃希菌进行耐药性检测,聚合酶链反应(PCR)法检测大肠埃希菌aac(6')-Ib基因,对aac(6')-Ib基因阳性菌株扩增片段进行DNA测序并确定基因型。结果大肠埃希菌临床株对萘啶酸、环丙沙星、诺氟沙星、左氧氟沙星4种喹诺酮类抗菌药物耐药率均高于75%。aac(6')-Ib基因检出率为14.0%(17/121),经DNA测序确定aac(6')-Ib基因变异体(cr)有14株,突变率为82.4%(14/17);aac(6')-Ib基因阳性株对氨苄西林-舒巴坦、哌拉西林-他唑巴坦、头孢唑啉、头孢克洛、头孢呋辛、阿米卡星、环丙沙星、诺氟沙星、左氧氟沙星耐药率高于阴性株且差异有统计学意义(P<0.05)。结论仁济医院临床分离大肠埃希菌对喹诺酮类抗菌药物耐药情况严重;质粒介导aac(6')-Ib基因的存在可使大肠埃希菌对喹诺酮类抗菌药物耐药性提高;质粒介导aac(6')-Ib基因还可能引起细菌对β-内酰胺酶抑制剂药物和头孢菌素类药物敏感性下降。

高效液相色谱法测定木鳖子中3-O-6'-O-甲基-β-D-葡萄糖醛酸丝石竹苷的含量

目的:运用高效液相色谱法测定木鳖子中3-0-6'-0-甲基-β-D葡萄糖醛酸丝石竹苷的含量。方法:ECONO-SPHERE C_(18)色谱柱,以甲醇-水(80:20)为流动相,流速0.8mL·min^(-1),检测波长210nm。结果:3-0-6'-0-甲基-β-D-葡萄糖醛酸丝石竹苷线性范围0.612～3.672μg,r=0.999 9;平均加样回收率98.8％;RSD=0.36％(n=5)。结论:该法灵敏、准确,可作为衡量木鳖子质量的依据。

Hydrothermal Syntheses and Crystal Structures of Six Complexes Constructed from 1,3,5-Benzenetricarboxylic Acid and 4'-(4-Pyridyl)-2,2':6',2''-terpyridine Mixed Ligands

Six new transition metal complexes, [Zn（HBTC）（PYTPY）]n·n PYTPY（1）, [Cu（HBTC）（PYTPY）]n·n PYTPY（2）, [Co（HBTC）（PYTPY）]n·n DMF（3）, [Mn（HBTC）（PYTPY）]n·n DMF（4）, [Cd（HBTC）（PYTPY）（H2O）]n·2nH2O（5）, and [Co（HBTC）（PYTPY）（H2O）2]（6）,（H3BTC = 1,3,5-benzenetricarboxylic acid, PYTPY = 4＇-（4-pyridyl）-2,2＇：6＇,2＇＇-terpyridine, DMF = N,N？-dimethylformamide）, have been synthesized and characterized by elemental analysis, IR and X-ray single-crystal diffraction. Complexes 1~5 all feature one-dimensional chain structures, and complex 6 exhibits a zero-dimensional structure. Complexes 1~5 present three-dimensional（3D） supramolecular frameworks via π-π stacking interactions, whenas 6 has also a 3D supramolecular structure assembled by hydrogen bonding. Meanwhile, complexes 1 ~ 6 exhibit the thermal stabilities and photoluminescent properties.

6,6'-二甲基-2,2'-联吡啶固相萃取光度法测定水中铜的研究

根据试剂6,6' 二甲基 2,2' 联吡啶与铜(Ⅰ)的显色反应及WatersPorapakR○ Sep Park固相萃取小柱对显色配合物的固相萃取,建立了一种测定水样中μg/L级铜的新方法,在pH=4.5HAc NaAc缓冲介质中,6,6' 二甲基 2,2' 联吡啶与铜(Ⅰ)反应生成2∶1稳定配合物,该配合物可用WatersPorapakR○ Sep Park固相萃取小柱富集,小柱上富集的配合物用乙醇(内含1%醋酸)洗脱后用光度法测定,可测定水样中μg/L级的铜。该方法用于几种水样中铜含量的测定,结果令人满意。

庆大霉素C-6'位氨甲基化修饰基因的研究

探索庆大霉素C-6'位氨甲基化修饰作用的基因。首先构建用于gen T基因缺失的同源重组质粒p FT104,利用接合转移导入绛红色小单孢菌G1008,筛选获得一株gen T基因缺失工程菌GT106(Δgen T)。其次构建用于GT106上gen N基因缺失的重组质粒p FTN203,通过接合转移导入GT106,筛选获得一株工程菌GTN205(Δgen T+gen N)。最后在gen K基因已经明确为C-6'位甲基化酶基因的基础上,在GTN205中敲除gen K基因,筛选获得到一株工程菌GTNK308(Δgen T+gen N+gen K)。工程菌发酵产物经质谱分析结果表明,与出发菌G1008相比,GT106组分未发生变化,而GTN205不再合成庆大霉素C1,产物主要积累在庆大霉素C1a和C2,GTNK308未检测到庆大霉素C2b。结果说明,gen N基因缺失阻断了庆大霉素C1与C2b的合成,表明gen N基因参与修饰绛红糖胺C-6'位氨甲基化,而gen T并不参与修饰绛红糖胺C-6'位氨甲基化。

aac(6')-Ib-cr基因是微生物对喹诺酮类抗菌药的又一耐药途径

aac(6')-Ib-cr基因表达的氨基糖苷乙酰转移酶通过质粒介导方式对环丙沙星等乙酰化,使其抗菌生物活性降低,并与其他耐药因素产生协同作用,导致MIC值大幅升高。该基因分布范围广,检出率高,使得微生物对喹诺酮类抗菌药物耐药更加复杂。本文检索了近年来aac(6')-Ib-cr基因相关研究报道,归纳论述该基因在喹诺酮类抗菌药物耐药中的作用,提醒临床医务工作者应高度重视aac(6')-Ib-cr基因对临床用药的影响,以促进喹诺酮类抗菌药的合理应用。

一种检测2'-甲基-6'-乙基-2-氯乙酰苯胺水解酶活性的方法

建立了一种快速测定Delftia acidovorans T3-6菌株2'-甲基-6'-乙基-2-氯乙酰苯胺(CMEPA)水解酶活性的方法。在20 mmol·L^(-1)Tris-HCl(p H值为7.0)缓冲液中,10~50μmol·L^(-1)的CMEPA水解产物2-甲基-6-乙基苯胺(MEA)在铁氰化钾催化下与4-氨基安替比林反应生成紫红色物质,该物质在535 nm处的吸光度(y)与MEA浓度(x)呈正相关(y=0.014 6x-0.005 4,R2=0.998 8)。底物CMEPA、十二烷基硫酸钠(SDS)、甲醇等有机试剂以及1 mmol·L^(-1)金属离子对显色反应无显著影响,温度和p H值对显色反应影响显著。4-氨基安替比林显色法对菌株T3-6粗酶液酶活性的测定结果与二氯甲烷萃取-紫外分光光度法无显著差异。该方法也适用于其他苯胺苯酚类衍生物的测定。

加做V_(5') V_(6')导联对左心室肥大的诊断价值

目的探讨加做V5导联下一肋间(V5')导联,V6导联下一肋间(V6')导联对左心室肥大的诊断价值。方法选用125例经确诊左心室肥大患者加做V5'、V6'导联,以R波电压V5'/V5>1和(或)R波电压V6'/V6>1作为诊断左心室肥大诊断标准,与常规心电图导联诊断左心室肥大作一对比分析研究。结果本文两种标准诊断左心室肥大分别与常规心电图诊断比较差异有非常显著性意义。结论加做V5'、V6'导联,可以提高心电图诊断左心室肥大的敏感性。R波电压V5'/V5>1和(或)R波电压V6'/V6>1对左心室肥大有一定诊断价值。