基于嘌呤能受体P2X7R的痛风性关节炎病理研究

目的 观察冰水泳浴对痛风大鼠模型病理变化的影响并探究其中P2X7R的调控机制。方法 雄性SD大鼠分为正常(NORM)组和实验组,实验组包括痛风对照(GC)组、冰水泳浴(IWS)组和亮蓝G(BBG,P2X7R拮抗剂)组。实验组大鼠通过尿酸酶抑制法联合Coderre法塑造高尿酸血症合并痛风性关节炎模型。冰水泳浴组大鼠在Coderre法造模后的0 h和12 h,分别于深约0.5 m的冰水混合物中进行5 min的耐力游泳,BBG组则在造模后立即腹腔注射BBG溶液1次。公式计算踝关节肿胀指数;尿酸酶法检测大鼠血清尿酸水平;ELISA法检测血清IL-1β、IL-6和TNF-α含量;HE染色观察踝关节和滑膜组织的病理变化;Western blot和免疫组化分别检测滑膜组织中P2X7R和NLRP3蛋白表达。结果 与正常组相比,实验组大鼠血清尿酸水平及踝关节肿胀指数均显著升高(P<0.05或P<0.01),且滑膜组织均存在不同程度的炎性浸润。与痛风对照组相比,冰水泳浴组踝关节肿胀指数在12 h显著升高(P<0.05),血清IL-1β、IL-6和TNF-α含量(P<0.01)及滑膜组织中P2X7R、NLRP3蛋白量均有显著表达(P<0.05);病理结果显示软骨表面破损,滑膜组织出现严重增生与糜烂,并伴有大量炎性细胞聚集。BBG组大鼠滑膜组织的P2X7R、NLRP3蛋白表达与病理损伤较痛风对照组无显著变化(P>0.05),而血清IL-1β、IL-6和TNF-α的表达均有显著改善(P<0.01)。结论 冰水泳浴模拟的寒冷刺激和剧烈运动可加重痛风性关节炎的病理损伤,其机制可能与关节局部P2X7R的高表达有关。

人参皂苷Rc调节P2X7r-NLRP3信号通路改善酒精性肝病作用机制

目的探讨人参皂苷Rc(Ginsenoside Rc,简称Rc)对酒精性肝病的保护作用及其作用机制。方法采用50 mmol/L乙醇(EtOH)刺激小鼠肝细胞(AML-12)12 h后,采用不同浓度Rc处理24 h。Western blot方法检测AML-12细胞中P2X7r、NLRP3和IL-23蛋白表达情况;RT-qPCR测定AML-12细胞中SREBP1、Lipin-1、P2X7r、NLRP3的mRNA表达情况;通过ELISA法分析肝细胞上清液中IL-1β和IL-18水平。结果与对照组比较,EtOH能够诱导AML-12细胞脂质变性和炎症因子释放,Rc能够有效下调P2X7r、NLRP3和IL-23的蛋白或mRNA表达,抑制EtOH诱导AML-12细胞中SREBP1和Lipin-1的mRNA表达,抑制EtOH诱导AML-12细胞中IL-1β和IL-18向胞外释放(均P<0.001)。结论Rc能够抑制酒精性肝病进程,作用机制可能与抑制P2X7r-NLRP3信号通路有关。

芒柄花黄素调控P2X7R/NLRP3通路对高糖诱导的心肌细胞炎症反应与焦亡的影响

目的探讨芒柄花黄素(FN)调控嘌呤能2X7受体(P2X7R)/核苷酸结合寡聚化结构域受体蛋白3(NLRP3)通路对高糖诱导的心肌细胞的炎症反应与细胞焦亡的影响机制。方法将H9C2细胞分为对照组、高糖(HG)组、HG+FN低浓度(FN-L)组、HG+FN中浓度(FN-M)组、HG+FN高浓度(FN-H)组、HG+FN-H+P2X7R激活剂(ATP)组。24 h后,CCK-8检测H9C2细胞活力变化;TUNEL染色检测细胞焦亡变化;qRT-PCR检测焦亡因子白细胞介素(IL)-18、半胱氨酸蛋白酶(Caspase-1)、NLRP3 mRNA表达水平;ELISA检测上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-6和IL-1β水平;Western blot检测P2X7R、IL-18、Caspase-1、NLRP3蛋白表达水平。结果与对照组相比,HG组细胞活力显著下降(P<0.05),但焦亡率、LDH、TNF-α、IL-6、IL-1β水平、P2X7R、IL-18、Caspase-1、NLRP3蛋白表达显著增加(P<0.05);与HG组相比,HG+FN-L组、HG+FN-M组、HG+FN-H组细胞活力显著增加(P<0.05),但焦亡率、LDH、TNF-α、IL-6、IL-1β水平、P2X7R、IL-18、Caspase-1、NLRP3蛋白表达显著降低(P<0.05);与HG+FN-H组相比,HG+FN-H+ATP组细胞活力显著下降(P<0.05),但焦亡率、LDH、TNF-α、IL-6、IL-1β水平、P2X7R、IL-18、Caspase-1、NLRP3蛋白表达显著增加(P<0.05)。结论FN通过抑制P2X7R/NLRP3通路减轻高糖诱导的心肌细胞的炎症反应与细胞焦亡,缓解细胞损伤。

H240R和MGF505-7R基因缺失非洲猪瘟病毒的构建及其生长特性的初步研究

为探究H240R和MGF505-7R基因对非洲猪瘟病毒(ASFV)复制水平的影响,本研究采用PCR扩增ASFV HLJ/18株H240R基因和MGF505-7R基因阅读框前后各1000 bp的同源臂,分别克隆至pBS-EGFP及pBS-Mcherry载体中,构建同源臂质粒pBS-GFP-H240R和pBS-Mcherry-MGF505-7R,采用PCR和测序鉴定正确。根据CRISPR/Cas9系统sgRNA设计原则设计分别靶向H240R和MGF505-7R基因的小向导RNA(sgRNA),并克隆至pX330载体中,构建重组质粒pX330-sgH240R和pX330-sgMGF505-7R,经测序鉴定正确后,将线性化的同源臂质粒pBS-GFP-H240R与pX330-sgH240R共转染猪肺泡巨噬细胞(PAM),再以ASFV感染,通过观察荧光并采用噬斑筛选纯化,构建H240R基因缺失病毒ASFV-ΔH240R;采用上述类似的方式构建MGF505-7R基因缺失病毒ASFV-Δ7R;在ASFV-ΔH240R的基础上,将线性化的同源臂质粒pBS-Mcherry-MGF505-7R与pX330-sgMGF505-7R共转染PAM后,再以ASFV-ΔH240R感染,通过观察荧光并采用噬斑筛选纯化,构建双基因缺失病毒ASFV-ΔH240R-Δ7R。上述3株基因缺失病毒均采用PCR和测序鉴定正确后,均以MOI 1感染PAM,24 h后于荧光显微镜观察;同时采用红细胞吸附试验测定不同培养时间的病毒载量即半数红细胞吸附量(HAD50),并绘制各病毒的生长曲线。结果显示,ASFV-ΔH240R、ASFV-Δ7R及ASFV-ΔH240R-Δ7R感染的PAM分别出现绿色荧光、红色荧光及红绿色双色荧光,而ASFV-WT感染的细胞无荧光,表明正确构建各基因缺失病毒。生长曲线测定结果显示,ASFV-Δ7R和亲本病毒生长曲线基本一致,ASFV-ΔH240R复制水平显著低于亲本病毒(P<0.001),ASFV-ΔH240R-Δ7R复制水平显著高于ASFV-ΔH240R(P<0.01),但仍低于亲本株。表明MGF505-7R基因与病毒的复制无关,但H240R基因与病毒的复制有关,在ASFV-ΔH240R的基础上缺失MGF505-7R基因则可部分恢复病毒的复制能力。本研究构建了3株基因缺失ASFV并测定其生长曲线,为进一步研究ASFV基因功能提供了数据参考。

基于P2X7R/NLRP3通路探讨枳葛口服液改善大鼠酒精性肝损伤的作用机制

目的探讨枳葛口服液改善大鼠酒精性肝损伤的作用机制。方法60只大鼠随机分为正常组,模型组(白酒),枳葛口服液高、中、低剂量组(10、5、2.5 mL/kg),造模及给药12周后处死大鼠,计算肝脏指数,HE染色观察肝组织病理学改变,Western blot法检测肝组织P2X7R、NLRP3、caspase-1、ASC蛋白表达,免疫组织化学法检测肝组织NLRP3蛋白表达,ELISA法检测血清IL-6、IL-18、TNF-α、NF-κB水平。结果与模型组比较,枳葛口服液高剂量组大鼠肝脏指数降低(P<0.05),大鼠肝组织形态正常,基本无脂肪空泡及炎症细胞浸润,肝组织P2X7R、NLRP3、caspase-1、ASC、NLRP3蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),血清IL-6、IL-18、TNF-α、NF-κB水平降低(P<0.05,P<0.01)。结论枳葛口服液可能通过降低P2X7R/NLRP3通路相关蛋白表达,减轻大鼠炎症因子产生,从而发挥改善酒精性肝损伤的作用。

加味四妙散对急性痛风性关节炎大鼠的疗效及对滑膜组织中嘌呤能离子通道型受体7 NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3表达的影响

目的通过研究加味四妙散干预急性痛风性关节炎大鼠滑膜组织中嘌呤能离子通道型受体7(P2X7R)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)表达的影响,探讨加味四妙散在防治急性痛风性关节炎的疗效及抗炎作用机制。方法选择雄性SD大鼠60只,按照随机数字表法分为6组,分别为空白对照组、模型组、秋水仙碱组、加味四妙散低剂量组、加味四妙散中剂量组、加味四妙散高剂量组,每组10只。空白对照组给予等体积0.9%氯化钠注射液在相应的部位,其余5组复制高尿酸血症并急性痛风性关节炎大鼠模型。加味四妙散组予加味四妙散低、中、高剂量水提液(4.24 g/kg、8.48 g/kg、16.96 g/kg)灌胃、秋水仙碱组予秋水仙碱混悬液(3 mg/kg)灌胃。模型组予等量0.9%氯化钠注射液灌胃。经过4 h、8 h、12 h、24 h和48 h的治疗,对右踝关节的肿胀情况及大鼠步态进行观察。末次给药2 h后,通过腹主动脉采血,采用生化法检测血清尿酸浓度、肝肾功能及血清三磷酸腺苷(ATP)水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清中白细胞介素(IL)-1β、IL-8含量,取受试踝关节滑膜组织,苏木精-伊红染色(HE)观察滑膜组织病理情况,利用蛋白免疫印迹法检测滑膜组织中NLRP3、P2X7R蛋白的表达。结果除空白对照组外,各组大鼠的踝关节肿胀率从造模后4~8 h开始上升,24 h达高峰后下降。在造模48 h后,秋水仙碱组和加味四妙散的低、中、高剂量组的肿胀率减轻,步态逐渐改善(P<0.05),与空白组比较,模型组中滑膜组织表现出关节炎病理改变,显微镜下可见滑膜脱落、坏死,滑膜细胞增生,相较于模型组,加味四妙散的低、中、高剂量组以及秋水仙碱组在血清ATP、IL-1β、血尿酸、IL-8均降低,滑膜组织关节炎病理情况得到改善。滑膜组织P2X7R、NLRP3蛋白表达均降低(P<0.05),与秋水仙碱组相比,加味四妙散对大鼠肝肾功能的损害较小(P<0.05)。结论加味四妙散可以降低高尿酸血症和痛风模型大鼠的血尿酸水平,减少对肝肾功能的损害,抑制急性痛风性关节炎大鼠踝关节滑膜组织中NLRP3、P2X7R蛋白的表达,降低局部组织炎症反应,从而发挥治疗作用。

基于快速扩展随机树的7R机械臂避障达点运动规划

基于单树随机树搜索算法(Single directional rapidly-exploring random tree,single-RRT)和双树随机树搜索算法(Bi-directional rapidly-exploring random tree,bi-RRT),对7R机械臂的避障达点运动规划展开系统研究。基于single-RRT算法进行避障达点运动的数值仿真和实物样机试验。提出一种新的bi-RRT算法,结合末端姿态调整和关节自运动来生成目标树。并利用7R机械臂的解析逆解,生成目标位形。传统的bi-RRT算法只给定了一个目标位形,而新算法中目标点树根是由一群目标位形组成。在给定的障碍物环境中,机器人自动选择某一合适的位形作为目标节点来引导搜索树最有效地生长。通过数值仿真,验证该方法的优越性。利用Matlab和C++的混合编程和OpenGL开发了7R机械臂避障达点运动规划仿真软件。利用该软件,对基于bi-RRT的7R机械臂避障达点运动规划进行虚拟样机的试验研究。

环保型多重掺杂X7R瓷料的多元非线性回归分析

通过引入自制复合氧化物掺杂剂,应用多元非线性回归分析方法,建立了多元非线性回归数学模型y=b0+∑bixi+∑biixi2+∑biiixi3,确立了环保型多重掺杂X7R多层陶瓷电容器(MLCC)瓷料中各种掺杂剂的用量对介电常数及电容量温度变化率(△C／C25℃)的多元非线性回归方程,并进一步解释了部分掺杂剂的改性机理．回归方程表明,介电常数随 Nb、Ce掺杂量的增加而降低,这与当前较为成熟理论“壳-芯”结构模型完全吻合．最后通过回归方程优化瓷料配方,研制了环保型X7R MLCC瓷料系统．在空气中于1140℃下烧成的BaTiO3陶瓷材料的主要性能指标达到: ε298K=2900±50,tgδ≤1．0％,ρ≥1011Ω·cm, △C／C25℃(-55℃^+125℃)≤±15％．

藁本内酯对AngⅡ诱导的A7r5细胞迁移的影响

目的研究藁本内酯抑制AngⅡ诱导的A7r5细胞迁移的有效浓度及时间。方法采用MTT比色法测定藁本内酯对细胞的毒性;将A7r5细胞铺在6孔板并进行培养,待密度达到70%~80%后,用细胞划痕实验和Transwell细胞迁移实验评估藁本内酯对AngⅡ诱导的A7r5细胞迁移能力的变化,不同浓度（0、2.5、5、10μg/m L）的藁本内酯作用于A7r5细胞,于0、6、12、24 h观察细胞迁移情况,拍照记录,计算细胞迁移速度。结果藁本内酯对AngⅡ诱导的A7r5细胞迁移有明显的抑制作用,在0~10μg/m L浓度范围内呈剂量依赖关系,浓度越高其抑制细胞迁移越明显。同一浓度不同作用时间藁本内酯对AngⅡ诱导的A7r5细胞迁移抑制作用差异具有统计学意义（P〈0.05）;同一时间不同浓度的藁本内酯对AngⅡ诱导的A7r5细胞迁移抑制作用差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论藁本内酯能抑制A7r5细胞的迁移,终质量浓度为10μg/m L藁本内酯作用于1μg/m L AngⅡ诱导的A7r5细胞12 h,其对A7r5细胞迁移抑制作用最明显。

夹脊电针调控P2X7R/NLRP3信号通路相关因子改善脊髓损伤大鼠微环境炎症反应的作用机制研究

目的:明确夹脊电针对急性脊髓损伤大鼠P2X7R受体介导的炎症反应的作用以及机制,为夹脊电针的临床应用提供理论依据。方法:120只大鼠,均分为假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、夹脊电针组(EA组)、P2X7干扰组(P2X7R siRNA组)和干扰对照组(Control siRNA组)共5组,每组又分1 d、3 d、7 d和21 d 4个时间点。BBB评分评定大鼠后侧肢体运动功能;免疫组化法检测脊髓组织中Cleaved caspase-1、IL-1β及P2X7R表达变化;免疫荧光双标法检测脊髓组织中P2X7R在小胶质细胞中的表达变化。结果:与Sham组比较,各时间点Model组大鼠BBB评分降低(P<0.05);与Model组大鼠比较,术后3 d、7 d、21 d EA组和P2X7R siRNA组大鼠BBB评分升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与Sham组比较,术后1 d、3 d、7 d和21 d Model组大鼠脊髓组织Cleaved caspase-1、IL-1β和P2X7R增加(P<0.05);与P2X7R siRNA组比较,3 d、7 d和21 d时间点Control siRNA组Cleaved caspase-1、IL-1β及P2X7R表达仍然较高,差异有统计学意义(P<0.05);与Model组比较,造模后3 d、7 d和21 d 3个时间点EA组脊髓组织Cleaved caspase-1明显降低(P<0.05),造模后7 d和21 d两个时间点EA组脊髓组织IL-1β、P2X7R明显降低(P<0.05);与Model组比较,造模后3 d、7 d和21 d 3个时间点P2X7R siRNA组脊髓组织Cleaved caspase-1、IL-1β和P2X7R明显降低(P<0.05)。P2X7R同OX42(小胶质细胞标志物)存在共定位。结论:夹脊电针可以通过干扰脊髓损伤大鼠脊髓组织中Cleaved caspase-1、IL-1β和P2X7R的表达,抑制炎性反应,从而促进肢体运动功能恢复。

厚膜EMI滤波器用X7R介质瓷料的研究

利用先驱体NiNb2O6与MnNb2O6掺杂法改性BaTiO3系统。由于2种先驱体可以有效地起到展宽与移峰效应,使系统居里峰在室温附近取得最大值,在1290℃烧结时介电常数达到5000以上,容量变化率ΔC/C≤±15%;在系统中加入适量助熔剂可以实现中温烧结(1150℃),介电常数大于3600,容量变化率ΔC/C≤±12%,满足X7R特性要求,可用于厚膜EMI滤波介质瓷料的制备。

Kinematics and dynamics analysis of a 3-7R parallel decoupling mechanism

One kind of movable-pair analysis method is adopted to analyze the configuration of a 3-7R （revolute-pair） parallel decoupling mechanism, and the mechanism＇s characteristics are summarized. The mechanism has three orthogonal distributional branch-chains, and all movable pairs are rotational joints. The movable platform of the mechanism has x, y, z translational decoupling directions. Furthermore, in order to verify the mechanism＇s decoupling characteristics, the mechanism＇s kinematics analysis is solved, and the mechanism＇s direct/inverse kinematics model, input/output velocities and accelerations are deduced, which confirm its decoupling movement characteristics. Finally, one kind of mechanism link decomposed-integrated approach is adopted, and the mechanism＇s dynamics model is completed with the Lagrange method, which also proves its decoupling force characteristics. All of these works provide significant theory for the further study of the mechanism＇s control strategy, design, path planning etc.

同型半胱氨酸对A_7r_5细胞增殖及MMP-2表达的影响

目的：观察同型半胱氨酸（Hcy）对大鼠胸主动脉平滑肌细胞（A7r5细胞）增殖及基质金属蛋白酶2（MMP-2）表达的影响。方法：分别用0、0.25、0.5、1 mmol/L Hcy作用A7r5细胞48 h后,细胞计数及MTT法检测A7r5细胞的增殖情况,半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测MMP-2 mRNA的表达,免疫印迹法（Western blot）检测MMP-2蛋白的表达。结果：随着Hcy浓度的增加,A7r5细胞数目和吸光度（OD）值呈剂量依赖性增加,其中0.25、0.5、1 mmol/L Hcy组与对照组差异均有统计学意义（P〈0.05-P〈0.01）。MMP-2 mRNA的表达随着Hcy浓度的增加而增加,呈剂量依赖性,各实验组与对照组差异均有统计学意义（P〈0.05）。Hcy呈剂量依赖性上调A7r5细胞MMP-2蛋白的表达,各实验组与对照组差异均有统计学意义（P〈0.05-P〈0.01）。结论：Hcy在一定范围内呈剂量依赖性促进A7r5细胞增殖,可在蛋白及mRNA水平使A7r5细胞MMP-2表达呈剂量依赖性增加,这一效应可能是Hcy致动脉粥样硬化的分子机制之一。

7R机械臂的研制及用于实践教学的探索

近年来,以机器人为研究对象开展实践教学活动备受关注。针对当前高校人才培养目标及新形势下的机器人技术人才培养需求,开发了一种具有7个回转自由度的冗余关节式教学机器人。通过分析其工作原理和传动特点,详细设计了该7R教学机器人的机械结构和控制系统。该7R教学机器人可以带动末端执行器按照预设的轨迹、位置和姿态要求完成相应的动作,如码垛、装配、避障等操作。在此基础上,结合现代机器人实践教学特点,并考虑到面向不同层次、不同对象的实践教学内容及教学模式,从认知训练、基础操作训练以及综合与创新训练等方面,规划了一系列的实践教学项目,有利于学生开拓视野,培养技能,提高学生自主学习、综合素质及创新能力。

IL-10对AngⅡ诱导的A7r5细胞增殖的抑制作用

目的探讨IL-10对A7r5大鼠胸大动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用及其与p53、bcl-2的变化关系。方法用MTT法测定细胞抑制率;倒置显微镜观察细胞形态;细胞免疫组化法和Western bolt观察细胞内p53、bcl-2基因的表达。结果 IL-10对AngⅡ诱导的A7r5平滑肌细胞增殖有明显抑制作用,但不呈剂量依赖关系;可逆转p53、bcl-2的表达。结论 IL-10对AngⅡ诱导的A7r5平滑肌细胞增殖有明显防治作用,与细胞凋亡基因p53、bcl-2相关。

X7R特性瓷粉水基流延成型制备镍电极多层陶瓷电容器的研究

以聚丙烯酸酯乳液为粘合剂,采用水基流延成型制备镍电极多层陶瓷电容器(Ni-MLCC)。研究了水性粘合剂适合X7R瓷粉流延成型的粘度特性和热稳定性,用扫描电子显微镜(SEM)分析了所得膜片和电容器的微观结构,并对所制备电容器的电性能进行了测试。结果表明:水性聚丙烯酸酯粘合剂具有剪切稀薄的粘度特性,热分解温度低,能够满足流延成型的需求。水基流延成型制备膜片表面光滑,无缺陷,瓷粉在粘合剂中分散均匀。所制备Ni-MLCC的电极连续性好。

X7R型复相陶瓷的制备及介电性能研究

用两相混合烧结法制备了 PZN基和 BT基复合的复相陶瓷。研究了起始两相的比例以及粉末的粒度和烧成条件对复相陶瓷介电性能的影响。通过优化工艺条件 ,获得了满足 X7R(ΔC/ C<± 15 % ,- 5 5～ 12 5°C)

颗粒包覆法制备X7R特性PZN基复相陶瓷

采用溶胶-凝胶颗粒包覆技术在Ph（Zn1／3Nb3／3）O3基因溶体颗粒表面形成一层低熔硼硅包覆物，以包覆后的两种固溶体为高低温组元制备复相陶瓷．结果表明；颗粒包覆物可显著降低复相陶瓷的烧结温度，并有效抑制两相固溶反应，获得了低烧结温度、高介电常数。

骨髓中IL-7、IL-7R及EBF表达与运动性免疫抑制

IL-7在早期B细胞的增殖中起到了关键的促进作用,EBF在淋巴系干细胞向B系细胞分化中起着决定性的系谱特异定型作用。IL-7、IL-7R通过维持EBF表达,参与了B细胞增殖转录因子网络的形成,这与早期B细胞分化调控密切相关。运动中GC的升高会加快早期发育中B细胞的凋亡,研究B细胞的发育及其调控机制对寻求更有效的运动免疫调理措施具有重要意义。

绵羊痘病毒古浪县分离株H7R基因的克隆及其原核表达

根据已发表的山羊痘福州株全基因组,以其H7R基因进行引物设计,从古浪株中提取绵羊痘全基因组首次克隆H7R基因。将目的片段插入p MD19-simple载体后使用Bam HI+Not I双酶切构建p ET-28a-H7R原核表达载体,经测序验证构建载体正确。将重组质粒转化到Rosetta感受态通过IPTG诱导,SDS-PAGE检测,结果表明:在17 ku处出现明显条带,经过几次条件优化,H7R在大肠杆菌中主要以包涵体的形式表达。这为后续研究羊痘病毒的入侵及新型疫苗的研究奠定了基础。