SEA为载体蛋白的A/C群脑膜炎奈瑟菌结合物初步免疫效果评价

目的对以金黄色葡萄球菌肠毒素A(staphylococcal enterotoxin A,SEA)为载体蛋白的A/C群脑膜炎奈瑟菌结合物的免疫效果进行初步评价。方法采用1-氰基-4-二甲氨基-砒啶四氟硼酸(1-cyano-dimethylamino pyridiniumtetrafluoroborate,CDAP)活化法,将SEA、破伤风类毒素(tetanus toxin,TT)分别与A群脑膜炎奈瑟菌荚膜多糖(group A N.meningitidis capsular polysaccharide,GAMP)、C群脑膜炎奈瑟菌荚膜多糖(group C N.meningitidis cap-sular polysaccharide,GCMP)结合制备结合物;将结合物分别免疫BALB/c小鼠,腹部皮下免疫3次,于第1针免后第9天、第19天、第27天眼眶采血,分离血清备用;检测体液免疫及细胞免疫反应水平。结果 SEA与GAMP结合后能增强抗-GAMP Ig G抗体水平,第3次免后GAMP-SEA组多糖抗体水平达到1∶12 800,高于GAMP组1∶400,但GCMP-SEA组结果不理想。SEA与GAMP结合后均能激发细胞免疫反应,IFN-γ和IL-4的SFC与GAMP组比较均升高,且IFN-γ高于IL-4。SEA与GAMP、GCMP结合后Th1/Th2细胞亚群比值分别达到23.48和22.19,高于GAMP组(14.09)和GCMP组(16.73),差异有统计学意义(P<0.05),提示SEA与GAMP、GCMP结合后可激发细胞免疫。结论 SEA与GAMP、GCMP结合后既能增强GAMP、GCMP的免疫原性,提高体液免疫反应,又能激发细胞免疫反应,提示SEA具备作为A/C群脑膜炎奈瑟菌结合疫苗载体蛋白的可行性。

2017-2019年济宁市健康人群脑膜炎奈瑟菌流行病学和基因组学分析

目的了解济宁市健康人群脑膜炎奈瑟菌流行情况及其基因组特征。方法采集2017-2019年流行前期、流行期、流行后期不同年龄组健康人群的咽拭子标本,进行菌株分离培养、生化试验、血清凝集试验,分离到的菌株进行基因测序,利用PubMLST数据库进行多位点序列分型(MLST)、核心基因组多位点序列分型(cgMLST)、疫苗抗原分析,利用IQ-TREE和Splits Tree构建系统发育树。结果2017-2019年共检测1086份健康人群咽拭子标本,分离出21株脑膜炎奈瑟菌,健康人群平均带菌率为1.93%。其中流行前期带菌率为0.93%,流行期带菌率为2.30%,流行后期带菌率为1.83%。17~19岁人群带菌率较高,3~5岁儿童及≥20岁成人中未检出阳性菌株。检出的21株菌株中,B群15株,C群1株,不可分群5株。通过基因组分析,主要的ST型为ST-12301和ST-14655,ST-17464、ST-17465、ST-17466、ST-17467和ST-17468为本研究新发现的ST型。进行基因测序的19株菌株中,有8株属于4821克隆群,其余菌株不属于确定的克隆群,有3株血清型为不可分群的菌株但其基因型为B型。结论济宁市2017-2019年健康人群中脑膜炎奈瑟菌血清群以B群为主。本研究新发现5种MLST序列型,提示近几年菌株基因组存在微进化。MLST序列型的变迁有可能导致流行模式发生改变,有必要开展持续监测。17~20岁人群带菌率高,应密切关注菌株在人群中的扩散传播,以防引起流脑病例。

1例Y群脑膜炎奈瑟菌脑膜炎患儿皮肤坏疽的护理

目的:总结1例Y群脑膜炎奈瑟菌脑膜炎患儿皮肤及皮下组织坏疽护理经验。方法:根据伤口的不同恢复周期选择不同的护理方法,结合多学科的治疗和护理优势为患儿选择伤口护理技术、负压及植皮治疗,对患儿实行换药时预防性镇痛干预,并积极给予1年的延续性照护等。结果:住院时间2月余,双下肢伤口瘢痕愈合出院。随访1年,该患儿经过多次激光、瘢痕松解等康复训练,基本能够正常行走。结论:针对Y群脑膜炎奈瑟菌脑膜炎患儿的皮肤护理,利用多学科的治疗和护理,积极给予疼痛干预及康复指导,结合长期有效的延续性照护,对该患儿的预后起重要作用。

湖南省首起由C群脑膜炎奈瑟菌引起流脑局部流行的调查

目的了解湖南省首起由C群脑膜炎奈瑟菌引起的流脑局部流行疫情特征。方法依据《全国流行性脑脊髓膜炎防治指南(试行)》和GB16884—1997进行调查和实验室检测。结果从患者的脑脊液中分离到奈瑟菌。经湖南省CDC实验室复核鉴定为C群脑膜炎球菌。结论此次疫情为湖南省首起由C群脑膜炎奈瑟菌引起的流脑疫情。隔离治疗病人、在疫区易感人群中紧急接种流脑(A+C)疫苗是控制疫情扩散的有效方法。

从流脑病人血液检出C群脑膜炎奈瑟菌

2002年1-3月份,广西壮族自治区来宾县良塘乡发生流脑流行,共发现流脑病人15例,死亡3例.从暴发点患者血液中分离出一株病原菌.

PCR结合酶切-序列比对法鉴定B群脑膜炎奈瑟菌菌株

目的用PCR结合酶切-序列比对法对B群脑膜炎奈瑟菌菌株进行鉴定。方法用玻片凝集法对不同来源的15株B群脑膜炎奈瑟菌菌株进行初步检定,再用PCR结合酶切-序列比对法对上述15株菌株进行进一步鉴定,即用PCR结合酶切法扩增菌株的唾液酸转移酶sia D基因并对PCR产物进行酶切后,用BLAST软件将PCR产物测序结果与Gene Bank中原始sia D序列比对。结果 15株菌株玻片凝集结果均为阳性;15株菌株的PCR产物片段大小均为460 bp;TaqⅠ酶切后,13株菌株的酶切产物片段大小仍为460 bp,其PCR产物测序比对结果与B群脑膜炎奈瑟菌原始sia D序列同源性均达到99%;其余2株酶切产物片段大小约200 bp,与C群脑膜炎奈瑟菌sia D原始基因序列同源性分别为98%和99%。结论 15株菌株经PCR结合酶切-序列比对法鉴定,13株为B群脑膜炎奈瑟菌菌株,2株为C群脑膜炎奈瑟菌菌株;该方法可准确鉴定B群脑膜炎奈瑟菌菌株。

健康人群流行性脑脊髓膜炎流行前期和流行期A、C群脑膜炎奈瑟菌抗体水平研究

目的掌握合肥市健康人群A、C群脑膜炎奈瑟菌(Nm)抗体水平现状。方法应用重复横断面监测研究模式,以合肥市辖3县4区划分为7个研究地区,在2005-2006,2006-2007年流行性脑脊髓膜炎(流脑)流行季节流行前期和流行期,采用整群重复抽样方法,应用酶联免疫吸附试验,对健康人群A、C群Nm抗体水平进行调查。结果连续监测健康人群2次流行前期和流行期,实际抽样范围672～690人。2次流行前期和流行期之间A群无差异,C群差异有统计学意义;2次流行期之间A、C群差异均有统计学意义。0～5岁和≥21岁组相对较低,11～15岁、16～20岁、≥21岁组流行期明显上升。同期不同地区之间差异均有统计学意义,肥西县、长丰县呈现明显低抗体水平。结论健康人群中存在一定A、C群Nm抗体水平,结合现状应确保儿童和青少年疫苗有效接种率,加强成人流脑预防控制工作。

河南省首次从病人脑脊液分离出C群脑膜炎奈瑟氏菌

流行性脑脊髓膜炎的病原菌是脑膜炎奈瑟氏菌,现可分成13个血清群,我省自有文献记载以来,流行菌群以A群为主,其B群病例偶有发生,通过多年对流脑病原的监测,于1991年2月23日在郑州铁路中心医院发现一例流脑患者,经细菌学鉴定证实为C群菌引起发病,C群病人的出现在我省还是首次,现将鉴定情况报告如下: 材料和方法一、试验材料: 1、诊断血清:武汉、兰州生物制品研究所和北京生物制品检定所供给。 2。

中山地区正常人群鼻咽部脑膜炎奈瑟菌的带菌率及血清分型调查

目的 :获取本地区正常人群鼻咽部脑膜炎奈瑟菌携带情况 ,为政府制定预防和控制流行性脑脊髓膜炎暴发流行提供科学决策依据。方法 :随机抽检正常人群 (按人群防疫监测共分四组 :2～ 4岁、6～ 8岁、9～ 12岁、2 5～ 39岁组 )鼻咽拭子进行培养、分离、鉴定及血清分型 ,按《全国临床检验操作规程》进行。结果 :4 0 3人共检出 2 2株脑膜炎奈瑟菌 ,总检出率为 5 .4 6 %。男性检出 9株 ,检出率 4 .4 6 % ,女性检出 13株 ,检出率为 6 .4 7%。其血清分型为 A群 3株 ,B群 14株 ,C群 2株 ,1892型 1株 ,未定型 2株。 2～ 4岁组检出 6株 ,检出率 8.5 7% (6 /70 ) ;6～ 8岁组检出 4株 ,检出率 7.4 1% (4/5 4 ) ;9～ 12岁组检出 6株 ,检出率8.0 0 % (6 /75 ) ;2 5～ 39岁组检出 6株 ,检出率 2 .94 % (6 /2 0 4 )。男女性别之间及少年不同组别正常人群鼻咽部脑膜炎奈菌携带率经 X2 检验差异均无显著性 ,而少年组与成人组比较相差有显著性意义。结论 :调查显示 ,本地区正常人群鼻咽部脑膜炎奈瑟菌携带率为 5 .4 6 % ,处于较低水平。血清分型以 B群为主 ,本地为非流行株。不同性别正常人群鼻咽部脑膜炎奈瑟菌的携带率无差别 ,儿童携带率较成人高。调查结果显示本地区目前不具备流行特点 ,A群脑膜炎奈瑟菌未造成本地流行性?

A群脑膜炎奈瑟菌多糖IgG抗体检测试剂研制

目的研制检测A群脑膜炎奈瑟菌荚膜多糖IgG抗体的酶联免疫吸附试验（ELISA）检测试剂。方法以CTAB、酚、乙醇从A群脑膜炎奈瑟菌培养上清中提取荚膜多糖（MenA PS）,将多糖与卵清蛋白（EA）以还原氨基法偶联,并以Sepharose CL-4B纯化。优化反应条件,建立以偶联物MenA PS-EA为包被抗原检测A群脑膜炎奈瑟菌多糖IgG抗体的间接ELISA法,并与血清杀菌力试验（SBA）比较。结果高效液相色谱检测MenA PS-EA结合物纯度为81.50%。试剂具有良好重复性（变异系数CV=4.26%～5.30%）;37℃放置7d、4℃放置12个月,试剂的灵敏度不变,具有优良的稳定性;分别用该试剂和SBA法检测192份血清,试剂相对于血清杀菌力试验的灵敏度为96.91%,特异度为90.00%,一致性为95.83%,统计学分析表明,2种检测方法之间差异无统计学意义。结论以纯化MenA PS-EA作为包被抗原建立的A群脑膜炎奈瑟菌多糖特异性IgG抗体间接ELISA检测试剂具有可行性,为进一步研究及开发细菌多糖类抗体诊断试剂提供了可借鉴的方法。

脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白NMB0315作为B群流脑疫苗候选抗原的免疫效果

目的研究原核重组表达的B群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白0315(rNMB0315)在诱导小鼠产生特异性免疫应答中的作用、免疫血清抗体体外杀菌活性和重组蛋白的免疫保护效果,初步评价rNMB0315作为B群流脑疫苗候选抗原的潜力。方法将构建的原核表达载体p ET30a-NMB0315转化大肠杆菌BL21表达重组蛋白,纯化鉴定后的重组蛋白免疫雌性BALB/c小鼠,检测体液免疫和细胞免疫水平;测定血清抗体在补体介导下的体外杀菌活性,观察rNMB0315蛋白疫苗对实验小鼠的免疫保护效果。结果 rNMB0315具有良好的免疫原性,能诱导产生较高水平的体液免疫应答:包括血清特异性IgG、IgG1、IgG2a、IgG3、IgG2b和生殖道黏膜特异性分泌型IgA(s IgA),免疫后第6周抗体效价分别为1∶150 000、1∶85 000、1∶60 000、1∶35 000、1∶30 000和1∶30 000;也能激发较高水平的细胞免疫应答,免疫小鼠脾淋巴细胞增殖反应的刺激指数(SI)值明显高于PBS、Freund佐剂对照组。在免疫的2、4、6周,血清IgG2a/IgG1比值均小于1,提示rNMB0315疫苗以诱导Th2细胞性体液免疫应答为主。rNMB0315疫苗免疫血清在补体介导下的体外杀菌抗体效价为1∶128;72 h内,对实验小鼠的免疫保护率为90%。结论原核表达的rNMB0315具有良好的免疫活性和免疫保护效果,NMB0315外膜蛋白具有作为预防B群流脑蛋白疫苗候选抗原的潜力。

北京市昌平区2016年健康人群脑膜炎奈瑟菌携带状况、血清群及药物敏感性

目的了解2016年北京市昌平区健康人群中脑膜炎奈瑟菌的携带率和血清群分布,以及对抗生素的敏感性。方法参照《流行性脑脑膜炎奈瑟菌诊断标准》WS 295—2008进行菌株分离及鉴定,用PCR法对菌株进行血清分群,用K-B纸片法对菌株进行抗生素药物敏感性实验,对分离的其他口腔细菌进行16SrRNA测序鉴定。结果收集2016年昌平区2016年9—10月健康人群咽拭子共计252份,分离得到11株(4.37%)脑膜炎奈瑟菌(Nm):属于4个血清群,依次为B群(6株),W135群(3株),C群(1株),X群(1株);抗生素药敏试验结果表明,对头孢噻肟,头孢曲松,美罗培南,利福平完全敏感(100.00%),对环丙沙星,复方新诺明完全耐药(100.00%);27.27%的菌株对四环素耐药,54.55%的菌株对头孢西丁耐药,36.36%的菌株对阿奇霉素不敏感。结论昌平区健康人群携带脑膜炎奈瑟菌以B群为主,对头孢类,碳青霉烯类,安莎霉素类药物敏感,对氟喹诺酮类,磺胺类耐药,并出现对大环内酯类药物不敏感菌株。

薄膜过滤法在A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗无菌检查中的应用

采用薄膜过滤法对A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗的无菌检查方法进行验证。结果表明,薄膜过滤法具有取样量大,操作简便,污染几率小,能确保检验结果的准确性、有效性和重现性,该方法适用于A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗的无菌检查方法。

广东省近两年流行性脑膜炎奈瑟氏菌菌群分布及药敏性结果分析

目的了解并分析流行性脑膜炎奈瑟氏菌菌群分布及药敏性。方法无菌收集并分离出临床诊断为流行性脑膜炎病人和带菌者的脑脊液(CSF),将部分CSF接种到巧克力琼脂平板及血琼脂平板中,放置5%CO2孵箱中35℃孵育20～24 h。对培养出来的细菌进行鉴定。对已鉴定为脑膜炎奈瑟氏菌用MIC法,琼脂稀释法培养基为M-H琼脂补充5%脱纤维羊血,使用11种抗生素进行药敏检测。结果共分离和检出脑膜炎奈瑟氏菌18株,其中A群Nm为0株,B群Nm为9株,C群Nm为6株,Nm未定菌为2株,W135 Nm菌为1株。18株脑膜炎奈瑟氏菌抗生素敏感率较高,其中头孢噻肟(CTX30)、头孢曲松(CRO30)、美罗培南(MEM10)、阿奇霉素(AZM15)、米诺环素(MH30)、氯霉素(C30)、利福平(RD5)和氨苄西林(AM)8种药物敏感率均达到100%。结论广东省地区流行性脑膜炎以奈瑟氏菌B群和C群为主,应引起重视,其抗生素总体药物敏感率较高。

应用单克隆抗体和免疫斑点试验对B群脑膜炎奈瑟氏菌脂寡糖分型

本研究使用４种抗Ｂ群脑膜炎奈瑟氏菌（Ｎｍ）脂寡糖的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）和免疫斑点试验（ｄｏｔ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ）首次对我国不同年代和地区收集的９１株Ｂ群Ｎｍ进行了脂寡糖（Ｌｉｐｏｏｌｉ－ｇｏ－ｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，ＬＯＳ）分型，总分型率为９０．１１％，其中Ｌ３．７．９复合型最多，占６３．７４％，其次为Ｌ１．３．７．９复合型，占１２．０９％。该结果为确定我国引起流脑发病的Ｂ群Ｎｍ主要ＬＯＳ型提供了依据，为筛选本国的Ｂ群Ｎｍ菌苗菌株及其作为菌苗成分的ＬＯＳ抗原奠定了基础。