miR-218-5p靶向PDE7A调节人非小细胞肺癌A549细胞的糖酵解

目的:探究miR-218-5p靶向磷酸二酯酶7A(PDE7A)调节人非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞糖酵解过程的机制。方法:常规培养A549细胞,用Lipo3000将miR-218-5pmimic、mimic-NC、PDE7A过表达质粒(PDE7A-oe)和PDE7A对照质粒(PDE7A-NC)转染A549细胞,记为miR-218-5pmimic组、mimic-NC组、PDE7A-oe组和PDE7A-NC组。qPCR法验证转染效率,WB法检测糖酵解关键酶蛋白的表达,葡萄糖测定法和乳酸生成测定法检测各转染组A549细胞中2脱氧葡萄糖和乳酸含量,双萤光素酶报告基因实验验证miR-218-5p与PDE7A靶向结合关系,用TCGA数据库数据分析PDE7AmRNA在肺癌组织中的表达水平。结果:在A549细胞中成功地过表达了miR-218-5p(P<0.01)。过表达miR-218-5p均能显著抑制A549细胞中PDE7A、HK2、PKM2蛋白的表达(均P<0.01)、葡萄糖摄取量和乳酸生成量(均P<0.01)。过表达PDE7A均可显著促进A549细胞中PDE7A、HK2、PKM2蛋白的表达(均P<0.01),以及葡萄糖摄取量和乳酸生成量(均P<0.01)。A549细胞中miR-218-5p可与PDE7AmRNA的3´-UTR直接结合。数据库数据分析结果显示,PDE7AmRNA在肺鳞状细胞癌组织中呈高表达(P<0.01)。结论:miR-218-5p靶向PDE7A调控A549细胞中HK2和PKM2的表达水平,进而抑制糖酵解过程,miR-218-5p/PDE7A可能是NSCLC临床诊断和治疗的潜在靶点。

MRPL21调控YAP1/TAZ通路对非小细胞肺癌A549细胞活性的影响

目的探究MRPL21与YAP1/TAZ通路对非小细胞肺癌A549细胞活性的影响,以期为非小细胞肺癌的治疗提供新思路。方法非小细胞肺癌组织及癌旁的组织取自2021年6月~2023年9月于安徽医科大学第一附属医院接受手术治疗的9例非小细胞肺癌患者,通过免疫组化实验方法分析非小细胞肺癌组织中MRPL21的表达水平。将非小细胞肺癌A549细胞分为随机分为3组:siNC组、siMRPL21组以及BPDMA组。CCK-8实验与Hoechst染色检测A549细胞增殖情况;Transwell实验分析A549细胞的侵袭能力;TUNEL染色实验检测A549细胞的凋亡情况;蛋白质印迹实验检测A549细胞中MRPL21、YAP1、TAZ蛋白的表达水平。结果免疫组化实验结果显示,与癌旁的组织比较,非小细胞肺癌组织中的MRPL21表达上调(P<0.05)。与siNC组的A549细胞比较,CCK-8实验与Hoechst染色实验结果显示,siMRPL21组以及BPD-MA组的A549细胞增殖能力减弱(P<0.05)。Transwell实验结果显示,siMRPL21组以及BPD-MA组的A549细胞侵袭能力减弱(P<0.05)。TUNEL染色实验结果显示,siMRPL21组以及BPD-MA组的A549细胞凋亡率增加(P<0.05)。蛋白质印迹实验结果显示,siMRPL21组以及BPD-MA组的A549细胞的YAP1、TAZ蛋白水平表达均明显降低(P<0.05)。结论MRPL21在非小细胞肺癌组织中高表达;抑制MRPL21的表达后,A549细胞的增殖活性、侵袭能力减弱,细胞凋亡率增加,并且这一结果与调控YAP1/TAZ信号通路相关,MRPL21有望成为治疗非小细胞肺癌的新靶点。

LRRC15影响A549细胞自噬的作用研究

特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)是一种致病原因不明、进行性、慢性不可逆的间质性肺疾病。为探讨富含亮氨酸重复蛋白15(leucine-rich repeat-containing protein 15,LRRC15)在IPF的作用及调节机制,本研究构建了博来霉素(bleomycin,BLM)诱导的小鼠肺纤维化和A549细胞损伤模型,检测了LRRC15的表达变化。转染siLRRC15后分别采用MTT、GFP-RFP-LC3双荧光标记系统和免疫印迹等方法检测了细胞活性和自噬的变化。结果表明:BLM处理后,小鼠肺组织和A549细胞中LRRC15表达显著上调;将设计和合成的siLRRC15转入A549细胞,LRRC15的表达极显著降低,可以部分恢复BLM引起的细胞损伤;BLM处理A549细胞后,LC3-Ⅱ和P62蛋白呈现上升的趋势;GFP-RFP-LC3双荧光标记检测发现,BLM处理后自噬体数量明显增多;进一步用siLRRC15处理A549细胞后发现,自噬关键蛋白LC3-Ⅱ、ATG5、ATG7的表达增加,P62蛋白表达下调,自噬流的强度增加。以上研究结果说明LRRC15是IPF中上皮细胞损伤的指示剂,可能通过调节自噬参与纤维化过程中的调节,本研究为进一步阐明IPF的机制提供了必要的理论依据。

芝麻素对长春瑞滨诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的影响

[目的]探讨芝麻素对长春瑞滨诱导人肺腺癌A549细胞株凋亡的影响.[方法]选择人肺腺癌A549细胞株进行体外传代培养,制备成浓度为1.0×105个/mL的细胞悬浮液并接种于96孔板中.实验设空白组(加入DMEM培养液)、对照组(加入DMEM培养液及人肺腺癌A549细胞株)、芝麻素组(芝麻素10、20、30、40、50、60、70、80、90、100μg/mL)、长春瑞滨组(长春瑞滨5、10、15、20、25、30、35μg/mL)及联合用药组(加入IC50浓度的芝麻素和长春瑞滨,IC50为后续联合用药组实验药物浓度).空白组加入160μL的DMEM培养液,对照组及实验组各加入160μL已制备好的人肺腺癌A549细胞株悬浮液,待细胞株贴壁后,空白组、对照组及实验组分别加入20μL的生理盐水和20μL各相关浓度的药物.采用MTT法检测细胞增殖能力,利用倒置显微镜及HE染色法观察细胞形态学变化,采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况.[结果]在10~100μg/mL质量浓度范围内,低质量浓度的芝麻素具有抑制A549细胞株增殖的作用,IC50质量浓度为40μg/mL;在5~35μg/mL质量浓度范围内,长春瑞滨具有抑制A549细胞株增殖的作用,且随着药物质量浓度升高细胞抑制率升高,IC50质量浓度为20μg/mL;芝麻素与长春瑞滨联合用药对A549细胞株的抑制率明显高于单药用药(P<0.01).倒置显微镜及HE染色法观察结果显示,与对照组比较,芝麻素(40μg/mL)、长春瑞滨(20μg/mL)及联合用药(芝麻素40μg/mL+长春瑞滨20μg/mL)作用于A549细胞株48 h后贴壁细胞数量均明显减少,细胞间连接疏松,贴壁能力减弱,部分细胞体积变小、变圆或呈不规则形,核染色质凝集,细胞膜起泡形成凋亡小体,失去原有肿瘤细胞多角形或梭形形态,且联合用药组较单药组上述变化更为明显.流式细胞仪检测结果显示,药物作用48 h后,芝麻素组(40μg/mL)、长春瑞滨组(20μg/mL)及联合用药组(芝麻素40μg/mL+长春瑞滨20μg/mL)细胞凋亡率均明显高于对照组(P<0.01),且联合用药组早期凋亡率明显高于单独用药组(P<0.01).[结论]芝麻素可增强长春瑞滨诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的作用.

基于Hedgehog通路探讨理肺消积丸对NSCLC A549细胞周期、增殖和迁移的影响

目的探讨理肺消积丸对A549细胞的影响作用及对Hedgehog通路的调控作用。方法采用MTT实验筛选理肺消积丸含药血清对A549细胞最佳干预浓度后,将细胞分为6组:对照组、理肺消积含药血清组、Hedgehog通路抑制剂组(Vismodegib组)、顺铂组、理肺消积含药血清+Vismodegib组、理肺消积含药血清+顺铂组。不同干预后,分别采用CCK-8实验检测细胞增殖能力,采用克隆形成实验观察细胞克隆形成能力,采用Transwell实验观察A549细胞迁移能力,采用流式细胞术观察细胞周期比例的变化,采用qRT-PCR和Western blot技术检测Hedgehog通路中Gli1、Ptch1、Smo和CyclinD1 mRNA和蛋白表达的变化。结果浓度为10%的理肺消积丸含药血清能显著抑制A549细胞增殖(P<0.05),降低细胞克隆形成和迁移能力(P<0.05),阻滞细胞周期从G1期到S期转变,同时抑制Gli1、Ptch1、Smo和CyclinD1 mRNA和蛋白表达(P<0.05),且与Vismodegib有良好的协同作用。结论理肺消积丸可显著抑制A549增殖和迁移能力,作用机制可能与其调控Hedgehog通路阻滞细胞周期有关。

竹红菌乙素光诱导A549细胞凋亡的机制研究

竹红菌乙素(HB)在特定波长照射下可有效杀伤多种癌细胞,但其光诱导细胞死亡的机制尚未完全阐明。为了探索竹红菌乙素(HB)光诱导人肺腺癌细胞A549细胞死亡的机制,本研究运用激光扫描共聚焦显微镜、MTT染色法、流式细胞技术及蛋白质印迹(Western blot)等技术,针对HB在A549中细胞摄取、亚细胞定位、细胞内活性氧的生成、细胞毒性以及细胞死亡机制,进行了详细评估。研究结果显示,HB能够选择性地定位在线粒体,对A549细胞具有较低的暗毒性和较高的光毒性。HB能够光诱导线粒体损伤、线粒体膜电位改变、线粒体内细胞色素c释放和半胱天冬酶的激活,最终引发A549细胞凋亡。由此可见,天然产物HB作为一种靶向线粒体的潜在光敏剂,具有优异的抗肿瘤活性,可通过线粒体介导的内源途径信号通路诱导细胞凋亡。通过该研究,为HB光动力治疗非小细胞肺癌的临床应用提供参考和理论依据。

黏蛋白13在肺腺癌组织中的表达及其对A549细胞恶性生物学行为的影响与可能的机制

目的:探讨黏蛋白13(MUC13)在肺腺癌组织中的表达及其对A549细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及EMT的影响与可能的机制。方法:通过癌症基因组图谱(TCGA)和高通量基因表达(GEO)数据库分析MUC13在肺腺癌组织与正常肺组织、癌旁组织中的差异表达。qPCR法和WB法检测人肺腺癌细胞NCI-H1395、NCI-H1975、H1299、A549和人正常肺上皮细胞BEAS-2B中MUC13 mRNA和蛋白的表达水平。利用si RNA技术敲低A549细胞中MUC13表达,实验分为si-MUC13组、NC组和si-MUC13+IGF-1组。通过克隆形成实验、流式细胞术和Transwell实验分别检测敲低MUC13对A549细胞增殖、细胞周期、凋亡、迁移和侵袭的影响,WB法检测敲低MUC13对A549细胞上皮钙黏素(E-cadherin)、神经钙黏素(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、EGFR、p-EGFR、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT等蛋白表达的影响。结果:MUC13 mRNA和蛋白在肺腺癌组织和细胞中均呈高表达(均P<0.01),选取表达水平较高的A549细胞进行后续实验。敲低MUC13后,A549细胞的增殖能力显著降低,G0/G1期的细胞数量显著增多、G2/M期及S期的细胞数量显著减少,细胞凋亡率显著升高,细胞迁移及侵袭能力均显著降低(均P<0.01);A549细胞中E-cadherin表达显著上调,N-cadherin、vimentin表达显著下调,p-EGFR/EGFR、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比值均显著降低(均P<0.01);再加入IGF-1处理后,A549细胞中p-EGFR/EGFR、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比值均显著升高(均P<0.01)。结论:MUC13在肺腺癌组织和细胞中均呈高表达,其可能通过激活EGFR/PI3K/AKT信号通路促进A549细胞增殖、迁移、侵袭和EMT。

miR-33a-5p靶基因分析验证及对人肺腺癌A549细胞增殖的影响

目的研究miR-33a-5p过表达对人肺腺癌A549细胞增殖的影响及探索其可能的机制。方法在A549细胞中瞬时转染miR-33a-5p mimics,CCK-8和BrdU实验检测细胞增殖能力,转录组测序(RNA-seq)检测mRNA表达水平,targetscan(8.0)、miRDB(2020)、miRWalk(release_2022_01)和ENCORI(starbase,v2.0)联合筛选miR-33a-5p的潜在靶基因,并与RNA-seq的下调表达的基因取交集,RT-qPCR进行基因表达验证。结果RT-qPCR结果显示,miR-33a-5p在A549细胞中高表达(P<0.05);CCK-8实验和BrdU实验结果显示,细胞增殖能力受到抑制(P均<0.05);RNA-seq结果显示,差异基因共494个,其中上调266个,下调228个;GO功能富集主要在细胞外区组成、质膜的组成、受体复合物、细胞外泌体、细胞外基质结构组成、钙离子结合等,KEGG富集主要在补体和凝血途径、胰岛素抵抗、ABC转运途径、IL-17途径、NOD样受体途径和NF-κB信号通路等;靶基因预测分析和RT-qPCR表达验证显示,MTHFD2、OSBPL6、HADHB、HMGCLL1、GUCY1A2和DEPTOR是miR-33a-5p的潜在靶基因(P均<0.05)。结论miR-33a-5p可能通过调控MTHFD2、OSBPL6、HADHB、HMGCLL1、GUCY1A2和DEPTOR基因转录后表达水平来抑制A549细胞的增殖。

DCLK1激活FAK/PI3K/AKT/mTOR信号通路促进A549细胞的恶性行为

目的探讨双肾上腺素皮质样激酶1(DCLK1)对A549细胞增殖、迁移、侵袭等恶性生物学行为的影响,并探究可能涉及的相关分子机制。方法慢病毒感染法建立稳定表达DCLK1分子的A549细胞系,反转录-聚合酶链技术和蛋白质印记法进行鉴定。CCK-8与平板克隆实验检测过表达DCLK1后细胞增殖能力变化。Transwell实验观察过表达DCLK1对细胞迁移与侵袭能力的影响。癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析DCLK1对肺腺癌细胞的调控富集通路,蛋白质印记法进行验证。结果DCLK1在A549细胞中过表达可增加细胞的增殖、迁移与侵袭等能力,而抑制FAK/PI3K/AKT/mTOR信号通路可削弱DCLK1对A549细胞的恶性调控。结论DCLK1通过激活FAK/PI3K/AKT/mTOR信号通路,促进A549细胞的恶性生物学行为。

右美托咪定通过调控miR-1307表达对肺癌A549细胞生物学行为的影响

目的通过检测miR-1307表达水平,分析右美托咪定(dexmedetomidine,Dex)对肺癌A549细胞生物学行为影响的可能机制。方法人肺癌A549细胞接种后培养24h,采用数字表法随机分为4组:肺癌A549细胞组、Dex20μg/ml组、Dex 40μg/ml组及Dex 80μg/ml组;每组每孔设6个平行样,各组细胞培养结束后,通过CCK-8法测定细胞增殖能力,应用Annexin V-FITC/PI双染法观察细胞凋亡,Matrigel膜及Transwell法测定细胞侵袭力及迁移水平,采用实时荧光定量PCR检测各组细胞中miR-1307的表达水平。结果Dex能抑制肺癌A549细胞活力,且作用呈浓度依赖性及时间依赖性;Dex可诱导肺癌A549细胞凋亡,当Dex浓度达到80μg/ml,其凋亡率可升至22.23%;Dex可抑制肺癌A549细胞的迁移与侵袭能力,且呈浓度依赖性。此外,与对照组比较,Dex处理后A549细胞中miR-1307的相对表达量明显下降,且随着Dex浓度的增加下降更为明显。结论Dex能有效抑制肺癌A549细胞的增殖、侵袭、迁移,促进其凋亡,并呈剂量依赖性,其作用可能与其调控miR-1307的表达有关。

苍术素通过激活RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路诱导非小细胞肺癌A549细胞程序性坏死并抑制裸鼠移植瘤生长

目的:探讨苍术素(ATR)通过调节受体相互作用蛋白激酶(RIPK)1/RIPK3/混合谱系激酶结构域样(MLKL)信号通路对非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞程序性死亡及裸鼠移植瘤生长的影响。方法:使用0~160μmol/L的ATR处理A549细胞,MTT法检测细胞存活率以确定后续实验给药浓度。使用ATR和/或RIPK1抑制剂Nec-1(necrostatin-1)、caspase抑制剂Z-VADFMK处理A549细胞,验证ATR是否诱导A549细胞发生程序性坏死。将A549细胞分为对照组、ATR-L组、ATR-M组、ATR-H组(分别用0、10、20、40μmol/L ATR处理)、ATR+Nec-1组(40μmol/L ATR+50μmol/L Nec-1处理),处理24 h后,采用PI单染及Hoechst33342/PI双染法检测细胞死亡情况、透射电镜观察细胞死亡形态、DCFH-DA荧光探针法检测细胞内ROS水平、JC-1染色法检测线粒体膜电位、WB法检测细胞中RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路相关蛋白质的表达水平。构建A549细胞裸鼠移植瘤模型,用10 mg/kg ATR(溶于玉米油中)对裸鼠灌胃给药5周,观察ATR对移植瘤生长的影响,WB法检测移植瘤组织中RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路相关蛋白质的表达水平。结果:10~160μmol/L的ATR可显著抑制A549细胞增殖,选择10、20、40μmol/L的ATR进行后续实验。ATR组A549细胞存活率显著低于对照组(P<0.01)和ATR+Nec-1组(P<0.01),而ATR+z-VAD组细胞存活率显著低于z-VAD组(P<0.01),说明ATR可诱导A549细胞发生程序性坏死而非凋亡。与对照组比较,ATR处理组A549细胞发生肿胀,线粒体内脊消失呈空泡化,细胞内容物向外泄漏,细胞核聚集,表现为坏死特征,ATR-L组、ATR-M组、ATR-H组A549细胞死亡率、ROS水平及p-RIPK1、p-RIPK3、p-MLKL表达水平均显著升高,线粒体膜电位显著降低(均P<0.01),且呈药物浓度依赖性;与ATR-H组比较,ATR+Nec-1组细胞死亡率、ROS及p-RIPK1、p-RIPK3、p-MLKL表达水平降低,线粒体膜电位显著升高(均P<0.01)。裸鼠移植瘤实验结果显示,与对照组比较,ATR组裸鼠移植瘤体积、移植瘤质量均降低(P<0.05,或P<0.01),而与瘤组织中p-RIPK1、p-RIPK3、p-MLKL蛋白表达水平均显著升高(均P<0.01)。结论:ATR可能通过激活RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路诱导A549细胞发生程序性坏死,抑制A549细胞及其裸鼠移植瘤的生长。

基于mTOR/STAT3信号轴探讨桑色素诱导非小细胞肺癌A549细胞自噬的机制

目的基于mTOR/STAT3信号轴探讨桑色素诱导非小细胞肺癌A549细胞自噬的机制。方法将A549细胞分为空白组及30、60、90、120、150μg·m L^(-1)桑色素组,培养24、48、72 h后采用CCK-8法检测细胞增殖活性,计算细胞抑制率。将A549细胞分为空白组及30、90、150μg·m L^(-1)桑色素组,培养细胞14 d后通过克隆形成实验检测细胞增殖情况;培养细胞24 h后,采用Beyo ClickTMEd U-488检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;吖啶橙染色检测细胞自噬情况;透射电镜观察细胞自噬体形成情况;Western Blot法检测细胞中凋亡、自噬及m TOR/STAT3信号轴相关蛋白的表达水平。将A549细胞分为空白组、空白+氯喹(10μg·m L^(-1))组、桑色素(30、150μg·m L^(-1))组、桑色素(30、150μg·m L^(-1))+氯喹(10μg·m L^(-1))组,干预48 h后采用CCK-8法检测细胞活性,计算细胞存活率。结果与空白组比较,干预24 h后60、90、120、150μg·m L^(-1)桑色素组的A549细胞抑制率显著升高(P<0.05,P<0.001);干预48、72 h后桑色素30、60、90、120、150μg·m L^(-1)组的A549细胞抑制率显著升高(P<0.001);30、90、150μg·m L^(-1)桑色素组的A549细胞集落数及绿色荧光的增殖阳性细胞数均显著减少(P<0.01,P<0.001),细胞凋亡率均显著升高(P<0.01,P<0.001),cleaved-PARP蛋白表达水平显著升高(P<0.001);90、150μg·m L^(-1)桑色素组A549细胞的p-P38/P38MAPK蛋白表达水平显著升高(P<0.01,P<0.001);30、90、150μg·m L^(-1)桑色素组A549细胞中出现不同程度的橙黄色荧光,以90、150μg·m L^(-1)桑色素组的橙黄色荧光显著;150μg·m L^(-1)桑色素组A549细胞胞浆中分别出现了自噬体和自噬溶酶体;150μg·m L^(-1)桑色素组A549细胞的LC3-Ⅱ蛋白表达明显上调(P<0.05),90、150μg·m L^(-1)桑色素组A549细胞的Atg16L1-Ⅱ蛋白表达显著上调(P<0.001),p-m TOR/m TOR及p-STAT3/STAT3蛋白表达显著下调(P<0.001)。与桑色素(150μg·m L^(-1))组比较,桑色素(150μg·m L^(-1))+氯喹(10μg·m L^(-1))组的A549细胞存活率明显升高(P<0.05)。结论桑色素能够抑制肺癌A549细胞的增殖,促进其凋亡,并诱导自噬,其作用机制可能与m TOR/STAT3信号轴有关。

基于JAK2/STAT3通路研究周氏固金消瘤汤含药血清对人肺腺癌A549细胞侵袭迁移能力的影响

目的:探讨周氏固金消瘤汤(ZSGJXLT)含药血清对人肺腺癌A549细胞侵袭迁移能力的影响及其机制。方法:应用健康SD大鼠制备ZSGJXLT含药血清与空白血清,将0%(空白血清)及5%、10%、20%、30%、40%ZSGJXLT含药血清作用于A549细胞,CCK-8法测算细胞活性抑制率和半数抑制浓度(IC_(50))。用0%ZSGJXLT(空白对照组)、5%ZSGJXLT(ZSGJXLT低剂量组)、10%ZSGJXLT(ZSGJXLT中剂量组)及20%ZSGJXLT(ZSGJXLT高剂量组)含药血清培养A549细胞,细胞划痕实验及高内涵细胞成像技术观察细胞运动情况;Transwell侵袭及迁移实验观察细胞侵袭及迁移情况;Western blot法检测A549细胞JAK2/STAT3通路相关蛋白表达情况。结果:与空白对照组相比,不同浓度ZSGJXLT含药血清组A549细胞活性受到不同程度的抑制,与时间及浓度呈正相关性,24 h的IC_(50)为25.42%。与空白对照组相比,ZSGJXLT中、高剂量组A549细胞划痕愈合率、细胞移动速度均显著下降(均P<0.05),不同浓度ZSGJXLT含药血清组A549细胞侵袭及迁移数量明显减少(均P<0.05)。与空白对照组比较,ZSGJXLT中、高剂量组A549细胞的p-JAK2、p-STAT3、VEGFA蛋白表达水平显著降低(均P<0.05);不同浓度ZSGJXLT含药血清组MMP-2、MMP-9、N-cadherin蛋白表达有下调趋势,而E-cadherin蛋白表达有上调趋势,呈剂量依赖性,其中ZSGJXLT高剂量组与空白对照组比较差异有统计学意义(均P<0.05)。结论:周氏固金消瘤汤含药血清能抑制A549细胞侵袭迁移能力,其机制可能与调控JAK2/STAT3通路有关。

基于生信分析探索STARD8表达对肺癌A549细胞生物学功能的影响

目的探讨STARD8对肺癌A549细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡生物学功能的影响。方法从美国国家生物技术信息中心(NCBI),获取两份公开的基因芯片数据集(GSE18842和GSE68571),运用limma R包识别差异表达基因(DEGs)。采用最小绝对收缩和选择算子(LASSO)回归法结合SVM-RFE算法对候选基因进行筛选,构建受试者工作特征(ROC)曲线,应用CIBERSORT工具进行免疫浸润分析。通过RT-qPCR和Western blot分析STARD8在对照组及肺癌组的mRNA及蛋白水平,通过细胞平板克隆、Transwell、细胞划痕及流式细胞实验分析STARD8对A549细胞的增殖、侵袭、迁移及凋亡能力的影响。结果共筛选出285个上调基因和377个下调基因,取交集得到1个诊断标志物基因STARD8,免疫分析显示CD4 T细胞、NK细胞出现免疫抑制。肺癌组中STARD8的mRNA及蛋白表达均下调(P均<0.05)。STARD8过表达时肺癌A549细胞的增殖、侵袭及迁移能力降低,凋亡能力增加(P均<0.05)。结论STARD8可抑制肺癌A549细胞增殖、侵袭及迁移,促进细胞凋亡。

甘草多糖对LPS诱导的A549细胞炎症损伤的拮抗作用研究

甘草是世界上应用最广泛草本植物之一,其中主要提取物甘草多糖是具有多种生物活性的多糖类化合物.旨在探究甘草多糖(Glycyrrhiza polysaccharide)对脂多糖(LPS)诱导的A549细胞炎症的拮抗作用的分子机理,为治疗肺部炎症疾病提供一定理论依据.采用水提醇沉法提取甘草多糖粗提物.利用细胞增殖检测试剂盒CCK-8检测不同浓度甘草多糖以及LPS对A549细胞活力的影响;利用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞内TNF-α和IL-6因子的表达情况;利用实时荧光定量PCR检测细胞内IL-6、IL-1β、NF-κB的mRNA水平的表达情况.与对照组相比,甘草多糖能够促进A549细胞活力升高,而LPS处理A549细胞后细胞活力显著下降.ELISA法检测结果表示,相比对照组,LPS处理后细胞炎症因子TNF-α和IL-6的含量显著升高,LPS和甘草多糖复合处理后A549细胞内的TNF-α和IL-6因子显著降低.进一步实时荧光定量PCR结果表明,LPS组中细胞IL-6、IL-1β和NF-κB炎症因子mRNA的表达明显升高,甘草多糖处理后细胞中IL-6、IL-1β和NF-κB炎症因子mRNA的表达显著降低.与LPS组相比,甘草多糖能够显著降低炎症因子mRNA的表达.综上所述,甘草多糖对LPS诱导的A549细胞炎症损伤起拮抗作用,其可能机理是通过抑制NF-κB信号通路.

刺梨果多糖对肺腺癌A549细胞增殖、凋亡的作用及机制研究

目的探讨刺梨果多糖对肺腺癌A549细胞增殖、凋亡的作用及机制。方法在0、2、4、6、8、10 g·L^(-1)刺梨果多糖干预A549细胞24、48、72 h后,采用CCK-8法检测A549细胞增殖情况。在0、2、6、10 g·L^(-1)刺梨果多糖干预A549细胞24、48 h后,采用细胞划痕实验测定A549细胞的迁移情况;Transwell实验测定A549细胞侵袭情况。在0、2、6、10 g·L^(-1)刺梨果多糖干预A549细胞48 h后,采用流式细胞术(PI单染法)测定A549细胞周期;流式细胞术(Annexin V-FITC/PI双染法)测定A549细胞的凋亡情况;Real-Time PCR法测定A549细胞的周期、凋亡相关基因表达水平;Western Blot法测定A549细胞的周期、凋亡相关蛋白表达水平。结果(1)干预24、48、72 h后,与对照组(0 g·L^(-1))比较,刺梨果多糖2、4、6、8、10 g·L^(-1)组的A549细胞生长受到显著抑制,细胞的存活率显著降低(P<0.05,P<0.01),刺梨果多糖干预48 h的IC50值为6.109 g·L^(-1),后续实验采用2、6、10 g·L^(-1)浓度作为刺梨果多糖低、中、高剂量。(2)干预48 h后,与对照组比较,刺梨果多糖2、6、10 g·L^(-1)组的A549细胞迁移距离显著增加(P<0.05,P<0.01),细胞侵袭数量显著减少(P<0.05,P<0.01);刺梨果多糖6、10 g·L^(-1)组的G0/G1期、G2/M期细胞比例均显著升高(P<0.05,P<0.01),S期的细胞比例显著降低(P<0.01);刺梨果多糖2、6、10 g·L^(-1)组A549细胞的G0/G1、G2/M期相关调控因子CDK-4、CDK-6、CyclinD1、CDK-1、CyclinB1 mRNA及蛋白表达水平均显著下调(P<0.05,P<0.01);A549细胞的凋亡率均显著升高(P<0.01);凋亡相关基因Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9 mRNA表达显著上调(P<0.05,P<0.01);促凋亡Bax、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9蛋白表达显著上调(P<0.05,P<0.01),抗凋亡Bcl-2蛋白表达显著下调(P<0.05,P<0.01)。结论刺梨果多糖能够抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭,阻滞细胞周期于G0/G1和G2/M期,并通过线粒体通路和死亡受体通路诱导A549细胞凋亡。

苦参碱通过Hedgehog信号通路对肺癌A549细胞顺铂化疗敏感性的影响

目的探讨苦参碱通过Hedgehog信号通路对肺癌A549细胞顺铂(cisplatin,DDP)化疗敏感性的影响。方法用噻唑蓝(thiazolyl blue,MTT)检测苦参碱的浓度对A549细胞增殖的影响,计算20%致死浓度(20%lethal concentration,LC20);将对数期生长A549细胞分为对照组、苦参碱组(LC20苦参碱干预)、Hedgehog信号通路抑制剂(Hedgehog pathway inhibitor,HPI-4)组(5μmol·L^(−1) HPI-4干预)、DDP组(5 mg·L^(−1) DDP干预)、DDP+苦参碱组(5 mg·L^(−1) DDP和LC20苦参碱共同干预)、DDP+苦参碱+HPI-4组(5 mg·L^(−1) DDP、LC20苦参碱、5μmol·L^(−1) HPI-4共同干预),每组设置3个复孔。用MTT法和流式细胞术检测干预48 h后各组细胞的存活率和凋亡率,用蛋白印迹法(Western blotting)检测各组细胞Hedgehog信号通路相关蛋白音猬因子(sonic hedgehog,SHH)、补缀同源物1(patched1,Ptch1)、神经胶质瘤相关癌基因同源蛋白1(glioma-associated oncogene homolog 1,Gli1)的表达。结果与对照组比较,不同质量浓度的苦参碱干预组细胞存活率均降低(P<0.05),且细胞存活率随苦参碱质量浓度升高而降低(P<0.05)。与对照组比较,苦参碱组、HPI-4组、DDP组、DDP+苦参碱组、DDP+苦参碱+HPI-4组的细胞存活率均降低,且DDP+苦参碱+HPI-4组<DDP+苦参碱组<DDP组<苦参碱组、HPI-4组(P<0.05);细胞凋亡率结果与细胞存活率结果相反。与对照组比较,苦参碱组、HPI-4组、DDP组、DDP+苦参碱、DDP+苦参碱+HPI-4组Hedgehog信号通路SHH、Ptch1、Glis1蛋白的相对表达量均降低,且DDP+苦参碱+HPI-4组<HPI-4组<DDP+苦参碱组<DDP组、苦参碱组(P<0.05)。结论苦参碱可增加肺癌A549细胞DDP化疗敏感性,其作用机制可能与抑制Hedgehog信号通路有关。

芹菜素通过AMPK/mTOR通路调控肺癌A549细胞自噬

目的 探讨芹菜素(APG)对肺癌A549细胞增殖及自噬的影响及其与AMPK/mTOR通路的关系。方法 体外培养肺癌A549细胞,采用CCK-8法检测不同浓度芹菜素处理A549细胞不同时间后对细胞增殖的影响。后续实验分为空白对照组(0μmol/L APG),低、中、高浓度实验组和抑制剂组5组,采用MDC染色法检测各组对细胞自噬的影响,免疫印迹法检测自噬相关蛋白以及AMPK/mTOR通路相关蛋白表达情况。结果 芹菜素可显著抑制A549细胞增殖,且呈浓度依赖性(P<0.05);20、40、80μmol/L芹菜素组随作用时间延长,对A549细胞的增殖抑制率逐渐增加,呈时间依赖关系(P<0.05)。与空白对照组比较,实验组A549细胞中含高亮点状荧光的自噬小泡数量及IOD值逐渐增加(P<0.05),芹菜素可浓度依赖性上调LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、p-AMPKα蛋白表达水平及p-AMPKα/AMPKα比值(P<0.05),下调p-mTOR、p62蛋白表达水平及p-mTOR/mTOR比值(P<0.05)。与高浓度实验组比较,抑制剂组细胞中含高亮点状荧光的自噬小泡减少,IOD值下降,LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、p-AMPKα蛋白表达水平及p-AMPKα/AMPKα比值降低,而P62、p-mTOR蛋白表达水平及p-mTOR/mTOR比值升高(P<0.05)。结论 芹菜素能抑制肺癌A549细胞增殖,诱导其自噬,作用机制可能与AMPK/mTOR通路有关。

中药干预人肺腺癌A549细胞的实验研究进展

恶性肿瘤中,肺癌在国内和世界范围内的发病率、死亡率均居首位。非小细胞肺癌是主要的肺癌类型,而肺腺癌是非小细胞肺癌中常见的病理类型。A549细胞是一种实验用肺癌细胞,常被用于肺腺癌的研究模型。由于中药的低毒、有效、安全等特点,越来越多的研究聚焦于中药治疗肺癌的作用机制。目前,关于中药对肺腺癌A549细胞的实验研究不断开展,笔者经过查阅大量相关文献,将研究分为中药复方和中药单体的干预研究,对其进行综述。

缺氧对肺癌A549细胞外泌体的影响

目的:探讨缺氧对肺癌A549细胞外泌体形态、表型及蛋白表达的影响。方法:对A549细胞进行缺氧培养(实验组)和常氧培养(对照组)后,分别用外泌体提取试剂盒提取外泌体,然后用透射电镜观察其结构形态变化,免疫印迹检测其标记蛋白表达变化,BCA蛋白定量法检测外泌体蛋白量的变化。结果:实验组和对照组A549细胞提取的外泌体直径皆为30~120 nm,呈圆形或椭圆形,有完整胞膜结构,形态规则,内含低密度物质,边缘比较清晰;实验组中A549外泌体的CD9蛋白表达与对照组无明显差异,但是CD81的蛋白表达明显高于对照组。BCA检测结果显示,A549细胞分泌的外泌体蛋白量与接种细胞数呈线性关系,在缺氧状态下A549细胞分泌外泌体的蛋白量明显高于对照组。结论:缺氧导致肺癌细胞A549外泌体CD81的表达增多,细胞分泌外泌体蛋白量增多,提示缺氧状态下的A549细胞具有更强的远处转移能力。