表观遗传修饰对ABO基因表达影响的研究进展

ABO血型的精准鉴定对临床安全输血至关重要。血清学和基因分型技术的应用使疑难血型鉴定问题得到一定程度的解决,但临床仍有表型与基因型不匹配的问题存在,影响血型鉴定和有效输血。表观遗传修饰是调控基因表达的重要方式,包括DNA甲基化、组蛋白修饰和非编码RNA调控。ABO基因的表达受到表观遗传机制的调控,因此表观遗传修饰对ABO基因表达的影响可能是这部分血型难以鉴定的分子机制之一。DNA甲基化水平对ABO基因表达影响的研究较多,但有关其他表观遗传修饰机制的研究较少,尤其是多种类型的非编码RNA被发现,它们对ABO基因表达的调控机制需要更多的研究进行探讨。

血液系统恶性肿瘤致ABO基因甲基化状态异常的影响及分析

目的检测血液系统恶性肿瘤患者和健康献血员ABO基因启动子区CpG岛甲基化状态,分析ABO基因甲基化与血液系统恶性肿瘤的相关性,初步探讨ABO基因甲基化状态异常在血液系统恶性肿瘤中的临床意义。方法收集2020年7月至2023年3期间送检至血液中心6例血液系统恶性肿瘤患者标本和20例健康献血员标本作为研究对象。应用血型血清学技术检测ABO血型抗原情况,应用亚硫酸氢盐测序法(BSP)检测ABO基因启动子CpG岛甲基化状态。结果血液系统恶性肿瘤患者中有2例出现ABO抗原减弱,而健康对照组均未检测出ABO抗原减弱现象;经亚硫酸氢盐转化测序法检测病例组(n=6)和对照组(n=20)标本ABO基因甲基化状态,发现血液系统恶性肿瘤患者(甲基化率73.08%)ABO基因甲基化率显著高于随机选取的对照组样本(甲基化率38.08%),差异有统计学意义(P<0.001)。结论罹患血液系统恶性肿瘤与ABO血型抗原减弱相关联,且ABO基因启动子区CpG岛甲基化与血液系统恶性肿瘤的发生相关,这为探索血液系统恶性肿瘤ABO血型抗原减弱的分子机理提供了理论依据。

ABO基因启动子CpG岛甲基化与白血病的相关性

近年来研究发现ABO血型与许多疾病的发生发展相关,某些肿瘤导致A、B血型物质减少的现象已日益引起关注。本研究探讨ABO基因启动子CpG岛甲基化与白血病的相关性。采用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测了不同血型的健康人群和各种血液病患者外周血红细胞表面ABH抗原的相对含量,用PCR和MSP-PCR分别检测血液病患者和健康人ABO基因启动子DNA序列和CpG岛甲基化,以及ABO基因启动子-102位点的甲基化。结果发现,白血病患者均出现不同程度的A、B抗原减少;通过对比检测健康人和患者的ABO基因启动子序列,未发现有序列的不同,说明启动子序列高度保守;利用重亚硫酸盐对DNA样本进行修饰后,通过对健康人和患者的ABO基因启动子序列进行扩增和测序,发现健康人和再生障碍性贫血患者在ABO基因启动子的CpG岛区没有甲基化的位点,而急性髓性白血病(AML)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、慢性粒细胞白血病(CML)和部分骨髓增生异常综合征(MDS)患者在位置为-102、-101、-100、-99和-97位置的C碱基均有甲基化的现象。结论:甲基化是造成白血病患者AB抗原下降的原因;-102、-101、-100、-99和-97这几个甲基化位点有可能是白血病的特异性表现;针对-102位点检测结果提示-102位点是否甲基化有可能作为白血病鉴别诊断中一个有意义的分子标识物。

RASSF1A在无损性孕妇外周血浆中胎儿ABO基因分型中的运用

目的:探讨甲基化表观遗传标志RASSF1A在O型孕妇外周血浆中胎儿ABO基因分型中的运用,以无损性预测产前胎儿ABO血型。方法:首先提取O型孕妇外周血浆游离DNA,扩增SRY及甲基化RASSF1A作为胎儿DNA存在的标志;检测血浆游离DNA中B及非O预测胎儿ABO血型;并将基因分型结果与胎儿分娩后血清学结果进行比对,以评价该方法的准确性。结果:20例标本中,11例检测出SRY,检测结果与胎儿出生后性别相符;其余9例标本酶切后均扩增出RASSF1A,证实胎儿游离DNA存在。对血浆游离DNA进行ABO基因检测,20例标本中8例标本同时扩增出非O和B,提示为B血型;5例标本只扩增出非O,未扩增出B,提示为A型;7例标本均未扩增出非O及B,提示为O型。上述预测结果与胎儿出生后ABO血清学血型一致。结论:初步建立了基于RASSF1A的O型孕妇血浆中游离DNA中胎儿ABO基因的检测程序,可用于临床无损性产前胎儿ABO血型的预测。

ABO基因定型解决正反定型不符合标本3例

目的建立PCR-SSP(sequence specific primer,SSP)法ABO基因定型技术用于血型工作中常见问题的解决。方法运用血型血清学方法、PCR-SSP法进行3例实际工作中较有代表性的正反定型不符合样本检测。结果血清学方法检出了3例正反定型不一致的样本。基因检测结果显示:样本1、3是AB基因型;样本2是OIVOIV基因型。此3例样本血清学检测结果相互矛盾,不能得出正确结论。PCR-SSP法检测结果清晰,可及时准确定型。结论血型基因定型技术较血型血清学方法更准确、可靠,是血型血清学技术的极好补充。

ABO基因第6外显子c.278C>T突变导致BW.12亚型的研究

目的:研究ABO基因α-1,3-D半乳糖基转移酶基因突变对B抗原表达的影响,探讨其分子机制。方法:利用常规血清学方法对先证者及其家系成员进行血型鉴定,应用聚合酶链反应-序列特异性(PCR-SSP)和ABO基因第1-7外显子PCR产物直接测序进行ABO基因分型及序列分析,应用生物信息学软件对突变蛋白进行3D结构模拟,分析基因突变对蛋白结构稳定性的影响。结果:先证者及其家系成员血清学检测结果为B亚型,ABO基因分型明确了先证者的基因型为Bw12/O;基因测序结果证实B等位基因第6外显子存在ABO*BW. 12的特征性变异c. 278C> T,导致多肽链p. Pro93Leu替换。蛋白3D结构的模拟分析发现氨基酸替换后,与93位氨基酸连接的氢键及水分子均发生了改变。家系调查发现先证者的爷爷、父亲、大伯和哥哥均携带了相同的ABO*BW. 12等位基因。结论:ABO基因第6外显子c. 278C> T突变导致多肽链氨基酸替换,影响了α-1,3-D半乳糖基转移酶蛋白稳定性,引起酶活性改变,产生Bw12表型,且该变异基因可稳定遗传。

类孟买型ABO基因的检测

为研究类孟买型ABO基因的分子基础 ,在吸收放散试验、唾液血型物质凝集抑制等血清学试验基础上 ,用PCR SSP法对 5例类孟买型样本进行ABO血型的基因定型 ,并进行ABO基因第 6、第 7外显子测序。结果表明 ,本研究的 5例类孟买血型样本 ,经PCR SSP法基因定型 ,其ABO基因型分别为A10 2B1、A10 2B1、A10 2O1、A10 2B1、B1O1;经直接测序实验 ,该 5例样本的ABO基因测序结果与PCR SSP基因定型结果相一致 ,未检测出新的点突变。结论 :应用PCR SSP方法可对类孟买型个体进行常规ABO基因定型 ,具有简便、快速、可靠的特点。

双重复合糖基转移酶的ABO基因启动子CpG岛甲基化

背景:在ABO血型抗原的研究中,绝大多数样本是相同的ABO基因表达出正常的相同的ABH抗原。但有一定数量的样本表现出具有相同分子遗传背景但表达出来的抗原强度却随着家系\个体不同而有所差异,说明了ABO血型中复杂的表达调控机制。分析一类罕见的双重复合型标本的ABO血型血清学与基因背景情况,深入表观遗传学的研究,有利于部分揭示ABO基因表达机制。目的:探讨双重复合型ABO糖基转移酶表达相关的ABO基因启动子CpG岛甲基化水平与ABH抗原表达的关系。方法:6例经血型血清学定为CisAB或B(A)型的标本,进行ABO基因编码区全长序列和启动子序列的测定,采用重亚硫酸盐处理法检测ABO基因启动子CpG岛甲基化程度。结果与结论:6例双重复合AB型的标本中,在B101等位基因基础上存在nt803C>G突变的2个CisAB05/B(A)06等位基因,在ABO启动子CpG岛区域两者在nt-33(30%)、nt+27(50%)、nt+49(50%)具有甲基化差异;在A101等位基因序列的基础上存在nt803C>G突变的2个CisAB01等位基因,在ABO启动子CpG岛区域两者在nt-26(10%)位置有甲基化差异;在B101等位基因基础上存在nt640A>G突变的2个B(A)04等位基因ABO启动子CpG岛,在nt-33(10%)、nt+16(50%)、nt+57(60%)、nt+59(60%)、nt+68(60%)和nt+74(60%)位有甲基化差异。全部的6例标本ABO基因启动子区域DNA序列无任何突变异常。结果提示在相同的ABO遗传基因背景下,ABO基因启动子CpG岛区域某些位点甲基化可能影响ABH抗原在红细胞膜表面的表达。

运用多重PCR-直接测序法检测ABO基因型及其遗传多态性

根据ABO基因座第6和7外显子9个SNP位点设计引物,复合扩增后直接测序,根据测序结果判定不同物证检材ABO基因型及其在藏族群体中的多态性分布。成功地检测出经过不同方法处理的血痕、毛发、口腔拭子、骨骼、混合斑等101例腐败、降解及微量检材的ABO基因型,结果与免疫血清学分型一致,且该方法具有灵敏度高、特异性好、操作简单、结果准确、客观及能够发现新等位基因等优点。对80名青海藏族无关个体的调查表明,ABO基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡,杂合度H为0.675,多态信息含量PIC为0.672,个人识别力DP值为0.874,非父排除率PE值为0.391,偶合度I为0.126;青海藏族ABO等位基因频率O>B>A,且O等位基因频率高达0.6125。多重PCR-直接测序法检测ABO基因型适用于法医学不同来源的样本,提高了ABO血型系统的个体识别能力;ABO基因型在青海藏族人群中的分布具有较高多态性,可用于法医学个体识别及群体遗传学研究。

运用二重PCR和DNA芯片技术检测ABO基因型

目的以玻片为载体,用寡核苷酸探针杂交技术检测ABO基因型。方法根据ABO基因座外显子6和外显子7的3个SNP点的序列分布特征设计4条寡核苷酸探针,制成分型芯片。将待测样品DNA用末端标记了Cy5的引物进行二重PCR扩增,产物与芯片上的探针进行杂交,根据杂交产生的荧光信号确定样品的ABO基因型。结果利用ABO芯片,可对血斑、毛发等微量检材进行ABO基因型检测。对115名汉族无关个体的调查表明,ABO基因型的分布符合Hardy-Weinberg平衡,等位基因杂合度观察值和期望值分别为0.591、0.616,多态信息含量为0.544,二联体和三联体非父排除率分别为0.188、0.334,个体识别能力为0.777。结论通过DNA芯片检测ABO基因型的技术适用于法医学样本,可满足高通量的检测需求。

利用孕妇血浆中游离DNA检测胎儿ABO基因型

目的采用实时定量PCR(real-time PCR)通过孕妇血浆中的胎儿游离DNA(cff DNA)鉴定胎儿ABO血型基因型。方法静脉采集79名孕妇O型血液,提取血浆中的游离DNA。采用SYBR real-time PCR方法,利用261位点(nt261)和796位点(nt796)的多态性进行胎儿ABO基因分型。nt261和nt796扩增反应阴性的血浆DNA经甲基化特异性酶消化后,用Taq Man real-time PCR方法检测高甲基化胎源RASSF1A基因,来确定血浆DNA中是否存在cff DNA。待胎儿分娩后,血清学检测新生儿ABO血型,与基因检测结果比对。结果 79例标本中59例nt261扩增反应为阳性,其中33例nt796引物扩增反应为阳性,26例为阴性。20例nt261和nt796扩增反应阴性的标本中均可检测到胎儿RASSF1A基因,证明存在cff DNA。参照血清学结果,9例胎儿ABO基因型与表型不符,胎儿ABO基因分型准确率为88.6%,其中OO型检测准确率为100%,OA型为76.9%,OB型为90.9%。结论利用孕妇血浆中cff DNA检测胎儿ABO基因型可以在孕早期确定胎儿血型,避免怀有O型胎儿的孕妇多次复查抗体效价,并提高新生儿溶血病诊断的准确性。

海南汉、黎族人群中ABO基因的DNA多态性

目的研究海南汉、黎族人群中ABO基因DNA多态性及其基因频率分布的特点。方法应用等位基因特异性聚合酶链反应检测了255例海南汉族人样本DNA和379例海南黎族人样本DNA的ABO血型基因型,根据遗传距离和聚类分析比较海南汉、黎族的ABO血型基因频率与其他群体的差异,确定其在中国地理分布上的位置。结果用等位基因特异性聚合酶链反应技术可鉴定出6种ABO血型基因型AA、AB、AO^1、BB、BO^1、O^1O^1,其鉴定的ABO基因分型结果与DNA测序结果完全符合;在海南汉族人群中O^1O^1、BO^1、AO^1、AB、AA、BB基因型的频率分别为34.90%、23.53%、22.75%、6.27%、6.27%和6.27%,A、B、O^1等位基因频率分别为20.78%、21.18%和58.04%;在海南黎族人群中O^1O^1、BO^1、AO^1、AB、AA、BB基因型的频率分别为30.87%、26.39%、16.09%、13.19%、6.86%和6.60%, A、B、O^1等位基因频率分别为21.50%、26.39%和52.11%。根据遗传距离和聚类分析,海南汉族ABO血型分布介于北方和西北各省组与长江流域和西南区组之间,而海南黎族ABO血型分布与我国各省区的ABO血型分布4个组的聚类现象不明显。结论海南汉、黎族人群ABO血型基因频率分布存在明显的种族和地域的遗传多态性。

急性髓细胞白血病患者外周血ABO基因mRNA表达分析

目的了解急性髓细胞白血病患者外周血ABO基因mRNA表达特点。方法下载TCGA数据库急性髓细胞白血病RNAseq数据和GTEx数据库中的全血RNAseq数据。使用R软件分析急性髓细胞白血病和GTEx全血标本ABO基因mRNA表达水平的差异,分析急性髓细胞白血病ABO基因mRNA表达与DNA甲基化、免疫浸润以及预后的关系。结果急性髓细胞白血病ABO基因mRNA表达水平(中位数:1.333,上四分位数:3.654,下四分位数:0.401)低于对照组(中位数:3.576,上四分位数:3.747,下四分位数:3.470),差异有统计学意义(P<0.001)。急性髓细胞白血病ABO基因mRNA表达水平与转录起始位点下游+82(r=-0.249,P<0.001)、+618(r=-0.268,P<0.001)、+1080(r=-0.105,P<0.001)以及+1409位点(r=-0.210,P<0.001)甲基化存在负相关关系,与B细胞、CD8 T细胞、细胞毒性细胞、浆细胞样树突状细胞、T细胞、T辅助细胞、中央记忆型T细胞、辅助性滤泡T细胞以及调节性T细胞的免疫浸润存在正相关关系(P<0.001)。急性髓细胞白血病ABO基因mRNA高表达患者的生存时间(中位生存时间:366 d,置信区间:304-731 d)和低表达患者的生存时间(中位生存时间:731 d,置信区间:335-1402 d)之间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论急性髓细胞白血病患者外周血ABO基因mRNA表达是下降的,其与ABO基因第一内含子DNA甲基化以及免疫浸润有关,而与预后无关。

应用多重PCR-RFLP技术检测头发、口腔腭粘膜的ABO基因型

目的 探讨对头发、口腔腭粘膜等组织标本进行ABO基因分型的可行性。方法 应用多重聚合酶链反应 限制性片段长度多态性 (多重PCR RFLP)技术 ,检测 8例头发和 6例口腔腭粘膜标本的ABO基因型 ,标本的基因组DNA经 2对引物同时进行扩增 ,扩增后的产物同时用MspⅠ和KpnⅠ 2种限制酶进行消化 ,通过消化后产生的片段即可判断结果。然后将分析结果与血清学技术检测的ABO表现型和受检者血液标本的基因型进行比较。结果 14例标本共检出 6种ABO基因型 ,与表现型和血液标本的基因型结果完全一致。结论 该方法操作方便 ,重复性、稳定性好 ,可鉴定 15种基因型 ,应用于法医学鉴定具有可行性。

基因分型技术首次应用于类孟买型家系ABO基因的研究

目的探讨将基因分型技术用于解决临床输注中血型血清学难题。方法报告首次在国内用基因分型技术用于一个类孟买型家系5口人ABO基因多态性的研究。在吸收放散试验、唾液血型物质凝集抑制等血清学试验基础上,采用快速盐析法提取外周血中的DNA,用PCR-SSP法扩增ABO血型等位基因。 结果一家5人中,兄弟3人均为类孟买型,ABO基因分型分别为A102B、A102B、A102O1,而其父母血型基因与血清学血型相符合。结论ABO PCR-SSP基因分型是一种方便、快速、可靠的技术,与血型血清学相比有着显著优势。

简易ABO基因定型试剂盒的建立

目的建立1套简易ABO基因定型试剂盒。方法利用PCR-ASP(Allele-specific primer)法对9例正反定型不符合标本进行基因定型。结果2例为AB基因型,1例为O1vO1v基因型。另外还有3例B(A)/O基因型、3例cisAB/O基因型。结论该试剂盒利用Allele-specific primer PCR(PCR-ASP)法可正确鉴定出A、B、O等位基因及一些ABO亚型等位基因,如cisAB和B(A)血型等位基因。这些标本类型其实在血站或医院血库的日常工作中会经常遇到,提示该试剂盒具有较好临床应用性。血清学凝集试验是检测血型抗原物质的金标准,但存有缺陷。

恶性血液病ABO抗原减少与ABO基因表达异常的相关性

目的探讨ABO基因异常表达与恶性血液疾病ABO抗原减少的相关性。方法选取本院2011年5月至2013年5月收治的白血病患者28例为研究对象,并选取同期行身体检查的健康体检者30例为对照组,分别采用免疫组化法测定两组患者ABO基因表达异常情况。结果与正常体检者相比,白血病患者ABO基因阳性表达率显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。随着白血病患者临床分期的增加,患者与ABO基因异常表达率显著增加。经相关性分析可知,白血病患者ABO抗原减少与ABO基因异常表达呈正相关。结论 ABO基因异常表达可能是引起白血病患者ABO抗原减少的重要因素,且随着患者病情的增加,患者ABO基因异常表达率显著上升。

直接测序法证明ABO基因变异1例

1案情介绍 2002年6月,北京市某网吧发生纵火案,造成24人死亡.因尸体严重炭化,失去外貌辨认条件,均需进行DNA检验确定尸源.

改良AS-PCR引物对ABO基因分型的影响

目的通过改进AS-PCR引物,提高ABO基因型分型正确率。方法把引物P13′末端第5位碱基由G改为C,其分型图谱与改进前进行对比分析。结果改进AS-PCR引物后,OO型非特异产物减少,避免了将OO型误判为AO型。结论引物P13′末端第5位碱基由G改为C后,可有效防止OO型被误判为AO型。