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狂犬病病毒核蛋白在Bac-To-Bac/AcMNPV杆状病毒系统的表达 被引量:6
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作者 尹伟 徐洁萍 +2 位作者 张金阳 颜焰 周继勇 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期86-89,115,共5页
为真核表达狂犬病病毒的核蛋白,本研究通过RT-PCR克隆狂犬病病毒ERA株核蛋白基因,将其克隆于杆状病毒转移载体pFastBacHTB中,构建重组质粒pFastBacHTB-NP并将其转化DH10Bac细胞,得到重组穿梭质粒reBacmid-NP;通过转染昆虫细胞sf9包装重... 为真核表达狂犬病病毒的核蛋白,本研究通过RT-PCR克隆狂犬病病毒ERA株核蛋白基因,将其克隆于杆状病毒转移载体pFastBacHTB中,构建重组质粒pFastBacHTB-NP并将其转化DH10Bac细胞,得到重组穿梭质粒reBacmid-NP;通过转染昆虫细胞sf9包装重组杆状病毒。SDS-PAGE、western blot和间接免疫荧光对表达的蛋白进行鉴定和反应原性分析。分别以重组杆状病毒表达的核蛋白、原核表达核蛋白为包被抗原进行ELISA检测。结果表明,在昆虫细胞中表达的狂犬病病毒重组核蛋白能与鼠抗RV核蛋白单克隆抗体和RV阳性血清特异性结合,其相对分子量约为50.5ku。以重组杆状病毒表达的核蛋白为抗原建立的rNP-ELISA的敏感性、特异性、符合率分别为86.36%,89.83%,90.00%,优于大肠杆菌表达的RV核蛋白。说明杆状病毒系统表达的核蛋白是建立RV核蛋白ELISA抗体检测方法的理想抗原。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 核蛋白基因 Bac—To—Bac/acmnpv杆状病毒表达系统.
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基因重组核型多角体病毒AcMNPV对东方粘虫的毒力作用 被引量:2
2
作者 秦利 张涛 +3 位作者 国见裕久 仲井まどか 刘涛 樊虹 《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 2002年第3期191-194,共4页
采用小滴饮下法 ,研究了基因重组核型多角体病毒AcMNPVAaIT和野生型核型多角体病毒AcMNPV -C6对东方粘虫(Pseudaletiaseparata)的病原性 ,并添加感染增效物质 ,研究其增效作用。结果表明 ,AcMNPVAaIT比AcMNPV -C6具有更强的病原性 ,被... 采用小滴饮下法 ,研究了基因重组核型多角体病毒AcMNPVAaIT和野生型核型多角体病毒AcMNPV -C6对东方粘虫(Pseudaletiaseparata)的病原性 ,并添加感染增效物质 ,研究其增效作用。结果表明 ,AcMNPVAaIT比AcMNPV -C6具有更强的病原性 ,被感染昆虫死亡率高、致死时间短 ; 展开更多
关键词 感染增效物质 基因重组 核型 多角体 病毒 acmnpv 东方粘虫 毒力作用
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AcMNPV大方形多角体突变株的特征研究 被引量:2
3
作者 林广云 王珣章 +3 位作者 龙綮新 邓日强 庞义 余奇理 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期64-74,共11页
对在细胞核中只形成一个几乎与细胞核同样大的立方形多角体突变株AcMNPVTKmt513的多角体及其感染细胞,做超薄切片及透射电镜观察,结果表明,在感染细胞核内病毒粒子并没有被包埋到多角体蛋白内,而且多角体蛋白也不具... 对在细胞核中只形成一个几乎与细胞核同样大的立方形多角体突变株AcMNPVTKmt513的多角体及其感染细胞,做超薄切片及透射电镜观察,结果表明,在感染细胞核内病毒粒子并没有被包埋到多角体蛋白内,而且多角体蛋白也不具有野生型病毒多角体蛋白那样的晶格结构。生物测定结果表明,经提纯后的突变多角体对虫体无感染力,而感染了突变株病毒的细胞只有弱的感染力。序列测定结果证实,其fp25基因无突变发生,且fp25基因在Sf9细胞中的转录也无异常,从而排除了突变与fp25基因有关。比较了26种NPV及GV的多角体蛋白及颗粒体蛋白的氨基酸序列,发现第25位的甘氨酸是绝对保守的。利用Prosis电脑软件对突变株病毒的多角体蛋白进行了二级结构预测并与野生型病毒作了比较,发现突变株病毒多角体蛋白的二级结构与野生型的比较,α螺旋数上升,β折叠数下降,同时,亲水性及抗原性都发生了改变。两种病毒的多角体蛋白通过SDSPAGE分析,其迁移率没有差别。 展开更多
关键词 acmnpv fp25基因 多角体蛋白
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增效物质对AcMNPV-AaIT感染的增效作用 被引量:1
4
作者 王玲玲 李俊 +1 位作者 张涛 秦利 《昆虫知识》 CSCD 北大核心 2007年第3期382-384,共3页
以苜蓿尺蠖蛾核型多角体病毒的基因重组型病毒(AcMNPV-AaIT)及甜菜夜蛾Spodoptera exigua(H櫣bner)为材料,采用室内添食法研究增效物质对该病毒感染增效作用,筛选出对重组病毒具有感染增效作用的物质—刚果红。
关键词 增效物质 刚果红 acmnpv-AaIT 甜菜夜蛾
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基因重组核型多角体病毒AcMNPV-AaIT对甜菜夜蛾幼虫的毒力研究 被引量:1
5
作者 徐艳聆 樊虹 +3 位作者 聂磊 王玲玲 张涛 秦利 《辽宁农业科学》 2004年第2期10-12,共3页
研究了基因重组核型多角体病毒AcMNPV AaIT和野生型多角体病毒AcMNPV C6对甜菜夜蛾的病原性,并添加感染增效物质,研究其增效作用。结果表明:AcMNPV AaIT对甜菜夜蛾3、4龄幼虫的LD50分别为151、379PIB/头,比AcMNPV C6少39、906PIB/头;LT5... 研究了基因重组核型多角体病毒AcMNPV AaIT和野生型多角体病毒AcMNPV C6对甜菜夜蛾的病原性,并添加感染增效物质,研究其增效作用。结果表明:AcMNPV AaIT对甜菜夜蛾3、4龄幼虫的LD50分别为151、379PIB/头,比AcMNPV C6少39、906PIB/头;LT50分别比AcMNPV C6缩短1.1d和1.5d;昆虫病毒感染增效物质具有强烈的感染增效作用,增效比值为617倍。 展开更多
关键词 基因重组核型 多角体病毒 野生型 acmnpv—AaIT 甜菜夜蛾 病原性
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重组病毒AcMNPV-BmK IT侵染Sf9细胞后凋亡相关基因的表达分析 被引量:1
6
作者 付月君 林桃桃 梁爱华 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期23-27,44,共6页
将从东亚钳蝎中克隆到的兴奋型昆虫毒素基因(BmK IT)同源重组到苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)基因组中,得到重组病毒AcMNPV-BmK IT,抗虫试验表明重组杆状病毒的杀虫活性明显优于野生型病毒,但AcMNPV介导的BmK IT的抗虫分子机制尚... 将从东亚钳蝎中克隆到的兴奋型昆虫毒素基因(BmK IT)同源重组到苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)基因组中,得到重组病毒AcMNPV-BmK IT,抗虫试验表明重组杆状病毒的杀虫活性明显优于野生型病毒,但AcMNPV介导的BmK IT的抗虫分子机制尚未阐明。本试验从草地贪夜蛾Sf9细胞中克隆获得了凋亡相关基因Sfp53,制备了抗体,分析了AcMNPV-BmK IT对Sfp53表达的影响,结果表明被重组病毒感染的细胞所表达的Sfp53时间与表达量与野生型相比都有所提前和提高,说明重组病毒可加速细胞的凋亡;同时通过半定量PCR分析了AcMNPV-BmK IT感染Sf9细胞时病毒抗凋亡基因iap2的表达,结果表明重组型病毒抗凋亡基因iap2表达量减少。以上结果在细胞分子水平上解释了AcMNPV-BmK IT杀虫活性提高的原因。 展开更多
关键词 acmnpv-BmK IT 凋亡 Sfp53 iap2
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拓展AcMNPV宿主域至家蚕的研究 被引量:2
7
作者 查新民 季平 +1 位作者 于继彬 沈卫德 《江苏蚕业》 2001年第3期7-9,共3页
将核型多角体病毒(Autographa caliphanic nuclear polyhedrosis virus,AcMNPV)与家蚕核型多角体病毒(Bombyxmori nuclear polyhedrosis v... 将核型多角体病毒(Autographa caliphanic nuclear polyhedrosis virus,AcMNPV)与家蚕核型多角体病毒(Bombyxmori nuclear polyhedrosis virus,NmNPV)基因组DNA的Sma I酶切C片段共转染Sf细胞,共转染上清液接种到BmN细胞中进行扩增,然后在BnN中进行空斑分析,挑取多角体空斑进行扩增。发现所得到的病毒即能在Sf纫胞中增殖,也能在BmN细胞中增殖,并产生多角体颗粒。用重组病毒的多角体口服感染幼虫,能引起家蚕幼虫发病。 展开更多
关键词 acmnpv BMNPV 宿主域 共转染 杆状病毒 病毒杀虫剂 家蚕
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吖啶橙对草地贪夜蛾sf9细胞和AcMNPV病毒的损伤效应
8
作者 邓平建 房师松 +3 位作者 李喜梅 倪惠波 王叶元 林健荣 《癌变.畸变.突变》 CAS CSCD 2007年第2期125-128,共4页
背景与目的:探索吖啶橙对昆虫细胞的遗传损伤。材料与方法:用不同浓度的吖啶橙处理草地贪夜蛾Sf9细胞、AcMNPV病毒,观察其对细胞生长发育,微核发生率,AcMNPV感染力的影响。结果:sf9细胞经5μg/ml的吖啶橙处理后,细胞分裂生长速度减慢,... 背景与目的:探索吖啶橙对昆虫细胞的遗传损伤。材料与方法:用不同浓度的吖啶橙处理草地贪夜蛾Sf9细胞、AcMNPV病毒,观察其对细胞生长发育,微核发生率,AcMNPV感染力的影响。结果:sf9细胞经5μg/ml的吖啶橙处理后,细胞分裂生长速度减慢,细胞表面粗糙,微核发生率为10.4‰,10μg/ml时可引起细胞膜破碎或死亡,微核发生率为22‰,出现三核,多核甚至核裂现象。当AcMNPV经吖啶橙处理后再感染sf9细胞,AcMNPV可在细胞内增殖,形成多角体,并出现一些类似三角形或四角形的异常多角体。结论:用一定剂量的吖啶橙处理草地贪夜蛾sf9细胞和AcMNPV病毒,可对细胞产生损伤和引起AcMNPV发生异常多角体。 展开更多
关键词 吖啶橙 草地贪夜蛾sf9细胞 acmnpv病毒 损伤
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AcMNPV大立方形多角体突变株突变位点的证实
9
作者 林广云 施先宗 +1 位作者 龙綮新 余奇理 《中山大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期61-64,共4页
纯化了3株在共转染后形成正常多角体的病毒株,提取其病毒DNA,并对其做了EcoRⅠ、BglⅡ酶切分析;克隆含多角体蛋白基因的EcoRⅠI片段并进行序列测定,证实了此病毒株为回复突变株.
关键词 杆状病毒 多角体蛋白 回复突变 突变位点 acmnpv
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AcMNPV polh启动子上游增强序列的部分缺失分析
10
作者 柴柯 龙綮新 王询章 《海南大学学报(自然科学版)》 CAS 2004年第1期61-69,共9页
本实验构建了2个用于杆状病毒AcMNPV(苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒)启动子及其调控序列研究的质粒载体:pF SBCAT和pF SBCATPpolh.以此为基础,结合目前对BmNPV(家蚕核多角体病毒)polh(多角体)基因和AcMNPVpolh基因上游增强序列的研究结果,... 本实验构建了2个用于杆状病毒AcMNPV(苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒)启动子及其调控序列研究的质粒载体:pF SBCAT和pF SBCATPpolh.以此为基础,结合目前对BmNPV(家蚕核多角体病毒)polh(多角体)基因和AcMNPVpolh基因上游增强序列的研究结果,构建了AcMNPVpolh基因上游增强序列部分缺失的瞬时表达载体;以cat为报告基因,利用瞬时转染和CATELISA的方法检测报告基因的表达活性,初步研究了对于polh启动子具有增强作用的AcMNPVpolh基因上游序列的结构.结果显示,与BmNPVpolh上游293bp序列同源性极高的AcMNPVpolh上游293bp片段对于polh启动子没有增强活性;CMVm启动子的AcMNPVpolh上游增强序列部分缺失之后不能够增强AcMNPVpolh启动子.因此,这一序列可能不再被缩短,也不大可能存在独立地起作用和更短的正、负调控元件. 展开更多
关键词 acmnpv polh 增强序列 部分缺失 杆状病毒 苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒 家蚕核多角体病毒 BMNPV
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从野桑蚕体内分离的NPV与BmNPV、AcMNPV间的RAPD分析
11
作者 李兵 沈卫德 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2003年第6期101-102,共2页
将野外收集的野桑蚕核型多角体病毒进行空斑筛选 ,纯化后的病毒通过碱裂解法抽提基因组DNA ,用家蚕核型多角体病毒 (BmNPV)和苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒 (AcMNPV)的基因组DNA作对照 ,用随机引物进行PCR扩增。结果表明 ,野桑蚕分离的NPV... 将野外收集的野桑蚕核型多角体病毒进行空斑筛选 ,纯化后的病毒通过碱裂解法抽提基因组DNA ,用家蚕核型多角体病毒 (BmNPV)和苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒 (AcMNPV)的基因组DNA作对照 ,用随机引物进行PCR扩增。结果表明 ,野桑蚕分离的NPV与BmNPV、AcMNPV存在较大的差异性 ,通过版本为 1.3b的Treecomw软件分析 ,表明野桑蚕体内的NPV与BmNPV的同源关系较近 ,而与AcMNPV的同源关系较远。 展开更多
关键词 野桑蚕 w—BmNPV BMNPV acmnpv RAPD
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AcMNPV e18基因酵母双杂交诱饵载体构建和转录自激活检测 被引量:3
12
作者 史瑞丽 周晓伟 黎路林 《湖北农业科学》 北大核心 2013年第10期2436-2438,2442,共4页
用PCR方法扩增苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica multiple nucleopolyhe-drovirus,AcMNPV)被膜蛋白ODV-E18基因,克隆至酵母双杂交诱饵载体pGBKT7构建诱饵质粒pG-BKT7-e18。将诱饵质粒分别转化酵母菌株Y187和AH109感受... 用PCR方法扩增苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica multiple nucleopolyhe-drovirus,AcMNPV)被膜蛋白ODV-E18基因,克隆至酵母双杂交诱饵载体pGBKT7构建诱饵质粒pG-BKT7-e18。将诱饵质粒分别转化酵母菌株Y187和AH109感受态细胞,被转化细胞在涂有X-gal的SD/-Trp营养缺陷型固体培养基上形成白色菌落;在SD/-Trp/-His和SD/-Trp/-Ade固体培养基上均不形成菌落,表明诱饵基因表达产物BD-E18在这两种细胞中都不能激活报告基因转录。pGBKT7-e18转化的Y187细胞在SD/-Trp营养缺陷型液体培养基中的生长速度与空载体转化细胞相同,显示BD-E18对酵母细胞无细胞毒性。结果表明,AcMNPV ODV-E18可能不直接参与对宿主细胞或病毒基因表达的调节,其编码基因可以作为诱饵基因通过筛查病毒宿主cDNA文库识别与其相互作用的蛋白质。 展开更多
关键词 苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus acmnpv) ODV-E18 酵母双杂交 自激活 细胞毒性
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AcMNPV类芋螺毒素多肽的抗菌活性分析 被引量:1
13
作者 曹青 吴岩 +3 位作者 刘永 吴俣 王文兵 朱姗颖 《生物学杂志》 CAS CSCD 2012年第6期29-31,共3页
类芋螺毒素(CTX)基因存在于多种杆状病毒,编码富含半胱氨酸的多肽。从AcMNPV中克隆了ctx基因,利用AcMNPV杆粒操作系统构建了重组病毒Ac-pFastBac1-Pie1-ctx-eGFP和Ac-pFastBac1-Pie1-ctx。绿色荧光蛋白介导的亚细胞定位显示AcMNPV CTX... 类芋螺毒素(CTX)基因存在于多种杆状病毒,编码富含半胱氨酸的多肽。从AcMNPV中克隆了ctx基因,利用AcMNPV杆粒操作系统构建了重组病毒Ac-pFastBac1-Pie1-ctx-eGFP和Ac-pFastBac1-Pie1-ctx。绿色荧光蛋白介导的亚细胞定位显示AcMNPV CTX定位于Tn细胞的细胞膜;抑菌实验表明,重组病毒Ac-pFastBac1-Pie1-ctx感染的胞外产物对金黄色葡萄球菌、微球菌、短小芽孢杆菌等临床致病菌具有显著的抗菌活性,但其作用机制尚需进一步阐明。 展开更多
关键词 类芋螺毒素(CTX) acmnpv 亚细胞定位 抗菌活性
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含外源类蜗牛毒素基因的AcMNPV的虫体感染性研究 被引量:2
14
作者 卢玉蓉 冯枞棣 +5 位作者 吴东 孙修炼 邓菲 袁丽 J.M.Vlak 胡志红1 《中国病毒学》 CSCD 2004年第3期276-280,共5页
类蜗牛毒素基因(conotoxinlike,ctl)是在一些杆状病毒基因组中存在的与蜗牛毒素类似的一类基因,其功能尚不清楚。本文利用苜蓿银纹夜蛾核多角病毒(AcMNPV)bacmid表达系统构建了含油桐尺蠖核多角体病毒(BusuNPV)ctl基因的重组病毒AcBac-p... 类蜗牛毒素基因(conotoxinlike,ctl)是在一些杆状病毒基因组中存在的与蜗牛毒素类似的一类基因,其功能尚不清楚。本文利用苜蓿银纹夜蛾核多角病毒(AcMNPV)bacmid表达系统构建了含油桐尺蠖核多角体病毒(BusuNPV)ctl基因的重组病毒AcBac-ph-ctl。在细胞水平上对ctl基因的RT-PCR分析表明,该基因转录出mRNA。在甜菜夜蛾体内进行了生物活性测定,结果表明AcBac-ph-ctl与对照野生型AcMNPV的LC50,ST50无显著性差异,表明在此系统中,外源的CTL无杀虫增效性能。 展开更多
关键词 类蜗牛毒素基因(ctl) acmnpv BACMID LC50 ST50 转录 生物测定
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AcMNPV介导BmKIT和组织蛋白酶协同表达对Sf9细胞凋亡的分析 被引量:1
15
作者 赵洁 梁爱华 付月君 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2015年第1期118-122,共5页
为了研究Bm K IT提高Ac MNPV抗虫活性的作用机制,将Bm K IT基因插入到Ac MNPV中形成重组病毒。采用重组单价病毒Ac MNPV-Bm K IT(IE1)、Ac MNPV-Bm K IT(P10)、Ac MNPV-Bm K IT(PH)和一种重组双价病毒Ac MNPV-Bm K IT(P10)-vcath(PH),... 为了研究Bm K IT提高Ac MNPV抗虫活性的作用机制,将Bm K IT基因插入到Ac MNPV中形成重组病毒。采用重组单价病毒Ac MNPV-Bm K IT(IE1)、Ac MNPV-Bm K IT(P10)、Ac MNPV-Bm K IT(PH)和一种重组双价病毒Ac MNPV-Bm K IT(P10)-vcath(PH),通过四唑盐比色法(MTT)和蛋白质印迹法(Western Blot)分析了Bm K IT在Ac MNPV的3个启动子调控下对Sf9细胞增殖和细胞凋亡的影响,结果显示,感染病毒36,48 h Bm K IT在不同启动子调控下表达量从高到低依次为PH、P10、IE1。同时分析了Ac MNPV介导的Bm K IT与组织蛋白酶的协同表达对昆虫Sf9细胞增殖和调亡的机制,结果表明,Ac MNPV-Bm K IT(P10)-vcath(PH)处理组对Sf9细胞抑制率比Ac MNPV-Bm K IT(P10)处理组平均提高了14.5%,凋亡相关蛋白c-Myc、cleaved-Caspase3、Bax表达量增加,Bcl-2表达量减少。 展开更多
关键词 acmnpv BMK IT 组织蛋白酶 协同作用
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TnGV增强蛋白在AcMNPV中的表达和活性分析 被引量:4
16
作者 李志广 尹隽 钟江 《中国病毒学》 CSCD 2002年第4期326-330,共5页
为了研究杆状病毒增强蛋白的活性基团 ,本文构建了分别表达三种N端部分缺失的粉纹夜蛾颗粒体病毒增强蛋白的重组杆状病毒 ,这三种蛋白在N端分别缺失了 15 0 ,186和 2 5 0个氨基酸。用重组病毒感染Tn 5B1 4细胞 ,成功地表达了这三种蛋白 ... 为了研究杆状病毒增强蛋白的活性基团 ,本文构建了分别表达三种N端部分缺失的粉纹夜蛾颗粒体病毒增强蛋白的重组杆状病毒 ,这三种蛋白在N端分别缺失了 15 0 ,186和 2 5 0个氨基酸。用重组病毒感染Tn 5B1 4细胞 ,成功地表达了这三种蛋白 ,并得到了纯化的蛋白质。通过体外降解围食膜的方法检测这些部分缺失的增强蛋白的活性 ,结果证实这三种蛋白均失去了增强蛋白的降解围食膜粘蛋白的活性。这一结果表明 。 展开更多
关键词 TnGV增强蛋白 acmnpv 表达 活性分析 杆状病毒 结构 功能 生物防治
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利用Red/ET系统结合rpsL反向筛选敲除AcMNPV lef-10基因 被引量:1
17
作者 白玉 许晓东 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2015年第12期181-190,198,共11页
【目的】利用Red/ET系统结合rpsL反向筛选建立苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)晚期表达因子lef-10点突变载体,为进一步研究AcMNPVlef-10的功能奠定基础。【方法】利用Red/ET系统结合rpsL反向筛选BAC修饰系统对AcMNPV lef-10进行点突... 【目的】利用Red/ET系统结合rpsL反向筛选建立苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)晚期表达因子lef-10点突变载体,为进一步研究AcMNPVlef-10的功能奠定基础。【方法】利用Red/ET系统结合rpsL反向筛选BAC修饰系统对AcMNPV lef-10进行点突变,由于lef-10和必需基因vp1054有重叠,所以在敲除lef-10时只能通过引进点突变使lef-10失活,避免影响vp1054的正常表达。首先,构建rpsL-AMP筛选盒,然后在野生型AcBacmid中引进点突变(方法是通过2次Red/ET重组:第1次重组在野生型AcBacmid lef-10中引进rpsL-AMP抗性筛选标记,形成一次重组Bacmid,第2次重组是在一次重组Bacmid中引进含点突变的lef-10片段),再利用链霉素反向筛选去除rpsL-AMP抗性筛选标记,同时引入相应的点突变。将从lef-10基因点突变重组菌中提取得到的AcBacmid与质粒pTriEx1.1和pTriEx-innateP-lef10分别共转染草地贪夜蛾Sf9细胞,同时用野生型AcBacmid与质粒pTriEx1.1共转染Sf9细胞作为对照,显微镜下观察病毒的复制情况,确定lef-10基因是否为AcMNPV的必需基因。【结果】通过对重组Bacmid的PCR鉴定和点突变序列的测定,证明AcMNPVlef-10基因已经发生点突变;通过共转染试验发现,随着转染时间的延长,lef-10补回型病毒和野生型病毒一样,均能在Sf9细胞中复制产生具有感染性的子代病毒粒子BV,从而对邻近细胞造成二次感染,使得细胞死亡,且lef-10补回型重组病毒产生感染性病毒粒子的能力与野生型基本一致;而由于lef-10缺失型重组病毒不能产生有感染性的病毒粒子,所以在被lef-10缺失型重组病毒转染的细胞中,细胞数目不会随着转染时间的增加而发生明显改变。【结论】利用Red/ET重组系统结合rpsL反向筛选系统可以在Ac MNPVlef-10基因中引入点突变,且lef-10是杆状病毒生活周期中的一个必需基因,其缺失会影响杆状病毒的复制。 展开更多
关键词 苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(acmnpv) lef-10 Red/ET重组系统 rpsL反向筛选系统 基因敲除
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杆状病毒AcMNPV中Ac109蛋白的抗虫功能分析 被引量:3
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作者 许书美 付月君 《山西农业科学》 2018年第2期155-158,171,共5页
为研究苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)中病毒增殖因子Ac109对鳞翅目害虫甜菜夜蛾幼虫的抗虫效应,采用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统构建了重组病毒AcMNPV-Ac109-EGFP。免疫印迹和荧光显微镜观察结果证实,重组病毒AcMNPV-Ac109-EGFP... 为研究苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)中病毒增殖因子Ac109对鳞翅目害虫甜菜夜蛾幼虫的抗虫效应,采用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统构建了重组病毒AcMNPV-Ac109-EGFP。免疫印迹和荧光显微镜观察结果证实,重组病毒AcMNPV-Ac109-EGFP侵染昆虫Sf9细胞后Ac109的表达量和细胞的荧光强度随着侵染时间延长而显著增加。抗虫试验表明,与AcMNPV处理组、PBS对照组相比,AcMNPV-Ac109-EGFP病毒处理组的幼虫体质量增长缓慢,有较高的致死率和低的蛹化率及羽化率;AcMNPV与AcMNPV-Ac109-EGFP病毒处理组的最终死亡率分别为58.33%和73.33%;蛹化率分别为41.667%和25.000%;羽化率分别为20.00%和11.67%,说明Ac109可提高病毒对甜菜夜蛾幼虫的抗虫性。以上结果构建了1株高抗虫活性的重组病毒,并为这个重组病毒潜在的应用价值提供了试验依据。 展开更多
关键词 苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(acmnpv) Bac-to-Bac杆状病毒表达系统 病毒增殖因子Ac109 草地贪夜蛾卵巢细胞Sf9 甜菜夜蛾
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AcMNPV核衣壳的形态发生 被引量:3
19
作者 陈建国 滕俊琳 翟中和 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第2期83-86,共4页
报道了缺失多角体蛋白基因的AcMNPV在sf9细胞内核衣壳的形态发生过程。病毒衣壳蛋白首先装配成许多呈束状排列的直径为34nm中空长管状结构,然后是病毒DNA进入管内,装有DNA的长管按一定的长度间隔断开,形成成束的核衣壳,每个核衣壳的大小... 报道了缺失多角体蛋白基因的AcMNPV在sf9细胞内核衣壳的形态发生过程。病毒衣壳蛋白首先装配成许多呈束状排列的直径为34nm中空长管状结构,然后是病毒DNA进入管内,装有DNA的长管按一定的长度间隔断开,形成成束的核衣壳,每个核衣壳的大小约34×260nm,最后成束的核衣壳被囊膜包被形成完整的多粒包埋型病毒粒子。 展开更多
关键词 杆状病毒 昆虫病毒 核衣壳 形态发生
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AcMNPV LEF-10形成难解离复合物的特性研究
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作者 朱孔利 赵钰 +1 位作者 蒋向 许晓东 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2014年第7期210-216,共7页
【目的】将已经成功构建的AcMNPVlef-10表达载体在原核和真核表达系统中表达,研究其形成高分子复合物的特性,为揭示其高分子复合物的形成机理奠定基础。【方法】将先前成功构建的pTriEx-lef-10、pTriExlef-10-1-52、pTriEx-lef-10-27-7... 【目的】将已经成功构建的AcMNPVlef-10表达载体在原核和真核表达系统中表达,研究其形成高分子复合物的特性,为揭示其高分子复合物的形成机理奠定基础。【方法】将先前成功构建的pTriEx-lef-10、pTriExlef-10-1-52、pTriEx-lef-10-27-78重组质粒分别转化至大肠杆菌BL21(DE3)和Sf 9细胞中诱导表达,产物经纯化、浓缩后,进行SDS-PAGE和Western blot检测分析;利用SDD-AGE技术估测LEF-10蛋白的分子质量;用透射电子显微镜分别观察原核和真核系统表达的LEF-10蛋白的外部形态。【结果】Western blot分析显示,LEF-10蛋白能形成高分子复合物,而C末端、N末端缺失和C末端融合GFP都可以阻断或部分阻断LEF-10高分子复合物的形成;苯酚-氯仿-异戊醇能部分打开LEF-10蛋白高分子复合体;利用SDD-AGE技术初步估测LEF-10高分子复合体分子质量集中在520~3 250ku;透射电子显微镜观察原核和真核系统表达的LEF-10,可见蛋白复合体大小不均一,呈现球形或者近球形。【结论】LEF-10蛋白在原核和真核表达系统中,都会形成高分子复合体,该复合体在强变性剂作用下,也不能完全打开,推测该复合体可能以共价键形式结合。 展开更多
关键词 acmnpv LEF-10 原核表达 真核表达
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