ACTHR在介导血管紧张素Ⅱ和氯化钾对醛固酮分泌调控中的实验研究

目的研究血管紧张素Ⅱ（AT-Ⅱ）和氯化钾刺激人肾上腺皮质癌H295R细胞后醛固酮合成酶（CYP11B2）mRNA及醛固酮激素的改变情况，并探讨促肾上腺皮质激素受体（ACTHR）在介导该反应中的作用。方法用慢病毒包装的ACTHR高表达载体感染H295R细胞作为实验组。空载体病毒转染组细胞为对照组。应用免疫印迹Westernblot和荧光定量PCR法验证ACTHR表达情况。分别用100nmol／LAT-Ⅱ及16mmol／L氯化钾刺激各组细胞，刺激24h后测定CYPllB2mRNA表达水平，对比2组细胞CYP11B2mRNA增幅情况。用ELISA试剂盒测定醛固酮激素的含量，对比2组细胞醛固酮增幅情况。结果实验组细胞ACTHR在蛋白水平和mRNA水平分别增加2．4倍和18倍（P〈0．05）。AT-Ⅱ刺激24h后实验组细胞CYP11B2 mRNA表达水平较对照组细胞高1．7倍，2组细胞醛固酮激素水平分别为（121．98±8．31）ng／L和（104．05±6．88）ng／L，前者增幅为后者的2．06倍（—P〈0．05）；氯化钾刺激各组细胞24h后，实验组细胞CYP11B2mRNA表达水平较对照组细胞高19．2倍，2组细胞醛固酮激素水平分别为（137．67±10．35）ng／L和（104．05±6．88）ng／L，前者增幅为后者的3．13倍（P〈0．05）。结论ACTHR高表达可增加醛固酮对AT-Ⅱ和氯化钾刺激的敏感性，有望成为研究原发性醛固酮增多症重要突破口。

人参皂甙通过垂体—肾上腺轴调整应激期NK细胞的受抑作用

本文主要探讨了人参皂甙抗手术应激时,NK细胞活性的调节与垂体—肾上腺激素分泌有关的机理。实验证实,人参皂甙能部分拮抗应激所致的小鼠脾NK细胞活性下降。其可能机制是,手术应激引起小鼠外周血ACTH、皮质酮含量增加,同时,脾细胞上高亲和力ACTHR在应激期表达也增加,因此,应激期升高的ACTH、皮质酮等作用在脾脏免疫活性细胞,导致免疫功能抑制;而人参皂甙能部分抑制应激期ACTH、皮质酮的增加,提高免疫细胞功能。由此而知,人参皂甙拮抗应激期NK细胞活性下降,与降低垂体—肾上腺轴活动有关。

免疫细胞ACTH受体测定方法建立及大鼠胸腺ACTH受体的发现

本文介绍了免疫细胞ACTH受体(ACTHR)测定法并首次报道了大鼠胸腺细胞具有高亲和力和低亲和力两类ACTHR。方法学研究表明,胸腺细胞数量以1～2×10~6个/管、反应时间20分钟较佳;竞争结合实验结果表明,非标记ACTH的IC_(50)值为800nM;当加入的^(125)I-ACTH为2.5 nM时,胸腺细胞ACTHR已基本饱和,根据饱和曲线进行Scatchard作图分析表明,大鼠胸腺细胞具有两类亲和力不同的ACTHR。应激可致胸腺细胞ACTHR急骤减少。