延胡索通过靶向CXCL17激活AMPK信号通路下调PD-L1抑制EB病毒感染诱导的胃癌免疫逃逸

目的探讨延胡索对EB病毒(EBV)阳性胃癌细胞免疫逃逸的作用及其靶向CXCL17影响EBV阳性胃癌细胞免疫逃逸的机制。方法GEO2R在线分析软件筛选EBV阳性胃癌组织中的差异表达基因。采用EBV阴性胃癌AGS细胞和EBV阳性胃癌SUN-719细胞进行实验。实时qPCR和Western blotting检测EBV阴性和EBV阳性胃癌细胞中CXCL17表达。将CXCL17 siRNA转染EBV阳性胃癌细胞,Western blotting检测细胞PD-L1表达;将EBV阳性胃癌细胞与T细胞共培养,CCK-8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率。用延胡索提取物(2、4、8μg/mL)处理EBV阳性胃癌细胞,Western blotting检测细胞CXCL17和PD-L1表达;将EBV阳性胃癌细胞与T细胞共培养,CCK-8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率。将CXCL17过表达质粒转染延胡索提取物(8μg/mL)处理的EBV阳性胃癌细胞,Western blotting检测细胞PD-L1和p-AMPK表达;将EBV阳性胃癌细胞与T细胞共培养,CCK-8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果CXCL17在EBV阳性胃癌组织和细胞中表达上调(P<0.05)。沉默CXCL17降低EBV阳性胃癌细胞PD-L1表达,抑制与T细胞共培养的EBV阳性胃癌细胞增殖并促进细胞凋亡(P<0.05)。延胡索处理降低EBV阳性胃癌细胞CXCL17和PD-L1表达,抑制与T细胞共培养的EBV阳性胃癌细胞增殖并促进细胞凋亡(P<0.05);过表达CXCL17逆转了延胡索处理对EBV阳性胃癌细胞PD-L1表达和细胞增殖的抑制作用及细胞凋亡的促进作用(P<0.05);过表达CXCL17还降低了延胡索处理的EBV阳性胃癌细胞p-AMPK表达(P<0.05)。结论CXCL17在EBV阳性胃癌细胞中表达上调,延胡索通过下调EBV阳性胃癌细胞CXCL17表达抑制胃癌细胞免疫逃逸,其机制可能与激活AMPK信号通路有关。

基于调控AMPK信号通路的中药治疗脑缺血再灌注损伤药理机制研究进展

脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia-reperfusion injury,CIRI)指脑血管缺血后血液再次恢复供应,导致脑组织进一步的损伤和功能障碍。目前,现代医学在CIRI的防治中取得了一定的进展,但仍然面临一些挑战和局限性。因此,寻找有效的干预措施来防治CIRI具有重要的临床价值。腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)及其下游蛋白是治疗CIRI的重要靶点,在细胞能量稳态调节中起着关键作用。中药具有多靶点、多途径和多效应的特点,可以激活AMPK信号通路级联反应,通过调节细胞自噬、氧化应激、炎症反应、细胞凋亡等来治疗CIRI,并取得一定成果。故文章总结了AMPK相关信号通路的结构与机制,详述其与CIRI的关系,并对中医药调控AMPK信号通路防治CIRI的研究现状进行系统性总结,以期为CIRI的中医防治及新药研发提供新的思路。

柴胡皂苷D调控CaMKKβ/AMPK信号通路介导ICCs细胞自噬的机制

目的探讨柴胡皂苷D调控CaMKKβ/AMPK信号通路,在功能性消化不良中对胃肠道Cajal间质细胞(Interstitial cells of Cajal,ICCs)细胞自噬的作用及机制。方法分离大鼠原代ICCs细胞,谷氨酸刺激构建ICCs自噬模型,免疫荧光检测Ca2+水平。将原代ICCs细胞分为对照组、模型组、模型+柴胡皂苷D组、模型+CaMKKβ抑制剂组、模型+柴胡皂苷D+CaMKKβ抑制剂组。透射电镜观察自噬体超微结构,ELISA检测Ghrelin和SP的水平,免疫荧光检测Ca2+和LC-3Ⅱ的表达,Western blot检测LC-3Ⅱ/Ⅰ、CaMKKβ、p-AMPK、Drp1、MFN2、IP3R和RyR的蛋白表达水平。结果谷氨酸诱导的模型组ICCs中LC-3Ⅱ荧光表达增强。柴胡皂苷D干预可降低Ca2+浓度,降低CaMKKβ、AMPK和MFN2水平(P<0.01),增加LC-3Ⅱ/Ⅰ、IP3R、RyR、Drp1、Ghrelin和SP水平(P<0.01)。柴胡皂苷D联合CaMKKβ抑制剂STO-609干预后效果更显著。结论柴胡皂苷D可通过CaMKKβ/AMPK信号通路介导Ca2+外流,影响ICCs细胞过度自噬及胃肠动力相关因子的表达。

车叶草苷调节SIRT1/AMPK信号通路对慢性阻塞性肺疾病大鼠氧化应激损伤的影响

目的探究车叶草苷(asperuloside,ASP)调节沉默信息调节因子-1(SIRT1)/腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)信号通路对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠氧化应激损伤的影响。方法随机选取12只大鼠作为对照组(Control组),其余采用香烟暴露诱导建立COPD大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组(Model组)、车叶草苷低剂量组[ASP-L,14 mg/(kg·d)ASP]、中剂量组[ASP-M,28 mg/(kg·d)ASP]、高剂量组[ASP-H,56 mg/(kg·d)ASP]、车叶草苷高剂量+SIRT1抑制剂组[ASP-H+EX527组,56 mg/(kg·d)ASP+4.38 mg/(kg·d)EX527],每组12只。测量大鼠的肺功能及肺湿干质量比(W/D);酶联免疫吸附测定(ELISA)检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、活性氧(ROS)水平;苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织病理变化;TUNEL检测肺组织凋亡情况;免疫组织化学检测抗髓过氧化物酶(MPO)表达;免疫印迹法检测SIRT1/AMPK信号通路相关蛋白表达。结果COPD大鼠成功建模,与Model组相比,ASP-L组、ASP-M组、ASP-H组大鼠气道阻力(RI)、W/D比值、细胞凋亡率、MDA、ROS水平、MPO光密度值降低(P<0.05),吸气流量峰值(PIF)、呼气流量峰值(PEF)、第1秒用力呼气容积(FEV1)/用力肺活量(FVC)比值、SOD、GSH-Px水平及SIRT1、p-AMPK/AMPK蛋白表达升高(P<0.05);HE染色结果显示ASP干预后COPD大鼠肺组织炎性浸润及肺组织结构变化减轻;EX527可减弱ASP-H对COPD大鼠肺组织损伤的改善作用。结论ASP可能通过激活SIRT1/AMPK信号通路,抑制肺组织氧化应激和细胞凋亡,改善COPD大鼠肺功能。

开化龙顶绿茶对高脂小鼠肝脂肪变性AMPK信号通路和肠道菌群的影响

目的:探究开化龙顶绿茶水提物对高脂饮食小鼠肝脂肪变性AMPK信号通路和肠道菌群紊乱的干预效果。方法:检测开化龙顶绿茶加工环节茶样主要功能成分动态变化趋势。适应性饲养30只小鼠1周后,随机将其分为正常组、高脂组和龙顶绿茶组,各10只,连续口服灌胃8周(正常组和高脂组灌胃生理盐水,龙顶绿茶组灌胃300 mg/kg bw的茶汤水提物),记录并分析小鼠体质量、Lee's指数、血糖水平、血脂、肝组织病理切片、肝组织AMPK信号通路和肠道菌群的变化。结果:在加工过程中,开化龙顶绿茶的主要功能成分均发生一定程度改变。与鲜叶相比,提香中茶多酚、游离氨基酸、咖啡碱和水分的含量分别降低了7.90%,6.20%,0.47%以及71.05 g/100 g,而可溶性糖和水浸出物的含量分别升高了0.01%和0.10%;与高脂组相比,龙顶绿茶组小鼠的体质量为26.67 g,Lee's指数为3.13,血糖曲线下面积为1505.25 mmol·min/L,血清生化指标如总胆固醇(TC)和总甘油三酯(TG)的含量分别为4.23 mmol/L和0.76 mmol/L,均表现出明显差异(P<0.05)。并且,开化龙顶绿茶水提物还能显著降低肝组织AMPK信号通路基因转录和蛋白表达水平(P<0.05);开化龙顶绿茶水提物可显著降低高脂小鼠肠道菌群中厚壁菌门与拟杆菌门的比值(P<0.05),并增加理研菌科、布劳特氏菌属和另枝菌属等有益菌种的相对丰度。结论:开化龙顶绿茶水提物干预高脂饮食小鼠肝脂肪变性AMPK信号通路和肠道菌群紊乱的效果明显。

原花青素通过SIRT1/AMPK信号通路对庆大霉素致大鼠急性肾损伤的改善机制

目的探究原花青素对庆大霉素致大鼠急性肾损伤(AKI)的改善机制。方法通过腹腔注射硫酸庆大霉素构建AKI大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为模型对照组、盐酸贝那普利5 mg/kg组(阳性对照)、原花青素50 mg/kg组、原花青素100 mg/kg组、原花青素200 mg/kg组,每组10只;另取10只正常大鼠作为正常对照组。各给药组大鼠灌胃相应药液,正常对照组和模型对照组大鼠灌胃等体积生理盐水。所有大鼠每天给药1次,连续28 d。末次给药后,检测血清中血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及24 h尿液中尿蛋白(UP)水平;计算肾脏指数;观察大鼠肾组织病理变化并进行病理评分;检测肾组织细胞凋亡率和胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、B细胞淋巴瘤2基因相关X蛋白(Bax)表达水平,以及沉默信息调节因子1(SIRT1)、AMP活化蛋白激酶(AMPK)蛋白的磷酸化水平。结果与模型对照组比较,各给药组大鼠SCr、BUN、UP、MDA水平,肾脏指数,肾组织病理评分,肾组织细胞凋亡率及肾组织中Caspase-3、Bax蛋白表达水平均显著降低,SOD、GSH-Px水平和肾组织中SIRT1、AMPK蛋白的磷酸化水平均显著升高(P<0.05),且原花青素的作用存在剂量依赖性(P<0.05);原花青素200 mg/kg组与盐酸贝那普利5 mg/kg组比较,上述指标差异均无统计学意义(P>0.05)。结论原花青素对AKI大鼠的改善作用可能与其激活SIRT1/AMPK信号通路进而抑制氧化应激有关。

基于SIRT1/AMPK信号通路探究壮宣饮对H1N1肺炎小鼠肺泡上皮细胞自噬和凋亡的影响

目的:基于沉默信息调节因子1(silencing information regulator 1,SIRT1)/腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine activated monophosphate protein kinase,AMPK)信号通路探究壮宣饮对H1N1肺炎小鼠肺泡上皮细胞自噬和凋亡的影响。方法:随机选择6只小鼠作为对照组,其余小鼠通过鼻内滴入100μL甲型流感病毒(influenza A virus,IAV)[A/PuertoRico/8/34(PR8,H1N1)病毒]溶液建立H1N1肺炎小鼠模型。将造模成功小鼠随机平分为H1N1组、低-壮宣饮组(7.16 g·kg^(-1))、中-壮宣饮组(14.33 g·kg^(-1))、高-壮宣饮组(28.66 g·kg^(-1))、高-壮宣饮+Compound C组(28.66 g·kg^(-1)壮宣饮+0.25 mg·kg^(-1) SIRT1/AMPK信号通路抑制剂Compound C),每组均6只,每天上、下午各1次,连续5天,H1N1组和对照组给予等量生理盐水。ELISA法检测BALF中炎性因子水平;HE染色检测肺组织病理变化;分离和培养小鼠肺泡上皮细胞;流式细胞术检测肺泡上皮细胞凋亡;Western blot检测肺泡上皮细胞自噬蛋白、SIRT1/AMPK信号通路相关蛋白表达。结果:对照组肺组织结构正常,而H1N1组肺组织炎性细胞浸润到间质中、肺泡严重出血、塌陷、间质水肿、肺泡壁增厚,H1N1组较对照组γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平、肺泡上皮细胞凋亡率显著升高(P<0.05),AMPK、SIRT1蛋白水平、微管相关蛋白1轻链3(microtubule associated protein 1 light chain 3,LC3)-Ⅱ/Ⅰ、苄氯素1(benzyl chloride 1,Beclin 1)蛋白水平显著下降(P<0.05);与H1N1组相比,低-壮宣饮组、中-壮宣饮组、高-壮宣饮组IFN-γ、IL-6、TNF-α水平、肺泡上皮细胞凋亡率显著下降(P<0.05),AMPK、SIRT1蛋白水平、LC3-Ⅱ/Ⅰ、Beclin 1蛋白水平显著升高(P<0.05),且呈剂量相关性。Compound C逆转了高-壮宣饮的有利影响。结论:壮宣饮可能通过调控SIRT1/AMPK信号通路对H1N1肺炎小鼠肺泡上皮细胞自噬和凋亡起到改善作用。

紫檀芪调节LKB1/AMPK信号通路减轻缺氧缺血性脑损伤新生大鼠氧化应激损伤

目的:分析紫檀芪调节肝激酶B1/腺苷酸活化蛋白激酶(LKB1/AMPK)信号通路减轻缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠氧化应激损伤的机制。方法:构建72只HIBD新生大鼠模型,并分为模型组、紫檀芪低剂量组(15 mg/kg)、紫檀芪高剂量组(30 mg/kg)、紫檀芪高剂量+compound C组(紫檀芪30 mg/kg+compound C 20 mg/kg),每组18只,另选取12只新生大鼠为假手术组。采用水迷宫实验评估大鼠学习与记忆能力;红四氮唑(TTC)染色法测定大鼠脑梗死面积;测定大鼠脑含水量;检测大鼠脑组织谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平;蛋白质印迹法测定海马组织LKB1/AMPK信号通路相关蛋白。结果:与假手术组相比,模型组大鼠逃避潜伏期加长,脑梗死面积、脑含水量、脑组织MDA水平升高,穿越平台次数减少,脑组织上清液SOD、GSH-Px及海马组织p-LKB1/LKB1、p-AMPK/AMPK、Nrf2水平降低(P<0.05)。与模型组相比,紫檀芪低剂量组、紫檀芪高剂量组大鼠逃避潜伏期缩短,脑梗死面积、脑含水量、脑组织MDA水平降低,穿越平台次数增多,脑组织上清液SOD、GSH-Px及海马组织p-LKB1/LKB1、p-AMPK/AMPK、Nrf2水平升高(P<0.05),且紫檀芪低、高剂量组比较差异有统计学意义(P<0.05)。与紫檀芪高剂量组相比,紫檀芪高剂量+compound C组大鼠逃避潜伏期加长,脑含水量、脑组织MDA水平升高,穿越平台次数减少,脑组织上清液SOD、GSH-Px及海马组织p-LKB1/LKB1、p-AMPK/AMPK、Nrf2水平降低(P<0.05)。结论:紫檀芪可能通过促进LKB1/AMPK/Nrf2信号通路介导的抗氧化应激,减轻新生大鼠HIBD。

AMPK信号通路和NLRP3炎症小体在肝衰竭中的研究进展

肝衰竭是由多种因素导致的严重肝脏结构和功能损伤,且是一个涉及“三重打击”的复杂病理生理过程。在机体内,AMPK信号在调节细胞能量平衡中起着重要作用。肝脏作为机体的代谢工厂,对能量的产生和利用有着严格的调控。此外,NLRP3炎症小体也在众多炎症性疾病发生发展过程中扮演着重要角色。而AMPK信号通路和NLRP3小体之间存在交互影响。本文就AMPK介导的多种信号通路、NLRP3炎症小体的激活效应及二者之间的相互作用在肝衰竭过程中的研究进展做一综述。

橄榄苦苷通过激活AMPK信号通路缓解小鼠妊娠糖尿病

目的该研究的目的是探究植物来源的橄榄苦苷对GDM小鼠的作用及相关机制。方法构建GDM小鼠模型,腹腔注射橄榄苦苷(10 mg·kg^(-1)·d^(-1)),记录体质量和血糖水平。通过ELISA和RT-qPCR检测白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的水平来评估GDM小鼠的炎症水平,通过Western blot检测腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)信号通路的活化,通过比较产仔数和出生体质量来分析妊娠结局。结果橄榄苦苷可以减轻GDM小鼠体质量的升高,并有效降低血糖,恢复胰岛素敏感性。橄榄苦苷治疗还可以降低氧化应激和炎症水平,激活GDM小鼠肝脏组织中的AMPK信号通路,并且橄榄苦苷治疗显著改善了小鼠妊娠结局。结论橄榄苦苷可以有效缓解GDM症状并改善模型小鼠的妊娠结局,这种效果是通过减弱由AMPK信号通路介导的氧化应激和炎症来实现的。

基于AMPK信号通路的附子在不同机体状态下对神经—内分泌—免疫网络的生物学效应表达机制研究

目的基于腺苷酸激活蛋白激酶(AMP-activiated protein kinase,AMPK)信号通路,研究附子在寒热不同机体状态下对神经—内分泌—免疫(neural-endocrine-immune,NEI)网络的生物效应表达机制。方法84只雄性KM小鼠随机分为空白组、虚热模型组、虚寒模型组、虚热附子低剂量(10 g/kg)组、虚热附子高剂量(20 g/kg)组、虚寒附子低剂量(10 g/kg)组、虚寒附子高剂量(20 g/kg)组,每组12只。采用醋酸地塞米松建立虚热模型、氢化可的松琥珀酸钠建立虚寒模型,各组灌胃相应药物,连续14日。采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测环腺苷酸(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)、环鸟苷酸(cyclic guanosine monophosphatec,cGMP)、去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)、多巴胺(dopamine,DA)、5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)、三碘甲状腺原氨酸(triiodothyronine,T3)、甲状腺素(thyroxine,T4)、补体C3(complement 3,C3)、C4、免疫球蛋白G(immunoglobin G,IgG)、IgM;通过反转录—荧光定量PCR法(reverse transcript quantitative PCR,RT-qPCR)检测心脏组织脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FASN)、6-磷酸果糖激酶-2/果糖-2,6-二磷酸酶3(6-phosphofructo-2-kinase/fructose-2,6-biphosphatase 3,PFKFB3)、硬脂酰辅酶A去饱和酶1(stearoyl coenzyme A desaturase 1,SCD1)、胰岛素受体底物2(insulin receptor substrate,IRS2)的mRNA表达。结果与虚寒模型组比较,附子高剂量能够显著升高虚寒证小鼠的环核苷酸cAMP、cAMP/cGMP含量(P<0.01),神经递质NE、DA、5-HT含量(P<0.01),内分泌激素T3、T4含量(P<0.01),免疫因子C3、C4、IgG、IgM含量(P<0.01),显著降低虚寒证小鼠cGMP含量(P<0.01),FASN、PFKFB3、SCD1、IRS2的mRNA表达(P<0.01,P<0.05,P<0.01,P<0.01);与虚热模型比较,附子对虚热证小鼠的FASN、SCD1、PFKFB3的mRNA表达则无统计学意义。结论辛热中药附子作用于寒热不同机体状态下通过调控AMPK信号通路上FASN、PFKFB3、SCD1基因mRNA表达进而影响NEI网络的生物学效应表达不同,并且无论是虚寒状态还是虚热状态,附子均能显著抑制IRS2的mRNA表达,可能是其“效—毒”效应表达不同的机制。

基于TLR4/MyD88/AMPK信号通路探索“从风论治”治法治疗糖尿病肾病的作用机制

目的基于TLR4/MyD88/AMPK信号通路探索“从风论治”治法治疗糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)的作用机制。方法db/db小鼠分为对照组、糖尿病肾病组、干预组,干预时间为8周。留取血清、尿液,检测24小时尿蛋白定量、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达水平。留取肾组织,光镜下观察肾组织病理改变,同时采用Western blot法及免疫组织化学法检测肾组织Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)、髓样分化因子(myeloid differentiation factor 88,MyD88)、AMP活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ-辅激活因子1-α(peroxisome proliferator-activated receptorγcoactivator 1-alpha,PGC-1α)蛋白的相对表达情况。结果干预组24小时尿蛋白在药物干预后明显减少,且干预组与糖尿病肾病组对比差异有统计学意义。Elisa结果显示:干预组与糖尿病肾病组相比,db/db小鼠血清中IL-6水平与TNF-α水平均有降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。对照组肾组织的肾小球结构完整,糖尿病肾病组系膜细胞及系膜基质均增生,间质少量炎细胞浸润,干预组较糖尿病肾病组有减轻。Western blot及免疫组化结果显示:干预组TLR4、MyD88蛋白表达程度明显低于糖尿病肾病组(P<0.01);干预组p-AMPK、PGC-1α蛋白的表达程度显著高于糖尿病肾病组(P<0.01),而干预组AMPK蛋白的表达水平与糖尿病肾病组差异无统计学意义(P>0.05)。结论“从风论治”治法通过TLR4/MyD88/AMPK信号通路能够减轻DKD炎性因子的表达延缓DKD进展。

黄芪总皂苷调控LKB1/AMPK信号通路对人乳腺癌细胞增殖、凋亡、周期的影响及机制

目的 基于肝激酶(LK)B1/磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)信号通路探讨黄芪总皂苷对人类乳腺癌细胞增殖、凋亡及周期的影响及作用机制。方法 以人乳腺癌细胞ZR-75-1为研究对象,通过噻唑蓝(MTT)法观察人乳腺癌细胞ZR-75-1增殖活力变化;苏木素-伊红(HE)染色观察人乳腺癌细胞ZR-75-1形态变化;流式术检测人乳腺癌细胞ZR-75-1凋亡率及细胞周期变化;RT-聚合酶链反应(PCR)检测人乳腺癌细胞ZR-75-1 LKB1、AMPK mRNA水平;Western印迹检测人乳腺癌细胞ZR-75-1 LKB1、AMPK蛋白表达。结果 乳腺癌细胞ZR-75-1的增殖受到黄芪总皂苷的影响,随黄芪总皂苷剂量(0、50、100、150 mg/μl)攀升,癌细胞增殖抑制率逐渐强,差异有统计学意义(P<0.05)。乳腺癌细胞ZR-75-1的凋亡受到黄芪总皂苷影响,黄芪总皂苷剂量越大,乳腺癌细胞ZR-75-1的凋亡率越高,差异有统计学意义(P<0.05)。乳腺癌细胞ZR-75-1的细胞周期,随黄芪总皂苷剂量攀升,G0/G1期细胞比例明显增加,S期、G2期明显降低。受黄芪总皂苷影响,乳腺癌细胞ZR-75-1 LKB1、AMPK mRNA及蛋白表达上升,黄芪总皂苷剂量越高,LKB1、AMPK mRNA表达上升越明显,差异有统计学意义(P<0.001)。结论 黄芪总皂苷能够抑制人乳腺癌细胞ZR-75-1的增殖活力,诱导人乳腺癌细胞ZR-75-1凋亡并在细胞增殖周期G0/G1期中阻滞,其中的作用机制与LKB1、AMPK信号通路密切相关。

表没食子儿茶素没食子酸酯激活SIRT6/AMPK信号通路改善果糖饮食诱导小鼠非酒精性脂肪性肝病的作用研究

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对果糖饮食诱导非酒精性脂肪性肝病小鼠的作用及其机制。方法 将32只雌性C56BL/6小鼠随机分为对照组、模型组及EGCG低、高剂量组(50、100 mg·kg^(-1)),每组8只。模型组及EGCG给药组均给予30%果糖水饲养,对照组给予正常饮用水;EGCG给药组按照设定剂量灌胃给药,每日1次,连续10周。采用比色法测定血清中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)的活力,以及血清、肝组织中甘油三酯(TG)的含量;苏木素-伊红(HE)染色和油红O染色法观察肝脏脂肪变性和脂质蓄积变化;RT-qPCR法检测肝脏中胆固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1c)、脂肪酸合成酶(FASN)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)mRNA表达;Western Blot法检测肝脏中沉默调节蛋白6(SIRT6)、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶α(p-AMPKα)、SREBP-1c、FASN、ACC蛋白表达;免疫组织化法检测肝脏中FASN、ACC蛋白表达;采用分子对接技术观察EGCG与SIRT6蛋白的相互作用。结果 与对照组比较,模型组小鼠血清AST、ALT活力以及血清、肝组织中TG的含量显著升高(P<0.01),肝脏脂肪样变性严重并伴有大量脂质蓄积;肝脏SIRT6、p-AMPKα蛋白表达水平显著降低(P<0.01)、SREBP-1c、FASN、ACC等脂肪酸从头合成关键因子mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,EGCG给药组小鼠血清AST、ALT活力以及血清、肝组织中TG的含量明显降低(P<0.05,P<0.01),肝脏脂肪样变性和脂质蓄积程度明显减轻;肝脏SIRT6、p-AMPKα蛋白表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01),SREBP-1c、FASN、ACC mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01)。分子对接结果显示,EGCG与SIRT6蛋白对接的结合自由能为-7.8 kcal·mol-1,具有较好的相互作用。结论 EGCG能够改善果糖饮食诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝病,可能与其通过激活SIRT6/AMPK信号通路抑制脂肪酸从头合成有关。

甘草素调节LKB1/AMPK信号通路对冠心病大鼠的心脏保护作用研究

目的探讨甘草素(Liq)调节肝激酶B1(LKB1)/腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)信号通路对冠心病大鼠的心脏保护作用。方法Wistar大鼠随机分为对照组及造模组,造模组通过高脂饲料喂养以及腹腔注射垂体后叶素建立冠心病大鼠模型,将造模成功的冠心病大鼠随机分为冠心病组、Liq低剂量(Liq-L)组(100 mg/kg Liq)、Liq高剂量(Liq-H)组(300 mg/kg Liq)、Liq-H+Radicicol组(300 mg/kg Liq+40 mg/kg Radicicol)。干预结束后,检测心功能[左心室收缩末期直径(LVSD)、射血分数(EF)、左心室舒张末期直径(LVDD)和左心室缩短分数(FS)]及血脂水平[总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)];ELISA检测血清中炎性因子[白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α]及氧化应激因子[谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)]水平;分离心脏组织,HE染色观察组织病理变化;Western Blot检测p-AMPK/AMPK、LKB1表达水平。结果与对照组相比,冠心病组大鼠心脏组织排列紊乱,有大量炎性细胞浸润,大鼠IL-1β、IL-6、TNF-α水平、TC、TG、LDL、LVSD、LVDD、MDA显著增加,p-AMPK/AMPK、LKB1表达、HDL、EF、FS、SOD、GSH显著降低(P<0.05);与冠心病组相比,Liq-L组、Liq-H组病理损伤得到缓解,IL-1β、IL-6、TNF-α水平、TC、TG、LDL、LVSD、LVDD、MDA显著降低,p-AMPK/AMPK、LKB1表达、HDL、EF、FS、SOD、GSH显著增加(P<0.05);与Liq-H组相比,Liq-H+Radicicol组病理损伤加重,IL-1β、IL-6、TNF-α水平、TC、TG、LDL、LVSD、LVDD、MDA显著增加,p-AMPK/AMPK、LKB1表达、HDL、EF、FS、SOD、GSH显著降低(P<0.05)。结论Liq可能通过激活LKB1/AMPK信号通路发挥对冠心病大鼠心脏的保护作用。

芝麻酚通过AMPK信号通路调控巨噬细胞极化减轻脂肪组织炎症

目的探讨芝麻酚(sesamol,SEM)对高脂饮食诱导的肥胖小鼠脂肪组织炎症的影响及对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞极化的调控分子机制。方法将C57BL/6J小鼠随机分成正常对照组、肥胖模型对照组和SEM干预组。干预结束后取小鼠血清和脂肪组织,ELISA法测定小鼠血清和脂肪组织中炎症因子、抗炎因子及趋化因子的分泌水平,Western blot法测定脂肪组织巨噬细胞M1型极化标志物的蛋白表达水平。以LPS刺激RAW264.7巨噬细胞诱导炎症模型并用SEM进行干预,使用AMPK抑制剂compound C进行机制探讨和验证,Western blot法检测巨噬细胞极化标志物及AMPK信号通路相关蛋白表达水平,ELISA法检测巨噬细胞炎症相关因子。结果体内实验发现,SEM可降低肥胖小鼠血清和脂肪组织中IL-6、TNF-α和MCP-1分泌水平,提高IL-10分泌水平,减少M1型巨噬细胞标志物CD11c蛋白表达。体外实验发现,SEM能够激活巨噬细胞AMPK,上调PGC-1α、下调NF-κB表达,降低CD11c、IL-6、TNF-α,升高CD206、IL-10水平,而compound C可以减弱SEM的上述作用。结论SEM可通过激活AMPK信号通路调控巨噬细胞极化减轻脂肪组织炎症。

基于AMPK信号通路探讨中医药治疗非酒精性脂肪性肝病合并2型糖尿病研究进展

腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)是影响全身代谢和生理功能的多种代谢途径的主要调节者,其活化已被提出用于治疗多种代谢性疾病,如肥胖症、非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)、2型糖尿病(T2DM)。AMPK是一种高度保守的代谢调节因子,参与糖脂相关的代谢过程,近年来被认为是代谢性疾病的一个关键研究靶点。多项研究显示,中药单体、中药复方可以通过激活AMPK信号通路改善胰岛素抵抗(IR)和炎症反应,激活自噬,调节糖脂代谢,从而延缓NAFLD合并T2DM的发生和发展。采用文献检索和综合分析的方法,总结中医药通过激活AMPK信号通路参与NAFLD合并T2DM治疗的作用机制,为今后中医药治疗NAFLD合并T2DM提供思路。

中介素通过激活AMPK信号通路对脂多糖诱导巨噬细胞极化的影响

目的探讨中介素(intermedin,IMD)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导小鼠单核巨噬细胞系RAW 264.7极化的影响及其作用机制。方法RAW 264.7细胞随机分为对照组、LPS组、LPS+IMD组、LPS+IMD+CC(AMPK抑制剂Compound C)组。Real time-PCR法检测TNF-α、CD86、iNOS、Arg^(-1)、CD206 mRNA表达,Western blot法检测p-AMPK、AMPK、TNF-α、IL-6和IL^(-1)0蛋白表达,流式细胞术检测巨噬细胞亚型,ELISA法检测培养基上清IL-6和TNF-α浓度。结果与对照组及LPS组比较,IMD处理可增加AMPK磷酸化水平,增加p-AMPK/AMPK比值;与对照组相比,LPS诱导可导致巨噬细胞发生M1极化,M1型标志分子CD86、TNF-α及iNOS mRNA表达升高,M2型标志分子CD206、Arg^(-1) mRNA表达降低,上调促炎因子TNF-α、IL-6表达,降低抑炎因子IL^(-1)0表达,使M1型细胞数量增加,细胞上清中TNF-α、IL-6分泌增加;而IMD处理可抑制LPS诱导的M1极化,AMPK抑制剂Compound C组处理可在一定程度上拮抗这一作用。结论IMD通过激活AMPK信号通路抑制LPS诱导的巨噬细胞M1型极化。

降糖消渴颗粒对糖尿病大鼠骨骼肌AMPK信号通路的影响

目的:探讨肝脾肾同治的组方降糖消渴颗粒对糖尿病(DM)大鼠血糖及骨骼肌AMPK信号通路的影响。方法:SD大鼠高脂饲料喂养4周后结合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)30 mg·kg^(-1),建立2型糖尿病大鼠模型,将成模的大鼠按血糖随机分为模型组、阳性对照组(吡格列酮片1.5 mg/kg BW)、降糖消渴颗粒组(9 g生药/kg BW),并设正常对照组。干预前及干预2周、4周后,分别检测大鼠空腹血糖(FBS),实验结束后实时荧光定量PCR法检测大鼠肌肉组织AMPKα、葡萄糖转运子4(GLUT4)、胰岛素受体底物1(IRS-1)mRNA表达,Western Blot法检测AMPKα、p-AMPKα、GLUT4、IRS-1蛋白表达。结果:降糖消渴颗粒组大鼠空腹血糖水平均明显低于模型组大鼠(P<0.05),且该效果存在时-效关系。降糖消渴颗粒能上调DM大鼠骨骼肌组织AMPKαmRNA及蛋白表达,且p-AMPK蛋白量亦明显增加(P<0.01),同时提高DM大鼠骨骼肌组织GLUT4、IRS-1 mRNA及蛋白表达量(P<0.01)。结论:立足于肝脾肾三脏同治的中药复方降糖消渴颗粒能通过激活骨骼肌AMPK信号通路相关蛋白,达到改善DM大鼠糖代谢,提高骨骼肌胰岛素敏感性的作用。

二甲双胍联合紫杉醇对人乳腺癌细胞凋亡及AMPK信号通路的影响

目的:探索二甲双胍联合紫杉醇对乳腺癌MCF-7细胞活力和凋亡的影响及其可能的机制。方法:采用不同浓度(2、5、10、20、40和80 mmol/L)二甲双胍作用于体外培养的MCF-7细胞,MTT法检测细胞的活力。采用2 mmol/L二甲双胍和2. 4 mg/L紫杉醇单独或联合处理细胞,并加入一磷酸腺苷活化的蛋白激酶(AMPK)信号转导通路抑制剂compound C。实验分为对照组、二甲双胍组、紫杉醇组、联合组和联合+compound C组;流式细胞术检测细胞的凋亡率,采用RT-qPCR和Western blot法检测Bax、Bcl-2和caspase-3的mRNA和蛋白表达量,Western blot检测AMPK和P21蛋白的表达量。结果:不同浓度二甲双胍(2、5、10、20、40和80 mmol/L)显著抑制乳腺癌细胞的活力(P <0. 05),且具有一定浓度依赖性。与对照组相比,2 mmol/L二甲双胍和2. 4 mg/L紫杉醇单独或联合均可显著抑制细胞活力并诱导其凋亡(P <0. 05),显著下调Bcl-2水平(P <0. 05),上调Bax和caspase-3水平(P <0. 05),促进AMPK和P21蛋白表达。联合使用的效果优于单独使用。加入AMPK抑制剂可削弱此作用。结论:二甲双胍联合紫杉醇可抑制乳腺癌MCF-7细胞活力,诱导其凋亡。此作用与激活AMPK信号转导通路并调节细胞凋亡信号通路有关。