胃癌细胞中AP-1活性与RARα介导的相关性

为确定全反式视黄酸 ( ATRA)抑制胃癌细胞 AP- 1活性过程中 RARα介导的作用机理 ,利用 Northern印迹和 Western印迹测定 RARα基因和 c Jun、c Fos蛋白表达水平 ;氯霉素乙酰转移酶活性 ( CAT)分析 AP- 1活性 ;以及 MTT法检测细胞生长速率 .结果表明 ,ATRA能够诱导 RARα表达 ,抑制 c Jun和 c Fos蛋白表达和 AP- 1活性 ,由此导致胃癌细胞生长抑制 .结果证实 ,ATRA抑制胃癌细胞 AP- 1活性是抑制细胞生长的重要途径之一 ,并与 RARα介导密切相关 .

胃癌细胞中视黄酸受体抑制AP-1活性的不同方式

研究胃癌细胞中视黄酸受体RARα和RARβ抑制活化蛋白 1(activatorprotein 1,AP 1)活性的不同方式及其与全反式视黄酸 (ATRA)作用的相关性 .瞬时转染RARβ表达载体到MKN 4 5细胞后 ,佛波脂 (TPA)诱导的AP 1活性受到明显抑制 ,且与RARβ浓度正相关 ,与ATRA存在与否无关 ;相反 ,RARα转染细胞后 ,对TPA诱导的AP 1活性的抑制不仅与RARα的浓度相关 ,而且依赖于AT RA .凝胶阻抑测定表明 ,TPA可以显著加强AP 1结合活性 ,当ATRA处理不表达RARβ和低表达RARα的MKN 4 5细胞后 ,AP 1结合活性不受影响 ;然而 ,表达RARα和RARβ的BGC 82 3细胞经AT RA处理后 ,TPA诱导的AP 1结合活性则受到抑制 .另外 ,分析与抗AP 1活性相关的RARβ功能区表明 ,DNA结合区的缺失导致RARβ抑制AP 1活性作用的丧失 ,而配体结合区对于RARβ抑制AP 1活性则是非必需的 .以上结果证实 ,有胃癌细胞中 ,RARβ可能是AP 1活性的抑制因子 ,RARα则可能是ATRA作用的靶向 .尽管它们的作用方式有所不同 ,但最终都可以通过抑制AP

烧伤小鼠早期肝组织JNK1、AP-1的活性变化

目的 :观察烧伤小鼠早期肝组织JNK1磷酸化及核转位、AP - 1DNA结合活性时相变化特点 ,初步探讨创伤应激早期糖皮质激素抵抗的分子机制。方法 :将 36只BALB/C小鼠随机分为正常对照组和实验组 ,实验组给予背部Ⅲ度 15 %～ 2 0 %烧伤。分别于伤后 2h、 4h、 6h、 12h、 2 4h用westernblot测定肝组织JNK1磷酸化及核转位 ,用EMSAs测定AP - 1的DNA结合活性。结果 :烧伤后 2hJNK1磷酸化程度和核内JNK1的含量显著增加 ,4h达到高峰 ,6h时仍显著高于正常对对照组水平 ,以后逐渐恢复正常。烧伤后 2hAP - 1的DNA结合活性与正常对照组相比无显著差异 ,4h后AP - 1的DNA结合能力逐渐升高 ,12h达到最大值 ,以后逐渐恢复 ,至 2 4h仍显著高于正常对照组。结论 :烧伤早期不仅引起小鼠肝组织JNK1的磷酸化程度显著增强 ,由胞浆向胞核的转位显著增加 ,而且引起AP - 1的DNA结合活性显著增强。揭示创伤应激早期糖皮质激素抵抗可能与JNK1、AP - 1活性增加有关。

实验性局灶性脑缺血及再灌流后AP-1复合物的结合活性测定

本研究应用凝胶迁移法检测局灶脑缺血区中Ｆｏｓ与Ｊｕｎ基因的蛋白产物形成异源二聚体复合物—转录因子ＡＰ１（ａｃｔｉｖａｔｏｒｐｒｏｔｅｉｎ１）的ＤＮＡ结合活性。缺血３０ｍｉｎ或９０ｍｉｎ伴随再灌流４ｈ，结果表明ＡＰ１结合活性增加。提高的ＤＮＡ结合活性持续２４ｈ。

红藻氨酸致敏癫痫大鼠海马内AP-1 DNA结合活性和成分的改变(英文)

一次皮下注射惊厥剂量（7．5mg／kg）的红藻氨酸（kainicacid，KA），诱发Fisher344大鼠出现急性癫痫发作，7d后即可形成癫痫敏感大鼠。继用Gelshift、Super－shift和Westernblot方法测定大鼠海马内AP－1DNA结合活性及其组成成分。Gelshift结果显示，癫痫敏感大鼠海马内AP－1DNA结合活性的基础水平较对照组为高；Super-shift实研表明仅Fra和JunD抗体能把AP－1蛋白滞留到较高的位置；Westernblot进一步证明JunD蛋白包括43，39and28kDaJund；又癫痫敏感大鼠若第二次接受癫痫刺激，其AP－1复合物的活性及成分均再次发生改变。以上资料提示AP－1DNA结合活性的增高和高水平的JndD很可能在癫痫敏感性长期持续增高的维持中起重要作用。

丙丁酚抑制氧化型低密度脂蛋白诱导系膜细胞转化生长因子-β_1表达

目的 观察丙丁酚对ox- LDL诱导系膜细胞AP -1活性和TGF -β1 表达的作用 ,探讨抗氧化剂治疗脂质肾损伤的分子机制。方法 大鼠系膜细胞随机分为正常细胞组、ox- LDL处理组和ox- LDL +丙丁酚处理组。运用凝胶迁移率实验检测AP-1活性变化 ,Western杂交检测c- Jun、JNK/SAPK磷酸化及TGF- β1 蛋白表达水平的改变。运用Northern杂交检测TGF- β1- mRNA表达。结果 丙丁酚 5 0 μmol/L预处理系膜细胞 2 0h ,显著降低ox LDL诱导系膜细胞AP 1活性。丙丁酚浓度为 5 0、1 0 0、2 0 0 μmol/L时 ,均显著抑制ox- LDL诱导JNK ,/SAPK磷酸化 ;且ox LDL +丙丁酚处理组的c Jun蛋白表达分别为ox- LDL处理组的 6 0 %、5 1 %和 4 6 %。Northern杂交显示 :ox LDL为 1 0 μg/mL时并不激活TGF- β1 mRNA表达 (P >0 .0 5 ) ;而当ox-LDL浓度增至 5 0、1 0 0 μg/mL时 ,TGF -β1 mRNA表达分别增加 1 .8和 1 .9倍。Western杂交显示ox -LDL呈剂量依赖方式增加TGF β1 蛋白质表达。加入丙丁酚后显著降低ox LDL诱导系膜细胞的TGF -β1- mRNA和蛋白质表达 (P <0 .0 5 )。结论 丙丁酚可能通过抑制JNK1 /SAPK磷酸化和AP 活性下调ox- LDL诱导系膜细胞TGF- β1 表达。

视黄素受体介导的视黄素(retinoids)抗癌作用

对近年来视黄素受体介导视黄素抗癌作用机理的研究进展作一综述 ,主要有 :1)视黄素受体 ;2 )视黄素受体与细胞生长 ;3)视黄素受体与孤生受体的相关性 ;4 )视黄素受体对 AP- 1活性的抑制作用 ;5)视黄素受体介导的信号转导途径 .通过研究 ,对于探讨视黄素受体的功能、阐明视黄素的抗癌机理、合成更多的受体选择性视黄素具有重要的现实意义 .

激活蛋白-1在皮肌炎患者外周血单一核细胞中的表达及糖皮质激素对其表达的影响

目的探讨激活蛋白一1（AP一1）在皮肌炎患者外周血单一核细胞（PBMC）中的表达及糖皮质激素对其表达的影响。方法分别提取15例正常人和20例皮肌炎患者（为未使用过糖皮质激素的初发患者或停止糖皮质激素治疗1个月以上者，初发12例，复发8例）的PBMC，每例的PBMC等分为2份，一份加入含80I．Lmol／L地塞米松和10％小牛血清的RPMI1640培养液培养48h后待用，另一份直接一80℃保存待用。用电泳迁移率改变实验检测不同组别PBMC中AP一1的活性。结果AP-1在正常人PBMC中为低表达（灰度面积值为4．93±0．15mm2）。皮肌炎初发组和复发组患者PBMc加地塞米松前的AP-1表达（灰度面积值分别为30．23±0．49mm。和34．79±0．61mm。）均明显高于地塞米松处理后AP-1表达（灰度面积值分别为5．59±0．39mm。和5．69±0．39mm。），地塞米松处理前复发组PBMC的AP-1活性高于初发组（P〈0．01）。结论AP-1活性增强可能是导致皮肌炎炎症反应及复发的重要因素之一。糖皮质激素可以一定程度抑制AP-1活性。

醛固酮对肝星状细胞激活蛋白-1通路调控的体外研究

目的探讨醛固酮(Aldo)对肝星状细胞(HSC)激活蛋白-1(AP-1)信号转导通路的影响。方法采用HSC-T6细胞株,分别予Aldo 1μmol/L处理10、30、60、120、180 min,蛋白质印迹法检测磷酸化P42/44蛋白的表达。另外,观察细胞外信号调节激酶(ERK)特异性抑制剂-U0126,抗氧化剂-乙酰半胱氨酸(NAC)(均先预处理60 min,再予Aldo刺激)和肿瘤坏死因子α(TNF α)对磷酸化P42/44蛋白表达的影响。Aldo在干预30、60、120、240 min后,电泳迁移率变更分析(EMSA)检测AP- 1 DNA结合活性的变化;予U0126和NAC干预后,EMSA检测AP-1 DNA结合活性;逆转录聚合酶链反应检测α1-1型前胶原基因的表达。结果Aldo可诱导磷酸化P42/44的表达,并呈时间依赖性,10min 达到峰值,之后逐渐减低。U0126可抑制磷酸化P42/44的表达。Aldo可增强HSC的AP-1的DNA结合活性。U0126可以显著抑制Aldo诱导的AP-1的活化,NAC部分抑制Aldo诱导的AP-1的活化。Aldo可诱导α1-1型前胶原mRNA的表达。U0126和NAC可显著抑制Aldo诱导的α1-1型前胶原mRNA表达增强。结论Aldo可经ERK通路诱导HSC AP-1结合活性增强。Aldo可经AP-1通路调控α1-1型前胶原基因的表达。

激活蛋白-1信号转导通路活化与结直肠癌转移的相关性研究

目的探讨激活蛋白-1(AP-1)在结直肠癌及癌周组织中与DNA探针结合活性的变化及AP-1信号转导通路活化与结直肠癌转移的关系。方法采用电泳迁移率分析方法,检测30例结直肠癌手术切除标本及癌旁2cm、5cm组织和远癌切端组织中AP-1与DNA探针的结合活性;采用定量逆转录聚合酶链式反应方法检测各位点血管内皮细胞生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA转录水平。结果结直肠癌组织AP-1与DNA探针的结合活性明显高于癌旁5cm组织和远癌切端组织(P<0.01);结直肠癌组织AP-1结合活性与肿瘤浸润程度、淋巴结转移呈明显正相关(P<0.01),而与肿瘤组织学分型以及肿瘤分化程度无显著相关性(P>0.05)。结直肠癌组织VEGF、MMP-9mRNA转录水平明显高于癌旁组织和癌远切端组织(P<0.01,P<0.05)。结直肠癌组织AP-1结合活性增强与VEGF、MMP-9高表达显著相关(P<0.01)。结论AP-1信号转导通路与结直肠癌浸润和转移过程密切相关;此通路的活化参与肿瘤转移过程中肿瘤新生血管生成和细胞外基质降解。