ARMS法与Sanger测序法检测结肠癌KRAS基因突变的对比

目的:对比分析突变扩增阻滞系统法(ARMS)及Sanger测序法对结肠癌患者KRAS基因突变的检测效果。方法:收集2019年3月—2023年4月医院收诊的98例结肠癌手术患者,并对其手术切除病理标本中KRAS基因突变情况进行探究,每个标本均同时展开ARMS法、Sanger测序法检测,深入对比分析两种检测结果。结果:98个病理标准中ARMS法检测出40例KRAS基因突变(40.82%),Sanger测序法检出39例KRAS基因突变(39.80%),两种方法均检出1例有GGT>GAT(G12D)和GGC>GAC(G13D)双突变(P>0.05);ARMS法与Sanger测序法检测结果与年龄、性别无明显关联(P>0.05);两种方法检测KRAS基因突变具有明显一致性,其Kappa系数=0.578(P=0.001)。结论:在直肠癌KRAS基因突变检查中,ARMS法与Sanger测序法均有明显的优缺点,相比于金标准Sanger测序检查,ARMS法的临床实用价值更高,可进一步解决其检测局限性,以提高检出率。

直接测序法和ARMS法检测非小细胞肺癌表皮生长因子受体基因突变的比较

背景与目的以表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)为靶点治疗非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)是现在治疗肺癌的前沿手段,因此检测EGFR是否突变成为治疗肺癌的关键一步。本研究旨在探讨直接测序法和ARMS法检测NSCLC患者的EGFR基因突变情况及检出率。方法收集自2012年4月-2013年6月本中心接受进行EGFR基因突变检测的NSCLC患者,分别用直接测序法和ARMS法对这些患者的肿瘤组织标本进行检测,检测其中EGFR基因第18-21外显子的突变情况,并比较两者方法的优劣。结果在该451例两种方法均检测的患者中,两种方法均检测到突变且突变结果一致者127例,结果不一致者5例,均无突变者186例,直接测序法检测到突变而ARMS法未检测到突变者50例,反之83例。50例中有33例为ARMS法29种突变之外的突变。直接测序法检测的突变率为40.4%,ARMS法检测的突变率为47.7%,ARMS法的突变检出率明显高于直接测序法(P<0.001)。在204例石蜡组织中,ARMS法的突变检出率59.80%明显高于直接测序法41.67%(P<0.001);而在240例新鲜组织中,两种方法无统计学差异(P=0.083)。结论直接测序法和ARMS法检测EGFR基因突变基本一致,ARMS法更为灵敏,且操作方便快捷,但是价格昂贵。对于肿瘤组织含量较少的样本中,ARMS法更为敏感,明显优于直接测序法。直接测序法可以检测到ARMS试剂盒内不包含的少见突变。结合两种方法检测结果更为可靠全面。

结直肠癌患者应用ARMS法检测KRAS、NRAS、PIK3CA、BRAF基因突变分析

目的探讨结直肠癌(CRC)患者应用扩增阻碍突变系统(Amplification Refractory Mutation System,ARMS)法检测KRAS、NRAS、PIK3CA及BRAF基因突变情况并分析其与临床病理特征的关系。方法收集中国医科大学附属盛京医院60例结直肠癌患者手术切除组织,采用ARMS法检测KRAS、NRAS、PIK3CA及BRAF基因突变情况。结果KRAS基因突变23例,突变率为38.3%;NRAS基因突变1例,突变率为1.7%;PIK3CA基因突变4例,突变率为6.7%;BRAF基因突变3例,突变率为5%。检出双突变2例,分别为PIK3CA与KRAS突变,PIK3CA与BRAF突变。有淋巴结转移患者KRAS基因突变率显著高于无淋巴结转移患者(P=0.031)。KRAS、NRAS、PIK3CA、BRAF基因突变之间无明显相关性。结论在结直肠癌患者中,KRAS基因突变率最高,且多发生于有淋巴结转移患者,NRAS、PIK3CA、BRAF基因突变率较低。对结直肠癌患者进行KRAS、NRAS、PIK3CA、BRAF基因联合检测,为临床个体化靶向治疗提供更准确的理论依据。

ARMS法和Sanger测序法检测结肠癌KRAS基因突变的比较

目的探讨ARMS法和Sanger测序法检测KRAS基因突变的差异。方法整理收集南方医院2013—2016年间手术切除的113例结肠癌标本,同时应用ARMS法和Sanger测序法检测KRAS基因突变,分析两种方法的检测结果以及检出模式,考察两种方法的检测差异程度。结果 113例结肠癌手术标本ARMS法和Sanger测序法检出KRAS基因突变的阳性率分别为47.8%(54/113)和34.5%(39/113),两种方法检测结果阳性符合率为72.2%(39/54)。ARMS法检测总突变率显著高于Sanger测序法(P<0.05);ARMS法检测4种单碱基的突变率均高于Sanger测序法(P>0.05)。其中4例Sanger测序法检测结果为(+),ARMS法为(-);19例标本ARMS法检测结果为(+),用Sanger测序法检测结果为(-);另有1例标本用ARMS法检测到有GGT>GAT(G12D)和GGC>GAC(G13D)双突变。结论 ARMS法和Sanger测序法各有优缺点,2种方法检测,其结果一致。ARMS法能检测出的阳性病例更多,且结果差异显著,而Sanger测序法检测突变种类较多。综合考虑临床检测结肠癌手术标本KRAS基因突变应以ARMS法为主,Sanger测序法作为补充,可提高KRAS基因突变检出率。

ARMS法甲状腺乳头状癌BRAF基因检测252例临床病理分析

甲状腺乳头状癌（PTC）占所有甲状腺恶性肿瘤的85%-90%[1],是甲状腺癌中最常见的病理类型。众所周知,甲状腺癌的发病率逐年增加。鉴于日益增多的甲状腺癌,其中绝大多数是亚临床的,迫切需要找出一种可靠的术前分层方法（依据患者复发和死亡风险）来确定是否进行手术、手术的范围以及术后辅助治疗的需要。目前研究表明[2,3],

应用ARMS法对一苯丙酮尿症家系PAH致病基因的检测

应用ＡＲＭＳ法对一个ＰＫＵ家系进行了致病基因的检测。在对等位特异性ＰＣＲ产物进行琼脂糖凝胶电泳、溴乙锭染色后证实：患儿为Ｉｎｔｒｏｎ４切拼受端与Ｒ４１３Ｐ点突变的复合杂合子，其父母分别为上述致病基因的携带者。结果表明：此体系可以作为产前诊断ＰＫＵ的手段之一。

应用ADx-ARMS法对大肠癌组织中K-ras基因突变的检测

目的探讨ADx-ARMS法对大肠癌组织中K-ras基因突变的检测情况。方法选择首都医科大学附属北京世纪坛医院2012年4～8月的大肠癌石蜡标本40例。应用ADx-ARMS法检测大肠癌石蜡标本中的K-ras基因7个热点突变,分析与年龄、性别、组织学分型以及病理分化程度的关系。结果 40例大肠癌样本中共发现K-ras基因突变14例,突变率约为35.0%。K-ras基因突变与年龄及组织学分型无关(P>0.05),与患者性别(P<0.05)及腺癌分化程度(P<0.01)有关。结论 ADx-ARMS法检测大肠癌组织中K-ras基因突变效果满意,值得临床应用。

ARMS法检测EGFR基因突变的常见问题及解决对策

近年来分子靶向治疗在非小细胞肺癌中备受关注,其中EGFR基因状态是决定是否用EGFR-TKI治疗的先决条件。目前最常用于EGFR检测的方法是ARMS法,该方法灵敏度高、时间短、操作简单,易于在临床样品中检测开展。

ARMS法与下一代测序法检测非小细胞肺癌EGFR基因突变的比较

目的本研究旨在通过对突变扩增阻滞系统(ARMS)法与下一代测序法(NGS)检测非小细胞肺癌(NSCLC)EGFR基因突变的比较分析,来探索更适合我国临床肺癌患者EGFR基因突变的检测方法。方法收集22例NSCLC患者标本,分别用ARMS法及二代测序法对标本进行EGFR基因突变检测,分析比较两种方法的优劣。结果本次实验的22例标本其中17例EGFR基因突变结果两种检测方法一致,结果为EGFR单突变6例,双突变1例,阴性10例;2例ARMS法检测为单突变,二代测序法检测为双突变;3例ARMS法未检测到突变,二代测序法检测到突变。结论 ARMS法与二代测序法检测EGFR基因突变结果基本一致,但各有优缺点,两种方法结合检测效果更好。

ARMS法和Sanger测序法检测晚期肺腺癌小标本EGFR基因突变分析

目的应用ARMS法和Sanger测序法检测晚期肺腺癌小标本组织表皮生长因子受体(EGFR)基因突变的情况并比较其一致性。方法分别使用ARMS法和测序法检测102、138例晚期肺腺癌小标本的EGFR基因突变情况,并分析其与患者临床病理特征的关系,比较其间的一致性。结果 ARMS法及测序法检测EGFR基因突变率分别为46.1%(47/102)、37.7%(52/138),ARMS法EGFR基因突变率女性高于男性(61.9%vs 35.0%,P=0.007),而与年龄、吸烟、活检部位、活检方法、标本性质、原发肿瘤、淋巴结、远处转移、分期无关(P>0.05)。测序法EGFR基因突变率与活检部位存在相关性(P=0.049),与其他临床病理特征均无关(P>0.05)。二者的一致率为64.1%(25/39),Kappa系数为0.499(P<0.001)。结论 ARMS法与测序法对晚期肺腺癌的临床小样本进行EGFR检测具有中等的一致性。

Super-ARMS法在检测非小细胞肺癌EGFR基因突变中的应用分析

目的本研究通过对超级突变扩增阻滞系统(Super-ARMS)法与突变扩增阻滞系统法(ARMS)检测晚期非小细胞肺癌患者表皮生长因子受体(EGFR)基因突变的比较分析,探索Super-ARMS法的临床应用价值。方法收集111例晚期非小细胞肺癌患者外周血标本,提取血浆游离DNA后,分别采用Super-ARMS法及ARMS法进行EGFR基因突变检测,同时对53例配对的石蜡组织切片采用ARMS法进行EGFR基因突变检测。结果 111例标本中,Super-ARMS法检测EGFR基因突变率为50.5%(56/111),ARMS法检测EGFR基因突变率为46.9%(52/111);Super-ARMS法检测出T790M单突变3例,双突变5例,ARMS法则未检测出相关突变,两者比较差异有统计学意义(χ~2=8.023,P<0.01);两种方法检测EGFR基因突变一致率达87.4%(97/111),一致性检验显示Kappa系数为0.748(95%CI:0.624～0.871,P<0.001);通过检测53例配对组织样本的EGFR基因突变情况显示,与组织ARMS法比较,Super-ARMS法检测的敏感性、特异性和准确性分别为70.8%(17/24)、89.7%(26/29)和81.1%(43/53)。结论 Super-ARMS法与ARMS法检测EGFR基因突变结果一致性较高,Super-ARMS法检测T790M突变的敏感性明显优于ARMS法。

应用ARMS法检测广东省常见的三种葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因点突变

目的应用突变特异性扩增系统（ＡＲＭＳ）法筛查广东省常见的葡萄糖６磷酸脱氢酶（Ｇ６ＰＤ）基因的Ｇ１３８８Ａ、Ｇ１３７６Ｔ和Ａ９５Ｇ，并初步估计其频率。方法应用已建立的Ｇ１３８８Ａ和Ｇ１３７６ＴＡＲＭＳ法和新建立的Ａ９５ＧＡＲＭＳ法，对９０例广东地区男性，经Ｇ６ＰＤ定性和定量证明为Ｇ６ＰＤ缺乏者进行检测。结果在９０例男性中检出Ｇ１３８８Ａ４２例（４６７％），Ｇ１３７６Ｔ１４例（１５６％），Ａ９５Ｇ１２例（１３３％），共计７２例（７５６％）。其余为稀有突变和未定型者。结论ＡＲＭＳ法为一种简便、快速、经济、准确的检测Ｇ６ＰＤ基因常见突变的方法。

用ARMS法检测β地中海贫血C654-2T突变

地中海贫血（地贫）是我国华南和西南地区的常见遗传病。尤其是β地贫无论对社会和个人、家庭都带来不可估量的危害。目前，检出β地贫携带者的基因型，进行产前基因诊断，是防止重型β地贫患儿的出生，预防本病的唯一有效方法。目前使用的寡核苷酸（ＡＳＯ）杂交法和反向...

ARMS法快速鉴定中国人非缺失型α地中海贫血基因型

已报道的非缺失型α地中海贫血（地贫）基因点突变类型有３０多种，迄今在中国人中只鉴定出２种突变基因，即ＨｂＣｏｎｓｔａｎｔＳｐｒｉｎｇ（ＨｂＣＳ）和ＨｂＱｕｏｎｇＳｚｅ（ＨｂＱＳ），以ＨｂＣＳ多见，两者共占ＨｂＨ病的４５．８％～５８．９％。用聚合酶链反...

双错配碱基ARMS结合RE法快速检测FGFR3基因的突变超热点

目的建立快速简便、特异灵敏的鉴定FGFR3基因c.1138G>A突变超热点的基因诊断方法,为软骨发育不全(ACH)的产前基因诊断或植入前遗传学诊断(PGD)创造条件。方法针对突变率高达95%以上的FGFR3基因的突变热点c.1138G>A,设计双错配碱基的ARMS特异引物,对已经临床确诊的先证者家系及正常对照和非c.1138G>A突变的患者对照,分别用普通引物和特异引物进行PCR扩增和直接鉴定,然后对扩增产物进行DNA序列分析及SfcI酶切鉴定。结果用普通引物扩增,对照组和先证者均扩增阳性。SfcI酶切后,对照组仍为一条513bp的带,而患者切出205bp、308bp和513bp三条带;而用ARMS特异引物扩增,则先证者扩增阳性,而对照组扩增阴性,阳性者酶切后产生27bp和418bp两条带。这一切都与预期的结果完全吻合。结论该法快速、特异、准确性高,结合DNA序列分析和酶切鉴定(RE),可用于ACH高危胎儿的快速产前诊断。

结直肠癌K-ras基因突变两种检测方法的比较及临床相关性分析

目的比较ARMS法和Sanger测序法在检测K-ras基因突变时的敏感性、一致性和特异性,并且探讨结直肠癌患者K-ras基因突变与临床病理特性的相关性。方法采用ARMS法和Sanger测序法对200例结直肠癌患者进行K-ras基因突变检测。结果 ARMS法检出K-ras基因突变75例,阳性率为37.50%。Sanger测序法检出K-ras基因突变72例,阳性率为36.00%。两种方法的符合率为96%。同时,K-ras基因突变与淋巴结转移具有相关性(P<0.05),与患者年龄、性别、肿瘤部位、分化程度、肝转移和肿瘤类型均无相关性(P>0.05)。结论 K-ras基因突变检测有助于筛选靶向治疗有效的结直肠癌患者。ARMS法更适用于临床检测。

探针扩增阻滞突变法与数字PCR法检测甲状腺乳头状癌BRAF基因突变

甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)是甲状腺癌中最常见的类型,约占甲状腺癌的90%[1]。虽然目前绝大多数PTC预后较好,但仍有30%的PTC患者术后出现反复复发及远处转移[2]。Kimura等[3]研究发现70%的PTC可能存在分子改变,包括编码受体酪氨酸激酶RET、神经营养受体酪氨酸激酶-1(NTRK1)基因,以及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路的两个细胞内效应基因RAS和BRAF。

Sanger测序法和突变扩增阻滞系统法检测非小细胞肺癌EGFR基因19、21号外显子突变的临床价值比较

目的比较Sanger测序法和突变扩增阻滞系统(ARMS)法检测非小细胞肺癌(NSCLC)EGFR基因19、21号外显子突变的临床价值。方法收集经病理组织学确诊的NSCLC患者肺部原发或转移癌标本102例,其中石蜡包埋组织75例,病理活检标本27例;采用Sanger测序法和ARMS法检测上述标本EGFR基因19、21号外显子突变情况,分析其与患者临床病理学特征的关系。结果 ARMS法突变检出率为48.0%(49/102),高于Sanger测序法的32.3%(31/96),两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。病理活检组织ARMS法突变检出率为57.1%(12/21),明显高于Sanger测序法的23.8%(5/21),差异有统计学意义(P<0.05);石蜡包埋组织ARMS法和Sanger测序法突变检出率分别为49.3%(37/75)和34.7%(26/75),两者比较差异无统计学意义(P>0.05)。女性患者EGFR基因突变检出率68.0%高于男性患者的28.8%,未吸烟患者突变检出率65.5%高于吸烟患者的27.7%,腺癌患者突变检出率62.3%高于鳞癌患者的26.8%,差异均有统计学意义(均P<0.05);但EGFR基因突变检出率和有无淋巴结转移及年龄比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论 EGFR基因19、21号外显子突变好发于女性、未吸烟患者和腺癌患者,Sanger测序法对大组织样本及未知突变检测更有优势,ARMS法对病理活检、微小样本及要求灵敏度高的样本检测更为适合,结合2种方法检测结果更为全面可靠。