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ASH1L甲基转移酶在牛卵丘细胞中的表达与功能研究 被引量:4
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作者 崔立欣 田雅晴 +6 位作者 郝海生 邹惠影 赵善江 庞云渭 赵学明 朱化彬 杜卫华 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期1866-1877,共12页
旨在探究缺失、小的、同源异形1(absent,small,or homeotic 1-like,ASH1L)甲基转移酶在牛卵丘细胞中的表达与功能。本研究通过免疫荧光染色在健康母牛卵丘细胞中对ASH1L甲基转移酶进行定位,并分析细胞的组蛋白H3第36位赖氨酸(histone H3... 旨在探究缺失、小的、同源异形1(absent,small,or homeotic 1-like,ASH1L)甲基转移酶在牛卵丘细胞中的表达与功能。本研究通过免疫荧光染色在健康母牛卵丘细胞中对ASH1L甲基转移酶进行定位,并分析细胞的组蛋白H3第36位赖氨酸(histone H3 lysine36,H3K36)甲基化修饰模式;合成靶向Ash 1L基因的siRNA,对siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3及对照组进行荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹,筛选有效siRNA;采用荧光定量PCR分析干扰Ash 1L表达对处理组及对照组中凋亡相关基因及多梳抑制复合体(polycomb repressive complex 2,PRC2)组成基因的表达水平的影响。结果显示,ASH1L甲基转移酶位于牛卵丘细胞的细胞核中,呈点状分布。成功筛选到能有效干扰牛Ash 1L基因的siRNA-2,其干扰效率为60%~70%。将siRNA-2转染卵丘细胞后,该干扰组细胞中H3K36的单甲基化、二甲基化及三甲基化3种甲基化水平均显著低于对照组(P<0.05);干扰Ash 1L导致凋亡相关基因Bax、Bcl-2及caspase-3表达水平显著上调,凋亡基因Bax和caspase-3表达量高于抗凋亡相关基因Bcl-2(1.311和1.179 vs 1.146);同时,干扰Ash 1L基因表达也引起PRC2蛋白亚基EZH 2和Suz 12基因的mRNA表达量显著升高(P<0.05)。综上所述,本研究探讨了ASH1L甲基转移酶在牛卵丘细胞中的表达和功能,ASH1L在牛卵丘细胞中呈点状分布,且Ash 1L基因的抑制导致H3K36me1/2/3水平均显著下降及凋亡基因和PRC2蛋白相关亚基EZH 2和Suz 12基因表达的升高,为进一步研究其对家畜胚胎的调控作用提供技术和理论基础。 展开更多
关键词 ash1l甲基转移酶 牛卵丘细胞 H3K36甲基化修饰 凋亡
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组蛋白甲基转移酶ASH1L的研究进展 被引量:4
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作者 崔立欣 田雅晴 +4 位作者 郝海生 赵学明 庞云渭 朱化彬 杜卫华 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2020年第11期7-12,共6页
组蛋白甲基化修饰作为表观遗传中的机制之一,在基因的表达及沉默、异染色质形成、细胞分化和基因印迹等方面发挥着重要作用。缺失的、小的、同源异形1(ASH1,也称为ASH1L)是组蛋白赖氨酸甲基转移酶,因其在果蝇中基因突变导致的同源异形... 组蛋白甲基化修饰作为表观遗传中的机制之一,在基因的表达及沉默、异染色质形成、细胞分化和基因印迹等方面发挥着重要作用。缺失的、小的、同源异形1(ASH1,也称为ASH1L)是组蛋白赖氨酸甲基转移酶,因其在果蝇中基因突变导致的同源异形的表现与三胸腔结构蛋白的突变体相似而被归类于三胸腔结构蛋白质组;在哺乳动物中ASH1L可特异性甲基化H3K4和H3K36,激活基因转录。本文综述了组蛋白甲基化修饰、三胸腔结构蛋白组成及功能、组蛋白甲基转移酶ASH1L的调控作用等方面的研究进展,为探索ASH1L蛋白酶在疾病的发病、防治和调控中的作用机制,及其在大家畜繁育中的应用研究提供参考。 展开更多
关键词 组蛋白甲基化 三胸腔结构蛋白 ash1l 调控
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敲低组蛋白甲基转移酶ASH1L基因对牛卵丘细胞表达谱的影响 被引量:1
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作者 田雅晴 崔立欣 +5 位作者 郝海生 邹惠影 庞云渭 赵学明 朱化彬 杜卫华 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期151-160,共10页
旨在研究干扰类缺失的、小的、同源异形1(absent,small,or homeotic 1-like,ASH1L)甲基转移酶基因表达对牛卵丘细胞表达谱的影响。本研究采用经过筛选的siRNA干扰牛卵丘细胞中ASH1L基因的表达,分别收集干扰组和对照组细胞(野生型)进行RN... 旨在研究干扰类缺失的、小的、同源异形1(absent,small,or homeotic 1-like,ASH1L)甲基转移酶基因表达对牛卵丘细胞表达谱的影响。本研究采用经过筛选的siRNA干扰牛卵丘细胞中ASH1L基因的表达,分别收集干扰组和对照组细胞(野生型)进行RNA测序及基因差异表达、基因功能、信号通路、可变剪切和单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP)等生物信息学分析;采用实时定量PCR方法验证测序结果;每个试验3个重复。结果显示,干扰组与对照组细胞共筛选出2046个差异表达基因,其中上调基因1078个,下调基因968个;差异表达基因主要富集到2802个GO条目,如细胞分裂、细胞连接和组蛋白甲基转移酶活性;涉及到白细胞跨内皮迁移、PI3K-Akt、细胞黏附分子等53条KEGG通路。全部表达基因的基因集富集分析结果显示,ASH1L基因参与发育诱导、H3K4特异性组蛋白甲基转移酶活性、组蛋白去甲基化等生物学过程。另外,测序结果鉴出12种可变剪切方式,共117994个可变剪切事件;同时检测到522205个SNPs位点,其中碱基转换的发生频率显著高于颠换。综上所述,ASH1L基因干扰的卵丘细胞和野生型卵丘细胞的表达谱存在差异,推测该基因可能通过细胞黏附分子和白细胞跨内皮迁移等通路调节细胞生长,也可通过可变剪切和SNP影响基因表达,本试验为深入研究ASH1L对卵丘细胞增殖和胚胎发育的调控功能提供理论基础。 展开更多
关键词 ash1l 转录组测序 卵丘细胞
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过表达组蛋白甲基转移酶ASH1L对牛卵丘细胞增殖和凋亡的影响 被引量:1
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作者 王婉洁 陈南珠 +7 位作者 邹惠影 周心仪 郝海生 庞云渭 朱化彬 赵学明 余大为 杜卫华 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期3358-3368,共11页
旨在探究缺失的、小的、同源异形1(absent,small,or homeotic 1-like,ASH1L)过表达对牛卵丘细胞(cumulus cells,CCs)增殖和凋亡的影响。本研究将牛ASH1L SET结构域的cDNA序列克隆到pcDNA3.1上,构建牛ASH1L过表达载体;以导入pcDNA3.1+AS... 旨在探究缺失的、小的、同源异形1(absent,small,or homeotic 1-like,ASH1L)过表达对牛卵丘细胞(cumulus cells,CCs)增殖和凋亡的影响。本研究将牛ASH1L SET结构域的cDNA序列克隆到pcDNA3.1上,构建牛ASH1L过表达载体;以导入pcDNA3.1+ASH1L载体的牛CCs为过表达组(ASH1L-OE),野生型牛CCs为对照组(Control),采用免疫荧光染色检测两组细胞中ASH1L表达水平和H3K36me1/2/3甲基化水平;通过流式细胞术分析ASH1L过表达细胞的凋亡和增殖情况;采用荧光定量PCR检测两组细胞中凋亡、增殖相关基因的mRNA表达水平。以牛CCs cDNA为模板,PCR扩增获得长2487 bp的牛ASH1L SET结构域DNA片段,与pcDNA3.1载体连接;经Nhe I/Not I双酶切和测序鉴定,成功构建过表达载体pcDNA3.1+ASH1L。过表达载体转染牛CCs后,细胞中ASH 1L mRNA及其蛋白表达水平、H3K36me1/2甲基化水平均显著升高(P<0.05)。另外,ASH 1L过表达显著提高了活细胞率(91.85±1.25)%vs.(87.39±1.71)%,降低了细胞凋亡率(8.08±1.21)%vs.(12.51±1.72)%,并显著下调了凋亡基因BAX和CASPASE-3 mRNA表达水平(P<0.05),上调抗凋亡基因BCL-2 mRNA表达水平(P<0.01)。ASH 1L过表达24、36 h时,细胞增殖率、增殖相关基因PCNA、CCND 2表达水平显著升高(P<0.05)。可见,ASH 1L过表达抑制了牛CCs凋亡,诱导了细胞增殖及H3K36me1/2甲基化水平的升高,为进一步研究ASH1L对CCs生长和卵泡发育的调控提供技术和理论基础。 展开更多
关键词 ash1l甲基转移酶 牛卵丘细胞 过表达 细胞增殖 细胞凋亡 H3K36 me1/2
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口腔扁平苔藓患者外周血中ASH1L及其相关调控因子表达与免疫功能的相关性 被引量:2
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作者 李艳莉 邓金勇 +1 位作者 何升腾 董方 《临床和实验医学杂志》 2023年第2期150-153,共4页
目的探究口腔扁平苔藓(OLP)患者外周血中存在缺失的同源异形1(ASH1L)及其相关调控因子表达与免疫功能的相关性。方法回顾性选取2018年1月至2021年12月间就诊于三亚中心医院的103例OLP患者临床资料,将其作为观察组;同时选取同期100名健... 目的探究口腔扁平苔藓(OLP)患者外周血中存在缺失的同源异形1(ASH1L)及其相关调控因子表达与免疫功能的相关性。方法回顾性选取2018年1月至2021年12月间就诊于三亚中心医院的103例OLP患者临床资料,将其作为观察组;同时选取同期100名健康体检者作为对照组,测定两组受试者外周血ASH1L及其相关调控因子A20、IL-6的表达水平,并对比两组受试者的细胞免疫指标及体液免疫指标水平,分析ASH1L及其相关调控因子表达与免疫功能指标的相关性。结果观察组患者ASH1L相对表达量及其相关调控因子A20表达量为(0.412±0.116)×10^(-2)、(0.173±0.025)×10^(-2),明显低于对照组[(0.637±0.217)×10^(-2)、(0.335±0.134)×10^(-2)],IL-6相对表达量为(0.018±0.009)×10^(-2),明显高于对照组[(0.004±0.002)×10^(-2)],差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组患者的CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)以及总T^(+)B^(+)NK细胞水平为(62.26±7.84)%、(37.22±3.32)%、(1.33±0.57)、(95.75±0.45)%,均低于对照组[(73.15±5.32)%、(45.82±3.57)%、(1.97±0.58)、(105.68±0.48)%],CD8^(+)、CD19^(+)水平为(28.64±3.21)%、(12.65±2.57)%,高于对照组[(23.46±3.43)%、(8.43±1.26)%],差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组患者IgM水平为(1.63±0.21)g/L,明显高于对照组[(1.16±0.17)g/L],而补体C3、补体C4水平为(957.98±75.36)、(210.58±65.36)mg/L,低于对照组[(1157.30±94.27)、(276.39±49.54)mg/L],差异均有统计学意义(P<0.05);两组受试者IgG、IgA水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。Pearson相关性分析显示,OLP患者外周血ASH1L相对表达量与IgG呈正相关(P<0.05),A20相对表达量与IgA呈正相关(P<0.05),与CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)呈负相关(P<0.05);IL-6相对表达量与各项免疫功能指标均不具相关性(P>0.05)。结论OLP患者外周血中ASH1L及其相关调控因子A20、IL-6表达量明显异常,且其表达水平与患者免疫功能密切相关。 展开更多
关键词 口腔扁平苔藓 ash1l 调控因子 免疫功能 相关性
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口腔扁平苔藓患者外周血中ASH1L及其相关调控因子表达与免疫功能相关性 被引量:1
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作者 王方方 汪鹰 蔡扬 《中国医药导报》 2021年第24期8-10,16,共4页
目的分析口腔扁平苔藓(OLP)患者外周血中ASH1L及其相关调控因子表达与免疫功能的相关性,探讨其在OLP发病机制中的作用及意义。方法收集2018年8月至2019年8月贵州医科大学附属口腔医院40例OLP患者(OLP组)和20名同期体检健康者(对照组)的... 目的分析口腔扁平苔藓(OLP)患者外周血中ASH1L及其相关调控因子表达与免疫功能的相关性,探讨其在OLP发病机制中的作用及意义。方法收集2018年8月至2019年8月贵州医科大学附属口腔医院40例OLP患者(OLP组)和20名同期体检健康者(对照组)的外周血。采用流式细胞术及散射比浊法检测两组细胞免疫及体液免疫相关指标水平,实时荧光定量PCR检测两组外周血单个核细胞中ASH1L、泛素编辑酶A20、白细胞介素-6(IL-6)mRNA相对表达量及其与OLP免疫指标的相关性。结果OLP组中CD3^(+)、CD3^(+)CD4^(+)、CD3^(+)CD8^(+)、总T^(+)B^(+)NK细胞、IgM水平均低于对照组,CD19^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)、补体C3及C4水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。OLP组ASH1L及A20 mRNA相对表达量低于对照组,IL-6 mRNA高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。OLP组ASH1L mRNA相对表达量与IgG水平呈正相关(r>0,P<0.05)。A20 mRNA相对表达量与CD8^(+)、IgA水平呈正相关(r>0,P<0.05),与CD4^(+)/CD8^(+)呈负相关(r<0,P<0.05)。结论ASH1L及其相关调控因子在OLP患者外周血中表达异常且与免疫指标水平相关,在OLP免疫相关发病机制中发挥了一定作用。 展开更多
关键词 口腔扁平苔藓 ash1l 泛素编辑酶A20 白细胞介素-6
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Loss-of-function mutations of microRNA-142-3p promote ASH1L expression to induce immune evasion and hepatocellular carcinoma progression
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作者 Xing-Hui Yu Yan Xie +8 位作者 Jian Yu Kun-Ning Zhang Zhou-Bo Guo Di Wang Zhao-Xian Li Wei-Qi Zhang Yu-Ying Tan Li Zhang Wen-Tao Jiang 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS 2025年第1期126-145,共20页
BACKGROUND Hepatocellular carcinoma(HCC)has been a pervasive malignancy throughout the world with elevated mortality.Efficient therapeutic targets are beneficial to treat and predict the disease.Currently,the exact mo... BACKGROUND Hepatocellular carcinoma(HCC)has been a pervasive malignancy throughout the world with elevated mortality.Efficient therapeutic targets are beneficial to treat and predict the disease.Currently,the exact molecular mechanisms leading to the progression of HCC are still unclear.Research has shown that the microRNA-142-3p level decreases in HCC,whereas bioinformatics analysis of the cancer genome atlas database shows the ASH1L expression increased among liver tumor tissues.In this paper,we will explore the effects and mechanisms of microRNA-142-3p and ASH1L affect the prognosis of HCC patients and HCC cell bioactivity,and the association between them.AIM To investigate the effects and mechanisms of microRNA-142-3p and ASH1L on the HCC cell bioactivity and prognosis of HCC patients.METHODS In this study,we grouped HCC patients according to their immunohistochemistry results of ASH1L with pathological tissues,and retrospectively analyzed the prognosis of HCC patients.Furthermore,explored the roles and mechanisms of microRNA-142-3p and ASH1L by cellular and animal experiments,which involved the following experimental methods:Immunohistochemical staining,western blot,quantitative real-time-polymerase chain reaction,flow cytometric analysis,tumor xenografts in nude mice,etc.The statistical methods involved in this study contained t-test,one-way analysis of variance,theχ^(2)test,the Kaplan-Meier approach and the log-rank test.RESULTS In this study,we found that HCC patients with high expression of ASH1L possess a more recurrence rate as well as a decreased overall survival rate.ASH1L promotes the tumorigenicity of HCC and microRNA-142-3p exhibits reduced expression in HCC tissues and interacts with ASH1L through targeting the ASH1L 3′untranslated region.Furthermore,microRNA-142-3p promotes apoptosis and inhibits proliferation,invasion,and migration of HCC cell lines in vitro via ASH1L.For the exploration mechanism,we found ASH1L may promote an immunosuppressive microenvironment in HCC and ASH1L affects the expression of the cell junction protein zonula occludens-1,which is potentially relevant to the immune system.CONCLUSION Loss function of microRNA-142-3p induces cancer progression and immune evasion through upregulation of ASH1L in HCC.Both microRNA-142-3p and ASH1L can feature as new biomarker for HCC in the future. 展开更多
关键词 Hepatocellular carcinoma MicroRNA-142-3p ash1l Immune evasion Tumor immune microenvironment Apoptosis
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组蛋白H3K36位点甲基转移酶识别组蛋白底物的分子机制研究进展 被引量:1
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作者 曹英华 王占新 《北京师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期400-407,共8页
组蛋白H3第36位赖氨酸的甲基化修饰在染色质上含量丰富,与活跃转录以及DNA损伤修复等重要生理过程相关.H3K36位点可以被一甲基化、二甲基化和三甲基化3种形式修饰,目前已知的负责组蛋白H3K36三甲基化修饰的人源蛋白是SETD2,负责组蛋白H3... 组蛋白H3第36位赖氨酸的甲基化修饰在染色质上含量丰富,与活跃转录以及DNA损伤修复等重要生理过程相关.H3K36位点可以被一甲基化、二甲基化和三甲基化3种形式修饰,目前已知的负责组蛋白H3K36三甲基化修饰的人源蛋白是SETD2,负责组蛋白H3K36二甲基化修饰的酶包含NSD1、NSD2和NSD3和ASH1L共4名成员.这些H3K36甲基转移酶都具有非常特异的H3K36位点选择性,因此,对调控体内H3K36甲基化修饰的水平和分布十分重要.此外,它们的表达异常与人类的多种疾病相关.因此,解析组蛋白H3K36甲基转移酶识别并修饰组蛋白底物的分子机制,对揭示这些酶参与的表观遗传调控机制及其在体内的生理功能都具有十分重要的意义.早期的研究使得人们对组蛋白H3K36甲基转移酶催化底物的机制有了较深入的认识,但是由于解析的修饰酶与底物复合物的结构较少,对这些酶特异识别组蛋白底物分子机制的认识尚有很多不足.近年来,随着冷冻电镜技术的应用,H3K36甲基转移酶与核小体底物的复合物结构相继取得了突破,极大地推进了人们对这些酶识别并催化组蛋白底物分子机制的认识.本文以这几个组蛋白H3K36甲基转移酶为主要目标,对其分子机制的最新进展进行介绍总结. 展开更多
关键词 H3K36甲基转移酶 SETD2 NSD家族蛋白 ash1l 核小体底物
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