干酪乳杆菌ATCC334抑制胶原蛋白诱导关节炎大鼠的炎性反应

目的研究干酪乳杆菌ATCC334是否抑制胶原蛋白诱导的关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠的炎性反应以及NF-κB信号通路是否参与了此过程。方法21只Wistar大鼠随机分成3组:A为正常对照组,B为CIA组,C为干酪乳杆菌ATCC334组。组处理因素如下:(1)对照组用生理盐水灌胃,每日500μL,连续28 d不间断;(2)CIA组在造模同时用生理盐水灌胃,每日500μL,连续28 d不间断;(3)ATCC334组造模同时每日500μL浓度为2×10^(8) CFU/mL干酪乳杆菌ATCC334溶解液灌胃,连续28日不间断。应用足爪足趾容积仪测量大鼠后足爪增长容积,第29天处死大鼠,取大鼠血清ELISA检测大鼠血清中TNF-α及IL-6水平,取大鼠腘窝和腹股沟淋巴结制备单细胞悬液分离CD4+T细胞,Western Blot检测CD4+T细胞中TNF-α、IL-6及NF-κB蛋白水平。结果干酪乳杆菌ATCC334降低CIA大鼠关节炎指数及后足爪增长容积,降低了CIA大鼠血清TNF-α、IL-6水平,降低了CIA大鼠CD4+T细胞中NF-κB p65蛋白的表达。结论干酪乳杆菌ATCC334具有抗关节炎和抑制炎性因子的作用,且NF-κB可能参与此过程。

分离乳酸菌对金黄色葡萄球菌ATCC29213株的抑菌作用

本试验旨在探究从羊瘤胃内容物中分离的乳酸菌对金黄色葡萄球菌ATCC29213株的抑菌作用。首先对乳酸菌进行分离纯化、形态学鉴定并结合16S rDNA测序,通过生长曲线与产酸曲线证实其具有较好的生长性能与产酸能力;牛津杯双层平板法检测分离的乳酸菌对金黄色葡萄球菌ATCC29213株的抑菌作用;乳酸抑菌试验探究分离的乳酸菌对金黄色葡萄球菌ATCC29213株发挥抑菌作用的最适pH。结果显示:从羊瘤胃内容物中分离的1株乳酸菌——粪肠球菌N3-1(1)具有良好的抑菌活性;该乳酸菌的无菌发酵上清液原液对金黄色葡萄球菌ATCC29213株有抑菌作用,但经氢氧化钠(NaOH)处理后抑菌圈消失,表明该乳酸菌的无菌发酵上清液接近中性,不能发挥对金黄色葡萄球菌ATCC29213株的抑菌作用。乳酸抑菌试验说明,pH为1.4~2.1时乳酸溶液对金黄色葡萄球菌ATCC29213株有一定的抑制作用,pH大于3.8时,无论是乳酸溶液还是乳酸菌无菌发酵上清液均不能观察到对金黄色葡萄球菌ATCC29213株的抑制作用。结论:本试验从羊瘤胃内容物分离出1株具有良好抑菌活性的乳酸菌——粪肠球菌N3-1(1)。通过产酸试验、乳酸抑菌试验和用NaOH处理乳酸菌无菌发酵上清液作用于金黄色葡萄球菌ATCC29213株,证明乳酸菌无菌发酵上清液中发挥抑菌活性的物质为有机酸类,乳酸发挥作用的最适pH为1.4~2.1,这可为后续研究乳酸菌活性物质的抑菌机制提供试验基础。

异养硝化-好氧反硝化菌Paracoccus pantotrophus ATCC 35512的研究进展

近年来发现了一类具有偶联异养硝化-好氧反硝化功能的细菌.Paracoccus pantotrophus ATCC 35512是其中最早发现的细菌.通过对该菌株16SrRNA序列和细胞色素c的氨基酸序列分析,确立其为一个新种Paracoccus pantotrophus,ATCC35512被确定为模式株.该菌株的异养硝化-好氧反硝化偶联途径假说被提出,其反应途径中涉及的一系列酶和电子传递体也陆续被纯化研究.本文综述了对该菌株系统分类、形态和生理生化特征、硝化–反硝化偶联假说及氮循环酶系等的研究进展,并提出了进一步揭示异养硝化–好氧反硝化现象的研究方向.

Streptomyces griseus ATCC 13273对4种黄酮生物转化的初步研究

研究Streptomyces griseusATCC 13273对黄酮类化合物柚皮苷,橙皮苷,黄芩苷及木犀草素的生物转化。用标准马铃薯培养基培养的S.griseus中加入底物后继续培养4 d,发酵液经乙酸乙酯萃取后采用硅胶柱层析分离纯化,产物的结构根据光谱数据予以鉴定。有6个转化产物得到分离鉴定,分别是柚皮素-7-O-葡萄糖苷,柚皮素,橙皮素,黄芩素、黄芩素-6-甲氧醚和柯伊利素。结果表明此转化过程中涉及到两类反应即糖苷水解和甲基化反应,S.griseus产生的L-鼠李糖苷酶对底物有特异选择性,β-D-葡萄糖苷酶的选择性不强,甲基转移酶仅对黄酮类化合物的特异位点进行甲基化。该研究首次报道S.griseus对黄酮L-鼠李糖苷键和β-D-葡萄糖苷键的水解及对黄酮类化合物特异位点的甲基化。

大肠杆菌菌株ATCC 25922碱性磷酸酶的原核表达、纯化及其活性研究

使用常规PCR法以大肠杆菌菌株ATCC 25922基因组为模板,克隆到该菌株的碱性磷酸酶成熟肽基因,并将其构建到原核表达载体pET-30a（＋）的Bam HⅠ、XhoⅠ之间,获得重组表达载体pET-30a-EAP。并且我们将pET-30a-EAP转化到大肠杆菌RosettaTM（DE3）pLysS中,经IPTG诱导表达后,获得大小为52ku的目的蛋白EAP。经试验证明该蛋白以可溶形式为主。进而,高效表达的重组碱性磷酸酶经亲和层析法纯化后被用于活性鉴定。pNPP的显色反应与去磷酸化试验证实来自ATCC 25922的重组碱性磷酸酶具有催化磷酸单酯水解活性,而且酶热稳定性高、有效工作温度范围大,与其他蛋白融合表达时仍保持酶活性。以上研究结果为大肠杆菌菌株ATCC 25922碱性磷酸酶的规模化生产及在免疫酶技术领域中的应用提供了重要的参考依据。

ATCC碱性纤维素酶产生菌产酶特性的重新确定

研究美国典型培养物保藏中心(ATCC)提供的菌株ATCC21833(HorikoshiK定名为芽孢杆菌Bacillussp.N4)的纤维素酶合成基因后,发现该基因与HorikoshiK定名的N4基因并不具有同源性.为此重新研究了该菌株的产酶特征和所产生碱性纤维素酶的部分酶学特性.结果表明,羧甲基纤维素为最适宜的碳源,在以羧甲基纤维素、蛋白胨和酵母抽提物为主要组分的培养基中进行培养,碱性纤维素酶的活性可以达到0.64U/mL,所产生的碱性纤维素的最适pH值为10.0,最适反应温度为40℃.其产酶特性和酶学性质和N4菌株有较大差异.

近平滑假丝酵母ATCC 7330的生长条件优化

通过单因素实验和正交实验,对近平滑假丝酵母ATCC 7330生长的营养元素和发酵条件进行了优化。结果表明,近平滑假丝酵母ATCC 7330生长的最优培养基配方为:MgSO_40.8g·L^(-1)、(NH_4)_2HPO_4 16g·L^(-1)、蔗糖25.98g·L^(-1)、酵母浸粉12g·L^(-1),最适发酵初始pH值为5.0,最适通风量为3.0L·min^(-1),在此条件下,菌体量比优化前提高110%。该研究为近平滑假丝酵母ATCC 7330整细胞催化应用奠定了基础。

标准菌株ATCC 16404的分类学进展及影响

作为丝孢类真菌的代表菌株,标准菌株ATCC 16404被列入包括《美国药典》在内的各类标准中。2008年,Jan Houseknecht等人通过表型结合基因型的多相鉴定技术,确认该菌株为巴西曲霉(Aspergillus brasiliensis)。2010年新版《美国药典》和世界微生物菌种数据中心(WDCM)编制的《培养基相关参考菌株目录》采纳了该菌株新的分类学描述。这一变化会导致各国对标准中涉及的黑曲霉标准菌株重新进行分类学鉴定,并对内部相关的SOP进行修改。文中详细介绍了该菌株的历史、基本特征、在标准中的应用情况以及新的多相分类鉴定研究进展。

Acidithiobacillus ferrooxidans ATCC23270与矿物吸附过程的热量变化及不同条件下代谢热的基础研究

用微量热技术研究了不同条件下Acidithiobacillus ferrooxidans ATCC23270（以下简写为A.ferrooxidans ATCC23270）与硫化矿吸附过程的热量变化以及不同细菌浓度、不同的初始pH值及不同的培养条件下细菌的代谢产热情况。研究发现,矿浆浓度0.03g/mL,细菌浓度1.7×10^8个/mL的时候细菌与矿物的吸附放热最大。不同条件培养的细菌胞外多聚物的组成不同,与矿物吸附的反应热也不相同,黄铁矿培养细菌胞外多聚物含量最高,反应热也最高,说明细菌胞外多聚物在吸附过程中起重要作用。用微量热法能够很好地反映出细菌生长代谢过程中每个微观时刻的热量变化。对于A.ferrooxidans ATCC23270,最佳的代谢产热条件为：pH值为2.0和2.3,细菌浓度为3.0×10^8个/mL。不同培养条件下的细菌的生长代谢热不同,2039＋FeSO4培养的代谢热最大、放热最快。

近平滑假丝酵母ATCC 7330中羰基还原酶双水相萃取工艺研究

研究了聚乙二醇(PEG)/硫酸铵[(NH4)2SO4]双水相体系萃取近平滑假丝酵母ATCC 7330粗酶液中羰基还原酶的工艺,考察了无机盐种类、PEG分子量及其质量分数、(NH4)2SO4质量分数、萃取温度、萃取时间等因素对羰基还原酶纯化倍数的影响。确定最优的双水相萃取条件为:(NH4)2SO4质量分数15%、PEG1000质量分数19%、萃取温度16℃、萃取时间15 min,在此条件下,羰基还原酶的纯化倍数可达6倍。为近平滑假丝酵母ATCC 7330中羰基还原酶在手性化合物的绿色合成中的应用奠定了基础。

Streptomyces sahachiroi ATCC 33158中启动子P_(aziU1)的克隆及表达

为鉴定和分析aziU1基因的启动子PaziU1,将该基因上游183bp的DNA片段和组成型强启动子PermE*(作为阳性对照)分别克隆到启动子探针载体pIJ8660中,以增强型的绿色荧光蛋白基因(egfp)作为报告基因,通过检测菌丝体中绿色荧光的强弱,对PaziU1的启动子活性进行了定性和定量分析。PaziU1在3种不同的链霉菌Streptomyces sahachiroi、Streptomyces lividans ZX1和Streptomyces albus中均表现出启动子活性。PaziU1的启动子活性在初始培养的36h略低于PermE*,在培养48h后,PaziU1的表达活性高于PermE*。结果表明,Pazi U1与PermE*一样,是一个可以在链霉菌中组成型表达的强启动子。

马链球菌兽疫亚种ATCC35246株类M蛋白的提取

马链球菌兽疫亚种 (Streptococcusequisubsp.zooepidemicus) 是引起我国猪链球菌病的主要病原之一 ,其类M蛋白是一重要的毒力因子和保护性抗原。用热酸提取的马链球菌兽疫亚种ATCC352 4 6株类M蛋白 ,作SDS PAGE电泳 ,在电泳图谱中出现相对分子质量为 43 0 0 0、 34 0 0 0、33 0 0 0、31 0 0 0和 30 0 0 0等 5条主蛋白带。免疫印迹显示 ,这 5条主蛋白带都能被ATCC352 4 6的全菌兔血清识别 。

游动放线菌ATCC 12065生物转化强效免疫抑制剂西罗莫司

游动放线菌ATCC 12065生物转化强效免疫抑制剂西罗莫司后产生与西罗莫司不同的4个未知组分(未知组分1,2,3,4),HPLC保留时间分别为25.41min,34.13min,48.46min和52.24 min(西罗莫司的保留时间为26.62min)。经UV、HPLC及LC-MS分析表明,转化产物为西罗莫司衍生物。未知组分1和未知组分2的分子量为916,比西罗莫司的分子量多2;未知组分3和未知组分4的分子量900,比西罗莫司的分子量少14。

Lactobacillus rhamnosus ATCC53103和Escherichia coli ATCC8739对结直肠癌细胞CT26增殖及凋亡的影响

目的:探究Lactobacillus rhamnosus ATCC53103、Escherichia coli ATCC8739对CT26细胞增殖、迁移及凋亡的影响。方法:以CT26细胞为研究对象,1∶100加入L.rhamnosus ATCC53103与E.coli ATCC8739,定植培养一定时间后,分别采用台盼蓝染色法、划痕法、流式细胞仪检测细胞的增殖、迁移以及凋亡,采用RT-PCR与Western blot方法检测凋亡基因caspase-3、caspase-9、bcl-2、bax、fas的转录水平与表达情况。结果:L.rhamnosus ATCC53103和E.coli ATCC8739对CT26细胞的增殖与迁移有抑制作用,并促进CT26细胞的凋亡。两者相比较,L.rhamnosus ATCC53103的作用更为缓和。经RT-PCR和Western blot检测发现,L.rhamnosus ATCC53103使得CT26细胞凋亡基因caspase-3、caspase-9的表达上调,而E.coli使得CT26细胞凋亡基因caspase-3表达下调。结论:L.rhamnosus ATCC53103和E.coli ATCC8739能抑制CT26细胞的增殖、迁移,促进细胞的凋亡,L.rhamnosus ATCC53103可能通过线粒体相关途径使细胞发生凋亡;而E.coli ATCC8739则不是通过caspase-3执行细胞的凋亡作用。

用黄色短杆菌ATCC 14067生产L—谷氨酰胺的培养基选择

L—谷氨酰胺是L—谷氨酸的γ—羧基酰胺化,其分子式为H2NCO·CH2·CH2·CH（NH2）·COOH。熔点185℃～186℃。[（?）]D20=+31°～+33°,它作为药物,可以用来治疗神经薄弱,胃和十二指肠溃疡等疾病,疗效明显。我们用谷氨酸产生菌ATCC 14067,通过改变发酵条件,使谷氨酸发酵转向谷氨酰胺发酵。我们对发酵培养基作了选择,玉米浆、生物素、铵盐。

产青霉素酰化酶的大肠杆菌ATCC11105在两水相系统中的动力学性质研究

本文研究了产青霉素酰化酶的大肠杆菌ＡＴＣＣ１１１０５在ＰＥ６２００００－ＤｅｘｔｒａｎＴ７０两水相系统中的动力学行为，并与在磷酸盐缓冲液中的动力学行为进行了对照。产青霉素酰化酶的菌体在两水相体系中的Ｋ＿ｍ值为４．３５ｍｍｏｌ／Ｌ，最适ｐＨ值为８．０，最适温度为５５℃，最稳定ｐＨ值为６．０～７．０，最稳定温度为３０℃；在磷酸盐缓冲液中Ｋ＿ｍ值为７．２０ｍｍｏｌ／Ｌ，最适ｐＨ值为８．０，最适温度为６５℃，最稳定ｐＨ值为８．０，最稳定温度为３５℃。

瑞士乳杆菌ATCC 15009对干酪成熟的影响

干酪的成熟是形成干酪特有的风味、质地和组织状态以及影响加工成本的最关键工艺。添加辅助发酵剂是目前较为成熟的一种促进干酪成熟的方法。本文将不同剂量的瑞士乳杆菌ATCC?15009作为辅助发酵剂添加到古达奶酪中,通过检测奶酪成熟过程中的乳酸菌自溶情况、可溶性氮含量以及感官评定等指标分析了ATCC?15009对奶酪成熟的影响。结果证明瑞士乳杆菌ATCC?15009具有很强的自溶能力,可以有效分解蛋白质并促进干酪的成熟,同时改善干酪的风味。

近平滑假丝酵母ATCC 7330对不同取代基乙酮类底物的催化效果

通过对接模拟和催化转化实验研究了近平滑假丝酵母ATCC 7330对10种不同取代基乙酮类底物的催化效果。结果表明:近平滑假丝酵母ATCC 7330整细胞催化对芳环取代乙酮类底物的光学选择性优于脂环取代乙酮类底物,对氨基苯乙酮的光学选择性最高,与模拟对接预测的结合能大小一致;从催化剂周转数来看,近平滑假丝酵母ATCC 7330整细胞对10种不同取代基乙酮类底物的催化能力大小依次为对氯苯乙酮=邻氯苯乙酮>1-萘乙酮>对氨基苯乙酮>环戊基乙酮>环己基乙酮>邻氨基苯乙酮>1-(1H-茚-4-基)乙酮>苯乙酮>环丙基乙酮,与对接模拟预测有一定差距。说明近平滑假丝酵母ATCC 7330整细胞的催化能力除了与结合能有关外,还与细胞的渗透性、反应溶剂等因素有关。

产热凝胶土壤杆菌ATCC 31749蛋白质组双向电泳图谱的构建

建立了热凝胶生产菌土壤杆菌菌体总蛋白的蛋白质提取方法和双向电泳方案,确定了使用蛋白质裂解液(7 mol/L尿素,2 mol/L硫脲,1%ASB-14去垢剂,40 mmol/L Tris,0.001%溴酚蓝,1 mmol/L EDTA,1%TBP和1%两性电解质)结合超声破碎法来提取菌体总蛋白的方案为最佳,选择17 cm pH 4～7的IPG预制干胶条和适宜的等电聚焦程序进行第一向等电聚焦电泳。最后比较了考马斯亮蓝和硝酸银两种染色方法对双向电泳图谱的影响,确立了蛋白分辨率高并且重复性较好的土壤杆菌双向电泳图谱构建的可靠方法。

谷氨酸棒杆菌ATCC13032原生质体的制备与再生

以谷氨酸棒杆菌ATCC13032为出发菌,研究了青霉素浓度及溶菌酶浓度对原生质体形成率的影响,以及氯化钙和二甲基亚砜等物质的添加对其再生率的影响。结果表明最佳青霉素浓度及溶菌酶浓度分别为0.6U/mL和1mg/mL,在此条件下谷氨酸棒杆菌ATCC13032原生质体形成率达96%。为进一步提高原生质体再生率,尝试了4种添加物,其中氯化钙及二甲基亚砜能显著提高原生质体再生率。当3g/L氯化钙和10mL/L的二甲基亚砜组合添加时原生质体再生率更可达34%,是未添加的2.1倍,达到采用夹层法培养能获得再生率的最大值。