柯萨奇病毒B组5型TaqMan一步法RT-qPCR检测方法的建立

目的建立柯萨奇病毒B组5型(coxsackievirusB5,CV-B5)特异的TaqMan一步法实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测方法。方法根据CV-B5的VP1序列,设计特异性引物和TaqMan探针。将目的基因插入pMD18^(TM)载体,在DH5α感受态细胞中扩增,大肠杆菌体外转录后获得RNA标准品并建立标准曲线,最后对检测方法的重复性、敏感度和特异性进行评价。结果该方法在10^(3)~10^(11)拷贝/微升的模板范围内具有良好的线性关系(r^(2)>0.99),扩增效率E=100.9%,敏感度达1×10^(3)拷贝/微升,只对CV-B5有特异性扩增曲线,且重复性较好。结论本实验建立的TaqMan一步法RT-qPCR检测方法有较高的敏感度、特异性和重复性,有良好的抗干扰性,可用于CV-B5的临床样本检测和绝对定量分析。

柯萨奇病毒B组1型感染动物模型研究进展

柯萨奇病毒B组1型(coxsakievirus B1,CVB1)能引起人类心肌炎、无菌性脑膜炎、新生儿全身感染等多种疾病,幼儿感染后病情较重甚至引发死亡,而目前尚无针对该病毒的疫苗及特效治疗药物。因此,建立并开展相关动物模型研究对CVB1感染后的机体免疫反应、病毒毒力机制、药物疫苗研发等问题的解决具有重要意义,同时也能为临床治疗提供部分依据。本文通过对CVB1病毒感染构建的不同动物模型进行总结,以期望为建立合适的动物模型以及开展相关研究提供参考。

辽宁省首株柯萨奇病毒B组5型全基因组序列分析

研究引起辽宁地区手足口病的柯萨奇病毒B组5型(coxsackievirus B5,CV-B5)基因组特征。对2018年从辽宁省688份肠道病毒核酸阳性的标本中分离到的1株CV-B5进行高通量测序,并对其全基因组进行遗传进化分析。结果表明,CV-B5辽宁分离株与国内流行株的全基因组核苷酸序列同源性为78.5%~97%,氨基酸序列同源性为75.3%~96.7%。基于全基因组的进化分析将CV-B5流行株分为A~D四个基因型,辽宁分离株属于D基因型。通过重组分析发现其在P3区的3D区段发生重组。首次在辽宁地区手足口病患儿中分离出CV-B5,辽宁省分离株(LN2018-23-21/CHN/2018)可能为重组株。

柯萨奇病毒B组3型上海分离株的基因特征分析

为探讨上海市不同来源的柯萨奇病毒B组3型(coxsackievirus B3,CVB3)菌株的循环动态变化及基因特征,本研究对分离自上海市环境污水、健康儿童和急性弛缓性麻痹(acute flaccid paralysis,AFP)病例中的CVB3菌株进行VP1区基因序列测定,并对照全球CVB3代表株进行序列相似性分析和系统发生学分析。结果显示,1989-2021年上海市不同来源的CVB3分离株共有120株,属于D、E基因亚型。上海CVB3分离株的核苷酸和氨基酸相似性差异较大,分别为78.7%~100%和93.3%~100.0%。2016年首次从上海环境污水中分离到E基因亚型CVB3,2021年再次分离到该基因亚型。2021年上海环境污水中的E基因亚型CVB3分离株与2020年的广东手足口病(hand,foot,and mouth disease,HFMD)病例CVB3分离株VP1区的核苷酸相似性较高,但上海暂未有该基因亚型感染病例报道。因此,仍须长期对环境污水和不同肠道病毒感染病例进行监测,以提高肠道病毒监测的敏感性,为肠道病毒相关疾病的诊疗提供数据支撑。

新疆师范大学健美操队女运动员核心力量对B组难度完成的影响研究

本文通过对新疆师范大学健美操队女运动员的核心力量对B组难度影响的调查,以了解女运动员的核心力量的总体情况。通过调查健美操队女运动员的基本情况、核心力量情况、相关的认知、难度完成的情况等,分析出适合女运动员核心力量训练的方法,为提高个人竞技能力提供一定的帮助。本文通过文献资料法、问卷调查法、数据统计法、访谈法等研究方法针对新疆师范大学健美操队女生的核心力量对难度完成的影响进行研究,最终得出结论发现:新疆师范大学健美操队女运动员的核心力量较好,难度掌握到位,但难度细节较差,影响女运动员核心力量素质的关键因素则是伤病。以上研究旨在为新疆师范大学健美操队竞技健美操更好的发展提供理论借鉴。

柯萨奇病毒B组1型感染叙利亚金黄地鼠动物模型建立

目的建立叙利亚金黄地鼠CVB1(Coxsackievirus B1,CVB1)感染动物模型。方法取叙利亚金黄地鼠经鼻腔滴注方式呼吸道感染CVB1,感染剂量每只为10^(7.25)CCID_(50)。观察14 d体重、体温、精神状态、皮肤黏膜变化、行为、粪便状态、是否有神经症状等临床情况;每天采集咽拭子、鼻灌洗液以及粪便进行病毒载量检测,感染第7天取3只实施安乐死,采血进行病毒载量及生化检测;同时采集脑、心脏、肝等多个组织样品进行病毒载量、组织病理学和IHC检测。结果感染CVB1病毒的动物在14 d内均出现不同程度精神萎靡、体温下降,以及口唇部出现典型的红疹及疱疹等类似人类手足口病临床表现。咽拭子、鼻灌洗液、粪便以及血液中能检测到病毒;组织中检测到病毒载量并观察到病毒抗原,同时伴有炎症、增生、出血等病理改变;血清酶中肝功、心肌酶升高。结论CVB1病毒经滴鼻方式感染叙利亚金黄地鼠建立的感染模型,表现出心肌和肝等组织器官的病理损伤特征,可用于人类手足口病的研究。

柯萨奇病毒B组5型非结构蛋白抑制NF-κB信号通路的作用机制研究

目的 柯萨奇病毒B组5型(CVB5)是手足口病的重要病原体之一,可导致发热、皮疹或疱疹等临床症状,重症者出现神经系统疾病,甚至死亡。天然免疫应答是机体抗病毒入侵的第一道防线,其中核因子κB (NF-κB)是宿主天然免疫反应中的重要蛋白质,然而关于CVB5感染后调控NF-κB介导信号通路的研究尚鲜有报道。方法 本研究通过检测启动子活性、促炎因子水平以及通路中关键蛋白表达等,阐明CVB5对NF-κB信号通路的调控作用机制。结果 CVB5感染可抑制促炎因子表达和p65的磷酸化。CVB5非结构蛋白(NSP)可抑制促炎因子表达以及重要蛋白p65和IκBα的磷酸化。经STRING11.1数据库预测表明,CVB5 3CD蛋白与宿主多聚胞嘧啶结合蛋白1 (PCBP1)具有相互作用,且PCBP1可促进IκBα和p65的磷酸化,抑制病毒复制。结论 CVB5 NSP可负调控NF-κB信号通路,且与3CD相互作用的PCBP1蛋白可通过调控NF-κB通路抑制CVB5复制。本研究探索病毒与宿主天然免疫应答的调控作用,从而为研制抗CVB5感染的药物提供作用靶点。

青藏高原青稞B组醇溶蛋白遗传多样性研究

报道了青藏高原青稞B组醇溶蛋白的遗传多样性.在66份青藏高原青稞材料中,共有15种不同条带、29种不同条带组合,表明青藏高原青稞材料具有丰富的多态性.不同来源的群体材料间遗传多态性存在差异,西藏育成品种的多态性略低于四川农家品种,人工选择使其遗传多态性减弱.聚类分析将材料分成3组,材料聚类与材料来源地没有明显的相关性.

成人腺病毒B组55型重症肺炎11例诊治分析

目的分析成人腺病毒B组55型重症肺炎患者的临床诊治资料,总结其临床特征及诊治方法。方法回顾性分析2013年4—5月本科收治的经病原学确诊的,符合美国感染疾病学会/美国胸科协会2007年关于成人社区获得性肺炎(CAP)重症肺炎诊断标准的11例成人腺病毒B组55型重症肺炎患者的临床诊治资料。结果 11例患者均为男性,年龄15～41岁,平均(28.5±5.3)岁。9例来自河北省保定地区,其中4例来自同一个县,呈一定的人群、地域聚集分布。临床症状重,11例均有高热、咳嗽、咳痰、胸闷,4例出现了精神障碍,4例伴腹泻。11例患者C反应蛋白(CRP)、白介素6(IL-6)、降钙素原(PCT)水平及中性粒细胞分数均升高;10例清蛋白(ALB)降低;10例乳酸脱氢酶(LDH)升高;9例天冬氨酸氨基转移酶(AST)升高;8例丙氨酸氨基转移酶(ALT)升高;7例肌酸激酶(CK)升高。入院时11例均为Ⅰ型呼吸衰竭,治疗过程中有7例发展为Ⅱ型呼吸衰竭。胸部CT检查示11例均以多肺叶受累的肺实变为主要特征,受累肺叶均多于3叶,其中4例出现空洞,1例出现纵隔气肿、皮下积气。均给予利巴韦林、甲泼尼龙及抗生素等治疗,8例痊愈出院,3例死亡。结论腺病毒B组55型引起的成人重症肺炎临床症状重,除高热、咳嗽等呼吸系统症状外,还伴发腹泻、精神症状等肺外表现。肺部CT以多肺叶受累的肺实变为主要特征,还可出现纵隔、皮下气肿。实验室检查指标中炎性指标升高(CRP、IL-6、PCT及中性粒细胞分数等),ALT、AST、CK、LDH升高,ALB降低。临床工作中发现具有上述特点的患者时需注意进行腺病毒B组55型的相关检查,尽早明确诊断,制定相应的治疗措施,以提高该病的治愈率。

住院儿柯萨奇病毒B组感染状况的分析

目的 :分析近 3年院内柯萨奇病毒 B组感染状况 ,认识柯萨奇病毒 B组与小儿疾病的内在关系。 方法 :观察了 796例病儿 ,其中上呼吸道感染 2 18例、肺炎 179例、哮喘 10 6例、心肌炎 15 5例、紫癜 19例、其他疾病 89例。采用 EL ISA方法检测柯萨奇病毒 B组 (CVB)的抗原 (CVB- Ag)和抗体 Ig M(CVB- Ig M)。结果 :(1)上呼吸道感染组和肺炎组 CVB阳性率分别是47.2 5 %和 48.0 4% ,两组间无统计学差异 ;(2 )哮喘、心肌炎和紫癜儿 CVB阳性率分别是 6 2 .2 6 %、6 1.2 9%和 6 8.42 % ,三组间比较无统计学差异 ,但 CVB阳性率均高于上呼吸道感染组和肺炎组 (P<0 .0 5 ) ;(3)其他疾病组和健康儿 CV B感染发生率均低 (分别是 15 .73%和 3.33% ) ,两组间无差异。 结论 :CVB感染与小儿多种疾病相关 ,尤其应该重视研究 CVB感染与哮喘、病毒性心肌炎和过敏性紫癜发病的内在联系。

儿童急性暂时性髋关节滑膜炎与柯萨奇B组3型病毒感染的相关性研究

目的 :探讨儿童急性暂时性髋关节炎与柯萨奇B组 3型病毒的相关性。方法 :采用ELISA法检测 10 0例急性暂时性髋关节滑膜炎患儿血清及髋关节液中柯萨奇B组病毒 (CoXB)、腺病毒 (AdV )、巨细胞病毒 (CMV)、呼吸道合胞病毒 (RSV)抗体 ,其中 79例作病毒血清免疫学检测 ,2 1例作髋关节病毒学检测 ,怀疑柯萨奇病毒感染者 ,随机抽样 9例作髋关节液中的病毒分离。结果 :急性暂时性髋关节滑膜炎患儿 79例血清免疫学检测查出Coxb lgM阳性 11例 ,AdV lgM阳性 14例 ,CMV lgM阳性 8例 ,RSV lgM阳性 8例 ,3 8例阴性。 2 1例髋关节液中查出CoXB阳性 7例 ,AdV阳性 5例 ,CMV阳性 2例 ,7例阴性。同时在血液和髋关节液中查出CoXB阳性 1例 ,AdV阳性 2例。随机抽样 9例作病毒分离培养 ,1例分离出柯萨奇病毒 ,采用中和试验证实为柯萨奇B组 3型病毒 ,并经电子显微镜检查确认。结论 :柯萨奇B组 3型病毒具有感染儿童导致急性暂时性髋关节滑膜炎的可能性。

青蒿素抗柯萨奇B组病毒感染的实验观察

目的探讨青蒿素体外抗柯萨奇B组3型病毒(CVB3)的作用。方法以CVB3感染HeLa细胞为实验模型,采用微量细胞病变抑制法、半定量RT鄄PCR实验和间接免疫荧光实验的方法,观察分析青蒿素对CVB3的直接灭活、阻断吸附和抑制复制的作用,以及青蒿素对CVB3在感染细胞内核酸复制和蛋白表达的影响。结果青蒿素不同程度地阻断病毒吸附和抑制病毒复制,明显抑制CVB3核酸复制与蛋白表达,未发现有直接灭活病毒的作用。结论青蒿素类药物具有体外抗CVB3的作用,其抗病毒机制是通过阻断病毒吸附和抑制病毒复制来完成的。

用原位核酸杂交法探讨柯萨奇B组病毒与克山病的关系──（黑龙江省急型克山病）

为探讨柯萨奇Ｂ组病毒感染与黑龙江省急型克山病的关系。本文用缺口平移法制备生物标记的柯萨奇Ｂ３病毒的ｃＤＮＡ探针与１３例急型克山病尸检心肌组织及脑外伤、ＣＯ中毒等意外死亡的正常成人心肌组织１０例，非病区７～８个月引产胎儿心肌组织１０例的石腊切片进行原位杂交。结果１３例急型克山病中有８例出现阳性杂交信号，即有柯萨奇Ｂ组病毒的ＲＮＡ存在，阳性率达６１．５％。对照组均为阴性，提示黑龙江省急型克山病有柯萨奇Ｂ组病毒感染，可能是急型克山病发病因素之一。

孕妇B组溶血性链球菌带菌与母婴预后的探讨

目的探讨B族溶血性链球菌(GBS)对围生期感染的影响。方法采用3%TH肉汤增菌液体培养基检测GBS,ELISA方法检测抗GBSⅢ型荚膜多糖抗体IgG水平。结果①孕妇GBS带菌率为10.12%(166/1642),新生儿带菌率为9.95%(20/201)。②孕妇阴道GBS带菌对不良产科并发症及新生儿预后无明显影响。③孕妇GBS阳性与阴性者的IgG浓度分别为(1.59±0.74)mg/L、(3.94±2.36)mg/L(P<0.001);新生儿IgG浓度分别为(1.14±0.69)mg/L、(3.04±1.82)mg/L(P<0.001)。结论GBS带菌对母婴预后影响不大。

用原位核酸杂交法探讨柯萨奇B组病毒与云南慢型克山病的关系

为了探讨柯萨奇 B 组病毒感染与云南慢型克山病的关系,本文用缺口平移法制备生物素标记的柯萨奇 B_3病毒的 cDNA 探针与云南慢型克山病尸检心肌组织15例及脑外伤等非正常死亡的尸检心肌组织10例石腊切片及引产胎儿心肌组织10例的石腊切片进行原位杂交。结果云南慢克16例中有11例出现阳性杂交信号,即有柯萨奇 B 组病毒(CVB)RNA 存在,阳性率达73.3%。脑外伤等非正常死亡的心肌及胎心均为阴性。提示云南慢型克山病与 CVB 的感染高度相关。

柯萨奇B组病毒感染与儿童胰岛素依赖型糖尿病的相关性研究

采用酶联免疫吸附试验 (ELISA)及逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测 35例儿童胰岛素依赖型糖尿病 (Insulindependentdiabetesmellitus ,IDDM)血清中柯萨奇B组病毒 (CoxsackievirusgroupB ,CBV)抗体IgM(CBV IgM) ,外周血中CBV RNA ,并选择 2 2例健康儿童做对照组以探讨CBV感染与儿童IDDM之间的关系。结果显示病例组 35例患儿血中CBV IgM阳性率 37 14% ,外周血CBV RNA阳性率 42 85 % ,对照组 2 2例阳性率分别为 4 5 4% ,9 0 9% ,两组比较差别显著 (P <0 0 5 )。从而提示儿童胰岛素依赖型糖尿病与柯萨奇B组病毒感染相关。

用原位核酸杂交法探讨慢型克山病与柯萨奇B组病毒的关系

为探讨山东慢型克山病与柯萨奇 B 组病毒的关系,用缺口平移法制备生物素标记 CoxB_3病毒的 cDNA 探针与慢型克山病14例尸检心肌组织及10例脑外伤,CO 中毒等意外死亡的正常成人心肌组织及10例非病区7～8个月引产胎儿的心肌组织切片进行原位杂交,14例慢克中有9例检测到柯萨奇 B 组病毒的 RNA,阳性率达64%,而对照组均为阴性。提示柯萨奇 B 组病毒感染可能是山东慢型克山病发病因素之一。

高速铁路路基粗粒土B组填料剪胀特性的大型三轴试验研究

采用大型三轴试验剪切仪，对高速铁路路基粗粒土 B 组填料的剪胀特性进行试验研究。结果表明：围压和粗粒含量对粗粒土 B 组填料的剪胀性有显著影响，整体表现为粗粒含量低或围压高时剪缩，粗粒含量高且围压低时先剪缩后剪胀；当围压小于200 kPa，粗粒含量大于49．31％时，粗粒土 B 组填料存在明显的剪胀趋势，且围压越低、粗粒含量越高，剪胀时轴向应变越小。验证了轴向应变ε21与侧向应变ε3的二次函数对粗粒土 B 组填料的适应性，并在此基础上根据试验结果建立粗粒土 B 组填料关于粗粒含量、围压的剪胀判据方程。ROWE 剪胀方程能很好地反映粗粒土 B 组填料剪胀特性，参数K 可取7～12。

西藏青稞4个B组醇溶蛋白基因的克隆和特征(英文)

从两份西藏青稞材料中分离克隆出4个B组醇溶蛋白基因(BH1-BH4),DNA测序结果表明:它们均包含完整的开放阅读框。推断的氨基酸序列与先前报道的大麦B组醇溶蛋白具有相同的蛋白质基本结构。系统分析表明:它们推断的氨基酸序列与栽培大麦中的B组醇溶蛋白具有较高的相关性,与野生大麦和山羊草属的醇溶谷蛋白相似性较低。并且,在4个基因BH1-BH4中,BH1与先前报道的B组醇溶蛋白基因有较低的序列相似性,因此我们对BH1基因进行了原核表达,含该基因的表达载体在大肠杆菌中表达出相对分子质量为28．15 kDa．并以包涵体形式存在的蛋白,进一步对其在青稞谷粒品质改良中的潜在价值进行了探讨。

用原位核酸杂交法探讨柯萨奇B组病毒与黑龙江慢型克山病的关系

克山病是原因未明的地方性心肌病,慢型克山病有关病毒病因的研究未见有关报道,作者用生物素标记的柯萨奇 B_3病毒的 cDNA 探针与黑龙江病区慢型克山病尸检心肌组织及非正常死亡成人心肌组织和非病区7～8个月引产胎儿心肌组织进行了原位杂交,以检测柯萨奇 B 组病毒 RNA。结果13例慢型克山病中有9例呈现阳性杂交信号,阳性率达69.2%,两对照组均为阴性。表明黑龙江慢型克山病心肌组织中有柯萨奇 B 组病毒 RNA 的存在,提示黑龙江病区慢型克山病与柯萨奇 B 组病毒的感染呈现高度相关。