多发性骨髓瘤单克隆抗体疗法、靶向B细胞成熟抗原疗法研究进展

多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是一种以骨髓中单克隆浆细胞恶性增殖为特征的血液系统疾病。尽管多种新型药物的应用使患者生存及预后有所改善,但很大程度上仍复发难治。单克隆抗体靶抗原、B细胞成熟抗原均在骨髓瘤细胞上高表达,是理想的靶抗原,因此针对靶抗原的单克隆抗体疗法及靶向B细胞成熟抗原疗法在多发性骨髓瘤中显示出较好的临床疗效。现结合相关文献对上述两种疗法的研究进展进行综述。

B细胞成熟抗原BCMA在细胞内诱导NF-κB的活化

目的 :研究细胞表面B细胞成熟抗原 (B cellmatu rationantigen ,BCMA)在B细胞激活因子刺激下 ,对转录因子NF κB是否具有激活作用 .方法 :采用电转移基因转染和卤化钙基因转染方法 ,将BCMA和C末端缺失 80个氨基酸残基的BCMA基因 (BCMAΔC80 )分别转染 3T8细胞及kbgfp细胞 ,观察与NF κB启动子下游的报告基因表达水平的变化 .结果 :BCMA在 3T8细胞中经BAFF激活后可上调报告质粒中CD14基因的表达 ,而C末端缺失 80个氨基酸残基的突变BCMA(BCMAΔC80 )则不具备此功能 .同时在另一报告细胞系kbgfp中亦观察到类似作用 .结论 :细胞表面的BCMA在被B细胞激活因子刺激后 ,可引起NF κB的活化 ,这一作用依赖于BCMA的C末端的 80个氨基酸残基 .

以B细胞成熟抗原为靶点的免疫疗法在多发性骨髓瘤中的研究进展

B细胞成熟抗原(BCMA)是一种表达于晚阶段B淋巴细胞及浆细胞表面的跨膜蛋白,特异地高表达于多发性骨髓瘤(MM)细胞。从MM癌变前期、潜伏期到活跃期,其表达水平逐渐升高,是MM免疫治疗的理想靶点。近年来,针对BCMA的免疫疗法包括抗体药物偶联物(ADC)、双特异性抗体(BsAb)和嵌合抗原受体T细胞免疫(CAR-T)疗法等在复发/难治MM治疗中获得显著疗效,BCMA作为MM的免疫治疗靶点显示出极大的发展潜力。

靶向B细胞成熟抗原的嵌合抗原受体T细胞的构建及其对肿瘤细胞的杀伤

目的:探索通过嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)-T细胞靶向B细胞成熟抗原(B cell maturation antigen,BCMA)以治疗多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)的方法。方法:构建基于鼠源BCMA scFv的CAR-BCMA分子,包装为慢病毒载体并感染健康人T细胞构建CAR-BCMA-T细胞;构建BCMA阳性细胞系A549-BCMA、A549-BCMAOFP和K562-BCMA作为靶细胞。将CAR-BCMA-T细胞与构建的靶细胞和人骨髓瘤细胞U266共孵育,CCK-8法和流式细胞术检测其对BCMA阳性肿瘤细胞的杀伤能力。构建MM患者来源CAR-BCMA-T细胞并检测其杀伤靶细胞A549-BCMA的能力,并采用ELISA和流式细胞术检测CAR-BCMA-T细胞IFN-γ的释放水平。结果:健康人来源的CAR-BCMA-T经过11 d培养扩增300倍,阳性率达到43%;成功构建BCMA阳性靶细胞。在5:1效靶比下,CAR-BCMA-T对A549-BCMA、K562-BCMA和U266细胞的杀伤率分别在80%、60%和80%左右,显著高于对BCMA阴性细胞的杀伤率,且杀伤力与靶细胞的BCMA表达强度相关。在效靶比20:1时,MM患者来源CAR-BCMA-T细胞对靶细胞A549-BCMA的杀伤率达到95%以上,并且大量分泌IFN-γ。结论:本研究成功构建了健康人及MM患者来源的靶向BCMA的CAR-T细胞,其能够有效特异杀伤BCMA阳性的肿瘤细胞。

B细胞成熟抗原（BCMA）靶向免疫治疗多发性骨髓瘤的研究进展

B细胞成熟抗原(B cell maturation antigen,BCMA)因其在恶性骨髓瘤细胞上高度选择性表达,故是理想的精准治疗靶点。本文就BCMA的生物学活性、作为生物标志物的意义以及针对抗B细胞成熟抗原开发的免疫疗法(双特异性抗体,抗体药物偶联物,嵌合抗原受体T细胞疗法)的最新研究进展作一综述。

人B细胞成熟抗原的克隆、表达及纯化

目的构建人B细胞成熟抗原(BCMA)原核表达质粒,表达BCMA融合蛋白。方法通过RT-PCR方法从人B淋巴瘤Raji总RNA中扩增BCMA的全长cDNA,并插入原核表达载体PGEX4T-1的BamHI和NotI酶切位点,构建原核表达载体PGEX4T-1-BCMA,利用酶切和序列分析方法验证所构建质粒的正确性。在大肠杆菌中表达BCMA融合蛋白,并经谷胱甘肽-S-转移酶(GST)亲和柱纯化。纯化后的产物经过SDS-PAGE、Western blot检测目的蛋白的表达情况。结果 BamHI/NotI双酶切证明重组质粒中含有目的大小的BCMA基因片段,序列分析证明重组质粒中插入片段的碱基序列均完全正确。将所构建的PGEX4T-1-BCMA质粒转染感受态DH5α,IPTG诱导表达后超声裂解菌体,上清经GST亲和纯化,经SDS-PAGE、抗GST和BCMA抗体Western blot分析,证实融合表达蛋白为GST-BCMA融合蛋白。结论成功构建了BCMA原核表达载体,重组质粒能够在原核表达系统中可溶性表达GSTBCMA融合蛋白,为进一步研究BCMA的生物学功能奠定了基础。

检测B细胞成熟抗原的噬菌体展示单链抗体实时荧光定量免疫PCR方法建立

目的建立检测B细胞成熟抗原(BCMA)的噬菌体展示单链抗体实时荧光定量免疫PCR(PDRT-IPCR)方法。方法采用无缝克隆技术将抗体ANTI-BCMA片段连接入噬菌体M13KO7中,构建重组噬菌体质粒M13KO7-ANTI-BCMA,保存于E.coli DH5α感受态细胞中,通过PEG/NaCl溶液低温沉降后获得重组噬菌体M13KO7-ANTI-BCMA。采用Western Blotting法鉴定重组噬菌体M13KO7-ANTI-BCMA是否展示抗BCMA单链抗体。以不同浓度的BCMA包被96孔高吸附酶标板,加入重组噬菌体M13KO7-ANTI-BCMA,热裂解后,以裂解噬菌体的DNA作为扩增模板,进行实时荧光定量PCR,观察不同浓度BCMA的实时荧光定量PCR扩增曲线。运用OriginPro2021软件进行四参数Logistic拟合曲线,根据相关系数R^(2)确定线性范围,计算最低检测限。以重组噬菌体M13KO7-ANTI-CD19和噬菌体M13KO7为对照,验证PDRT-IPCR方法检测BCMA的特异性。结果抗BCMA单链抗体成功展示在重组噬菌体M13KO7-ANTI-BCMA表面。随着BCMA包被浓度的降低,对应扩增曲线的CT值逐渐变大,PDRT-IPCR检测BCMA的线性范围为0.1 ng/mL~1000 ng/mL,R^(2)为0.9993,最低检测限为0.077 ng/mL。重组噬菌体M13KO7-ANTI-BCMA与BCMA的结合是特异性的。结论本研究建立了检测BCMA的PDRT-IPCR方法,该检测方法具有检测限灵敏、线性范围宽、特异性高等特点。

《中国肿瘤临床》文章推荐:靶向B细胞成熟抗原在多发性骨髓瘤中的治疗进展

过去20年,多发性骨髓瘤(MM)的治疗取得了较大的进展,患者的生存时间获得显著延长,但多数患者最终仍会复发或变为难治性,MM仍然无法治愈。B细胞成熟抗原(BCMA)的表达仅限于一些B细胞谱系,在MM细胞上广泛表达,是MM的一个理想靶抗原。

《中国肿瘤临床》文章推荐:靶向B细胞成熟抗原在多发性骨髓瘤中的治疗进展

过去20年,多发性骨髓瘤(MM)的治疗取得了较大的进展,患者的生存时间获得显著延长,但多数患者最终仍会复发或变为难治性,MM仍然无法治愈。B细胞成熟抗原(BCMA)的表达仅限于一些B细胞谱系,在MM细胞上广泛表达,是MM的一个理想靶抗原。多种靶向BCMA的治疗,包括嵌合抗原受体(CAR)T细胞、双特异性抗体(BsAbs)和抗体-药物偶联物(ADC),在复发/难治性MM患得显著的临床效果。2022年第49卷第20期《中国肿瘤临床》血液肿瘤专栏专家论坛栏目刊发了中国医学科学院血液病医院(中国医学科学院血液学研究所)安刚教授撰写的《靶向B细胞成熟抗原在多发性骨髓瘤中的治疗进展》一文,综述了近年来MM靶向BCMA治疗的研究进展,希望为同道提供临床与研究的参考价值。

靶向B细胞成熟抗原嵌合抗原受体T细胞治疗浆细胞白血病1例并文献复习

目的:探讨浆细胞白血病(PCL)临床特点及治疗方案,提高对该疾病的认识。方法:回顾性分析安徽医科大学第二附属医院收治的1例PCL患者临床资料。结果:患者经4线药物治疗,在第三次复发后病情快速进展,接受靶向B细胞成熟抗原嵌合抗原受体T细胞治疗后获得持续14月的无进展生存,未发生细胞因子释放综合征。结论:抗B细胞成熟抗原嵌合抗原受体T细胞可能为潜在的PCL患者治疗方法。

B细胞成熟抗原在多发性骨髓瘤免疫治疗和分子影像中的应用进展

多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是一类源自血液系统的恶性肿瘤,其主要特点是骨髓中克隆性浆细胞的异常增长,这些细胞会分泌单克隆免疫球蛋白,进而损害靶器官。B细胞成熟抗原(B cell maturation antigen,BCMA)在恶性浆细胞中显著表达,而在正常细胞(仅限于浆细胞、部分成熟B细胞及CD34+干细胞)中则无表达,因此被视为MM诊断和治疗的理想靶点。该文综述了近年来BCMA在MM中的分子机制、靶向免疫治疗以及BCMA靶向分子影像探针的研究进展。

骨髓可溶性B细胞成熟抗原表达在多发性骨髓瘤患者中作为BCMA CAR-T细胞疗效预测指标的研究

目的探索多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓可溶性B细胞成熟抗原(sBCMA)表达对靶向B细胞成熟抗原(BCMA)的嵌合抗原受体T细胞(CAR-T细胞)治疗疗效及安全性的影响。方法以2018年1月至2021年12月接受人源化抗BCMA CAR-T细胞临床试验的29例复发/难治MM(RRMM)患者为研究对象。流式细胞术检测抗BCMA CAR-T细胞治疗前后骨髓sBCMA的表达并进行差异比较。结果①BCMA CAR-T细胞治疗2个月,20例(68.97%)患者获得总体反应(OR),9例患者仅为病情稳定(SD)或微小缓解(MR)。②20例OR组患者骨髓sBCMA表达治疗前高于治疗后[26926(18215,32488)ng/L对9968(6634,11459)ng/L,P<0.001];而MR+SD组患者骨髓sBCMA表达治疗前后差异无统计学意义[41187(33816,47046)ng/L对33954(31569,36256)ng/L,P=0.145];CAR-T细胞治疗前骨髓sBCMA表达OR组低于MR+SD组患者(P=0.005)。③全部29例RRMM患者CAR-T细胞峰值与骨髓sBCMA表达无明显线性相关性(R2=0.035,P=0.330)。④sBCMA表达水平与CAR-T细胞治疗不良事件严重程度的相关性:0~1级细胞因子释放综合征(CRS)组(13例)与2~4级CRS组(16例)比较骨髓sBCMA表达差异无统计学意义[32045(18742,40801)ng/L对29102(24679,38776)ng/L,P=0.879];0级免疫效应细胞相关神经毒性综合征(ICANS)组(22例)与1~3级ICANS组(7例)比较骨髓sBCMA表达差异无统计学意义[30073(19375,40065)ng/L对33816(22933,43459)ng/L,P=0.763]。结论骨髓sBCMA表达与RRMM患者接受BCMA CAR-T细胞治疗的疗效有关,但与不良事件严重程度无显著相关性。或可作为RRMM患者接受BCMA CAR-T细胞治疗的疗效预测标志物。

细胞周期蛋白依赖性激酶4/6抑制剂对多发性骨髓瘤细胞B细胞成熟抗原和程序性死亡受体配体1表达的影响

目的 探讨细胞周期蛋白依赖性激酶4/6(CDK4/6)抑制剂对多发性骨髓瘤(MM)细胞免疫治疗相关分子B细胞成熟抗原(BCMA)、程序性死亡受体配体1(PD-L1)表达及MM细胞和正常微环境细胞凋亡的影响。方法 对数生长期H929细胞分为阿贝西利组、帕博西尼组、DMSO组,于细胞培养基中分别加入2μmol/L阿贝西利、5μmol/L帕博西尼和等体积DMSO处理,处理1、3、5 d时,采用流式细胞术检测3组细胞BCMA、PD-L1相对平均荧光强度。2020年1月—2023年6月中国医学科学院血液病医院诊治MM患者3例,采集患者骨髓,采用淋巴细胞分离液分离骨髓单个核细胞,分为阿贝西利组、帕博西尼组、DMSO组,分别给予1μmol/L阿贝西利、10μmol/L帕博西尼和等体积DMSO处理,采用流式细胞术检测CD138+肿瘤细胞和CD138-正常微环境细胞相对细胞存活率。结果 帕博西尼组处理1、3、5 d时BCMA相对平均荧光强度(1.37±0.04、2.36±0.11、3.99±0.17)均高于阿贝西利组(0.69±0.02、1.03±0.05、1.69±0.06)(P<0.05),处理3、5 d时均高于DMSO组(1.00±0.02、1.00±0.05)(P<0.05),处理1 d时与DMSO组比较差异无统计学意义(P>0.05);阿贝西利组处理5 d时BCMA相对平均荧光强度高于DMSO组(P<0.05),处理1、3 d时与DMSO组比较差异均无统计学意义(P>0.05);阿贝西利组、帕博西尼组处理1、3、5 d时BCMA相对平均荧光强度均依次增高(P<0.05)。处理1、3、5 d时,阿贝西利组、帕博西尼组PD-L1相对平均荧光强度(1.30±0.02、3.21±0.10、2.28±0.17,1.28±0.12、2.81±0.38、2.00±0.16)均高于DMSO组(1.00±0.09、1.00±0.06、1.00±0.14)(P<0.05),阿贝西利组与帕博西尼组比较差异均无统计学意义(P>0.05);阿贝西利组、帕博西尼组处理3 d时均高于处理1、5 d时(P<0.05),处理5 d时高于处理1 d时(P<0.05)。处理24、48 h时,阿贝西利组、帕博西尼组骨髓单个核细胞CD138+相对细胞存活率均低于DMSO组(P<0.05),帕博西尼组均低于阿贝西利组(P<0.05)。处理48 h时,帕博西尼组骨髓单个核细胞CD138-相对细胞存活率低于DMSO组、阿贝西利组(P<0.05),处理24 h时与DMSO组、阿贝西利组比较差异均无统计学意义(P>0.05);阿贝西利组处理24、48 h时骨髓单个核细胞CD138-相对细胞存活率与DMSO组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 CDK4/6抑制剂上调MM细胞BCMA、PD-L1表达,对MM细胞有选择性杀伤作用,对正常微环境细胞无明显影响。

B细胞成熟抗原在系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞的表达

目的检测B细胞成熟抗原(BCMA)mRNA在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)的表达水平,探讨BCMA在SLE发病中的意义。方法纳入2006年1-11月收治的36例SLE患者,同期17例健康志愿者作为对照组,采用半定量RT-PCR法检测外周血单个核细胞中BCMA mRNA的表达,并与SLE疾病活动指数(SLEDAI)进行相关性分析。结果 SLE患者组BCMA mRNA表达水平(0.598±0.230)均明显高于正常对照组(0.411±0.309)(P<0.05)。SLE患者BCMA mRNA表达水平与SLEDAI评分无相关性(P=0.590)。结论 SLE患者BCMA mRNA表达水平的增高,可能在SLE的发病机制中具有一定的作用。

血清B细胞成熟抗原在多发性骨髓瘤中的研究现状

多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是一种以骨髓中终末分化浆细胞异常积累为特征的B细胞恶性肿瘤[1]。近年来随着新药(蛋白酶体抑制剂、免疫调节药物、单克隆抗体等)不断被发现,MM患者治疗疗效明显改善,但对于MM患者的临床状态变化的监测仍是一个难题。目前用于监测MM患者临床状态的指标通常包括M蛋白和血清游离轻链(sFLC)水平等,但是具有若干局限性[2-4]。

抗B细胞成熟抗原嵌合抗原受体T细胞回输方案治疗复发难治多发性骨髓瘤1例并文献复习

目的探讨以抗B细胞成熟抗原(BCMA)嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)回输方案治疗复发难治多发性骨髓瘤(RRMM)的效果。方法回顾性分析东南大学医学院附属中大医院2021年3月收治的1例RRMM患者的治疗经过,并复习相关文献。结果患者为70岁女性,确诊多发性骨髓瘤3年余,接受多种化疗方案治疗后效果不佳,并出现肾脏的髓外受累。转诊至东南大学医学院附属中大医院后行鼠源化抗BCMA CAR-T回输治疗,输注后发生2级细胞因子释放综合征,予托珠单抗对症治疗后缓解。细胞回输后第11天,腹部CT提示肾盂包块较前缩小;回输6个月后,腹部CT未见肾盂占位;回输8个月后,疾病无进展。结论抗BCMA CAR-T回输方案治疗RRMM患者疗效显著,安全性高。

来那度胺联合抗B细胞成熟抗原嵌合抗原受体T细胞治疗复发难治多发性骨髓瘤一例并文献复习

目的探讨来那度胺联合抗B细胞成熟抗原(BCMA)嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)治疗复发难治多发性骨髓瘤(RRMM)的临床效果。方法回顾分析河南省中医院2020年1月收治的1例接受来那度胺联合抗BCMA CAR-T治疗的RRMM患者临床资料,分析其临床特点及诊治情况,并复习相关文献。结果患者为51岁男性,2015年10月确诊IgD-λ型多发性骨髓瘤(MM),接受包括免疫调节剂和蛋白酶体抑制剂等方案化疗10个疗程后缓解,随后接受自体造血干细胞移植;移植后14个月MM复发,采用多种化疗方案及鼠源和人源抗BCMA CAR-T治疗,病情持续进展。用氟达拉滨和环磷酰胺预处理后,-1天服用来那度胺,次日输注人源抗BCMA CAR-T,输注后发生3级细胞因子释放综合征(CRS),对症治疗后缓解。抗BCMA CAR-T治疗后14 d原发病评估达非常好的部分缓解(VGPR),至截稿前已维持VGPR 3个多月。结论来那度胺联合抗BCMA CAR-T治疗RRMM是可行的和有效的。

含达雷妥尤单抗方案用于抗B细胞成熟抗原的嵌合抗原受体T细胞治疗后复发难治多发性骨髓瘤一例并文献复习

目的分析含达雷妥尤单抗方案用于抗B细胞成熟抗原(BCMA)嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)治疗后复发难治多发性骨髓瘤(RRMM)的疗效。方法回顾性分析河南省中医院2019年8月收治的1例接受含达雷妥尤单抗方案治疗的抗BCMA CAR-T治疗后RRMM患者的临床资料,并复习相关文献。结果患者因RRMM接受抗BCMA CAR-T治疗,复发后应用含达雷妥尤单抗方案治疗,8周后达到部分缓解(PR),治疗后12周达到非常好的部分缓解(VGPR),除白细胞和血小板减少、一过性输注反应外,未出现感染等其他不良反应。至截稿前已维持VGPR 4个月余。结论含达雷妥尤单抗方案用于抗BCMA CAR-T治疗后RRMM是安全的,为此类患者提供了新的治疗策略。

靶向B细胞成熟抗原的多发性骨髓瘤在研新药——GSK2857916

多发性骨髓瘤(multiple myeloma, MM)是继非霍奇金淋巴瘤后第二种常见的血液系统恶性肿瘤。B细胞成熟抗原(B-cell maturation antigen, BCMA)是浆细胞存活所需的肿瘤坏死超家族的细胞表面受体,在MM患者的骨髓瘤细胞中能普遍检测到,其已被多种新型靶向疗法作为选择性抗原。GSK2857916是由葛兰素史克公司正在开发的一种新型抗体偶联药物,由抗BCMA单克隆抗体与微管蛋白聚合抑制剂单甲基尿嘧啶F缀合而成,对复发/难治性多发性骨髓瘤细胞具有良好的抑制活性。GSK2857916已被美国食品药品监督管理局授予突破性药物资格,同时被列为2019年全球最具市场潜力的在研新药之一,有望弥补这个领域的空白。本文就GSK2857916的基本信息、作用机制和临床试验情况作一概述。

抗B细胞成熟抗原嵌合抗原受体T细胞再次治疗复发难治多发性骨髓瘤的疗效和安全性

目的探讨抗B细胞成熟抗原(BCMA)嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)再次治疗复发难治多发性骨髓瘤(RRMM)的疗效和安全性。方法回顾性分析2017年1月至2021年6月因首次抗BCMA CAR-T治疗(CART1)失败或复发,在河南省中医院接受抗BCMA CAR-T再次治疗(CART2)的10例RRMM患者临床资料。总结CART2患者的治疗情况、疗效及不良事件,并与CART1的客观缓解率(ORR)、中位持续缓解时间(DOR)及不良反应发生率进行比较。结果10例患者中,男性8例,女性2例,中位年龄57岁(41~70岁)。CART1患者3个月ORR为90%,中位DOR为16.0个月(3.0~27.0个月)。CART2使用人源抗BCMA CAR-T治疗6例,鼠源抗BCMA CAR-T治疗4例。CART2患者3个月ORR为40%,中位DOR 8.5个月(3.0~11.0个月)。CART1用鼠源抗BCMA CAR-T的9例患者中,CART2仍用鼠源抗BCMA CAR-T再治疗的4例患者无一例有效;用人源抗BCMA CAR-T再次治疗的6例患者中,4例(66.7%)达到部分缓解(PR)及以上缓解。CART1的10例患者发生1~2级细胞因子释放综合征(CRS),7例出现不同程度的白细胞计数、中性粒细胞绝对计数(ANC)和血小板计数减少;CART2有效的4例患者均发生1~2级CRS,均出现不同程度的白细胞计数、ANC和血小板计数减少,无一例发生免疫效应细胞相关神经毒性综合征。结论抗BCMA CAR-T再次治疗RRMM有效、安全。CART2的ORR和DOR低于CART1,常见不良反应为CRS和血细胞减少。