B7基因修饰的肿瘤细胞诱导抗大肠癌主动免疫

目的 :研究B7基因修饰的肿瘤细胞诱导抗大肠癌CTL的活化。方法 :采用电击法将B7基因导入小鼠大肠癌细胞CMT93 ,G418筛选阳性克隆 ,免疫组化显示B7分子有高效表达 ,B7 +CMT93(CMT93 -B7)接种于C57BL/6小鼠背部皮下 ,其致瘤性显著下降 (P<0 01) ;CMT93 -B7致敏的小鼠对野生型瘤细胞具有免疫保护作用(P<0 05) ;用CMT93和CMT93 -B7细胞分别经腹腔免疫小鼠 ,得到腹腔浸润淋巴细胞及致敏脾细胞 ,MTT法进行体外杀伤实验。结果 :CMT93 -B7诱导的CTL(cytotoxicTlymphocyte)对CMT93的杀伤活性显著高于野生型CMT93诱导的CTL对相同靶细胞的杀伤活性(P<0 05) ,并且CMT93 -B7诱导的CTL对CMT93 -B7的杀伤率显著高于对野生型CMT93的杀伤率 (P<0 05)。结论 :B7分子有效地促进抗大肠癌CTL的活化 。

转染B7基因的U14疫苗对小鼠宫颈癌的防治作用研究

目的 :探讨转染B7基因的U14疫苗能否在中国 6 15系小鼠体内诱导抗宫颈癌主动免疫应答。方法 :将小鼠B7 1基因导入 6 15系小鼠宫颈癌U14细胞 ,建立高效表达B7 1的U14细胞株 (B7+U14 )及其细胞疫苗。 (1)用B7+U14疫苗免疫 6 15系小鼠 ,观察U14皮下移植成瘤情况 ;(2 )用B7+U14疫苗治疗 6 15系荷瘤小鼠。设立对照组 ,观察各组小鼠的成瘤情况、生存期 ;(3)体外实验检测经B7+U14和U14疫苗免疫小鼠T细胞杀伤肿瘤的活性。结果 :(1)B7+U14疫苗免疫可有效地预防野生型U14细胞移植瘤的产生 (比较肿瘤大小、生存期 :P <0 .0 1) ;(2 )B7+U14疫苗能治愈部分荷瘤小鼠 ,其效果受荷瘤大小的限制 ,肿瘤直径 >3mm时 ,B7+U14疫苗治疗无效 (P <0 .0 5 ) ;(3)经B7+U14和U 14疫苗免疫小鼠T细胞 ,其不同效靶比杀伤肿瘤效率前者明显高于后者 (P <0 .0 0 1)。结论 :转染B7基因的U14细胞疫苗能诱导机体产生有效的抗宫颈癌主动免疫应答。应用转染B7基因的肿瘤细胞疫苗可能成为临床术后治疗宫颈癌的有效辅助方法。

转GM-CSF基因瘤苗联合B7基因治疗淋巴瘤的实验研究

用电穿孔法将粒—巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)表达质粒导入RMA淋巴瘤细胞,筛选出高表达GM-CSF的细胞克隆(RMA-GM),再转入B7质粒,经过丝裂霉素处理后皮下接种C57小鼠,观察抗肿瘤免疫效果。结果获得了高表达GM-CSF的小鼠T细胞淋巴瘤克隆RMA-GM,联合B7质粒电转染细胞接种C57小鼠后,出瘤时间比对照组延长,肿瘤生长速度减慢,生存期明显延长,90%小鼠长期生存。提示GM-CSF联合B7基因质粒转导的肿瘤瘤苗比单一基因转导有更好的抗肿瘤免疫效果。

B7基因联合导入对自钉基因靶向化疗作有影响的电镜观察

目的：探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶基因（ＨＳＶ－tk）、Ｂ细胞活化抗原（Ｂ７）联合基因治疗乳腺癌的协同性。方法：将ＳＨＺ－８８乳腺癌细胞在ＳＤ乳鼠上致瘤后，随机分为对照组、tk组、Ｂ７组及tk＋Ｂ７组，每组１０只。３周后瘤体内分别注射空载体０．２ml或转染有ＧeＴＫpＳＮ、pＢ７ＳＮ和ＧeＴＫpＢ７ＳＮ基因的ＳＨＺ－８８细胞约５×１０ ＾６个并按５０mg．d＾－１腹腔内注射羟甲基无环鸟苷（ＧＣＶ）治疗１５d。

UGT2B7基因多态性与药物代谢关系的研究进展

尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UGT)是药物Ⅱ相代谢中至关重要的酶,而尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶2B7(UGT2B7)基因多态性对UGT的活性起着重要的作用。不同的UGT2B7基因型与患者体内的血药浓度有关,根据基因型的不同可分为强代谢组及弱代谢组。该文主要阐述UGT2B7基因多态性与药物代谢的关系,着重叙述UGT2B7基因多态性与血药浓度的相关性。

B7基因与肿瘤免疫基因治疗的研究进展

基因治疗是继手术、放疗、化疗之后的第四种肿瘤治疗方案,共刺激分子B7在肿瘤免疫基因治疗中的作用成为目前肿瘤研究的热点之一。本文介绍B7基因家族及其在肿溜免疫基因治疗的基础与临床研究中的作用,表明B7基因在肿瘤的基因治疗中具有广阔的应用前景。

B7基因转染对肾癌细胞的影响

目的 :观察B7基因表达对人肾癌细胞免疫原性的影响。方法 :将B7基因采用脂质体转染技术 ,将PLXSN/B7 1转染肾癌细胞。运用RT PCR方法观察B7 1表达情况 ,同时应用单克隆抗体标记技术检测转染前后免疫学改变。结果 :肾癌细胞不表达 ,转染后大多数肾癌细胞表面表达B7 1。转染前后肾癌患者T3、T4升高 ,T8降低 ,T4 /T8升高。结论 :B7 1基因能增强免疫细胞对肾癌细胞的识别和杀伤 。

脂质体介导B7基因在C6胶质瘤细胞中表达的实验研究

目的 通过脂质体介导基因转移方法 ,将含B7基因的重组逆转录病毒表达质粒导入C6细胞中 ,使之能有效的表达B7分子 ,探索胶质瘤免疫基因治疗的新方法。方法 用脂质体将pLXSN -B7重组表达质粒导入Wistar大鼠胶质瘤细胞系C6中 ,经G418筛选出阳性克隆。通过PCR、狭缝杂交及B7单克隆抗体免疫荧光方法检测B7基因在C6细胞中的整合、转录及表达情况。结果 PCR可从B7基因转导的C6细胞 (C6pLXSN -B7)基因组中扩增出 0 8Kb的B7基因片断 ;以B7为探针狭缝杂交显示C6pLXSN -B7细胞中有B7基因的转录 ;以抗 -B7单克隆抗体进行的免疫荧光检测显示C6pLXSN -B7细胞表面有B7分子的表达 ,而对照组肿瘤细胞 (C6pLXSN、C6 )则无B7分子的表达。结论 脂质体介导B7基因转移方法可将B7基因完整整合到C6细胞基因组中并使之能稳定、有效的表达。

B7基因转染的肿瘤细胞诱导的抗肿瘤免疫反应的特异性和持续性

肿瘤免疫治疗的目的之一是诱导特异性的T细胞反应以清除体内散在的肿瘤细胞，近年来的研究表明T细胞的激活除需要特异性抗原／MHC Ⅰ类分子复台物信号外，还需要共激活分子与T细胞表面的受体结台作为第二信号来完成整个过程，这类共激活分子中作用最明显的是BT分子，它与T细胞表面抗原CD28分子结合后。

HOXB7基因在肺腺癌中的表达及其临床意义

目的检测同源盒基因B7(HOXB7)在肺腺癌中的表达情况,并探讨其临床意义。方法分别应用逆转录PCR(RT-PCR)和Western blotting法检测人正常肺支气管上皮细胞系HBE及4株肺腺癌细胞系A549、H1975、H1650、H322中HOXB7的表达情况。应用免疫组织化学染色及Western blotting法检测HOXB7在75例肺腺癌及配对癌旁正常组织中的表达,并分析其表达与肺腺癌临床病理特征及预后的关系。结果 4株肺腺癌细胞系中HOXB7 mRNA和蛋白的表达水平均显著高于正常肺支气管上皮细胞系(P<0.05)。HOXB7蛋白在肺腺癌及对应癌旁正常组织中的高表达率分别为76.0%(57/75)和9.3%(7/75),差异有统计学意义(P<0.05)。HOXB7蛋白在肺腺癌组织中的表达水平与临床分期、病理分级及淋巴结转移有关(P<0.05),而与性别、年龄无关(P>0.05)。HOXB7低表达者的中位生存期为68个月,高于高表达者的51个月,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HOXB7在肺腺癌中高表达,且与肿瘤的侵袭转移和疾病进展相关,有可能作为肺腺癌早期诊断及评估预后的新靶标。

骨与软组织肉瘤患者检测循环肿瘤细胞及HOXB7基因表达的临床意义

目的探讨骨与软组织肉瘤患者外周血中循环肿瘤细胞(circulating tumor cell,CTC)的数量、类型以及循环肿瘤细胞上同源盒基因B7(homeobox genes B7,HOXB7)表达的临床意义。方法回顾性分析本院2017年5月至2019年7月经病理确诊的骨与软组织肉瘤患者40例,患者确诊后均采用CanPatrolTM富集技术检测循环肿瘤细胞,采用多重mRNA原位分析对循环肿瘤细胞进行分型鉴定,并使用RNA探针检测循环肿瘤细胞上HOXB7基因的表达情况。结合临床资料,分析CTC计数、类型及HOXB7基因表达与骨与软组织肿瘤的分期及转移之间的关系。结果40例患者中有37例在治疗前检测出CTC细胞,检测出的CTC分为上皮型、混合型和间质型。CTC计数与骨与软组织肉瘤的分期密切相关(P=0.002),EnneckingⅢ期患者外周血CTC计数明显多于EnneckingⅡ期(P=0.040);EnneckingⅢ期患者间质型CTC的计数也显著高于EnneckingⅡ期(P=0.001)。HOXB7在EnneckingⅢ期患者CTC中的阳性表达率为56.9%,显著高于其他分期(P=0.003)。对骨肉瘤进行亚组分析,EnneckingⅢ期患者CTC中HOXB7表达的阳性率显著高于EnneckingⅡ期(P=0.025)。结论骨与软组织肉瘤患者外周血循环肿瘤细胞细胞计数、分型及HOXB7基因的表达与肿瘤分期、转移密切相关。

肝豆状核变性患者的临床表型和ATP7B基因变异分析

目的:分析我国北方部分地区肝豆状核变性(wilson disease,WD)患者的临床特征及ATP7B基因变异情况。方法:以2018年11月至2022年4月期间在河南大学附属郑州颐和医院确诊的50例WD患者为研究对象,提取患者外周血基因组DNA,采用PCR扩增后用Sanger法对患者ATP7B基因外显子/内含子连接区进行序列分析。结果:50例WD患者根据临床症状分为肝型14例、脑型28例和其他型8例。50例WD患者中ATP7B基因变异结果:纯合子3例,复合杂合子32例和单一杂合突变13例,三处杂合突变1例,四处杂合子突变1例。共检测到30种不同的ATP7B基因突变,突变频率比较高的为p.Arg778Leu,p.Pro992Leu,p.Ala874Val,p.Arg919Trp,p.Val1106Ile。结论:本研究发现肝型WD患者发病早期主要表现为转氨酶升高,血清铜蓝蛋白降低,且以幼儿为主。p.Arg778Leu和p.Pro992Leu为ATP7B基因常见的突变,共发现30种ATP7B基因突变,为WD的早期确诊、家系筛查及产前诊断提供科学依据。

儿童肝豆状核变性的临床资料与ATP7B基因分析

目的 分析肝豆状核变性(WD)患儿的临床资料及ATP7B基因变异特点。方法 收集2016年1月至2022年6月于西安交通大学附属儿童医院感染科就诊的158例WD患儿的临床资料,根据受累器官及临床表现的不同,分为肝型WD(n=144)和脑型WD(n=14)。根据肝脏受累的轻重程度及病程长短、表现的差异,肝型WD又分为症状前WD(n=114)、急慢性肝炎型WD(n=30)。采用目标基因捕获、高通量测序技术进行基因检测,根据是否存在c.2333G>T(p.R778L)变异,分为R778L型(n=55)与其他型WD组(n=61)。比较各组间患儿的一般情况、临床表现及实验室指标。结果 症状前WD患儿的确诊年龄小于急慢性肝炎型WD与脑型WD(Z值分别为-56.640、-64.956,P<0.05);急慢性肝炎型WD患儿的病程短于症状前WD患儿(Z=26.930,P<0.05)。ATP7B基因热点突变前4位依次为c.2333G>T(等位基因频率为28.88%)、c.2621C>T(等位基因频率为9.48%)、c.2310C>G(等位基因频率为8.62%)及c.2975C>T(等位基因频率为7.76%)。R778L组WD患儿的确诊年龄大于其他型WD(Z=2.082,P<0.05)。结论 儿童WD以肝脏表现常见,基因型与临床表型无明显相关性。

口腔鳞状细胞癌组织TRIM14和HOXB7蛋白表达与患者临床病理特征及预后的关系

目的 探讨三结构域蛋白14(TRIM14)、同源异型盒基因B7(HOXB7)蛋白在口腔鳞状细胞癌(OSCC)患者癌组织中的表达水平与患者临床病理特征及预后的关系。方法 收集2016年1月至2018年1月行手术治疗的OSCC患者148例的癌组织与癌旁正常组织,免疫组化法分析组织中TRIM14、HOXB7表达情况;Kaplan-Meier生存曲线分析OSCC患者癌组织TRIM14、HOXB7表达水平与生存率之间的关系;COX回归分析OSCC患者预后不良的影响因素。结果 OSCC癌组织TRIM14、HOXB7高表达率均高于癌旁正常组织(P<0.05)。OSCC癌组织TRIM14、HOXB7表达与肿瘤T分期、M分期、淋巴结转移、周围组织浸润、分化程度相关(P<0.05)。OSCC患者5年生存率为49.32%(73/148),Kaplan-Meier生存曲线表明TRIM14、HOXB7高表达患者生存率低于TRIM14、HOXB7低表达患者(χ^(2)=14.480、24.841,P<0.001)。多因素COX分析结果显示,T3-T4分期、M1分期、淋巴结转移、周围组织浸润、癌组织TRIM14、HOXB7高表达均是OSCC患者预后不良的危险因素(P<0.05)。结论 OSCC患者癌组织TRIM14与HOXB7蛋白表达水平均上调,其表达与患者临床病理特征和5年生存预后明显相关。

肝豆状核变性ATP7B基因突变的分子机制研究进展

肝豆状核变性,是位于13号染色体上的ATP7B基因突变导致的一种常染色体隐性遗传病。ATP7B基因突变可能会导致其编码的ATP7B蛋白(铜离子转运ATP酶β肽)结构改变及功能受损,使肝细胞的铜转运及代谢发生障碍,引起铜的异常沉积,进而出现病理表现。本文对ATP7B基因及其编码蛋白的结构功能、ATP7B基因突变的类型及其分布、突变对ATP7B蛋白结构和功能的影响进行了归纳梳理,为进一步分析WD致病的分子机制提供参考。

B7联合HSV-TK基因对大鼠乳腺癌的治疗作用

目的 :探讨逆转录病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 (HSV- TK)和共同刺激因子 B7基因联合使用对乳腺癌动物模型的体内治疗作用。方法 :应用基因重组技术 ,构建分别携带 HSV- TK,B7及 HSV- TK/B7双基因的逆转录病毒载体。以 SHZ- 88细胞株建立乳腺癌动物模型 ,随机分为对照组、TK组、B7组及 TK/B7组 ,每组 2 0只。 2周后于瘤体内分别注射转染有空载体及不同的重组载体的乳腺癌细胞 ,3d后于腹腔内连续注射无环鸟苷 (GCV) 15 d(5 0 mg· kg- 1· d- 1 ) ,观察肿瘤体积、荷瘤生存时间的变化和组织病理改变。结果 :B7组、TK/B7组肿瘤内淋巴细胞浸润明显增多。与对照组相比 ,TK组、B7组肿瘤生长减缓 ,体积减小 ,荷瘤生存期延长 ,两组间均有显著差异 (P<0 .0 5 ) ,而 TK /B7组尤为显著 (P<0 .0 1) ;TK组与 B7组相比则无显著差异。 结论 :HSV- TK,B7基因联合治疗乳腺癌动物模型 ,能直接杀伤肿瘤 ,抑制肿瘤生长 ,延长荷瘤动物的生存期。

基于生物信息学分析WNT7B基因在肺腺癌中的表达及其临床意义

目的:基于生物信息学分析WNT7B基因在肺腺癌(LUAD)中的表达及其临床意义。方法:应用生物信息学方法评价WNT7B在LUAD中的诊断和预后预测价值。通过TCGA、GEO数据库研究WNT7B基因在肺癌中表达情况,并分析WNT7B基因在肺癌和非癌组织中表达差异及其表达与生存率、免疫细胞浸润之间的关系。应用STRING数据库筛选共表达基因并构建调控网络,将共表达基因进行基因本体论(GO)以及京东基因和基因组(KEGG)富集分析,同时应用cBioportal探究WNT7B基因突变对肺癌患者生存期的影响。结果:与正常肺组织相比,LUAD组织中WNT7B基因表达水平明显升高(P<0.01),WNT7B基因作为标志物的灵敏度为0.628。K-M生存分析显示,高表达WNT7B组预后较差(P<0.05)。GSEA揭示了5条与WNT7B基因相关的信号通路,WNT7B基因突变的LUAD患者总生存期(P=0.035 8)的预后预测作用不佳。此外,还发现WNT7B基因表达与免疫显著相关。结论:WNT7B基因有望成为LUAD诊断、预后评估和治疗的新靶点,但仍须进一步开展临床相关研究。

人B7-1/Sart3融合基因的克隆和表达

目的 构建人共刺激分子CD80 (B7 1)、T细胞识别的鳞状细胞癌抗原 3(Sart3)融合基因真核表达载体 ,并分别在原核和人成纤维细胞中表达。方法 采用RT PCR技术 ,从人胎盘组织抽提的总RNA中克隆Sart3基因的部分cDNA序列 (第 1～ 12 81bp) ,此段序列包括已报道的能诱导HLA限制性细胞毒性T淋巴细胞的抗原表位。然后将不含终止密码子的B7 1cDNA和Sart3cDNA共克隆入真核表达载体 pEGFP N1,测定核苷酸序列确定重组成功后 ,分别转染大肠杆菌和人成纤维细胞 ,利用流式细胞仪和Westernblot检测B7和Sart3的表达。结果 构建人B7、Sart3融合基因真核表达载体B7Sart3/pEGFPN。测序结果与GenBank的B7、Sart3相应序列 (NM_0 0 5 191、NM_0 14 70 6 )一致 ,阅读框无改变。流式细胞仪测定发现在转染的人成纤维细胞表面有明显的荧光增强 ,免疫印迹发现融合蛋白可以与抗B7抗体反应 ,融合蛋白分子量与B7 Sart3 EGFP的预测分子量相当。结论 成功构建真核表达载体B7Sart3/pEGFPN ,并在人成纤维细胞中表达。为下一步研究将SART3蛋白作为肿瘤疫苗应用于骨肉瘤的生物治疗打下基础。

B7-1转基因骨肉瘤疫苗的制备及鉴定

目的构建含B 7-1基因与绿色荧光蛋白(GFP)基因的融合表达载体,转染LM 8骨肉瘤细胞制备骨肉瘤疫苗。方法用RT-PCR法扩增B 7-1基因片断,应用含GFP基因的真核表达质粒构建融合表达载体,酶切、测序鉴定构建质粒;采用脂质体介导方法将其转染到LM 8细胞,并用荧光显微镜及LCM结合蛋白免疫印记检测其在肿瘤疫苗细胞中的表达。结果经PCR及酶切鉴定,证实成功构建了含B 7-1基因的真核表达重组体pEGFP-C 1/B 7,重组子测序结果与国际基因文库中m B 7-1序列相符。用荧光显微镜观察到疫苗细胞中有GFP表达,RT-PCR检测到疫苗细胞中B 7-1基因的表达,w esternb lot发现疫苗细胞中有B 7蛋白的表达。结论B 7-1重组真核绿色荧光表达载体pEGFP-C 1/B 7已成功构建,转染LM 8细胞成功制备了骨肉瘤细胞疫苗。