BCA法测肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌SR膜蛋白浓度

目的测定肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌膜蛋白浓度。方法蔗糖梯度离心法对肺动脉平滑肌膜蛋白进行提取;二喹啉甲酸(Bicinchoninic acid,BCA)法测定膜蛋白浓度;G-6-Pase定量试剂盒测定平滑肌肌浆网(SR)标志酶G-6-Pase活性。结果经测定MCT组和对照组G-6-Pase活性分别为(19.5±2.41)IU/g和(18.35±2.21)IU/g,明显高于肺动脉平滑肌组织匀浆G-6-Pase活性(1.23±0.14)IU/g和(1.15±0.17)IU/g;测定波长为595 nm,在0.025～0.5mg/ml时,线性关系良好,r=0.997 6。结论提取的SR有较高纯度;BCA法可以用于平滑肌SR膜蛋白浓度的测定。

BCA法在反胶束萃取大豆蛋白中的应用

本文建立了用一种新的方法测定反胶束(如AOT)体系中所萃取大豆蛋白质的方法,即BCA(二辛可宁酸)法,经过对照实验,证明该方法的测定结果可靠,与半微量凯式定氮法相比无显著差异,该方法操作简便,结果准确可靠,可替代半微量凯式定氮法。

BCA法测定微量蛋白质的初步评价

自Smith 1985年报道了采用4,4′二羧酸-2,2′-喹啉(2,2′-Bicinchoninic acid,BCA)测定蛋白质后,其优点已被Backer 等承认.国内也有文献介绍.作者试图将其应用于临床体液样本的微量蛋白质检测.为此,我们将其和CBB、Lowry 氏二法作了比较性研究,报道如下.

BCA法测定新的植物毒素——蒜头果蛋白质量浓度

蒜头果蛋白(malanin)是从蒜头果种仁中分离、纯化出的一种新的植物毒蛋白.采用BCA法用酶标仪测定蒜头果蛋白的质量浓度,结果得到标准牛血清白蛋白回归方程.根据malanin的光吸收值,得出理论质量浓度为1 mg/mL的malanin的实测质量浓度为472.793μg/mL,说明malanin干粉的水溶性较好.

还原糖和非还原糖对BCA法测定微量蛋白质的影响

还原糖和非还原糖对ＢＣＡ法测定微量蛋白质的影响江苏省泗洪县人民医院（２１１９００）刘家喜，夏寿扬１９８５年Ｓｍｉｔｈ等［１］首次报告用４，４’－二羧酸－２，２＇－喹啉（ＢｉｃｉｎｃｈｏｎｉｎｉｃＡｃｉｄ，ＢＣＡ）测定体液微量蛋白质，国内也有文献报告［...

BCA法测定食品中的微量铜

研究BCA(2,2'-联喹啉-4,4'-二甲酸二钠盐)与铜的显色反应,建立测量食品微量铜的光度分析方法。在盐酸羟胺存在条件下,pH11.0缓冲介质中,BCA试剂与铜在物质的量的比为2:1的条件下反应生成的紫色络合物,λmax=562nm,ε562nm=7.72×103L/(mol.cm),铜含量在0～4.8μg/mL内符合比尔定律;经测定茶叶和海带中的铜含量,结果与原子吸收法的测定结果相符。结果表明:该方法稳定准确,可用于食品中微量铜的测定。

BCA法测定猪肺表面活性物质及其冻干粉中的表面活性蛋白质

目的：建立肺表面活性物质及其冻干粉中表面活性蛋白质的含量测定方法。方法：采用BCA试剂盒测定。结果：蛋白质在10～80μg范围内，线形关系良好，r=0．9998；在猪肺表面活性物质及其制剂中回收率分别为98.19％及98.41％；精密度（RSD）为0．61％；磷脂及辅料对测定无干扰。结论：本方法可简单快速地测定猪肺表面活性物质及其冻干粉中表面活性蛋白质的含量，专属性强、准确度高。

BCA法优化补骨脂蛋白质的提取工艺

采用碱提酸沉法提取补骨脂蛋白质,以二喹啉甲酸(BCA)法测定的蛋白质溶出率为指标,通过单因素实验和正交实验优化补骨脂蛋白质的碱提工艺条件,考察浸提p H、料液比、温度、时间等因素对补骨脂蛋白质提取的影响.结果表明,四种提取因素的影响从大到小的顺序为:浸提p H>料液比>温度>时间.最佳工艺条件为浸提p H 10.0、料液比(g/m L)1∶20、温度45℃、浸提时间150 min,此条件下补骨脂蛋白质溶出率为23.69%.以BCA法测定酸沉蛋白质浓度,确定补骨脂蛋白质的最大沉淀量p H为4.5,蛋白质的最大沉淀率为55.16%.对比发现理论提取率与实际提取率基本相同,证明BCA法测定补骨脂蛋白质的方法准确、可靠,为补骨质蛋白质的进一步研究利用奠定了基础.

改良BCA法测定透明质酸钠修复凝胶敷料中的蛋白质残留

在不受透明质酸钠修复凝胶敷料中其他辅料影响的同时,采用比较简单有效的方法,精确测定辅料中蛋白质的残留量。通过调节反应试剂的用量,将传统的BCA法进行改良,提高反应灵敏度,降低检测限度,利用紫外-可见分光光度计测定敷料中的蛋白质中含量。结果表明:改良后的BCA法在10.6 ug/ml~84.8 ug/ml的浓度范围内,标准品的浓度与吸光度保持良好的线性关系(r≥0.999),检测灵敏度提高约8倍,平均加样回收率为100.7%,相对标准偏差(n=6)为2.01%。该方法提高检测灵敏度的同时,避免辅料的干扰,准确测定透明质酸钠修复凝胶敷料中蛋白质的残留量。

二喹啉甲酸法(BCA)分析蛋白多肽的原理、影响因素和优点

蛋白多肽的定量分析方法很多,二喹啉甲酸法(BCA)是常用的方法之一。食品组成成分复杂,有很多影响BCA反应的干扰物。文中对BCA法的反应原理、测定方法、影响因素和消除方法,以及BCA法的优点进行系统的论述。

BCA法检测组分百日咳疫苗中间品蛋白含量的可行性评价

目的评价BCA法检测组分百日咳疫苗中间品蛋白含量的可行性,并进行验证。方法以《中国药典》三部(2015版)Lowry法2的检测结果为对照,对干扰BCA法测定组分百日咳疫苗中间品蛋白质含量的物质进行分析,明确干扰物质的限度;对BCA法的专属性、线性范围、重复性、准确性进行验证,并与Lowry法2的检测结果进行比较。结果30%硫酸铵对Lowry法2和BCA法测定蛋白质含量有明显干扰,其他缓冲体系均无影响;硫酸铵浓度≤25%时,对Lowry法2检测结果无干扰,低于5%的硫酸铵可通过1 mol/L的盐酸消除,不影响BCA法的测定;凯氏定氮法测定结果显示,组分百日咳疫苗中间品中硫酸铵浓度<5%。BCA法的专属性、线性范围、重复性、准确性均符合验证要求;Lowry法2与BCA法检测结果差异无统计学意义(P>0.05)。结论BCA法操作简便、快速、准确、高通量,可用于检测组分百日咳疫苗中间品的蛋白含量。

威廉环毛蚓提取物蛋白质含量测定方法研究

目的 建立威廉环毛蚓提取物蛋白质含量测定的最佳方法。方法 以氨基酸分析仪测定的威廉环毛蚓提取物中的氨基酸含量为指标,对蛋白质含量检测方法 Lowry法2、改良Lowry法、BCA法、Bradford法进行对比评价。结果 Lowry法2、改良Lowry法、BCA法、Bradford法测定威廉环毛蚓提取物蛋白质含量(上清液)结果分别为27.03%、45.85%、31.58%、11.11%,威廉环毛蚓提取物蛋白质含量(混悬液)的结果分别为38.44%、52.39%、44.06%、11.56%。采用氨基酸分析仪法测定得到威廉环毛蚓提取物中游离氨基酸含量为4.18%,将威廉环毛蚓提取物蛋白质酸水解之后测定总氨基酸含量为48.53%。结论 在威廉环毛蚓提取物样品溶液的处理方式上,与样品上清液相比,样品混悬液的测定结果更接近样品中蛋白质的真实含量。以牛血清白蛋白(BSA)为对照品,相较于Lowry法2、改良Lowry法和Bradford法,BCA法更适宜用于威廉环毛蚓提取物中的蛋白质含量测定。

4种常用蛋白浓度测定方法的比较

目的比较4种常用蛋白浓度测定方法的准确性及各自的影响因素。方法采用Lowry法、BCA法、磺基水杨酸沉淀法、Bradford法等4种常用蛋白浓度测定方法对几种样品进行对比试验。结果研究了蛋白质样品中的添加物对不同方法的影响,采用BCA法测定PEG-IL-6的蛋白浓度以及采用Bradford法测定变性液中的蛋白浓度不仅准确而且重复性好。结论确定PEG-IL-6的最佳蛋白浓度测定方法为BCA法,而包涵体变性液中的蛋白浓度只能用Bradford法测定。

凝胶层析法测定蛋白含量的方法

利用蛋白纯化仪建立一种凝胶层析测定蛋白含量的方法,采用HiTrapTMDesalting 5×5 mL色谱柱,流动相为超纯水,以蛋白浓度为横坐标,以蛋白出峰面积为纵坐标,建立标准曲线。与BCA试剂盒法比较,BCA试剂盒法相对误差范围为9.13%～144.00%,此法的相对误差范围为0.78%～44.72%,可见凝胶层析法测定结果准确性高,操作简单,快速,是一种可行的测蛋白含量的方法。

二喹啉甲酸检测法测定Sprague-Dawley大鼠肝微粒体蛋白浓度

目的建立酶标仪检测大鼠肝微粒体蛋白浓度的方法。方法大鼠尾静脉连续3 d注射0.9%氯化钠注射液2 ml,第4 d解剖大鼠,取肝脏,应用差速离心法提取大鼠肝微粒体,用二喹啉甲酸检测（BCA）法测定肝微粒体蛋白浓度。结果蛋白标准曲线范围在0~0.5mg/ml,回归方程为Y=0.091 9＋0.868X,（R=0.998）。低、中、高浓度回收率分别为101.33%,110.67%,101.17%,日内和日间精密度分别为6.52%,0.53%,1.95%和3.01%,7.23%,0.74%。结论本实验建立的BCA蛋白测定法准确可靠,重复性和稳定性均良好,相比较传统的蛋白测定方法,更为迅速,具有较强的抗干扰的能力,为研究用药后肝微粒体酶活性的改变提供可靠的检测手段。

提取石油烃降解菌T1蛋白的有效方法研究

该实验采用玻璃珠震荡、热裂解、反复冻融和超声波4种方法对细菌蛋白的提取、提取介质的裂解液。通过观察细菌裂解,蛋白浓度和蛋白SDS-PAGE电泳条带,得到了有效且稳定的石油烃降解菌蛋白质的提取方法。结果超声波效果最佳,热裂解和玻璃珠震荡效果一般,反复冻融和超声波提取蛋白的SDS-PAGE条带分布基本相同,其超声波获取蛋白丰度最高。蛋白质质量浓度测定显示,超声法提取蛋白质质量浓度最高。结果表明:超声法可高效提取石油烃降解细菌蛋白质,4种提取方法的稳定性和重复性均较好。

建立稳定表达人有机阴离子转运体OAT1细胞的活性检测方法及抑制剂的筛选

目的:建立稳定表达人有机阴离子转运体OAT1的细胞(hOAT1)中6-羧基荧光素浓度测定的荧光分析方法,并用于hOAT1细胞活性的测定及其抑制剂的筛选。方法:采用荧光分光光度法,检测波长为激发波长485 nm,发射波长520 nm,BCA法检测样品蛋白浓度。以6-羧基荧光素的荧光强度对蛋白浓度的比值作为衡量转运体OAT1活性的指标。结果:在hOAT1细胞中,6-羧基荧光素检测浓度的线性范围为0.08~3.2μmol·L^(-1)(r=0.9991),低、中、高浓度6-羧基荧光素溶液测定的日内RSD分别为6.08%、2.66%、0.86%,日间RSD分别为7.83%、3.73%、0.72%,绝对回收率分别为(111.35±9.8)%、(86.61±3.89)%、(100.15±1.10)%。抑制剂筛选结果显示1mmol·L^(-1)缬沙坦、奥美沙坦、厄贝沙坦、替米沙坦、辛伐他汀、瑞舒伐他汀对hOAT1抑制率分别为103.45%、110.34%、93.41%、90.33%、79.84%、95.22%。结论:本方法简单易行,可用于hOAT1细胞活性测定,缬沙坦、奥美沙坦、厄贝沙坦、替米沙坦、辛伐他汀、瑞舒伐他汀对hOAT1存在抑制作用。

抗体的系统性检测方法

21世纪随着现代生物技术、信息技术在生物医学工程学等研究领域的不断深入,以细胞工程技术和基因工程技术为主体的抗体工程药物近年来取得了突破性进展,其应用已涉及医学、农业、食品、环境等众多领域。当前生物医药正在成为发展潜力无限的产业,而生物医药领域中发展最快的是抗体工程药物,在基础研究、蛋白纯化、环境与食品监测、疾病诊断预防及治疗和优生优育等方面均有不可替代的重要作用。虽然抗体的制备技术日趋完善,但用于诊断和治疗的抗体必须符合高纯度、高效价、高可用性的要求,对抗体的制备、分离和鉴定就显得尤为重要。本文简要阐述了抗体工程药物制备中对抗体成分的系统性检测方法,包括纯度检测、特异性检测、亲和力检测、效价检测等,并对抗体这种特殊蛋白的常用定量检测方法进行了比较。

活性污泥胞外聚合物中蛋白质定量方法的评价

胞外聚合物(EPS)中蛋白质的准确定量对研究活性污泥性质具有重要意义。为对EPS中蛋白质定量方法的选择提供依据,系统评价了Modified Lowry法、BCA法、Bradford法的测试性能,包括测试范围、准确度、精密度及对EPS中部分组分(Ca^2+、Mg^2+、还原性糖、腐殖酸)的抗干扰性。结果表明:Modified Lowry法在蛋白质浓度为1~10、10~100 mg/L时与吸光度的线性相关性较好(R2>0.99),BCA法和Bradford法的测试范围较Modified Lowry法更宽;Modified Lowry法的准确度和精密度均最高,BCA法次之,Bradford法最低;Modified Lowry法受Ca^2+、Mg^2+和还原性糖干扰,BCA法受还原性糖和腐殖酸干扰,Bradford法受腐殖酸的干扰。因此,EPS中蛋白质定量方法的选择应从样品性质(蛋白质浓度范围、干扰物质种类及浓度)和测试方法性能(测试范围、准确度、精密度和抗干扰性)2个方面综合考虑。

不同纯化兔抗苏丹红ⅠIgG方法的比较

采用辛酸-硫酸铵法和亲和层析法两种方法纯化兔抗苏丹红I IgG。纯化产物通过BCA法、琼脂双向扩散、SDS-PAGE凝胶电泳试验进行蛋白浓度、效价及纯度的验证。实验结果表明,利用辛酸硫酸铵纯化的产物蛋白质浓度高于亲和层析法,但经亲和层析纯化的产物纯度和效价均优于饱和硫酸铵。因此亲和层析法是一种快速高效的纯化方法,纯化产物可适用于免疫学检测方法的研究,为今后食品中苏丹红添加剂的快速检测奠定了良好的基础。