异基因造血干细胞移植治疗bcr/abl融合基因阳性急性白血病的临床疗效观察

目的:观察异基因造血干细胞移植治疗bcr/abl融合基因阳性急性白血病的临床疗效。方法:对MICM分型确诊的18例bcr/abl融合基因阳性急性白血病患者,采用化疗或加用酪氨酸激酶抑制剂达完全缓解后行异基因造血干细胞移植术。结果:18例行异基因造血干细胞移植术后,均获得造血及免疫功能重建。9例无病存活;1例复发,经治疗后再次达完全缓解;8例死亡,其中因复发死亡3例,移植相关死亡5例。2a无病生存率为(31.6±14.0)%,2a总生存率为(48.0±13.9)%;中位无病生存时间(9.0±3.1)个月,中位总生存时间(18.0±8.0)个月。结论:异基因造血干细胞移植是目前治愈bcr/abl融合基因阳性急性白血病的惟一有效手段,联合酪氨酸激酶抑制剂能有效提高长期生存率。

间期双色双融合荧光原位杂交监测慢性髓系白血病异基因造血干细胞移植后bcr/abl融合基因

本研究探讨bcr/abl双色双融合荧光原位杂交(DD-FISH)的敏感性及临床应用价值。对19例慢性髓细胞白血病(CML)异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后微小残留病灶(MRD)用DD-FISH进行监测,同时与常规细胞遗传学(CC)、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)结果相比较。样本取自骨髓,少数来源于骨髓片或外周血。结果表明:14例CML患者在Allo-HSCT后CC显示持续正常供者核型,RT-PCR转为阴性,移植2月后均为完全供者嵌合(DC),DD-FISH检测结果持续为阴性,平均随访11.25月,MRD无增加。1例CC及RT-PCR阴性,而性染色体FISH为混合嵌合,DD-FISH阳性,监测无MRD增加,临床未治疗,疾病稳定。3例骨髓复发患者的DD-FISH及性染色体FISH均提示MRD明显增加,RT-PCR转为阳性,却只有1例CC异常,供者淋巴细胞输注(DLI)及甲磺酸伊马替尼治疗后均为DC,DD-FISH阴性,RT-PCR阴性。1例骨活检证实髓外复发患者骨髓或外周血样本的DD-FISH、CC及PCR均阴性,供受者完全嵌合。结论:间期双色双融合FISH可应用于CML异基因造血干细胞移植后MRD的监测,其操作简易快速,灵敏度高,且骨髓或外周血均可采用。动态监测能及时发现扩大的白血病细胞克隆。

bcr/abl融合基因检测在慢性粒细胞白血病诊断及残留病灶监测中的应用

目的探讨bcr／abl融合基因检测在诊断慢性粒细胞性白血病（CML）和监测CML残留病灶中的意义。方法采用巢式逆转录PCR（RT—PCR）检测337例CML患者bcr／abl融合基因的表达，并对所有患者进行残留病灶的动态监测，共检测632人次。其中移植（包括外周血干细胞移植、骨髓移植和脐血移植）患者26例；服用格列卫的患者22例；其它治疗方案患者289例。结果在337例CML初诊患者中bcr／abl基因表达阳性者325例，阳性率为96．4％；其中b3a2型转录本占58．5oA（190／325），b2a2型转录本占41．2％（134／325），b3a3型转录本占0．3％（1／325）。未发现b2a3型转录本。移植患者bcr／abl融合基因转阴率为88．5％（23／26），时间在30～201d之间，中位数为55d；服用格列卫患者融合基因总转阴率59．1％（13／22），转阴时间在用药后90～365d之间，中位数为210d；其它治疗组患者转阴12例，转阴率为4．1％（12／289）。结论bcr／abl融合基因的检测及动态观察，对CML的临床诊断、疗效及预后判断具有重要意义。

青黛复方对K-562细胞Bcr/Abl融合基因及p210蛋白表达的影响

目的探讨青黛复方对K-562细胞调亡、Bcr/Abl融合基因及p210蛋白的影响。方法以不同浓度青黛复方(0、2.5、5、7.5、10和20mg/ml)处理K-562细胞24h后,采用半定量RT-PCR技术检测各组Bcr/Abl融合基因的表达,Western blot技术检测p210Bcr/Abl蛋白表达,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果随药物作用浓度升高,K-562细胞凋亡率呈浓度依赖性增加;Bcr/Abl在mRNA和蛋白水平均呈浓度依赖性下调,尤以10mg/ml和20mg/ml处理组更为显著。结论青黛复方能部分抑制K-562细胞Bcr/Abl的表达并呈浓度依赖关系,其对慢性髓细胞性白血病(CML)的疗效可能是通过促进细胞凋亡而实现的。

双标记原位杂交法检测间期细胞BCR/ABL融合基因

目的 :应用双标记原位杂交方法检测 BCR/ ABL融合基因。方法 :BCR基因探针用地高辛标记 ,碱性磷酸酶显色 ;ABL基因用3 H- d ATP标记 ,核子乳胶放射自显影。结果 :检测 9例初治的慢性粒细胞白血病 ( CML)病人均为阳性 ,阳性细胞比例为 93% ;检测 CML来源的 K5 62细胞株阳性细胞占 98.8% ;正常人假阳性率为 0 .75 %。结论 :该方法简便、快速 ,适用于

bcr/abl融合基因阳性急性淋巴细胞白血病的临床特点

目的总结bcr/abl融合基因阳性急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿临床特点,探讨其治疗及预后的相关因素。方法对经巢式逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测bcr/abl融合基因阳性ALL患儿临床表现、治疗、预后进行回顾性分析。结果bcr/abl融合基因阳性ALL患儿20例。中位年龄9岁,普通B细胞型ALL 19例(95%);治疗d33骨髓完全缓解率为66.7%,16例中7例复发(45%),持续缓解时间2年以上6例;5例接受造血干细胞移植(HSCT),均骨髓复发;6例存活患者中均为单纯化疗,bcr/abl融合基因已转阴。1例T细胞表型患儿于化疗缓解3个月骨髓复发,接受移植术后1个月骨髓再次复发。结论bcr/abl融合基因阳性ALL患儿化疗效果差,难缓解,复发率高,预后差,T细胞表型预后更差。部分对化疗敏感的患儿bcr/abl融合基因持续阴性。异基因HSCT复发率也较高。

双色双融合荧光原位杂交检测慢性粒细胞白血病的bcr/abl融合基因研究

目的 :探讨双标双融合荧光原位杂交技术 (dual-coloranddual-fusionfluorescencein -situhybridization ,D -FISH)在慢性粒细胞白血病 (chronicmyeloidleukemia ,CML)中检测bcr/abl融合基因的灵敏度及特异性。方法 :应用细胞遗传学G显带 (CCG)核型分析、双色荧光原位杂交 (D -FISH)和染色体涂染技术 ,检测了 2 9例CML患者骨髓中期分裂相和间期细胞。结果 :CCG检出Ph(+ ) 2 4例 ,D -FISH检测均为bcr/abl(+ ) ;Ph(- ) 5例 ,其中 4例核型为 46,XY ,经D -FISH检测 2例bcr/abl(+ ) ,2例bcr/abl(- ) ,另 1例核型为 46,XYt(2 0 ;2 2 ) ,D -FISH检测bcr/abl(+ ) ,以 9号 ,2 0号和 2 2号全染色体探针涂染 ,确定该例核型为 46,XYt(9;2 0 ;2 2 ) ,D -FISH检测总阳性率为 93 .10 % (2 7/ 2 9) ,高于CCG检查时阳性率 82 .76% (2 4/ 2 9) (P =0 .0 2 5 )。结论 :与CCG方法相比 ,D -FISH检测CML的bcr/abl融合基因具有简便、快速、灵敏、特异性强等优点 。

巢式聚合酶链反应检测慢性粒细胞白血病bcr/abl融合基因

目的 探讨Ph染色体和bcr/abl融合基因在慢性粒细胞白血病 (CGL)的发病机制、诊断、治疗、预后判断的价值。方法 对 46例CGL患者作巢式逆转录聚合酶链反应 (RT PCR )检测bcr/abl融合基因 ,同时对其中 2 8例作细胞遗传学检查。结果 46例CGL患者中 ,44例bcr/abl融合基因阳性 ,阳性率为 95 .7% ;2 8例CGL患者作细胞遗传学检查 ,2 6例Ph染色体阳性 ,阳性率为 92 .9% ;2例Ph染色体阴性的CGL患者 ,用RT PCR检测出bcr/abl融合基因。结论 巢式RT PCR是一种快速、敏感而准确的检测方法 ,可以为部分Ph染色体阴性的CGL患者提供分子生物学的诊断依据。

青蒿琥酯对原代慢性粒细胞白血病细胞生长抑制、凋亡诱导及bcr/abl融合基因、P210蛋白、磷酸化SHP-2蛋白表达的影响

目的探讨青蒿琥酯对原代慢性粒细胞白血病细胞生长抑制、凋亡诱导及bcr/abl融合基因、P210蛋白、Src同源区2含域磷酸酶-2(SHP-2)蛋白磷酸化的影响。方法分离培养原代慢性粒细胞白血病细胞,采用不同浓度青蒿琥酯(0、5、10、20μg·mL^(-1))进行干预,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞生长抑制情况;细胞计数法检测细胞生存情况;罗丹明123染色法检测细胞线粒体膜电位的变化;电镜观察细胞超微结构的变化;流式细胞术(FCM)检测青蒿琥酯对细胞凋亡及胀亡的影响;荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测bcr/abl融合基因mRNA表达;Western Blot检测P210、SHP-2及磷酸化SHP-2蛋白表达。结果青蒿琥酯可抑制原代慢性粒细胞白血病细胞的生长,降低细胞存活率和线粒体膜电位水平(P<0.05),且与药物浓度和时间呈现一定的依赖性;不同浓度药物和不同作用时间可导致细胞凋亡率及胀亡率明显升高(P<0.01),同时可降低bcr/abl融合基因mRNA、P210、SHP-2和磷酸化SHP-2蛋白的表达水平(P<0.05,P<0.01)。结论青蒿琥酯可通过抑制原代慢性粒细胞白血病细胞的生长,促进其凋亡和胀亡,以及降低bcr/abl融合基因mRNA、P210、SHP-2、磷酸化SHP-2蛋白在原代慢性粒细胞白血病细胞中的表达水平,达到治疗慢性粒细胞白血病(CML)的目的。

慢性粒细胞白血病Ph^1染色体和bcr/abl融合基因检测的意义

目的 :探讨 Ph1染色体和 bcr/ abl融合基因检测在慢性粒细胞白血病诊断中的意义。方法 :选择 95例慢性粒细胞白血病患者和 2 0例缺铁性贫血患者作为研究对象 ,采用骨髓细胞短期培养法制备染色体、采用RT- PCR法分析 bcr/ abl融合基因。结果 :95例慢性粒细胞白血病患者中 ,Ph1染色体阳性者 83例 (87.4 % ) ,bcr/ abl阳性阳性者 90例 (94 .7% ) ,Ph1和 bcr/ abl均阳性 83例 (94 .7% ) ,Ph1阴性、bcr/ abl阳性 7例 (7.4 % ) ,Ph1 和 bcr/ abl均阴性 5例 (5 .3% )。 2 0例缺铁性贫血患者 Ph1 和 bcr/ abl均阴性。结论 :Ph1 染色体、 bcr/ abl融合基因的检测有助于慢性粒细胞白血病的诊断和鉴别诊断。

BCR/ABL融合基因阳性的急性淋巴细胞白血病的细胞形态与免疫表型特点

目的:研究BCR/ABL融合基因阳性急性淋巴细胞白血病(BCR/ABL+ALL)的细胞形态和免疫表型特点,并探讨其在预测疾病预后和指导临床治疗中的价值。方法:对BCR/ABL融合基因阳性的37例ALL患者(除外CML急淋变患者)和阴性的50例ALL患者骨髓细胞形态和免疫表型特征进行回顾性分析。结果:所有病例均表达CD19和CD79a,BCR/ABL融合基因阳性与BCR/ABL融合基因阴性ALL表面分子表达有统计学差异(P<0.05)的包括CD34(97.3%与80.0%),CD33(41.7%与16.3%),CD10(100.0%与86.0%),CD20(70.3%与30.0%)及CD56(28.6%与53.1%)。BCR/ABL融合基因阳性与BCR/ABL融合基因阴性ALL患者骨髓涂片检查细胞形态差异无统计学意义。结论:BCR/ABL融合基因阳性的ALL可能存在较为特征性的免疫表型,通过检测这些特征性免疫表型将有助于临床对ALL疾病进展迅速、预后差的亚型患者进行预测,并指导临床个体化治疗。

Ph1染色体及bcr/abl融合基因检测在慢性粒细胞白血病中的诊断意义

目的探讨Ph1染色体和bcr/abl融合基因检测在慢性粒细胞白血病诊断中的意义。方法选择28例慢性粒细胞白血病患者和20例缺铁性贫血患者作为研究对象,采用骨髓细胞短期培养法制备染色体、采用RT-PCR法分析bcr/abl融合基因。结果28例慢性粒细胞白血病患者中,Ph1染色体阳性者25例(89.3%),bcr/abl阳性者26例(92.9%),Ph1和bcr/abl均阳性25例(89.3%),Ph1阴性、bcr/abl阳性1例(3.6%),Ph1和bcr/abl均阴性2例(7.1%)。20例缺铁性贫血患者Ph1和bcr/abl均阴性。结论Ph1染色体、bcr/abl融合基因的检测有助于慢性粒细胞白血病的诊断和鉴别诊断。

RT-PCR一步法检测慢性粒细胞白血病bcr/abl融合基因

应用RT PCR一步法检测了 42例慢性粒细胞白血病 (CML)患者的bcr/abl融合基因 ,均显示bcr/abl基因阳性 ,其中2 1例为 16 8bp扩增带 ,18例为 93bp扩增带 ,3例同时具有 16 8bp和 93bp二条扩增带。bcr/abl融合基因检测 ,对CML的诊断、治疗及预后判断均有重要意义。RT PCR一步法特异性好 ,敏感性高 ,简单快速 ,可节省试剂 ,值得推广应用。

荧光原位杂交技术检测BCR/ABL融合基因的临床应用

本研究探讨应用荧光原位杂交技术(FISH)检测BCR/ABL融合基因在临床中的应用价值。对初诊考虑为慢性骨髓增殖性疾病或骨髓增生异常/骨髓增殖性疾病的患者、急性淋巴细胞白血病患者及异基因造血干细胞移植后的慢性髓系白血病(CML)患者,行骨髓细胞学检查并用FISH法检测BCR/ABL融合基因。结果表明:①46例在初诊时考虑为慢性骨髓增殖性疾病或骨髓增生异常/骨髓增殖性疾病的患者中,有22例患者诊断为CML,应用FISH法检测BCR/ABL融合基因均为阳性(100%),骨髓细胞学检查显示CML者占86.4%(19/22);另24例患者诊断为非CML的慢性骨髓增殖性疾病及骨髓增生异常/骨髓增殖性疾病,FISH法检测BCR/ABL融合基因均为阴性(100%),而骨髓细胞学检查有3例支持CML诊断、1例支持MDS诊断;②7例急性淋巴细胞白血病患者,有3例FISH法检测BCR/ABL融合基因为阳性;③2例异基因造血干细胞移植后的CML患者,应用FISH法检测BCR/ABL融合基因可检测到阳性细胞(分别为6.5%及1.2%)。结论:FISH法检测BCR/ABL融合基因敏感、可靠,对慢性骨髓增殖性疾病及骨髓增生异常/骨髓增殖性疾病的诊断及鉴别诊断有重要价值;可明确Ph+急性淋巴细胞白血病患者的诊断;在CML患者行异基因造血干细胞移植后监测微小残留病灶方面也有重要意义。

急性淋巴细胞白血病bcr/abl融合基因表达及其与免疫表型的关系

采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测了M-bcr/abl和m-bcr/abl两种类型融合基因在48例急性淋巴细胞白血病(ALL)患者的表达,并且绝大多数病例同时进行了免疫表型和DNA倍体的流式细胞术分析。结果表明,25%(12/48)的病例M-bcr/abl或m-bcr/abl融合基因阳性,m-bcr/abl阳性率略高。分析bcr/abl阳性病例的免疫表型,发现大多数病例为B系标志阳性,但部分T系标志阳性的病例也检测出M-bcr/abl或m-bcr/abl,说明bcr/abl阳性ALL病例以B系标志阳性者居多,T系标志阳性的ALL病例也可为bcr/abl阳性。

造血干细胞移植后白血病细胞染色体核型和bcr/abl融合基因表达观察

目的:探讨造血干细胞移植(HSCT)后白血病细胞染色体核型和基因表达观察的意义。方法:用骨髓细胞短期培养法和直接法G显带分析染色体;双色荧光原位杂交检测bcr/abl融合基因。结果:2 例供者为女性的男性急性髓细胞白血病(AML)患者异体外周血干细胞移植(allo PBSCT)后染色体检测持续46,XX。最长生存50个月。4例慢性髓细胞白血病(CML)经allo PBSCT后,Ph染色体和bcr/abl融合基因阳性1 例,经供者淋巴细胞输注加干扰素治疗,已生存70个月。Ph染色体阴性bcr/abl融合基因阳性2例,最长生存27个月。Ph染色体阳性bcr/abl融合基因阴性1例,已生存14个月。2例AML自体造血干细胞移植后检测出非特征性染色体畸变,复发后再化疗达完全缓解,最长生存期达81个月。结论:造血干细胞移植后白血病细胞遗传学检测可观察近期疗效,指导后续治疗选择。

间期细胞核中abl和bcr基因的三维空间分布在bcr/abl融合基因形成中的作用

目的从生物体视学角度分析bcr/abl融合基因的形成机制。方法应用荧光原位杂交和激光共聚焦扫描显微镜技术,观察γ-射线对IM9细胞中的bcr和abl基因在间期核内三维空间分布的影响。结果abl和bcr基因在间期核内有其特定的分布区域,且该分布区域在细胞周期中呈规律性的动态变化。放射性照射会使abl和bcr基因之间的距离缩短。结论abl和bcr基因在间期细胞核内的易接近性是bcr/abl融合基因形成的因素之一。

格列卫治疗后bcr/abl融合基因变异的研究

目的:应用荧光原位杂交法检测格列卫治疗后白血病bcr/abl融合基因的改变。方法:应用双色双融合法荧光原位杂交技术检测42例接受格列卫治疗的急慢性白血病患者骨髓细胞bcr/abl融合基因,对比治疗前后bcr/abl融合基因的改变。结果:所有患者治疗后均出现融合基因变异,与患者肿瘤负荷、分型和分期无关。结论:格列卫治疗可诱导bcr/abl基因发生融合变异。

Real Time PCR监测慢性粒细胞白血病bcr/abl融合基因的临床意义

目的通过Real Time PCR实时监测慢性粒细胞白血病bcr/abl融合基因的表达,探讨其在诊断及预后评价价值。方法采用荧光定量Real Time PCR反应技术检测39例慢性粒细胞白血病及其它血液系统疾病20例的bcr/abl融合基因表达水平。结果骨髓原始、外周血原始与bcr/abl融合基因拷贝数有显著相关性,初诊慢性粒细胞的bcr/abl融合基因表达水平普遍明显增高,经羟基脲±干扰素治疗后表达明显下降,复发或加速期患者可提前2-4个月左右早期发现,格列卫或移植治疗后,多数bcr/abl融合基因可转阴性。结论 bcr/abl融合基因检测对诊断慢性粒细胞白血病有重要价值,同样是慢性粒细胞白血病治疗和预后观察的决定性指标。

慢性粒细胞白血病患者外周血BCR/ABL融合基因表达水平及意义

目的观察慢性粒细胞白血病(CML)初发和急变患者外周血BCR/ABL基因的表达变化。方法建立实时定量RT-PCR同时检测b2a2和b3a2两种融合基因亚型,检测25例CML初发和25例CML急变患者的外周血样本中BCR/ABL融合基因的表达。结果BCR/ABL及GAPDH标准曲线的相关系数均为1.0,灵敏度为2pgRNA,根据熔解温度的不同可以区分b2a2和b3a2两种融合基因亚型。CML急变患者外周血BCR/ABL融合基因的表达水平是初发患者的4.72倍。结论本法简便、敏感、特异,可以相对定量BCR/ABL融合基因表达水平,有助于反映白血病细胞负荷,评价疗效及判断预后。