BCSCs在槲皮素抗乳腺癌作用中的研究进展

乳腺癌是一种严重威胁女性健康的多发病和常见病,化疗是其重要治疗环节。BCSCs与乳腺癌密切相关,而槲皮素可以通过调控与其相关的PI3K/AKT/mTOR信号通路、Notch信号通路、Wnt/β-Catenin信号通路、缺氧微环境、细胞凋亡等途径调控乳腺癌的发生、发展及治疗,但其能否被用于临床还需进一步研究。本文对近年来有关槲皮素通过BCSCs抗乳腺癌作用的研究进展进行综述。

BCSC-1基因异位表达抑制鼻咽癌细胞的恶性生物学行为

目的研究BCSC-1基因异位表达对人鼻咽癌细胞CNE-2L2恶性生物学行为的影响。方法RT-PCR扩增BCSC-1cDNA,分别构建原核重组表达载体pMAL-c2X-BCSC-1和真核重组表达载体pcDNA4/myc-HisA-BCSC-1。在原核细胞表达BCSC-1蛋白。用BCSC-1蛋白免疫新西兰白兔,制备BCSC-1抗血清。采用实时定量RT-PCR与用BCSC-1抗血清免疫荧光染色确认野生型CNE-2L2细胞的BCSC-1基因低表达。藉脂质体把pcDNA4/myc-HisA-BCSC-1转染入野生型CNE-2L2细胞。Westernblot检测BCSC-1基因在野生型CNE-2L2细胞异位表达。用体外培养中的生长曲线和集落生成检测细胞生长。接种细胞于裸鼠,定时测量肿瘤大小。小鼠肺做连续组织切片,观察肿瘤的肺转移。结果制备了BCSC-1抗血清。明确BCSC-1基因在野生型CNE-2L2细胞的表达极低。制备了BCSC-1基因异位表达的CNE-2L2细胞。与对照细胞(野生型CNE-2L2细胞和转染pcDNA4/myc-HisA的CNE-2L2细胞)相比,BCSC-1基因异位表达的CNE-2L2细胞在培养中的生长、集落生成、细胞的成瘤性生长和所长肿瘤的肺转移均明显抑制。结论BCSC-1基因异位表达对CNE-2L2细胞的恶性生物学行为有明显抑制作用。

腺病毒介导BCSC-1基因实验性治疗鼻咽癌

目的探讨抑癌基因BCSC-1对肿瘤的治疗作用。方法制备重组腺病毒Ad5-BCSC-1。用CellTiter 96 A-queous细胞增殖单一溶液检测试剂盒检测细胞增殖。肿瘤体内注射Ad5-BCSC-1,以注射Ad5-egfp或PBS作为对照,1周后重复注射,再2周后处死小鼠,称瘤重。结果Ad5-BCSC-1感染的CNE-2L2细胞的生长明显减慢,细胞在培养中聚集成大细胞团块。注射PBS、Ad5-egfp和Ad5-BCSC-1的小鼠CNE-2L2肿瘤的平均瘤重分别为(2·28±0·73)、(2·07±0·40)和(0·58±0·32)g。Ad5-BCSC-1组显著低于PBS和Ad5-egfp组(P<0·05)。结论瘤体内注射Ad5-BCSC-1能抑制CNE-2L2肿瘤的生长,提示BCSC-1基因治疗对BCSC-1基因缺失或表达低下的肿瘤可能有治疗作用。

BCSC-1基因异位表达对人小细胞肺癌细胞增殖的抑制效应

背景与目的:人乳腺癌候选抑制蛋白1(breast cancer suppressor candidate 1,BCSC-1)基因已被证实是一种新型抑癌基因,在多种肿瘤细胞均存在表达缺失的现象。该研究通过将BCSC-1基因转染至人小细胞肺癌细胞株NCI-H446,探讨BCSC-1基因异位表达对NCI-H446细胞增殖的抑制效应。方法:用PCR扩增BCSC-1 cDNA,构建真核重组表达载体pcDNA3.1/v5-HisB-BCSC-1。通过脂质体把pcDNA3.1/v5-HisB-BCSC-1和空质粒pcDNA3.1/v5-HisB转染入野生型NCI-H446细胞。以转染空质粒pcDNA3.1/v5-HisB的NCI-H446细胞为对照组,野生型NCI-H446细胞为空白对照组。采用流式细胞仪检测细胞周期;MTT法检测细胞增殖;免疫组化确认BCSC-1基因和CD44分子在NCI-H446细胞中的表达。结果:成功构建了真核重组表达载体pcDNA3.1/v5-HisB-BCSC-1,制备了BCSC-1基因异位高表达的NCI-H446稳定细胞株。细胞周期分析显示,异位表达BCSC-1的NCI-H446细胞大部分阻滞在G0/G1期,明显高于对照组和空白组(P<0.01)。MTT法检测显示,异位表达BCSC-1的NCI-H446细胞与对照组、空白组相比,生长速度明显减慢(P<0.05)。免疫组化显示异位表达BCSC-1的NCI-H446细胞CD44表达增高。结论:BCSC-1基因的异位表达对NCI-H446细胞的恶性增殖行为有明显的抑制作用,这种抑制作用可能与细胞周期阻滞和黏附分子CD44表达增高有关。

BCSC-1基因异位表达致鼻咽癌细胞CNE-2L2黏附性增强及细胞周期阻滞

目的探讨BCSC-1基因异位表达导致人鼻咽癌细胞CNE-2L2恶性行为减弱的机制。方法采用碘化丙啶染色DNA,流式细胞法检测细胞周期;Hoechest33258染色分析细胞分裂情况;细胞聚集实验检测细胞的黏附性;Western印迹分别检测E-钙黏蛋白、α-catenin和p53的表达。结果细胞周期分析显示异位表达BCSC-1的CNE-2L2细胞、野生型CNE-2L2细胞和转染空载体的CNE-2L2细胞分别有55.1%、43.4%和39.4%处于G0/G1期,分别有25.2%、28.7%和30.9%处于S期,分别有19.7%、27.9%和29.7%处于G2/M期。野生型CNE-2L2细胞和转染空载体的CNE-2L2细胞有较多细胞处于有丝分裂相,异位表达BCSC-1的CNE-2L2细胞几乎见不到有丝分裂相。异位表达BCSC-1的CNE-2L2细胞的黏附性和E-钙黏蛋白、α-catenin及p53的表达水平均高于野生型CNE-2L2细胞和转染空载体的CNE-2L2细胞。结论异位表达BCSC-1的CNE-2L2细胞的黏附性增强可能与E-钙黏蛋白和α-catenin表达增强相关;异位表达BCSC-1的CNE-2L2细胞阻滞于G1期可能与p53表达增加相关。这些变化可能在细胞恶性行为减弱中发挥作用。

抑癌基因BCSC-1原核表达载体的构建及诱导表达

目的 构建BCSC-1基因原核表达载体并进行诱导表达、纯化.方法 PCR方法从腺病毒穿梭载体pDC316-BCSC-1扩增BCSC-1基因,构建原核表达载体ET30a-BCSC-1,转化感受态E.coli BL21（DE3）,并用IPTG进行诱导表达.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳方法检测目的 蛋白的表达,并用超声洗涤方法进行目的 蛋白洗涤纯化.结果 成功构建原核表达载体pET30a-BCSC-1;在IPTG诱导下在E.coli BL21（DE3）中高效表达相对分子质量（Mr）为86 000的重组BCSC-1蛋白,目的 蛋白主要以包涵体的形式存在于沉淀中,经超声洗涤纯化后,重组蛋白纯度可达85%以上.结论 利用构建的原核表达载体成功表达出BCSC-1蛋白,为进一步制备抗BCSC-1的单克隆抗体及在临床中的应用打下良好基础.

BCSC-1基因慢病毒干扰载体的构建与鉴定

目的构建BCSC-1基因慢病毒RNA干扰载体并感染人乳腺癌细胞MCF-7,实时荧光定量PCR(QPCR)检测干扰效果。方法 设计并合成两条针对人BCSC-1基因的干扰序列(BCSC-1 shRNA1和BCSC-1shRNA2)以及对照序列(NS),将其连接入载体PLKO.1-sp6-pgk-GFP中,得到两个干扰载体和一个阴性对照载体。通过菌落PCR、双酶切和DNA序列测定等方法对其进行鉴定。将干扰载体与辅助包装质粒Lipofectamine2000共转染HEK293T细胞包装慢病毒并收取病毒上清。所获慢病毒颗粒感染人乳腺癌细胞MCF-7,QPCR方法检测两种干扰载体对BCSC-1基因的抑制效率。结果 菌落PCR结果显示目的片段插入PLKO.1-sp6-pgk-GFP载体,DNA测序证实插入序列无误。QPCR结果显示两种干扰载体感染人乳腺癌细胞MCF-7后,BCSC-1 shRNA1组和BCSC-1 shRNA2组BCSC-1基因表达水平分别为0.34±0.046和0.63±0.043,较空白对照组和NS组均有明显下降(P<0.05),且BCSC-1 shRNA1抑制效果优于BCSC-1 shRNA2(P<0.05)。结论 成功构建了两种BCSC-1基因慢病毒干扰载体,两载体均能下调人乳腺癌细胞MCF-7中BCSC-1基因表达水平。

BCSC-1过表达抑制肝癌Bel-7402细胞的增殖、侵袭、黏附和迁移

目的:研究人乳腺癌候选抑癌蛋白1基因(breast cancer suppressor candidate 1,BCSC-1)过表达对肝癌Bel-7402细胞的增殖、侵袭、黏附和迁移的影响,并探讨其可能的机制。方法:将pcDNA3.1/v5-HisB-BCSC-1和空质粒pcDNA3.1/v5-HisB转染的Bel-7402细胞作为BCSC-1组和空载体组,Bel-7402细胞为野生型组。MTT法、Transwell实验、体外黏附实验和划痕实验分别检测BCSC-1过表达对Bel-7402细胞增殖、侵袭、黏附和迁移的影响,Real-time PCR检测BCSC-1过表达对Bel-7402细胞中与细胞增殖、黏附相关的ICAM-1、PTTG、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)mRNA表达的影响。结果:转染pcDNA3.1/v5-HisB-BCSC-1后Bel-7402细胞中BCSC-1 mRNA的表达水平显著高于空载体组和野生组细胞[(10.58±0.56)vs(1.10±0.22)、(1.00±0.01),均P<0.01],成功制备BCSC-1稳定过表达的Bel-7402细胞株。与空载体组和野生型组相比,BCSC-1组Bel-7402细胞生长速度明显减慢[72 h:(0.29±0.003)vs(0.34±0.014)、(0.35±0.013),均P<0.05];侵袭率[(76.20±1.85)%vs(93.42±3.24)%、(100.00±1.05)%,均P<0.01)]、黏附率[(58.57±0.84)%vs(97.14±0.84)%、(100.00±1.30)%,均P<0.01]显著降低,迁移距离显著降低[(116.60±10.58)vs(231.33±10.26)、(237.96±11.58)μm,均P<0.01];同时过表达BCSC-1的Bel-7402细胞的OPN mRNA表达量明显降低[(0.12±0.06)vs(0.95±0.14)、(1.00±0.08),均P<0.01],ICAM-1、PTTG mRNA表达无明显变化。结论:BCSC-1过表达能够抑制Bel-7402细胞的增殖、侵袭、黏附和迁移能力,其机制可能与OPN基因表达下降有关。

BCSC-1基因异位表达对MDA-MB-231侵袭能力影响及其机制探讨

目的:利用已构建的乳腺癌候选抑制蛋白-1(breast cancer suppressor candidate 1,BCSC-1)基因真核表达质粒转染人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,观察BCSC-1基因异位表达对MDA-MB-231细胞体外侵袭能力的影响,初步探讨其影响机制。方法:利用脂质体将pcDNA3.1/v5-HisB-BCSC-1和空质粒pcDNA3.1/v5-HisB转染野生型MDA-MB-231细胞,以转染空质粒pcDNA3.1/v5-HisB的MDA-MB-231细胞为对照组,野生型MDA-MB-231细胞为空白对照组,转染后经G418加压筛选获得稳定BCSC-1表达细胞株。细胞划痕和Transwell细胞侵袭实验分析转染前后细胞侵袭能力的改变,实时荧光定量PCR分析转染前后基因的变化,细胞免疫组化分析转染前后BCSC-1以及细胞间黏附分子-1(intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)的变化。结果:转染后成功获得BCSC-1基因异位高表达稳定细胞株。细胞划痕实验显示,转基因组细胞平均迁移距离为(105.33±13.61)μm,较对照组(225±18.02)μm和对照组(236±16.46)μm明显降低,F=60.50,P=0.002。细胞侵袭实验显示,转基因组24h平均穿膜细胞数为34.67±2.52,较空白对照组56.66±2.08和对照组63.33±4.16明显降低,F=72.33,P=0.005。实时定量荧光PCR结果显示,转基因组BCSC-1表达水平为32.66±2.51,较对照组2.33±1.52和空白对照组明显升高,F=333.12,P=0.001;转基因组ICAM-1表达水平为28.67±3.79,较对照组3.33±1.53和空白对照组明显升高,F=127.14,P=0.003。细胞免疫组化结果显示,转染后BCSC-1以及ICAM-1表达水平明显增高。结论:BCSC-1基因的异位表达对MDA-MB-231细胞体外转移和侵袭能力有明显的抑制作用,这种抑制作用可能与ICAM-1表达增高有关。

BCSC-1和E-钙黏蛋白在乳腺良恶性病变中的表达及意义

目的观察乳腺癌抑制候选物1(BCSC-1)和上皮性钙黏蛋白(E-cadherin)在乳腺纤维瘤和乳腺导管癌中的表达及意义。方法采用免疫组化方法检测40例乳腺纤维瘤组织和89例乳腺导管癌组织中BCSC-1和E-cadherin的表达并分析其相关性。结果在乳腺纤维瘤组织和乳腺导管癌组织中,BCSC-1的表达阳性率分别为82.50%和62.92%,乳腺纤维瘤组阳性率高于乳腺导管癌组(P<0.05);E-cadherin的表达阳性率分别为85.00%和66.29%,乳腺纤维瘤组阳性率高于乳腺导管癌组(P<0.05)。BCSC-1表达与乳腺癌临床特征分析表明,BCSC-1的表达在淋巴结转移患者中阳性率(18.75%)显著低于无淋巴结转移患者(72.60%)(P<0.01);BCSC-1的表达在Ⅰ期中阳性率(86.96%)显著高于Ⅱ期及以上患者阳性率(54.55%)(P<0.01)。Spearman等级相关分析结果表明,BCSC-1的表达与E-cadherin的表达存在正相关(乳腺纤维瘤组r=0.7558;乳腺导管癌组r=0.7162)。结论BCSC-1和E-cadherin的表达在乳腺导管癌中均下降,且二者表达存在正相关关系,在乳腺癌发生过程中可能发挥协同作用。

干细胞核心基因NANOG在乳腺癌干细胞及非干细胞中的表达与定位

目的研究干细胞核心基因NANOG在乳腺癌干细胞（BCSCs）和非乳腺癌干细胞（Non-BCSCs）中的表达及定位差异以及BCSCs在MCF-7微球体中的分布情况。方法应用免疫荧光、免疫细胞化学及NANOG与Hoechst33342荧光染料双染色方法检测BCSCs和Non-BCSCs中NANOG的表达及其定位。结果免疫细胞化学及免疫荧光染色显示,MCF-7中存在两种细胞：一种细胞胞体大、细胞质丰富,NANOG主要表达其细胞质中,这部分细胞占绝大多数;另一种细胞胞体小而圆、细胞质少,NANOG主要表达其细胞核中,这部分细胞占少数。NANOG和Hoechst33342免疫荧光双染显示：NANOG表达于Hoechst33342拒染的细胞核中;而在Hoechst33342核染色的细胞中,NANOG主要表达于细胞质中。微球体呈球囊性、中心部呈空腔状,细胞沿着球壁分布,球壁多为1~3层细胞组成;在MCF-7微球体中,BCSCs主要分布在囊性微球体的内侧壁。结论 NANOG在BCSCs中主要表达在细胞核,而在Non-BCSCs中主要表达在细胞质,而BCSCs主要分布在囊性微球体的内侧壁,这可为BCSCs的进一步研究和乳腺癌的临床靶向治疗提供实验依据。

太阳能级硅激光刻槽埋栅电池的研究

探讨了廉价太阳能级硅材料对电池性能可能的影响，据此对激光刻槽埋栅电池的工艺加以优化．在此基础上制作的大面积太阳电池的转换效率达到１６．５９％．

β-榄香烯对MCF-7/ADM细胞株中乳腺癌干细胞作用的初步研究

目的探讨乳腺癌耐阿霉素细胞株MCF-7/ADM与阿霉素敏感细胞株MCF-7/S中乳腺癌干细胞(BCSCs)含量及乳腺癌耐药蛋白(BCRP)和P-糖蛋白(P-gp)表达的差异,观察中药β-榄香烯(β-ELE)对BCSCs及BCRP和P-gp表达的影响。方法应用无血清细胞培养法培养MCF-7/ADM和MCF-7/S细胞株,形态学观察不同细胞株无血清细胞球培养的成球率,RT-PCR检测两种细胞株中BCRP和P-gp的mRNA水平,流式细胞仪检测BCRP和P-gp的阳性表达率及CD44+CD24-/low细胞比例。应用15μg/mlβ-ELE作用MCF-7/ADM细胞株48h后,检测细胞成球率及BCRP、P-gp基因与蛋白表达的变化。结果与MCF-7/S细胞比较,MCF-7/ADM细胞的成球率及BCRP、P-gp mRNA水平较高。MCF-7/ADM细胞中BCRP和P-gp蛋白的阳性表达率分别为(77.78±9.55)%和(32.33±5.12)%,CD44+CD24-/low细胞比例为(64.79±11.78)%,均高于MCF-7/S细胞的(3.97±1.51)%、(14.26±2.51)%和(18.79±3.28)%,差异均有统计学意义(P<0.01)。β-ELE能明显抑制MCF-7/ADM细胞的成球率及BCRP、P-gp基因与蛋白的表达(P<0.01)。结论 MCF-7/ADM是BCSCs相对富集的一种耐药细胞株且高表达BCRP和P-gp,β-ELE能够抑制MCF-7/ADM细胞中BCSCs比例及其成球率,并降低耐药蛋白的表达。

乳腺癌干细胞的研究进展

乳腺癌是女性中常见的恶性肿瘤,其高度的异质性使乳腺癌患者的临床表现、形态学特征以及分子生物学表型均呈现出明显的不一致性,给诊断和治疗带来了很大的困难.肿瘤干细胞具有自我更新能力并能产生异质性的特征,与肿瘤进展、耐药、复发、转移等关系密切.本文对近年乳腺癌干细胞的研究进展作一综述.

乳腺癌干细胞与临床及其靶向治疗前景

肿瘤干细胞理论认为肿瘤起源于小部分具有干细胞特性的肿瘤细胞。肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs)具有自我更新、不对称分裂、放化疗耐受及致瘤性和转移潜能。因此,癌症的治疗必然要包含针对CSCs的靶向治疗。本文综述了乳腺癌干细胞与其临床转移及放、化疗耐受的关系和潜在的靶向治疗研究。

去泛素化酶UCHL1促进乳腺癌化疗耐药作用与机制研究

本研究探讨去泛素化酶UCHL1通过影响肿瘤细胞主动外排药物和乳腺癌肿瘤干细胞(breast cancer stem cell,BCSC)调控乳腺癌化疗耐药的作用及机制。比较肿瘤细胞MCF-7及其阿霉素耐药株MCF-7/ADM的UCHL1表达差异,以抑制剂LDN57444干预MCF-7/ADM的UCHL1功能,检测MCF-7/ADM的半数抑制浓度,流式细胞术检测ADM在细胞内的积聚和CD44+CD24-BCSC比例,微球体形成实验观察BCSC干性,real-time PCR和western blotting检测药泵蛋白和干细胞相关基因的表达。结果显示,MCF-7/ADM高表达UCHL1,抑制UCHL1后MCF-7/ADM的半数抑制浓度显著下降,药泵蛋白P-gp和MRP1表达下调且药物在细胞内的聚积增加,MCF-7/ADM中CD44+CD24-BCSC比例、微球体形成能力及干细胞相关基因表达均显著下降。以上结果说明UCHL1可促进乳腺癌细胞耐药性形成,主要通过改变药泵蛋白介导的经典耐药机制实现,并与促进BCSC干性密切相关。