基于BDNF/Trk B/CREB通路探讨柴胡加龙骨牡蛎汤对2型糖尿病合并抑郁大鼠海马的影响及其机制研究

目的:基于BDNF/Trk B/CREB途径探讨柴胡加龙骨牡蛎汤对2型糖尿病合并抑郁(T2D&D)大鼠海马的影响及抗抑郁机制。方法:40只SD大鼠建立T2D&D模型后,随机分为正常对照组、模型组、柴胡加龙骨牡蛎汤(1.638 g/kg)组、盐酸氟西汀(3.17 mg/kg)组,给药4 w后,行为学实验(旷场实验、悬尾实验、强迫游泳实验)评估大鼠抑郁状态;HE染色法观察大鼠海马组织形态,免疫组织化学染色法检测大鼠海马组织中BDNF、Trk B、CREB蛋白表达;RT-PCR法检测大鼠海马组织中BDNF、Trk B、CREB mRNA表达。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠旷场实验中水平得分和垂直得分显著降低,悬尾实验和强迫游泳实验中不动时间显著增加,悬尾实验中挣扎时间及晃动时间显著减少(P<0.01);HE染色结果显示海马神经元结构损伤;RT-PCR及免疫组化结果显示海马组织BDNF、Trk B、CREB mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,柴胡加龙骨牡蛎汤组大鼠旷场实验中水平得分和垂直得分显著升高,悬尾实验和强迫游泳实验中不动时间显著减少,悬尾实验中挣扎时间及晃动时间显著增加(P<0.01);HE染色结果显示海马神经元结构明显复原;RT-PCR及免疫组化结果显示海马组织BDNF、Trk B、CREB mRNA及蛋白表达显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:柴胡加龙骨牡蛎汤对T2D&D大鼠具有显著的抗抑郁作用,其机制可能与升高大鼠海马BDNF、Trk B、CREB mRNA及蛋白表达,增强海马组织神经元的再生与修复有关。

电针对甲基苯丙胺戒断后抑郁小鼠海马水通道蛋白4及BDNF/TrkB/CREB信号通路的影响

目的观察电针对甲基苯丙胺(MTHE)戒断后抑郁小鼠海马水通道蛋白4(AQP4)及脑源性神经营养因子(BDNF)/酪氨酸蛋白激酶B(TrkB)/环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)信号通路的影响,探讨电针改善MTHE戒断后抑郁潜在的作用机制。方法健康雄性C57BL/6J小鼠随机分为空白组、模型组和电针组,每组10只。模型组、电针组采用条件性位置偏爱实验(CPP)复制小鼠MTHE成瘾模式,自然戒断后制备戒断后小鼠抑郁模型。空白组、模型组、电针组不给予任何干预,电针组取“百会”、“大椎”穴给予电针干预,选用连续波,频率2 Hz,1次/d,15 min/次,连续治疗28 d。分别于戒断后和干预后对各组小鼠进行强迫游泳试验和开放旷场试验,Western blot法检测小鼠海马AQP4、BDNF、TrkB、CREB和p-CREB等蛋白表达情况,免疫荧光染色法检测小鼠海马AQP4表达情况,实时荧光定量PCR法检测小鼠海马AQP4 mRNA表达。结果造模后,与空白组比较,模型组、电针组CPP值均升高(均P<0.01),模型组、电针组CPP值差异无统计学意义(P>0.05)。戒断后,与空白组比较,模型组、电针组水中自主不动状态持续时间均增加(均P<0.01)、中央区活动持续时间均减少(均P<0.01),模型组与电针组差异无统计学意义(P>0.05);干预后,与空白组比较,模型组、电针组水中自主不动状态持续时间增加(P<0.01)、中央区活动持续时间减少(P<0.01),与模型组比较,电针组水中自主不动状态持续时间减少(P<0.01),中央区活动持续时间增加(P<0.01);干预后,与空白组比较,模型组、电针组AQP4、BDNF、TrkB、CREB、p-CREB蛋白表达均减少(均P<0.01),与模型组比较,电针组AQP4、BDNF、TrkB、CREB、p-CREB蛋白表达均增加(均P<0.01)。干预后,与空白组比较,模型组、电针组AQP4阳性减少(P<0.01),与模型组比较,电针组AQP4阳性表达增加(P<0.01)。干预后,与空白组比较,模型组、电针组AQP4 mRNA表达减少(P<0.01)。干预后,与模型组比较,电针组AQP4 mRNA表达增加(P<0.01)。结论电针可改善METH戒断后小鼠抑郁样行为,其作用机制可能与调控AQP4表达,以及BDNF/TrkB/CREB信号通路活性相关。

红景天甙调控BDNF/TrkB通路对听觉剥夺模型大鼠听皮层可塑性的影响

目的 探讨红景天甙调控脑源性神经生长因子(BDNF)/受体酪氨酸激酶(Trk)B通路对听觉剥夺模型大鼠听皮层可塑性的影响。方法 肌内注射庆大霉素诱导建立听觉剥夺模型大鼠,随机分为模型组、K252a(BDNF/TrkB通路抑制剂,100μg/kg)组、红景天苷(50 mg/kg)组、红景天苷(50 mg/kg)+K252a(100μg/kg)组,每组12只,另取12只大鼠肌内注射等剂量生理盐水,设为对照组,以药物分组处理后,测定大鼠听性脑干反应(ABR)阈值,评测其听力情况;以扫描电镜观察各组大鼠耳蜗组织病理改变;以苏木素-伊红(HE)染色检测各组大鼠听皮层神经元病理改变;以试剂盒测定听皮层及耳蜗组织活性氧(ROS)水平;以酶联免疫吸附试验(ELISA)测定大鼠血清致炎因子白细胞介素(IL)-18、肿瘤坏死因子(TNF)-α、干扰素(IFN)-γ水平;以Western印迹法检测大鼠听皮层及耳蜗组织BDNF/TrkB通路蛋白(p-TrkB/TrkB、BDNF)表达。结果 与对照组相比,模型组毛细胞结构改变,大小不一,且排列紊乱,数目缺失,与螺旋神经节细胞周围突结合发生裂隙,同时听皮层神经元萎缩变小,胞质减少,细胞核出现固缩碎裂,且分布杂乱,数目明显减少,听皮层神经元与耳蜗组织均出现明显病理损伤,ABR阈值、ROS水平、血清IL-18、TNF-α及IFN-γ水平显著升高(P<0.05),p-TrkB/TrkB、BDNF蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与模型组、红景天苷+K252a组分别相比,红景天苷组听皮层神经元与耳蜗组织病理损伤均减轻,ABR阈值、ROS水平、血清IL-18、TNF-α及IFN-γ水平均降低(P<0.05),p-TrkB/TrkB、BDNF蛋白表达水平均升高(P<0.05);K252a组听皮层神经元与耳蜗组织病理损伤均加重,ABR阈值、ROS水平、血清IL-18、TNF-α及IFN-γ水平均升高(P<0.05),p-TrkB/TrkB、BDNF蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。结论 红景天苷可清除ROS,减少炎性因子合成释放,抑制炎症,减轻听觉剥夺模型大鼠听皮层神经元与耳蜗组织损伤,改善其听力降低症状,通过激活BDNF/TrkB通路实现。

BDNF/TrKB介导的突触丢失对创伤性脑损伤小鼠远期认知障碍的影响及机制

目的探究脑源性神经营养因子(BDNF)/酪氨酸激酶受体(TrK)B介导的突触丢失对创伤性脑损伤(TBI)小鼠远期认知障碍的影响及机制。方法采用改良的Allen重锤打击法制作TBI模型,将小鼠分为Sham组、TBI组、TBI_OE_NC组、TBI_OE_BDNF组、TBI_Sh_NC组、TBI_Sh_BDNF组,每组40只。Sham组、TBI组分别在造模后1、3、5、7 d检测神经元突触后致密物厚度和突触体密度、BDNF、TrkB mRNA及蛋白表达。将OE_NC和OE_BDNF组腺病毒载体3μl注入承受单侧大脑皮质重锤打击的小鼠海马体,免疫荧光法检测BDNF、突触素(Synaptophysin)在小鼠海马体中的表达,Western印迹检测TrkB、p-TrkB、突触蛋白(SYN)1、SYNA、突触后致密蛋白(PSD)95等蛋白表达水平,Morris水迷宫实验检测小鼠定位航行和空间探索能力。将TBI_Sh_NC和TBI_Sh_BDNF组腺病毒载体3μl注入正常小鼠海马体,免疫荧光法检测Synaptophysin在海马体中的表达,Morris水迷宫实验检测定位航行和空间探索能力。TUNEL法检测Sham、OE_NC和OE_BDNF组脑组织细胞凋亡水平,Western印迹检测磷脂酰激酶-3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、p-PI3K、p-AKT、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、cleaved-半胱天冬蛋白酶(caspased)3等蛋白水平。结果与Sham组比较,TBI组脑海马体神经元突触后致密物厚度(5、7 d)和突触体密度(3、5、7 d)显著降低(P<0.05)。TBI组BDNF、TrkB mRNA和蛋白水平随时间逐渐降低(P<0.05)。相较于TBI_OE_NC组,TBI_OE_BDNF组脑海马体中BDNF、TrkB、p-TrkB、SYN1、SYNA、PSD95表达提高,细胞凋亡水平降低,p-PI3K、p-AKT、Bcl-2蛋白表达增加,Bax、cleaved-caspased3蛋白表达减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论TBI诱导BDNF-TrkB表达减少,进而抑制PI3K/Akt通路开启细胞凋亡途径,导致突触数量减少,损伤小鼠的远期认知能力。

越鞠丸石油醚部位潜在的快速抗抑郁作用与BDNF、TrkB蛋白表达的上调相关

目的研究越鞠丸石油醚部位是否具有快速抗抑郁潜力,并对其有效剂量及潜在的生物学机制进行了探讨。方法将44只昆明种♂小鼠随机分成空白组(生理盐水组)、越鞠丸石油醚部位(YJ-PE)高、中、低剂量组及氯胺酮组。单次给药后30 min对昆明小鼠进行小鼠悬尾行为绝望测试。再将24只昆明种♂小鼠分成空白组、筛选出有效的越鞠丸石油醚部位低剂量组和氯胺酮组,单次给药24 h后进行小鼠悬尾行为绝望测试。利用Western blot实验分别检测给药后30 min及24 h小鼠海马区BDNF和TrkB蛋白的表达变化。结果单次给药越鞠丸石油醚部位从30 min到24 h均能对其小鼠悬尾的行为绝望行为产生抗抑郁作用。给予越鞠丸石油醚部位30 min后小鼠海马中的BDNF及其受体TrkB的表达明显上调,且这种抗抑郁的作用机制可持续到24 h。结论越鞠丸石油醚部位(低剂量)具有快速抗抑郁的药物潜力,且这种潜在的快速抗抑郁作用与BDNF及其受体TrkB的激活相关。

丙泊酚麻醉对新生期大鼠海马BDNF及Trk-B的影响

目的观察新生期大鼠丙泊酚麻醉对空间学习记忆能力发育的影响。方法 7日龄SD大鼠45只,随机平均分为3组:空白对照组,不做任何处理;丙泊酚麻醉组,腹腔注射丙泊酚25 mg.kg-1,每20 min给予首次剂量的1/2,麻醉维持2 h;中长链脂肪乳注射组,腹腔注射脂肪乳25 mg.kg-1,每隔20 min给予首次剂量的1/2。待麻醉后4 h,每组随机处死6只,免疫组化法分析海马的caspase-3表达,蛋白免疫印迹法测定BDNF和Trk-B的水平。其余同窝饲养至40 d时行Morris水迷宫测定。结果与对照组比较,丙泊酚麻醉组海马BDNF及Trk-B表达明显减少、caspase-3表达明显增加(P<0.05),脂肪乳组与对照组差异无显著性。Morris水迷宫实验中,丙泊酚组大鼠寻找隐藏平台潜伏期较对照组明显延长(P<0.05),在记忆保留实验中丙泊酚组大鼠穿越平台次数明显少于对照组(P<0.05),脂肪乳组与对照组均无明显差异。结论新生期大鼠丙泊酚麻醉可影响空间认知功能发育,该效应可能与新生期海马内神经元凋亡增加,BDNF途径抑制有关。

管灸对面神经损伤家兔面神经核内BDNF及其受体TrkB表达的影响

目的研究管灸对面神经损伤家兔面神经核中脑源性神经营养因子(BDNF)及其受体蛋白激酶B受体(Trk B)表达的影响。方法采用机械压榨法制作家兔面神经损伤模型,将家兔随机分为假手术组、模型组、管灸组、热疗组,通过免疫组化学法检测各组面神经核中BDNF及其受体TrkB的蛋白表达变化。结果家兔面神经损伤后面神经核BDNF及其受体TrkB的表达均明显下降(P<0.05或P<0.01),管灸组面神经核BDNF及其受体Trk B的表达均显著高于模型组(P<0.05)。结论管灸疗法可显著提高面神经核中BDNF及其受体TrkB的表达,这可能对促进面神经损伤后面神经核的再生和修复有重要作用。

BDNF/TrkB在唾液腺腺样囊性癌上皮-间质转化过程中的表达及意义

目的:研究BDNF、Trk B和E-cadherin在唾液腺腺样囊性癌(SACC)细胞系中的表达,初步探讨BDNF、Trk B和E-cadherin与SACC高转移性及神经侵袭性之间的关系。方法:以SACC高、低转移细胞系SACC-LM和SACC-83为研究对象,利用实时荧光定量PCR和Western免疫印迹技术检测BDNF、Trk B和E-cadherin在其中的表达差异;在SACC-83细胞系中加入外源性BDNF因子、Trk B抑制剂k252a,分析BDNF/Trk B通路在SACC侵袭转移过程中的生物学作用;利用实时荧光定量PCR、Western免疫印迹、细胞形态观察、细胞迁徙和侵袭实验评估SACC细胞上皮-间质转化(EMT)进程。应用SPSS17.0软件包对数据进行统计学处理。结果:BDNF和Trk B在SACC-LM中的表达高于SACC-83,E-cadherin在SACC-LM中的表达低于SACC-83;外源性BDNF刺激能有效诱导Trk B的激活和表达,降低E-cadherin的表达,提高N-cadherin的表达,使细胞形态呈长梭形改变,促进SACC-83细胞的迁徙、侵袭能力;而Trk B受体抑制剂k252a可有效抑制BDNF的各种作用,降低SACC-83细胞形态变化和迁徙、侵袭能力。结论:BDNF/Trk B信号通路通过介导SACC的EMT过程,促进SACC的迁徙、侵袭能力。

APPswe/PS1dE9转基因小鼠小脑内突触素及BDNF/Trk-B蛋白表达的变化

目的:观察APP/PS1转基因小鼠小脑突触素及BDNF/Trk-B蛋白表达变化。方法:选用9月龄APP/PS1雄鼠(n1)和同窝对照野生型WT雄鼠(n2)。采用Western blot(n1=6;n2=6)、免疫组化(n1=4;n2=4)两种方式定量、定位测定小脑组织功能活性依赖蛋白突触素、脑源性神经营养因子(BDNF)和其高亲和力受体(Trk-B)的蛋白表达。用透射电镜观察小脑皮质突触超微结构变化(n1=2;n2=2)。结果:与WT组相比,APP/PS1组小脑皮质内突触素、BDNF/Trk-B表达明显减少;突触间隙增宽,突触后致密区变薄,密度降低。结论:APP/PS1小鼠小脑皮质中突触素、BDNF/Trk-B蛋白含量均明显降低,突触超微结构也发生明显改变,提示AD小脑突触数量及形态变化可能与BDNF合成及释放减少有关。

艾地苯醌对血管性痴呆大鼠海马BDNF mRNA及受体TrkB mRNA表达的影响

目的探讨艾地苯醌对血管性痴呆(VD)大鼠脑海马神经元保护机制。方法选取100只SD大鼠随机分为艾地苯醌低剂量组、艾地苯醌高剂量组、模型组、假手术组,同时将尼莫地平组作为对照组,每组20只。采用两血管阻断法制备大鼠VD模型,艾地苯醌高剂量组、低剂量组分别以10、3 mg/kg灌服艾地苯醌,对照组以10 mg/kg灌服尼莫地平,给药30 d后,检测各组水迷宫法行为学及海马组织脑源性神经营养因子(BDNF)和高亲和力受体酪氨酸激酶(Trk)B在RNA水平及蛋白水平的表达变化。结果与假手术组比较,模型组空间学习记忆能力与探索能力下降,在原平台停留时间、穿越原平台次数显著减少,逃避潜伏期显著增长(P<0.05),海马神经元BDNF mRNA和TrκB mRNA及蛋白表达均显著下降(P<0.05);与模型组比较,艾地苯醌高、低剂量组空间学习记忆能力与探索能力明显改善,在原平台停留时间显著延长,穿越原平台次数显著增多,逃避潜伏期显著缩短(P<0.05),海马神经元BDNF mRNA和TrkB mRNA及蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论艾地苯醌可提高脑海马神经元BDNF及受体TrkB表达,具有一定的剂量依赖效应,可保护脑海马神经元,改善VD大鼠学习与记忆能力。

基于BDNF/TrkB/ERK/CREB信号通路探究温笑散通过促进神经发生抗抑郁的作用机制

目的:探讨温笑散改善皮质酮诱导的小鼠抑郁样行为的作用机制。方法:雄性ICR小鼠随机分为正常组、模型组、帕罗西汀组(20 mg·kg^(-1))、温笑散低、高剂量组(3.27、6.54 g·kg^(-1)),正常组和模型组给予等体积的生理盐水,除正常组外其他各组在灌胃0.5 h后皮下注射皮质酮诱导抑郁模型。给药结束后检测小鼠抑郁样行为;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清皮质酮含量;尼氏染色观察海马神经元损伤情况;免疫荧光检测海马齿状回(DG)中双皮质素(DCX)表达;蛋白免疫印迹法检测海马组织中脑源性神经营养因子(BDNF)/酪氨酸激酶受体B(TrkB)/细胞外调节蛋白激酶(ERK)/环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)信号通路相关蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠糖水偏好率显著降低、悬尾不动时间显著增加(P<0.01),旷场中心区域的停留时间和运动总距离明显减少(P<0.05,P<0.01),血清皮质酮水平显著升高(P<0.01),海马DG区神经元体积明显缩小、细胞核染色加深,DG区的DCX表达减少,海马中BDNF、磷酸化(p)-TrkB、p-ERK、p-CREB蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,温笑散低剂量组糖水偏好、旷场、悬尾行为学指标明显改善(P<0.05,P<0.01),温笑散高剂量组糖水偏好、旷场行为学指标明显好转(P<0.05,P<0.01);温笑散给药组血清皮质酮水平均显著降低(P<0.01),海马DG区神经元结构和形态正常,细胞核明显、尼氏体丰富,DG区DCX的表达均升高,温笑散高剂量组海马中BDNF、p-TrkB、p-ERK、p-CREB蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论:温笑散能改善皮质酮诱导的小鼠抑郁样行为,促进神经发生,其作用机制可能与激活BDNF/TrkB/ERK/CREB信号通路相关。

PGE1对改善血管性痴呆大鼠学习记忆功能的影响及BDNF/TrkB信号通路的作用研究

目的 :探讨前列腺素E1(PGE1)对血管性痴呆(VD)大鼠学习记忆功能的影响及BDNF/Trk B信号通路在其中的作用。方法 :将48只成年雄性大鼠分为假手术组、盐水组、PGE1组和PGE1+K252a组,每组各有12只大鼠。使用双侧颈总动脉永久性结扎法将盐水组、PGE1组和PGE1+K252a组大鼠制成慢性脑低灌注诱导的VD大鼠模型,对假手术组大鼠的颈动脉进行钝性分离,并使用4-0号缝线对其颈动脉进行环绕,但不进行结扎。4周后,为假手术组和盐水组大鼠经尾部静脉注射生理盐水,为PGE1组大鼠经尾部静脉注射PGE1。为PGE1+K252a组大鼠经右侧脑室注射Trk B拮抗剂——K252a和DMSO(二甲基亚砜)后,为该组大鼠经尾部静脉注射PGE1。对四组大鼠进行水迷宫实验和条件性恐惧实验,比较其进行这两种实验的结果。在光学显微镜下观察四组大鼠海马组织CA1区锥体细胞的排列情况。结果 :在这四组大鼠中,假手术组大鼠的逃避潜伏期最短,盐水组大鼠的逃避潜伏期最长(P<0.05)。PGE1组大鼠的逃避潜伏期短于PGE1+K252a组大鼠(P<0.05)。盐水组和PGE1+K252a组大鼠跨越原平台的次数相比差异无统计学意义(P>0.05)。与盐水组和PGE1+K252a组大鼠相比,PGE1组和假手术组大鼠跨越原平台的次数较多(P<0.05)。PGE1组大鼠跨越原平台的次数多于假手术组大鼠(P<0.05)。假手术组和PGE1组大鼠发生震惊反射时间的百分比均大于盐水组和PGE1+K252a组大鼠(P<0.05)。假手术组和PGE1组大鼠发生震惊反射时间的百分比相比差异无统计学意义(P>0.05)。盐水组和PGE1+K252a组大鼠发生震惊反射时间的百分比相比差异无统计学意义(P>0.05)。假手术组大鼠脑组织切片中海马CA1区锥体细胞层的排列紧密、均匀。盐水组和PGE1+K252a组大鼠脑组织海马CA1区锥体细胞层的排列松散。PGE1组大鼠脑组织海马CA1区锥体细胞层的排列紧密、均匀,可见少许的脱落细胞。结论 :PGE1可有效地改善VD大鼠的学习记忆功能。此作用是通过调节VD大鼠体内BDNF/Trk B信号通路来实现的。

左归丸对惊恐伤肾MCAO大鼠BDNF及其受体的影响

目的:观察左归丸对惊恐伤肾脑缺血大鼠缺血后BDNF、Trk B表达的影响及补肾名方左归丸的治疗作用,探讨左归丸的作用机制及"肾通于脑"中医理论的生物学实质。方法:Wistar大鼠56只,雌性,随机分为假手术组、模型组、"猫吓鼠"模型组、治疗组,每组14只大鼠。除假手术组外,其余各组均采用线栓法建立大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,并于MCAO术后2h实施再灌注。"猫吓鼠"模型组、治疗组于MCAO手术前10天开始用"猫吓鼠"法恐吓大鼠,制备"恐伤肾"肾虚模型,左归丸组于MCAO手术前3天开始给予左归丸汤剂灌胃,每日1次,连续灌胃10天。采用免疫组化法检测BDNF、Trk B表达水平。结果:与假手术组比较,模型组BDNF表达及p-Trk B/Trk B比值增加。与模型组比较,"猫吓鼠"组BDNF表达及p-Trk B/Trk B比值下调。与"猫吓鼠"组比较,治疗组BDNF表达及pTrk B/Trk B比值增加。结论:脑缺血后BDNF及其受体表达增加可能是机体损伤后的一种保护性反应,惊恐伤肾可削弱机体的自我保护功能。左归丸可以改善惊恐伤肾大鼠抗脑缺血损伤能力的低下,并且这种作用可能通过上调BDNF表达及活化Trk B实现。

BDNF对新生鼠缺血缺氧性脑损伤的保护作用的研究

目的:研究提前给予脑源性神经生长因子(Brain-derived neurotrophic factor,BDNF)对新生鼠的缺血缺氧性脑损伤(Hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)的保护作用。方法:选取7 d龄Wistar大鼠256只,随机分成4组,①假手术组(n=64,A),②模型组(n=64,B),③模型前给药组(n=64,C),④模型后给药组(n=64,D),每组又分为1、3、5、7 d 4个时间点,每个时间点8只,用免疫组织化学和实时荧光定量PCR方法检测脑组织中海马区域的Trk-B和p75的表达水平。结果:模型前注射组和模型后注射组的Trk-B和p75水平分别与对照组和假手术组比较均有显著性差异(P<0.05)。结论:缺血缺氧模型前给予BDNF可保护HIBD引起的脑损伤,其可能机制是通过提高Trk-B的表达水平和降低p75的表达水平来发挥作用的。

“通督调神”针刺对脑卒中后抑郁大鼠海马CREB/BDNF/TrkB信号通路的影响

目的:观察“通督调神”针刺对脑卒中后抑郁(PSD)大鼠抑郁样行为以及海马环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)/脑源性神经营养因子(BDNF)/酪氨酸蛋白激酶B(TrkB)通路的调节作用,探讨其改善PSD的可能机制。方法:将36只SPF级SD大鼠随机分为假手术组、模型组、通督调神组,每组12只。模型组、通督调神组大鼠采用Zea Longa线栓法和慢性不可预知性温和应激(CUMS)法复合制备PSD模型。通督调神组大鼠于造模结束后第4天予针刺“大椎”“水沟”“百会”“神庭”,每次干预40 min,每天1次,每周6次,连续干预4周。分别于PSD模型造模结束后第2天和干预4周后进行大鼠Zea Longa神经行为学评分、蔗糖水消耗实验和敞箱实验;生化法检测大鼠海马CA1区超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量;ELISA法检测大鼠血清BDNF含量;实时荧光定量PCR法检测大鼠海马CA1区BDNF、Trk B、CREB mRNA表达;Western blot法检测大鼠海马CA1区BDNF、Trk B、CREB,p-CREB蛋白表达。结果:与假手术组比较,造模后、干预后模型组及造模后通督调神组大鼠Zea Longa神经行为学评分升高(P<0.05),蔗糖水消耗百分比、敞箱实验水平与垂直运动评分降低(P<0.05)。与模型组比较,通督调神组大鼠干预后Zea Longa神经行为学评分降低(P<0.05),蔗糖水消耗百分比、敞箱实验水平与垂直运动评分升高(P<0.05)。与假手术组比较,模型组大鼠海马CA1区SOD、CAT活性及血清BDNF含量降低(P<0.05),MDA含量升高(P<0.05);与模型组比较,通督调神组大鼠海马CA1区SOD、CAT活性及血清BDNF含量升高(P<0.05),MDA含量降低(P<0.05)。与假手术组比较,模型组大鼠海马CA1区BDNF、TrkB、CREB mRNA及BDNF、TrkB、CREB、p-CREB蛋白表达降低(P<0.05);与模型组比较,通督调神组大鼠海马CA1区BDNF、TrkB、CREB mRNA及BDNF、Trk B、p-CREB蛋白表达、p-CREB/CREB比值升高(P<0.05)。结论:“通督调神”针刺可改善PSD大鼠抑郁样行为,其作用机制可能与抑制海马神经组织氧化应激,增强CREB/BDNF/Trk B信号通路活性有关。

大豆蛋白和大豆肽对小鼠焦虑样行为的作用研究

为研究大豆蛋白和大豆肽对慢性不可预测轻度应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)诱导的小鼠焦虑样行为的影响,选用40只6~7周龄雄性C57BL/6J小鼠,随机分为空白组、模型组、大豆蛋白组和大豆肽组。通过CUMS诱导小鼠产生焦虑样行为,并在第53天进行高架十字迷宫实验,第54天收集脑组织样本检测小胶质细胞的激活情况、炎症因子和脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)的水平,以及BDN F-Trk B-CREB通路上相关蛋白的表达。结果表明:与空白组相比,CUMS可使小鼠在开臂中的时间和进入开臂的次数占比显著降低,Ib a-1阳性细胞数量显著增加,I L-1β水平显著上升,BDNF、p-TrkB、p-CREB表达显著下降(P<0.05);与模型组相比,大豆蛋白组中小鼠进入开臂的次数占比为模型组的1.4倍,同时I L-6、I L-1β、TN F-α和IF N-γ水平分别降低了21.5%、34.2%、10.9%和32.5%,BDNF蛋白表达提高了39.8%(P<0.05)。大豆肽组中小鼠在开臂中的时间和进入开臂的次数分别为模型组的2.0倍和1.4倍,同时小鼠海马区、CA1和CA3区Ib a-1阳性细胞数量分别下降了39.0%、43.2%和40.8%,I L-10水平提高了23.3%,I L-1β和TN F-α水平分别降低了26.8%和13.7%,BDNF水平提高了22.0%,BDNF和p-TrkB蛋白表达分别提高了63.0%和42.5%(P<0.05)。研究结果表明,大豆蛋白和大豆肽营养干预均可缓解神经炎症、增强神经营养功能,从而发挥抗焦虑活性,其中大豆肽效果更佳。研究旨在为抗焦虑食品的研发提供理论参考。

温胆汤含药血清对CREB mRNA沉默海马神经元细胞凋亡及BDNF/TrkB/CREB信号通路的影响

目的:探讨温胆汤对环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)mRNA沉默海马细胞活性、凋亡及海马脑源性神经营养因子/原肌球蛋白相关受体激酶/CREB(BDNF/TrkB/CREB)信号通路作用的影响。方法:制备温胆汤含药血清,将SD雄性大鼠随机分为温胆汤高、中、低剂量组、氯氮平组、正常生理盐水组,每组10只,其中每组15只。正常组予20 mL·kg-1生理盐水灌胃,氯氮平组给予0.02 g·kg-1氯氮平原药灌胃,温胆汤高、中、低剂量组分别予质量浓度为2,1,0.5 g·mL-1的等量温胆汤浓缩生药灌胃,1次/d,连续灌胃8 d后,股动脉取血,5 000 r·min-1离心15 min,倾取上清液,灭活,-80℃保存,备用。通过脂质体转染至海马细胞中,构建CREB mRNA沉默海马神经元细胞系,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)验证小分子干扰核糖核酸(siRNA)转录后效果。检测海马细胞周期和凋亡,正常海马细胞和CREB基因沉默海马细胞内BDNF,TrkB,CREB,钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)mRNA表达水平。结果:对于细胞凋亡,与正常大鼠血清组比较,各组别在24,48 h时,细胞凋亡显著降低(P<0.01);与正常大鼠血清-siRNA组比较,各给药组细胞凋亡显著降低(P<0.01)。对于BDNF,TrkB,CREB,CaMKⅡmRNA表达,与正常大鼠血清组比较,基因沉默正常组CREB,BDNF mRNA表达均显著下降(P<0.01);与正常大鼠血清-siRNA组比较,各给药组可显著提高BDNF mRNA表达(P<0.01),其中TrkB,CaMKⅡ各组间差异无明显统计学意义。结论:温胆汤含药血清可提高BDNF mRNA表达,通过调控BDNF/TrkB/CREB信号通路,以保护海马神经元,达到防治精神分裂症认知障碍的目的。

耳穴电刺激配合声音掩蔽对耳鸣大鼠听觉皮层的CREB蛋白、BDNF及其受体TrkB表达的影响

目的:探讨耳穴电刺激配合声音掩蔽对耳鸣大鼠听觉皮层的环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)、脑源性神经营养因子(BDNF)及其受体酪氨酸蛋白激酶受体B(TrkB)表达的影响。方法:将27只成年雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组和治疗组。模型组及治疗组大鼠采取腹腔注射水杨酸钠诱导制作耳鸣模型;对照组注射0.9%NaCl溶液。造模成功后,治疗组采用耳穴"神门""胰胆"电刺激配合声音掩蔽法治疗,每天1次,治疗15d。采用声音惊吓反应监测系统监测各组大鼠的停顿声音预刺激抑制惊吓反应(GPIAS)及预刺激抑制反应(PPI),以WesternBlot法检测各组大鼠听觉皮层的BDNF及其受体TrkB,CREB和磷酸化CREB(p-CREB)蛋白表达。结果:①与对照组比较,模型组大鼠在12、16、20、28 kHz高频背景声音的GPIAS比值均下降(均P<0.05);与模型组比较,治疗组在12、16、20、28 kHz高频背景声音的GPIAS比值均升高(均P<0.05)。②与对照组比较,模型组BDNF蛋白表达、p-CREB蛋白表达均升高(均P<0.01),TrkB表达升高(P<0.05);治疗组与模型组BDNF和TrkB表达、CREB及p-CREB蛋白表达比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论:耳穴电刺激配合声音掩蔽法能改善耳鸣大鼠高频背景声音的GPIAS比值变化,此作用可能与抑制耳鸣大鼠听觉皮层的BDNF/TrkB/CREB信号通路相关蛋白表达下调,进而逆转不良可塑性改变有关。

芍甘木瓜汤通过BDNF/TrkB/CREB信号通路改善脑卒中偏瘫痉挛状态大鼠神经行为学研究

目的观察芍甘木瓜汤对脑卒中偏瘫痉挛状态大鼠神经行为学的影响,并探讨对脑源性神经营养因子(BDNF)/酪氨酸蛋白激酶B(TrkB)/环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)信号通路的调控机制。方法取50只SD大鼠采用改良线栓法制作大脑中动脉梗死模型,选取建模成功大鼠随机分为模型组、巴氯芬(0.008 g/kg)组和芍甘木瓜汤低、中、高剂量(0.05、0.10、0.15 g/kg)组。另取10只SD大鼠不栓塞大脑中动脉作为假手术组,于再灌注2 h后ig给药,每天1次,连续2周,假手术组和模型组ig等量生理盐水。干预前后分别采用Zea Longa量表、改良Ashworth量表评价神经行为学、肌张力变化,采用大鼠多导生理记录仪测定上肢伸直幅度;酶联免疫法检测大鼠干预前后血清BDNF、TrkB水平;苏木素-伊红(HE)染色观察缺血半暗带脑组织病理变化,透射电镜下观察缺血半暗带脑组织神经元超微结构;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测缺血半暗带脑组织BDNF、TrkB-FL、TrkB-T1、CREB mRNA表达;Western blotting检测BDNF、TrkB-FL、TrkB-T1、CREB蛋白表达及p-CREB水平。结果干预后巴氯芬组和芍甘木瓜汤各剂量组的Zea Longa量表、改良Ashworth量表分级均较干预前和模型组(干预后)显著改善(P<0.05),上肢伸直幅度均较干预前和模型组(干预后)均显著增加(P<0.05),血清BDNF、TrkB水平均较干预前和模型组(干预后)显著升高(P<0.05),缺血半暗带脑组织病理变化和神经元超微结构均较模型组明显改善。模型组缺血半暗带脑组织BDNF、TrkB-FL mRNA与蛋白表达,p-CREB蛋白水平均显著低于假手术组(P<0.05),巴氯芬组和芍甘木瓜汤各剂量组均较模型组显著升高(P<0.05);模型组缺血半暗带脑组织TrkB-T1 mRNA与蛋白表达显著高于假手术组(P<0.05),巴氯芬组和芍甘木瓜汤各剂量组均较模型组显著下降(P<0.05)。各组缺血半暗带脑组织CREB mRNA表达差异无统计学意义。结论对脑卒中偏瘫痉挛状态大鼠ig予以芍甘木瓜汤可改善其神经行为学,降低肌张力,增加血清BDNF、TrkB水平,减轻缺血半暗带脑组织病理和神经元超微结构变化,推测与激活BDNF/TrkB/CREB通路,上调BDNF、TrkB-FL mRNA与蛋白表达,下调TrkB-T1 mRNA与蛋白表达,增加p-CREB水平有关。

柴胡加龙骨牡蛎汤对慢性应激抑郁大鼠海马BDNF/TrkB/CREB通路的影响

目的:基于脑源性神经营养因子(BDNF)/络氨酸激酶B(TrkB)/环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)途径探讨柴胡加龙骨牡蛎汤对慢性应激抑郁大鼠海马的影响。方法:取60只SD大鼠,其中10只作为空白组,余50只建立慢性应激抑郁大鼠模型后,随机分为5组,即模型组,盐酸氟西汀组(0.003 g·kg^(-1)),柴胡加龙骨牡蛎汤低、中、高剂量组(1.625,3.25,6.5 g·kg^(-1))。连续灌胃给药8周,1次/d,分别于造模前、造模后及给药后进行行为学实验评估大鼠抑郁状态。苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠海马形态学变化,免疫组织化学法(IHC)检测大鼠海马组织中BDNF蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠海马组织中BDNF,TrkB,CREB mRNA表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)定量检测大鼠海马组织中BDNF,TrkB,CREB蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠糖水偏嗜率明显降低(P<0.05),水平得分、垂直得分明显降低(P<0.05),不动时间明显增加(P<0.05),漂浮时间显著增加(P<0.05),HE染色结果显示海马神经元结构损伤,免疫组织化学染色中BDNF表达明显降低(P<0.05),BDNF,TrkB,CREB mRNA及蛋白表达明显降低(P<0.05);与模型组比较,盐酸氟西汀组及柴胡加龙骨牡蛎汤低、中、高剂量组大鼠糖水偏嗜率明显升高(P<0.05),水平得分、垂直得分明显增加(P<0.05),不动时间明显减少(P<0.05),漂浮时间明显减少(P<0.05),海马神经元结构明显复原,免疫组织化学染色中BDNF表达明显增加(P<0.05),BDNF,TrkB,CREB mRNA及蛋白表达明显增加(P<0.05)。结论:柴胡加龙骨牡蛎汤能显著改善经慢性应激刺激后大鼠的抑郁样行为,增强海马组织神经元的再生与修复,其机制可能与上调大鼠海马BDNF/TrkB/CREB信号通路有关。