PRRSV BJ-4株ORF5基因的原核表达与重组蛋白的纯化

为成功表达猪繁殖与综合征病毒(PRRSV)结构蛋白GP5,通过PCR方法从重组质粒pGEM ORF5扩增得到缺失N端疏水序列的基因片段dORF5(deletingORF5)。将dORF5克隆至原核高效表达载体pGEX 4T 2,在E.coliBL21细胞中成功表达了重组蛋白GST dORF5,表达产物以包涵体的形式存在,表达量为20 8%。Western Blot结果表明重组蛋白可被PRRSV阳性血清所识别。利用融合肽进行亲和层析得到高纯度的重组蛋白,为进一步研究PRRS病毒结构蛋白的结构和功能奠定了基础。

BJ-4直线加速器低压电源故障的检修及工作环境的改进

自动频率控制系统 (AFC)和操作控制台低压电源部分 ,在工作中 ,散热环境不佳 ,一些发热的元件经常烧坏。本文就此原因作了改进 。

BJ-4直线加速器的保养与维修

我院从1994年底开始使用BJ-4医用直线加速器,该机型在当时是一款设计和制造都很成熟机型,性能稳定,性价比高,维修方便且费用低。我们在长达11年的使用中坚持定时保养和及时故障维修,使得如电子枪、氢闸流管、磁控管等主要元器件运行良好,均没更换,磁控管已运行了1500个高压小时,现还能正常工作。为医院节约了大笔资金也为病人治疗节省了宝贵的时间。现将多年来所做的保养,一些故障的维修整理出来,与大家交流。

BJ—4加速器电子枪灯丝电源线路及真空电源线路的改进

本文对电子枪灯丝的工作原理作了简要的介绍 ,对如何延长灯丝寿命作了线路改进 ,并对真空电源线路也作了部分修改以保证钛泵能够 2

BJ-6B型直线加速器故障分析与排除5例

我院淘汰了BJ-4B型医用电子直线加速器后，又引进了BJ-6B型医用直线加速器。较之前者，后者能产生6MV—X射线，采用工控机控制．自动化程度较高，并且配备了头体部立体定向放射治疗系统，具有常规治疗、弧形治疗、楔形治疗等治疗模式，能满足除电子线以外的大多数肿瘤治疗的需要。该机器一直运行良好，但由于我院的工作量大．平均每日照射都在90野以上，并经常进行非共面（转床）治疗，机器故障时有发生。现就我院加速器遇到的5个典型故障及其维修经验介绍如下。

医用直线加速器操作中的几点建议

BJ-4医用直线加速器在肿瘤治疗中扮演着非常重要的角色，它的正常运行与否直接关系到医院的社会效益和经济利益，在加速器出现的故障中，有相当一部分是在操作过程中出现的，如果操作得当，可以减少故障的发生，一但出现故障可以及时发现，将故障排除在萌芽状态。这时操作就显的尤为重要。以下是笔者数年来对加速器操作和维修工作的几点总结。希望同行们批评指正。

猪繁殖与呼吸综合征病毒北京分离株的ORF7克隆与序列分析

将北京地区猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ） 分离株ＢＪ２ 和ＢＪ４ 的ＯＲＦ ７ 及部分３’端非编码区（ ＵＴＲ） 的ＲＴＰＣＲ 扩增产物克隆连接于ｐ ＧＥＭＴｅａｓｙ 质粒载体上，重组质粒经ＥｃｏＲ Ⅰ酶切鉴定后进行了双链测序。测定的基因序列与欧美标准毒株已知序列比较发现，ＢＪ２ 和ＢＪ４ 株与美洲ＶＲ２３３２ 株非常接近，在其长度为５５５ ｂｐ 的ｃＤＮＡ 序列中，仅与ＶＲ２３３２ 株分别相差１ 和２ 个核苷酸，其中ＯＲＦ ７ 的核苷酸序列与ＶＲ２３３２ 株同源性分别高达１００ ％ 和９９ ．４６ ％ ，其推导的氨基酸序列与ＶＲ２３３２ 株同源性分别为１００ ％ 和９９ ．２５ ％ ，３’ＵＴＲ 则完全相同；而与欧洲ＬＶ 株则有明显差异，其核苷酸序列同源性仅为６８ ．００ ％ 和６７ ．００ ％ ，推测的氨基酸序列同源性仅有６５ ．００ ％ 和６４ ．００ ％ ，且ＢＪ２ 和ＢＪ４ 株与ＬＶ 株相比缺失了ＫＫＳＴＡＰＭ 和ＡＳＱＧ 两段氨基酸序列，而３’ＵＴＲ 则比ＬＶ 株多出３８ ｎｔ 的一段特征性核苷酸序列。序列分析结果表明，ＢＪ２ 和ＢＪ４ 株属于同一基因型，且具有ＶＲ２３３２

广东省猪生殖与呼吸综合征病毒主要结构蛋白基因的变异分析

根据GenBank中猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲株(ATCC VR-2332)基因序列分别设计合成了针对PRRSV ORF3、ORF5和ORF6基因的引物,利用RT-PCR从广东省送检的5份病料中均分别扩增得到了大小约787、630和550 bp的片段,将扩增的cDNA片段克隆入pMD 18-T载体并测序.应用DNAStar软件分析,并与国内外已发表毒株和疫苗株(RespPRRS/Repro、RespPRRS MLV)、LV4.2.1株的序列进行比较.结果显示,这5个毒株与CH-1a、HB-1(sh)、BJ-4、ATCC VR-2332、疫苗株等毒株ORF3、ORF5、ORF6的核苷酸同源性分别为87.2%～98.7%、85.4%～96.8%、91.8%～98.9%,推导的氨基酸同源性分别为84.6%～97.6%、84.5%～95.5%、94.8%～98.9%;而与LV4.2.1株的核苷酸同源性分别为56.1%～58.3%、54.4%～57.0%、62.2%～64.4%,推导的氨基酸同源性分别为53.9%～56.7%、54.0%～57.0%、78.0%～80.3%.基因系统发育树表明,广东省流行的PRRSV与HB-1(sh)株的亲缘关系比较近.

猪繁殖与呼吸综合征病毒nsp7蛋白的表达与纯化

为了解nsp7重组蛋白的免疫学活性,采用RT-PCR的方法从猪繁殖与呼吸道综合症病毒(PRRSV)BJ-4毒株中扩增得到nsp7基因,将基因连接到pET-28a载体并转化至大肠杆菌BL21中进行诱导表达,利用Ni-NTA进行亲和纯化,通过SDS-PAGE和Western-blot对重组蛋白进行分析和鉴定,通过间接ELISA方法研究了重组蛋白的免疫学活性。结果表明,成功制备了nsp7重组蛋白,间接ELISA结果表明,重组蛋白具有良好的免疫活性,为建立nsp7特异性抗体的间接ELSIA检测方法及PRRS诊断试剂盒的研制奠定了基础。