牛IL-18成熟蛋白基因在昆虫细胞中的表达及其活性

目的:在杆状病毒表达载体中表达牛白细胞介素-18(bovine interleukine-18,BoIL-18)成熟蛋白基因,并鉴定其生物学活性。方法:设计一对特异性引物,将编码BoIL-18的成熟蛋白基因亚克隆到杆状病毒转移载体pFastBac HTb上,构建重组质粒repFastBac HTb-18,转化至DH10Bac感受态细胞中得到重组Bacmid(Bacmid-BoIL18)。在Cellfectin作用下,将Bacmid-BoIL18转染昆虫细胞sf9获得重组杆状病毒,然后将重组杆状病毒感染sf9,感染后不同时间收获sf9细胞,进行SDS-PAGE电泳,分析表达情况;用BoIL-18的原核表达产物作为抗原制备的兔多克隆抗体进行Western blot分析;将纯化的表达产物对牛外周血单个核细胞(PBMC)进行细胞增殖试验,对健康牛脾进行IFN-γ诱生试验,初步分析表达产物的生物学活性。结果:BoIL-18成熟蛋白基因在昆虫细胞中获得了表达,经薄层凝胶扫描分析证实,表达量占总蛋白的21.3%;Western blot分析证明,在相对分子质量(Mr)约为26 000处有一条特异性条带。生物学活性分析表明,纯化的表达产物可明显增强淋巴细胞增殖,促进IFN-γ的产生。结论:BoIL-18成熟蛋白基因在昆虫细胞中获得了表达,表达产物具有良好的生物学活性。

牛IL-18真核表达载体的构建及其对FMD疫苗的免疫增强作用

【目的】探讨牛IL-18(BoIL-18)对口蹄疫(FMD)灭活疫苗的免疫增强作用。【方法】PCR扩增BoIL-18蛋白基因片段,将其定向克隆至pcDNA3.1载体中,构建牛IL-18真核表达质粒pcDNA3.1-BoIL18。将pcDNA3.1-BoIL18与FMD灭活疫苗联合免疫小白鼠,同时设空载体和单纯接种FMD灭活苗组为对照,通过对口蹄疫抗体效价的检测、T淋巴细胞转化试验及NK细胞活性检测试验,研究BoIL18对FMD灭活疫苗的免疫增强作用。【结果】同时接种FMD灭活疫苗和IL-18真核表达质粒的小白鼠T淋巴细胞转化率和NK细胞活性,从接种第21天开始均明显高于单纯FMD灭活苗接种组(P<0.05),所产生的中和抗体效价从第28天开始与单纯接种FMD灭活疫苗组差异显著(P<0.05);空载体组与单纯FMD灭活疫苗组上述3项指标间无显著差异。【结论】牛IL-18真核表达质粒在小白鼠体内得到了良好表达,且表达产物对FMD灭活疫苗的免疫效果具有明显的增强作用。