灯盏乙素通过环状GMP-AMP合酶-干扰素基因刺激因子通路抑制BV-2小胶质细胞介导的神经炎症

目的探讨灯盏乙素对脂多糖(LPS)诱导的BV-2小胶质细胞神经炎症的影响。方法培养BV-2小胶质细胞系,将BV-2小胶质细胞分为对照组(Ctrl)、环状GMP-AMP合酶(cGAS)抑制剂RU320521(RU.521)组、LPS组、LPS+RU.521组、LPS+灯盏乙素预处理(LPS+S)组、LPS+S+RU.521组,共6组。Western blotting及免疫荧光双标染色法检测并观察BV-2小胶质细胞中cGAS、干扰素基因刺激因子(STING)、核因子κB(NF-κB)、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)、PYD结构域蛋白3(NLRP3)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达变化(n=3)。结果Western blotting和免疫荧光双标染色均显示,与对照组相比,LPS诱导后,BV-2小胶质细胞中cGAS、STING、p-NF-κB、NLRP3和TNF-α蛋白的表达水平显著升高(P<0.05);与LPS组相比,LPS+S组中cGAS、STING、p-NF-κB、NLRP3和TNF-α蛋白的表达水平显著下降(P<0.05)。使用cGAS通路抑制剂RU.521后显示了与灯盏乙素预处理组相似的作用效果。此外,NF-κB在各组的变化不明显(P>0.05)。结论灯盏乙素干预抑制BV-2小胶质细胞介导的神经炎症反应,可能与cGAS-STING信号通路有关。

Fasudil通过TLR4通路抑制脂多糖诱导的小鼠BV-2小胶质细胞TNF-α和IL-1β的表达

目的探讨Fasudil对脂多糖(LPS)诱导BV-2小胶质细胞系促炎细胞因子表达中的作用。方法体外培养BV-2小胶质细胞系,实验分为PBS对照组、LPS刺激组、LPS联合Fasudil干预组,ELISA检测细胞TNF-α、IL-1β的释放,Griess法检测NO释放水平,流式细胞术检测Toll样受体4(TLR4)、TLR2蛋白表达。结果 LPS刺激BV-2细胞可导致TNF-α、IL-1β和NO的释放明显增加,还可导致炎性信号通路中的受体TLR4表达明显增加。Fasudil能明显抑制炎性因子的释放和TLR4的表达。结论 Fasudil可抑制LPS诱导的小胶质细胞NO、TNF-α和IL-1β释放,其作用机制可能与Fasudil下调TLR4通路有关。

乙酰葛根素对Aβ_(25-35)诱导的BV-2小胶质细胞NF-κBp65和iNOS表达的影响

目的:研究乙酰葛根素对β-淀粉样蛋白诱导的小鼠BV-2小胶质细胞核转录因子-κBp65和诱导型一氧化氮合酶表达的影响。方法:体外培养小鼠BV-2小胶质细胞,用凝聚态β-淀粉样蛋白(amyloid-β25-35,Aβ_(25-35))诱导小胶质细胞活化建立阿尔茨海默病炎症细胞模型。实验细胞随机分为6组:空白对照组,Aβ_(25-35)组,Aβ_(25-35)+乙酰葛根素(浓度分别为:0.1,0.4,1.6μmol/L)剂量组和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(caspase-3)抑制剂(Z-DEVD-fmk)组。在倒置相差显微镜下观察细胞形态的变化;硝酸还原酶法检测乙酰葛根素对一氧化氮(nitric oxide,NO)的影响;利用Western Blot分析乙酰葛根素对NF-κBp65和i NOS蛋白表达的影响;通过Realtime PCR分析乙酰葛根素对NF-κBp65和i NOS基因表达的影响。结果:Aβ_(25-35)诱导后小胶质细胞由静息状态转变为阿米巴样,乙酰葛根素可减轻细胞发生的形态改变。乙酰葛根素呈剂量依赖性的抑制炎性因子NO的产生,抑制NF-κBp65和i NOS的表达。结论:乙酰葛根素可以改善BV-2小胶质细胞的形态变化,减轻BV-2小胶质细胞的炎性反应,其机制可能与其抑制NF-κB信号通路的激活有关,且具有剂量依赖性。

美满霉素对脂多糖诱导的BV-2小胶质细胞肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的探讨美满霉素(MC)对脂多糖(LPS)诱导的BV-2小胶质细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法采用相应浓度的MC或LPS(100 ng/ml)对MC组及0.1、1、10、100μmol/L MC+LPS组、LPS组、空白对照组BV-2小胶质细胞进行预处理。ELISA法检测BV-2小胶质细胞TNF-α蛋白的表达,逆转录-PCR检测细胞TNF-αmRNA表达。结果与空白对照组比较,0.1、1μmol/L MC+LPS组及LPS组的TNF-α水平显著升高(均P<0.01)。10、100μmol/L MC+LPS组TNF-α水平显著低于LPS组(均P<0.01)。与空白对照组比较,LPS组及10μmol/L MC+LPS组TNF-αmRNA的表达水平显著增高(均P<0.01)。10μmol/L MC+LPS组TNF-αmRNA表达水平显著低于LPS组(P<0.01)。结论 MC预处理(≥10μmol/L)可显著抑制LPS诱导的小胶质细胞TNF-α的表达。

人参皂苷Rg1抑制脂多糖诱导BV-2小胶质细胞增殖

目的探讨人参皂苷Rg1(Rg1)对脂多糖(LPS)诱导BV-2小胶质细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)和细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的调控作用及其对活化的BV-2小胶质细胞增殖的调控作用。方法体外培养BV-2小胶质细胞并分为空白对照组、LPS不同时间(1,3,6,8,12 h)处理组及Rg1不同浓度(10、20和50μmol/L)预处理组。采用Western blotting检测细胞增殖相关因子PCNA蛋白和cyclin D1蛋白的表达变化;RT-PCR检测细胞增殖相关因子PCNA和cyclin D1 mRNA的表达变化;免疫荧光染色法观察细胞内cyclin D1蛋白表达变化。采用流式细胞术检测细胞周期的变化。结果 LPS诱导BV-2小胶质细胞PCNA和cyclin D1mRNA和蛋白表达上调,并呈时间依赖性;不同浓度Rg1预处理下调LPS诱导的BV-2小胶质细胞PCNA和cyclin D1的mRNA和蛋白表达。结论Rg1通过下调LPS诱导的BV-2小胶质细胞PCNA和cyclin D1的表达水平来调控细胞周期进而抑制活化的小胶质细胞的增殖。

褪黑素对低氧诱导的BV-2小胶质细胞CD45表达增高的抑制作用(英文)

目的 研究褪黑素对低氧激活的小胶质细胞CD4 5表达的影响 ,以探讨褪黑素的抗衰老和抗阿尔茨海默病的作用机制。方法 体外培养BV 2小胶质细胞 ,用终浓度为 2 .0mmol·L- 1的连二亚硫酸钠作用 4 8h ,造成慢性低氧模型 ,药物处理组在低氧的同时给予褪黑素。相差显微镜下观察小胶细质胞形态学变化 ,流式细胞术测定缺氧状态下BV 2小胶质细胞表面CD4 5的表达 ;体外培养BV 2小胶质细胞用终浓度为 0 .0 1,0 .1,1.0 μmol·L- 1的褪黑素作用5min ,加入 2 0mg·L- 1的脂多糖 37℃孵育 12h ,Griess试剂法检测培养上清中NO的含量。结果 连二亚硫酸钠引起的低氧可明显增加BV 2小胶质细胞CD4 5的表达 ,荧光强度增至 2 3.9± 14 .2 (对照组为0 .80± 0 .73) ,低氧也可使小胶质细胞的形态发生阿米巴样变 ,而 0 .0 1,0 .1,1.0 μmol·L- 1的褪黑素可剂量依赖性地减少低氧诱导的CD4 5表达 ,抑制由低氧引起的小胶质细胞的阿米巴样变。但褪黑素对脂多糖诱导的BV 2小胶质细胞培养液中NO的升高无明显抑制作用。结论 褪黑素抑制小胶质细胞的激活与其抗氧化作用密切相关 。

PrP^(106-126)及Aβ_(1-42)同步诱导BV-2小胶质细胞趋化及增殖活性的研究

通过检测传染性海绵状脑病(TSEs)及阿尔茨海默病(AD)的PrP和Aβ毒性蛋白同步诱导小胶质细胞趋化与增殖活性,旨在初步揭示TSEs及AD的致病机制及重新评估TSEs危害公共卫生安全的风险。以PrP106-126和Aβ1-42为研究对象,以BV-2小胶质细胞为实验细胞,构建25~100μmol·L-1的PrP106-126和2.5~10μmol·L-1的Aβ1-42以及两者不同浓度比例混合物侵染BV-2细胞的实验模型,比较多肽及其混合物诱导BV-2的趋化指数(CI)、增殖指数(PI)以及MCP-1、TGF-β1的表达水平,同步进行上述参数的相关性分析。结果表明:与PBS组及蛋白对照组相比,25~100μmol·L-1的PrP106–126及2.5~10μmol·L-1 Aβ1-42均上调BV-2的CI、PI及表达MCP-1、TGF-β1水平(P<0.05);两种多肽不同浓度混合物同步诱导BV-2的CI、PI值及MCP-1、TGF-β1表达水平均大于单一蛋白分别诱导相同参数值,但却小于两种蛋白分别诱导相同参数值之和;两者诱导BV-2CI、PI及MCP-1表达水平均呈现多肽低浓度依赖性及处理时间依赖性,但当多肽达到高浓度或长诱导时间(PrP106-126>50μmol·L-1;Aβ1-42>5μmol·L-1;诱导时间>12h)时,这3种参数都进入平台期,但BV-2表达TGF-β1水平持续上升;PrP106-126及Aβ1-42对BV-2RCI与MCP-1水平呈正相关。结果提示,两种多肽均能上调BV-2的CI、PI及表达MCP-1、TGF-β1水平,并引起这些参数有规律的变化,两者在蛋白水平同步诱导BV-2上述参数有明显的拮抗作用。

丁苯酞通过诱导自噬调控BV-2小胶质细胞炎症反应

目的研究丁苯酞(NBP)对β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)诱导的BV-2小胶质细胞炎症反应的影响及可能机制。方法培养BV-2小胶质细胞,Aβ25-35诱导构建阿尔茨海默病(AD)炎症反应细胞模型,将其分为空白对照组(Control组)、模型组(Model组)、丁苯酞组(NBP)和丁苯酞联合6-氨基-3-甲基嘌呤(3-MA)组(3-MA组)。采用CCK-8法检测NBP和Aβ25-35对BV-2小胶质细胞活力的影响,Western blotting检测各组细胞自噬蛋白LC3B-Ⅱ和p62的表达情况,实时PCR检测自噬基因ATG5、Beclin1和炎症指标白细胞介素(IL)-1β、IL-6 mRNA的表达水平,ELISA检测细胞上清液中IL-1β的分泌量。结果Aβ25-35浓度≥20μmol/L时对细胞生存率具有显著损伤作用,NBP浓度≤40μmol/L时细胞活力与未处理细胞基本无差异。Model组IL-1β、IL-6 mRNA表达量较Control组明显上调,细胞上清液中IL-1β的分泌量增加(P<0.05)。与Model组相比,NBP组IL-1β、IL-6 mRNA表达量显著降低,ATG5、Beclin1 mRNA和LC3B-Ⅱ蛋白表达上调,p62蛋白明显减少,细胞上清液中IL-1β含量降低(P<0.05)。与NBP组相比,3-MA组IL-1β、IL-6 mRNA表达增加,ATG5、Beclin1 mRNA和LC3B-Ⅱ蛋白表达降低,p62蛋白和细胞上清液中IL-1β的分泌量增加(P<0.05)。结论NBP可能通过诱导自噬减轻Aβ25-35构建的BV-2小胶质细胞炎症反应。

雷公藤内酯对海人酸活化的BV-2小胶质细胞NF-κB表达的影响

目的:观察雷公藤内酯对海人酸活化的小胶质细胞活化增殖的影响,进一步探索雷公藤内酯抑制海人酸活化的小胶质细胞活化增殖的分子机制。方法:倒置显微镜观察BV-2小胶质细胞的活化增殖,免疫组化方法检测BV-2小胶质细胞的NF-κB蛋白表达水平,RT-PCR检测BV-2小胶质细胞的NF-κB mRNA表达水平。结果:倒置显微镜结果显示,与对照组相比,海人酸组BV-2小胶质细胞胞体变大变圆,突起变短或消失。与海人酸组相比,雷公藤内酯干预组BV-2小胶质细胞胞体变小变瘦,突起变细长,与对照组相似。免疫组化结果显示,与对照组相比,海人酸组BV-2小胶质细胞NF-κB蛋白表达显著增加(P<0.05)。与海人酸组相比,雷公藤内酯干预组BV-2小胶质细胞NF-κB蛋白表达显著降低(P<0.05)。RT-PCR结果显示,与对照组相比,海人酸组BV-2小胶质细胞NF-κB mRNA表达水平显著增加(P<0.05)。与海人酸组相比,雷公藤内酯干预组BV-2小胶质细胞NF-κB mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。结论:雷公藤内酯提取物可抑制小胶质细胞活化增殖,其分子机制可能与下调小胶质细胞NF-κB蛋白和mRNA表达有关。

EP2受体拮抗剂AH6809对BV-2小胶质细胞凋亡的影响

目的:观察不同浓度前列腺素E_2受体2(EP2)抑制剂AH6809对BV-2细胞的致凋亡作用,探索AH6809使用浓度与BV-2细胞凋亡的关系。方法:将不同浓度(10、20、30、40、80、160μmol/L)的AH6809依次加入BV-2细胞培养液中,运用倒置显微镜、免疫荧光双标、TUNEL检测、流式细胞术和Western Blot技术,对AH6809干预后的BV-2细胞的形态和凋亡情况进行观察。结果:AH6809在40μmol/L以上时,观察到BV-2细胞开始出现凋亡迹象,并且随着AH6809浓度的递增,发生凋亡的BV-2细胞呈现出逐渐增多的趋势,表现出浓度依赖性特征,差异具有统计学意义(P <0. 05)。结论:AH6809对BV-2细胞有致凋亡作用,使用时需要考虑浓度对细胞凋亡的影响。

雷公藤内酯对海人酸活化的BV-2小胶质细胞Ras和Raf表达的影响

目的:观察雷公藤内酯对海人活化的BV-2小胶质细胞Ras、Raf蛋白及mRNA表达的影响,揭示雷公藤内酯抑制海人酸活化的BV-2小胶质细胞增殖的分子机制。方法:免疫组化法检测BV-2小胶质细胞Ras和Raf蛋白表达,RT-PCR法检测BV-2小胶质细胞Ras和Raf mRNA表达。结果:免疫组化结果显示,海人酸组BV-2小胶质细胞Ras和Raf蛋白表达与对照组相比显著增加(P<0.05),雷公藤内酯组BV-2小胶质细胞Ras和Raf蛋白表达与海人酸组相比显著降低(P<0.05)。RT-PCR结果显示,海人酸组BV-2小胶质细胞Ras和Raf mRNA表达水平与对照组相比显著增加(P<0.05),雷公藤内酯组BV-2小胶质细胞Ras和Raf mRNA表达水平与海人酸组相比显著降低(P<0.05)。结论:雷公藤内酯可能通过下调BV-2小胶质细胞Ras、Raf蛋白及mRNA表达抑制海人酸活化的BV-2小胶质细胞增殖。

竹节参总皂苷对BV-2小胶质细胞神经炎症模型p38 MAPK/NF-κB通路的影响

目的 探讨竹节参总皂苷对BV-2小胶质细胞炎症模型p38 MAPK/NF-κB通路的影响。方法 采用大孔树脂提取竹节参总皂苷,并进行鉴定、含量检测。体外培养BV-2小胶质细胞,分为正常对照组、模型组、竹节参皂苷组(10、100μg·mL^(-1)竹节参皂苷)、抑制剂组(10μmol·mL^(-1)SB203580)、竹节参皂苷联合抑制剂组(100μg·mL^(-1)竹节参皂苷+10μmol·mL^(-1)SB203580),1μg·mL^(-1)LPS(脂多糖)干预BV-2小胶质细胞24 h,诱导炎症反应。CCK-8法检测细胞活性,免疫荧光、Western Blot法检测p38 MAPK/NF-κB通路蛋白表达,实时荧光定量PCR法检测IL-1β、IL-6 mRNA表达,划痕实验观察细胞迁徙。结果 与0μg·mL^(-1)竹节参皂苷比较,低浓度范围(0.1~100μg·mL^(-1))内,竹节参皂苷对BV-2细胞活性无明显影响(P>0.05)。与正常对照组比较,模型组BV2小胶质细胞p-p38 MAPK、p-NF-κB p65、IL-1β蛋白表达明显上升(P<0.05,P<0.01),IL-1β、IL-6 mRNA表达明显上升(P<0.01),细胞在划痕区域所占面积上升(P<0.01);与模型组比较,10、100μg·mL^(-1)竹节参皂苷均可抑制p-p38 MAPK、IL-1β蛋白表达(P<0.05),100μg·mL^(-1)竹节参皂苷可抑制p-NF-κB p65蛋白表达(P<0.01),10、100μg·mL^(-1)竹节参皂苷均可抑制IL-1β、IL-6 mRNA表达(P<0.05,P<0.01),并降低划痕区域迁徙细胞所占面积(P<0.01)。与模型组比较,抑制剂组p-NF-κB p65、IL-1β表达下降(P<0.01);与竹节参皂苷组(100μg·mL^(-1))比较,竹节参皂苷联合抑制剂组(100μg·mL^(-1)竹节参皂苷+10μmol·mL^(-1)SB203580)p-NF-κB p65表达下降(P<0.01),而IL-1β表达无明显变化(P>0.05)。结论 竹节参总皂苷干预活化的小胶质细胞,可通过抑制p38 MAPK/NF-κB通路,改善神经炎症,并抑制细胞迁徙。

胰岛素样生长因子1(IGF-1)通过激活PI3K/AKT信号通路增强小鼠BV-2小胶质细胞的吞噬功能

目的探讨胰岛素样生长因子1(IGF-1)对小鼠小胶质细胞吞噬功能的影响。方法脂多糖(LPS)腹腔注射建立小鼠急性中枢神经系统炎症模型,Western blot法检测脑组织中IGF-1和IGF-1受体(IGF-1R)的蛋白表达。使用LPS刺激BV-2小胶质细胞后,Western blot法检测IGF-1R的蛋白表达。体外培养BV-2细胞,在培养基中加入或未加入磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号阻断剂渥曼青霉素(wortmannin)的情况下,再加入IGF-1刺激24 h,加入荧光微球共同孵育2 h,流式细胞术检测BV-2细胞吞噬荧光微球的情况。IGF-1刺激BV-2细胞后,Western blot法检测细胞中AKT和磷酸化的AKT(p-AKT)蛋白表达。结果腹腔注射LPS后,小鼠脑组织中IGF-1和IGF-1R的表达均显著升高,同时LPS刺激也上调BV-2细胞IGF-1R的表达。随着IGF-1浓度的增加,BV-2细胞吞噬荧光微球的能力先逐渐增强后开始下降,在50 ng/mL的IGF-1刺激下BV-2细胞吞噬荧光微球的能力达到峰值。IGF-1刺激BV-2细胞后,细胞的AKT磷酸化水平逐渐上升。使用wortmannin阻断PI3K/AKT信号后,IGF-1促进BV-2细胞吞噬荧光微球的能力显著下降。结论IGF-1通过激活PI3K/AKT信号途径促进BV-2细胞的吞噬作用。

青蒿琥酯对脂多糖诱导的BV-2小胶质细胞激活的抑制作用

目的 观察青蒿琥酯对脂多糖（LPS）诱导的BV-2小胶质细胞炎症反应的抑制作用.方法 LPS诱导BV-2小胶质细胞活化建立炎症模型,观察青蒿琥酯（0.5、1.5、3.5 μmol/L）对细胞的作用.MTT检测细胞活性;Griess试剂法检测一氧化氮（NO）的释放;Western Blot检测核转录因子κB（NF-κB）的蛋白表达.结果 青蒿琥酯减少了活化的BV-2小胶质细胞NO的释放,降低了核内NF-κB的蛋白表达.结论 青蒿琥酯可能通过抑制LPS诱导的BV-2小胶质细胞NF-κB的激活从而抑制NO的产生,发挥抗炎作用。

醛酮还原酶1成员B1(AKR1B1)激活NF-κB通路诱导小鼠BV-2小胶质细胞活化抑制视网膜神经节细胞活性

目的探讨醛酮还原酶1成员B1(AKR1B1)在调控小胶质细胞极化中的机制及其对视网膜神经节细胞(RGC)活性的影响。方法利用脂多糖(LPS)诱导BV-2小胶质细胞极化,分别利用AKR1B1小干涉RNA(siRNA)和抑制剂泊那司他(ponalrestat/Statil)作用BV-2细胞;实时定量PCR检测BV-2小胶质细胞AKR1B1、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、环加氧酶2(COX2)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的mRNA表达,ELISA检测BV-2小胶质细胞培养上清液TNF-α、IL-1β含量。采用BV-2条件培养基处理原代RGC,免疫荧光细胞化学染色检测RGC脑特异性同源盒蛋白3a(Brn-3a)的表达以确定RGC活性,TUNEL染色检测RGC凋亡;Western blot法检测RGC核因子κBp65(NF-κBp65)、核因子κB抑制物激酶(IKK)蛋白磷酸化情况。结果LPS诱导BV-2细胞中TNF-α、IL-1β、COX2和iNOS的mRNA表达增加,培养液上清中TNF-α、IL-1β含量增加。BV-2细胞条件培养基导致RGC活力降低、凋亡增加;敲低AKR1B1后,可阻断BV-2细胞M1型极化,恢复RGC活力;敲低AKR1B1可阻断LPS诱导的IKK磷酸化和NF-κBp65的入核。结论AKR1B1可通过激活NF-κB通路诱导小胶质细胞的活化,进而降低RGC的活力并促进其凋亡。

白花丹素减少LPS激活的BV-2小胶质细胞中促炎细胞因子的表达

活化的小胶质细胞可产生一氧化氮（nitric oxide,NO）和细胞因子等促炎介质。这些介质的过度释放会导致神经退行性疾病,如阿尔茨海默病和帕金森病。抑制这些促炎分子的释放可以预防或阻止这些疾病的进展。来自传统药用植物白花丹（Plaumbago zeylanica L.）根部的一种萘醌化合物——白花丹素（plumbagin,PL）对巨噬细胞具有抗炎作用。然而,目前尚不清楚PL对活化的小胶质细胞有何作用。

灯盏乙素通过STAT3信号对激活的BV-2小胶质细胞M2型极化的影响

目的探究灯盏乙素(Scutellarin)对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)作用下M2型小胶质细胞极化的作用及信号转导和转录激活因子3(signal transducers and activators of transcription 3,STAT3)的调控机制。方法BV-2小胶质细胞分为对照组(Con组)、STAT3抑制剂α-氰基-(3,4-二羟基)-N-苄基霉素-烟酰胺组(AG490组)、LPS组、LPS+AG490组、LPS+灯盏乙素预处理组(LPS+S组)、LPS+S+AG490组,共6组。Western blot和免疫荧光染色检测STAT3、磷酸化STAT3(P-STAT3)和M2型小胶质细胞标记物白介素10(IL-10)的表达。结果Western blot结果显示,LPS组的P-STAT3、IL-10表达显著增强,与对照组差异显著(P<0.05);使用灯盏乙素干预后P-STAT3表达明显降低;IL-10表达显著增高;均与LPS组有显著差异(P<0.05)。AG490增强灯盏乙素的作用。此外,STAT3在各组的变化无统计学意义(P>0.05)。免疫荧光染色结果显示,灯盏乙素干预后可降低LPS激活的BV-2小胶质细胞P-STAT3的蛋白表达水平;增强IL-10蛋白表达。各组STAT3的蛋白水平无统计学意义。结论灯盏乙素通过抑制STAT3活化促进BV-2小胶质细胞向M2型极化,可能与灯盏乙素减轻神经炎症反应有关。

青蒿琥酯对缺氧诱导的BV-2小胶质细胞激活的抑制作用及其可能机制

目的观察青蒿琥酯对缺氧诱导的BV-2小胶质细胞激活的抑制作用。方法缺氧诱导BV-2小胶质细胞活化建立炎症模型,CCK8检测缺氧不同时间的细胞活性,Western blot检测缺氧不同时间组小胶质细胞的IL-1β释放量,筛选最佳缺氧时间,观察青蒿琥酯(0.5、1.5、3.5mmoL/L)对细胞的保护作用,ELISA方法检测IL-1β的蛋白表达,Western blot分别检测HIF-1α、TNF-α蛋白浓度。结果青蒿琥酯降低活化的BV-2小胶质细胞HIF-1α的蛋白表达,降低了IL-1β、TNF-α的蛋白表达。结论青蒿琥酯可能通过抑制缺氧诱导的BV-2小胶质细胞HIF-1α的蛋白表达,降低了IL-1β、TNF-α的蛋白表达,发挥抗炎作用。

阿曼托双黄酮抑制脂多糖诱导的小鼠BV-2小胶质细胞炎症反应

目的探讨阿曼托双黄酮(AF)对脂多糖(LPS)诱导的BV-2小胶质细胞的炎性因子的阻断效应。方法首先通过CCK-8法筛选出对BV-2细胞活性无影响的AF浓度;在此基础上,采用10mol/L AF预处理BV-2小胶质细胞1 h,加入1.0g/mL LPS诱导细胞炎症反应,通过实时荧光定量PCR检测炎性因子白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及环加氧酶2(COX2)的mRNA水平,Western blot法检测iNOS及COX2的蛋白水平,免疫荧光细胞化学染色法检测COX2、 iNOS的表达和定位。结果 CCK-8法证明10μmol/L AF对BV-2小胶质细胞活性无明显影响。LPS单独处理可增加BV-2小胶质细胞IL-1β、 TNF-α、 COX2、 iNOS的mRNA表达及COX2、 iNOS蛋白表达;与LPS组相比,10μmol/L AF预给药组能够明显降低IL-1β、 TNF-α、 COX2、 iNOS的mRNA水平及COX2和iNOS的蛋白水平,同时AF可明显抑制COX2及iNOS的表达,抑制BV-2小胶质细胞的激活状态。结论 AF对LPS诱导的BV-2小胶质细胞炎症反应具有保护作用。

青藤碱调控NLRP3/caspase-1通路抑制BV-2小胶质细胞焦亡及炎症的机制研究

目的探究青藤碱调控核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(caspase-1)通路抑制BV-2小胶质细胞焦亡及炎症的机制。方法以氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)模型诱导BV-2细胞焦亡模型,采用CCK-8法检测不同浓度(0、10、20、50、100μmol/L)的青藤碱干预BV-2小胶质细胞24h后的细胞活性,筛选药物浓度。将BV-2细胞分为正常组、OGD/R组和OGD/R+青藤碱组(20μmol/L)进行研究。使用微量酶标法测BV-2小胶质细胞乳酸脱氢酶(LDH)活性。采用赫斯特(Hoechst)/碘化丙啶(PI)细胞染色法检测BV-2细胞中PI阳性细胞数。采用RT-PCR和Western blot方法检测青藤碱对BV-2小胶质细胞硫氧还蛋白结合蛋白(TXNIP)、NLRP3、caspase-1、白细胞介素(IL)-1β和IL-18的mRNA和蛋白表达水平的影响。结果10、20μmol/L青藤碱干预24h后,OGD/R诱导的BV-2小胶质细胞活性较对照组无显著差异[(97.69±0.51)%、(96.03±1.13)%比(100.00±0.00)%,P均>0.05)],50、100μmol/L青藤碱干预24h后,OGD诱导的BV-2小胶质细胞活性较对照组显著降低[(78.92±3.02)%、(64.12±4.55)%比(100.00±0.00)%,P均<0.05]。与正常组比较,OGD/R组BV-2小胶质细胞LDH相对释放量明显上升[(2.23±0.19)比(1.00±0.00),P<0.05],PI活性细胞比例明显升高[(46.28±4.02)%比(3.52±0.31)%,P<0.05],TXNIP、NLRP3、caspase-1、IL-1β和IL-18 mRNA[TXNIP:(1.58±0.20)比(0.69±0.08),P<0.05;NLRP3:(2.32±0.18)比(0.88±0.09),P<0.05;caspase-1:(1.61±0.11)比(0.77±0.15),P<0.05;IL-1β:(3.17±0.43)比(1.03±0.09),P<0.05;IL-18:(1.82±0.22)比(0.81±0.13),P<0.05]和蛋白表达水平明显上调[TXNIP:(1.26±0.13)比(0.72±0.09),P<0.05;NLRP3:(0.43±0.04)比(0.16±0.04),P<0.05;caspase-1:(1.30±0.09)比(0.58±0.07),P<0.05;IL-1β:(1.21±0.11)比(0.39±0.06),P<0.05;IL-18:(0.54±0.07)比(0.23±0.06),P<0.05]。与OGD/R组比较,OGD/R+青藤碱组BV-2细胞LDH相对释放量明显下降[(1.28±0.09)比(2.23±0.19),P<0.05],PI活性细胞比例显著减少[(23.08±3.46)%比(46.28±4.02)%,P<0.05],TXNIP、NLRP3、caspase-1和IL-1βmRNA[TXNIP:(0.95±0.11)比(1.58±0.20),P<0.05;NLRP3:(1.26±0.12)比(2.32±0.18),P<0.05;caspase-1:(0.95±0.05)比(1.61±0.11),P<0.05;IL-1β:(1.55±0.18)比(3.17±0.43),P<0.05]和蛋白表达水平显著下降[TXNIP:(0.78±0.04)比(1.26±0.13),P<0.05;NLRP3:(0.26±0.03)比(0.43±0.04),P<0.05;caspase-1:(0.71±0.05)比(1.30±0.09),P<0.05;IL-1β:(0.54±0.03)比(1.21±0.11),P<0.05],IL-18蛋白水平下降[(0.34±0.08)比(0.54±0.07),P<0.05]。结论青藤碱可能通过下调NLRP3/caspase-1通路磷酸化水平,抑制BV-2小胶质细胞焦亡及炎症反应。