基于Caspase-3/Bcl-2/Bax信号通路探究加味旋覆代赭汤治疗食管癌前病变的作用机制

目的:探究加味旋覆代赭汤对食管癌前病变大鼠Caspase-3/Bcl-2/Bax信号通路的调控作用机制。方法:将48只雄性SD大鼠随机分为4组,空白组、模型组、中药组、西药组,每组各12只。除空白组外均采用复合造模法制作食管癌前病变大鼠模型,造模成功后,分别进行药物灌胃干预,空白组、模型组用生理盐水灌胃,中药组和西药组分别给予加味旋覆代赭汤、西药(雷贝拉唑+莫沙必利)灌胃,给药8周取材。利用光学显微镜观察食管上皮组织的形态学变化;分别应用蛋白质印迹法(Western-blot)及聚合酶链式反应(PCR)检测食管上皮组织Caspase-3、Bcl-2及Bax的表达水平。结果:与空白组比较,模型组大鼠食管上皮病理积分升高(P<0.01);与模型组比较,中药组、西药组大鼠食管上皮病理积分均降低(P<0.01)。PCR及Western-blot检测结果显示,与空白组比较,模型组大鼠Caspase-3、Bax mRNA、蛋白表达均降低(P<0.01);与模型组比较,中药、西药组大鼠Caspase-3、Bax mRNA、蛋白表达均增高(P<0.05)。与空白组比较,模型组大鼠食管组织中Bcl-2 m RNA及蛋白表达水平均升高(P<0.05);与模型组比较,中药组和西药组Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平均降低(P<0.05)。结论:加味旋覆代赭汤可能通过下调Bcl-2/Bax比值,增加线粒体外膜通透性,释放凋亡因子,激活Caspase-3,使病变组织发生凋亡,扭转食管上皮异型增生,从而起到治疗食管癌前病变的作用。

桂枝加龙骨牡蛎汤对魄不安于肺不寐大鼠脑组织Caspase-3、Bcl-2、Bax水平的影响

目的:探讨桂枝加龙骨牡蛎汤对魄不安于肺不寐大鼠脑组织Caspase-3、Bcl-2、Bax表达的影响及其治疗魄不安于肺不寐可能的作用机制。方法:32只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、中药组和西药组,每组8只。采用水环境小平台法干预9 d建立魄不安于肺不寐大鼠模型,造模成功后,中药组予以桂枝加龙骨牡蛎汤7.6 g·kg-1·d-1灌胃,西药组予以右佐匹克隆片0.1 mg·kg-1·d-1灌胃,对照组和模型组给予等体积生理盐水灌胃,连续14 d,测量体质量。采用免疫组织化学法及蛋白质免疫印迹法检测脑组织中Caspase-3、Bcl-2、Bax表达水平。结果:与对照组比较,模型组大鼠体质量减轻(P<0.01),免疫组化检测结果显示,大鼠脑组织Bcl-2的表达显著减少(P<0.01),Caspase-3、Bax表达显著增加(P<0.01),Bcl-2/Bax比率显著减少(P<0.01);Western blot结果显示大鼠脑组织Bcl-2相对表达量显著减少(P<0.01),Bax、Caspase-3相对表达量显著增加(P<0.01)。与模型组比较,中药组及西药组大鼠体质量显著增加(P<0.01),免疫组化检测结果显示,大鼠脑组织Bcl-2表达增加(P<0.05),Caspase-3、Bax表达减少(P<0.05),Bcl-2/Bax比率显著升高(P<0.01);Western blot结果显示大鼠脑组织中Bcl-2相对表达量增加(P<0.05),Bax、Caspase-3相对表达量显著减少(P<0.01)。结论:桂枝加龙骨牡蛎汤改善魄不安于肺不寐大鼠的睡眠可能与增加其脑组织Bcl-2、降低Caspase-3、Bax表达水平有关。

基于网络药理学和动物实验探讨黄连解毒汤通过Bcl-2/Bax/Caspase-3信号通路抗结直肠腺瘤作用机制

目的:研究黄连解毒汤通过调控Bcl-2/Bax/Caspase-3信号通路发挥抗结直肠腺瘤(CRA)的作用机制。方法:通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)获取黄连解毒汤的活性成分及作用靶点;通过在线人类孟德尔遗传病数据库(OMIM)和人类基因组数据库(GeneCard)获取CRA疾病靶点;通过Venny 2.1软件获得黄连解毒汤与CRA的交集靶点;通过String数据库和Cytoscape 3.9.1软件绘制蛋白互作网络,并筛选黄连解毒汤治疗CRA的核心作用靶点;通过DAVID数据库对交集靶点进行基因本体(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析;通过Auto Dock Tools 1.5.6软件将前5位药物活性成分与前5位关键靶点进行分子对接验证。采用随机数字表法将60只小鼠分为正常组、模型组、黄连解毒汤低剂量组、黄连解毒汤中剂量组、黄连解毒汤高剂量组、阿司匹林组,每组10只。采用氧化偶氮甲烷(AOM)/葡聚糖硫酸钠(DSS)联合诱导小鼠CRA模型,同时各组予相应药物进行灌胃干预9周。苏木精-伊红染色法(HE)观察小鼠肠组织的病理变化;原位末端转移酶标记法(TUNEL)观察肠组织细胞凋亡;实时荧光定量聚合酶链式反应(Realtime PCR)检测腺瘤组织B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)mRNA、Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA、细胞色素C(Cyt C)mRNA、胱天蛋白酶-9(Caspase-9)mRNA、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blotting)法检测腺瘤组织Bcl-2、Bax、Cyt C、Caspase-9、Caspase-3蛋白的表达水平。结果:网络药理学共筛选得到黄连解毒汤80个活性成分,药物-疾病交集靶点170个;通过药物-成分-靶点-疾病调控网络的构建,筛选出槲皮素(quercetin)、β-谷甾醇(beta-sitosterol)、豆甾醇(Stigmasterol)、黄连素(berberine)、汉黄芩素(wogonin)等核心活性成分;通过构建蛋白互作网络,筛选出AKT1、JUN、HSP90AA1、CASP3、IL-6等关键靶点;GO与KEGG富集分析发现黄连解毒汤可能通过调控细胞凋亡途径发挥治疗CRA的作用;槲皮素、β-谷甾醇、豆甾醇、黄连素、汉黄芩素与核心靶点AKT1、JUN、HSP90AA1、CASP3、IL-6具有较为稳定的结合活性,展现了良好的亲和力。动物实验结果显示,模型组小鼠肠道质量、腺瘤数量高于正常组(P<0.01),结直肠长度低于正常组(P<0.01);黄连解毒汤高、中、低剂量组小鼠肠道质量、腺瘤数量均低于模型组(P<0.01);黄连解毒汤高、中剂量组小鼠结直肠长度均高于模型组(P<0.01)。模型组小鼠腺瘤组织细胞凋亡率低于正常组(P<0.01);黄连解毒汤低、中、高剂量组小鼠腺瘤组织细胞凋亡率均高于模型组(P<0.01)。模型组小鼠腺瘤组织Bcl-2 mRNA和Bcl-2蛋白相对表达量高于正常组(P<0.01),Bax mRNA、Cyt C mRNA、Caspase-9 mRNA、Caspase-3 mRNA和Bax、Cyt C、Caspase-9、Caspase-3蛋白相对表达量低于正常组(P<0.01或P<0.05)。黄连解毒汤高、中剂量组小鼠腺瘤组织Bcl-2 mRNA及Bcl-2蛋白相对表达量均低于模型组(P<0.01),Bax mRNA、Cyt C mRNA、Caspase-9 mRNA、Caspase-3 mRNA及Bax、Cyt C、Caspase-9、Caspase-3蛋白相对表达量均高于模型组(P<0.05或P<0.01);黄连解毒汤低剂量组小鼠Caspase-9 mRNA及Bax、Cyt C、Caspase-3蛋白相对表达量高于模型组(P<0.05或P<0.01)。结论:黄连解毒汤可能通过调控Bcl-2/Bax/Caspase-3信号通路发挥治疗CRA的效应。

长春胺衍生物Vin24通过Bcl-2/Bax/Caspase3通路改善糖尿病小鼠周围神经病变研究

目的探讨长春胺衍生物Vin24对糖尿病周围神经病变(DPN)小鼠病理症状的保护作用及其作用机制。方法40只8周龄雄性C57BL/6N小鼠随机分为对照组、模型组、长春胺给药组和Vin24给药组。除对照组外,其余3组小鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ,150 mg·kg^(-1))诱导1型糖尿病模型,6周后开始给药。30只18周龄雄性db/db小鼠随机分为模型组、长春胺给药组和Vin24给药组,10只同窝阴性小鼠作为对照组。给药组每天灌胃长春胺(30 mg·kg^(-1))或Vin24(46.8 mg·kg^(-1)),对照组和模型组每天灌胃等体积的生理盐水,持续4周。通过检测机械异位痛觉和热痛觉阈值来评价小鼠感觉功能。利用激光散斑成像仪检测小鼠外周血流量。取足垫表皮组织进行PGP9.5免疫荧光染色评价表皮内神经纤维(IENF)密度;提取原代背根底神经节(DRG)神经元进行β-tubulinⅢ免疫荧光染色评价DRG神经元突起生长情况。此外,取DRG组织进行ATF3免疫荧光染色以及Western blot检测Bcl-2、Bax、Cleaved-Caspase3和Caspase3的蛋白水平来评价DRG神经元凋亡水平。结果与模型组相比,Vin24给药组小鼠的机械异位痛和热痛觉阈值降低(P<0.01,P<0.001),外周血流量增加(P<0.001);IENF密度增加(P<0.05,P<0.01),DRG神经元突起生长得到改善(P<0.001)。荧光染色结果显示,Vin24给药后小鼠DRG组织中神经元凋亡标记物ATF3的表达减少(P<0.01,P<0.001)。Western blot结果显示,抗凋亡蛋白Bcl-2的蛋白水平显著增加(P<0.05),促凋亡蛋白Bax和Cleaved-Caspase3的蛋白水平显著降低(P<0.05)。结论长春胺衍生物Vin24通过调控Bcl-2/Bax/Caspase3通路,抑制Cleaved-Caspase3的激活,降低神经元的凋亡水平,从而减轻DRG神经元损伤,改善糖尿病小鼠周围神经病变。

澳洲茄碱通过调控Bcl-2/Bax/caspase-3信号通路促进非小细胞肺癌发生凋亡

目的 探讨龙葵活性成分澳洲茄碱对非小细胞肺癌细胞PC9增殖、凋亡的影响。方法 体外培养PC9细胞,设对照组(0μmol/L)及澳洲茄碱不同剂量组(0、2、5、10、15、20、25μmol/L),CCK-8试剂盒检测澳洲茄碱对PC9细胞的增殖抑制作用;TMRE检测线粒膜电位;caspase3/7活性试剂盒联合GreenNuc?Caspase-3/Annexin V-mCherry染色检测caspase-3活性;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;给药处理或者使用PTEN抑制剂后,Western blot检测细胞中相关蛋白的表达量。结果 与对照组相比,经澳洲茄碱干预24、48、72 h后,PC9细胞的活力均明显降低(P<0.05);经澳洲茄碱干预24 h后,细胞线粒体膜电位明显降低,而细胞凋亡比例明显升高(P<0.05);caspase-3/7活力、活细胞Caspase-3活性及cleaved caspase-3蛋白表达均显著升高(P<0.01);PI3K和Akt磷酸化水平降低(P<0.05);而PTEN、Bax蛋白表达上调(P<0.05);抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白的表达下调(P<0.05)。结论 澳洲茄碱可通过调控Bcl-2/Bax/caspase-3通路及其上游蛋白活性而抑制PC9细胞增殖,促进其凋亡。

芹菜素对大鼠缺血/再灌注心肌细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3表达的影响

目的探讨黄酮类化合物芹菜素对大鼠实验性心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)时心肌细胞凋亡与Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达的影响,并分析心肌组织病理学损伤程度。方法采用结扎左冠状动脉前降支,心肌缺血45 min,再灌注2 h制作缺血/再灌注模型。将大鼠随机分为8组,即正常组(normal group,Normal)、假手术组(sham oper-ation group,Sham)、生理盐水缺血/再灌注组(saline ischemi-a-reperfusion group,NS)、溶剂对照组(solvent control group,Sol)、美托洛尔对照组(metoprolol control group,Meto)、芹菜素低、中、高剂量(1、2、4 mg.kg-1)用药组(apigenin low,medium and high dose treatment group,Api1,Api2,Api4)。再灌注2 h后迅速取出心脏,TUNEL法原位标记凋亡的心肌细胞;免疫组化法测Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达;做病理组织切片检查心肌损伤情况。结果芹菜素各剂量组心肌细胞凋亡率明显低于NS组(P<0.05),Api1,Api2,Api4能剂量依赖性地降低大鼠缺血/再灌注心肌细胞凋亡率;芹菜素各剂量组剂量依赖性地提高大鼠心肌缺血/再灌注的Bcl-2蛋白表达量(P<0.05)、降低大鼠心肌缺血/再灌注的Bax、Caspase-3蛋白表达量(P<0.05);芹菜素各剂量组与NS组比较,心肌组织损伤的病理学变化明显减轻(P<0.05)。结论芹菜素对缺血/再灌注心肌的保护效应可能与其抑制缺血/再灌注心肌细胞凋亡有关;芹菜素抗心肌凋亡作用的机制可能与其上调Bcl-2蛋白表达和下调Bax、Caspase-3蛋白表达有关;芹菜素能明显减轻心肌组织损伤。

轻中度亚低温对大鼠心肺复苏后脑细胞caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的研究不同程度亚低温对大鼠心肺复苏(CPR)后脑组织凋亡的影响。方法利用窒息法制作心肺复苏模型,SD大鼠15只,随机分为对照组(正常体温)、34℃低温组、32℃低温组,每组各5只。对照组在CPR后置于室温25℃下常规治疗;34℃低温组(34+/-0.2℃)和32℃低温组(32+/-0.2℃)在CPR 0.5 h后分别给予亚低温治疗。各组大鼠均于CPR后12 h取脑组织,免疫组化法测定大脑皮层caspase-3蛋白表达,Western blotting测定Bcl-2、Bax表达,同时观察各组脑组织病理变化。结果与常温组相比,低温组神经元caspase-3表达均明显减弱(P<0.05),其中32℃低温组caspase-3表达减弱更加明显(P<0.05);低温组Bcl-2表达明显增强(P<0.05),32℃低温组的Bcl-2蛋白表达比34℃低温组表达更强;3组大鼠神经元凋亡蛋白bax的表达无明显差异。结论亚低温可能通过降低caspase-3蛋白的表达、增强Bcl-2的表达,从而抑制脑细胞凋亡减轻脑损伤,32℃亚低温治疗比34℃更能起到脑保护的作用。

芪黄煎剂对缺血-再灌注大鼠肠黏膜上皮细胞Bcl-2、Bax及Caspase-3、9 mRNA表达的影响

目的观察中药芪黄煎剂对缺血-再灌注(ischemia-reperfusion,I/R)损伤大鼠肠黏膜上皮细胞凋亡基因Bcl-2、Bax mRNA表达和信号转导分子Caspase-3、9 mRNA表达的影响。方法 40只Wistar大鼠随机分为假手术组、I/R损伤组、谷氨酰胺(Gln)组和芪黄煎剂组,每组10只。假手术组管饲生理盐水3天后,仅腹壁切开而不行I/R手术;I/R损伤组与假手术组同样方法干预后,行I/R损伤手术;Gln组和QHD组分别管饲Gln和芪黄煎剂3天后,行I/R损伤手术。RT-PCR方法检测肠上皮细胞凋亡基因Bcl-2、Bax mRNA表达和凋亡信号转导分子Caspase-3、9 mRNA表达。结果与假手术组比较,I/R损伤组大鼠肠黏膜细胞内Bcl-2、Bax、Caspase-3、9 mRNA均明显增多,差异有统计学意义(P<0.05)。与I/R损伤组比较,Gln组、芪黄煎剂组Bcl-2 mRNA表达增多,Bax、Caspase-3、9 mRNA表达减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。与Gln组比较,芪黄煎剂组Bax mRNA表达更低(0.281±0.087vs0.350±0.053),Bcl-2/Bax值更高(1.648vs1.374),差异无统计学意义(P>0.05)。结论芪黄煎剂通过抑制细胞凋亡减轻I/R对大鼠肠黏膜上皮造成的损伤,其作用机制可能与增加Bcl-2 mRNA表达和降低Bax、Caspase-3、9 mRNA表达有关。

枸杞多糖对双酚A暴露小鼠生精细胞Caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

研究枸杞多糖(LBP)对双酚A(BPA)暴露小鼠睾丸生精细胞中Caspase-3、Bcl-2和Bax凋亡蛋白表达的影响。将50只成年雄性昆明小鼠随机分为A、B、C、D、E共5组,每组10只。除正常对照组(A组)注射等量橄榄油外,其余4组小鼠分别腹腔注射20mg.kg-1的BPA,连续7d,建立生精损伤模型。同时C、D、E组小鼠分别灌服7d不同剂量的LBP(50、100、200mg.kg-1),正常对照组(A组)和模型组(B组)小鼠灌服等量生理盐水。制备组织切片观察睾丸组织病理学变化,免疫组化法测定睾丸组织Caspase-3、Bax和Bcl-2凋亡蛋白的表达。结果显示,BPA可极显著增加睾丸生精细胞Caspase-3和Bax的阳性细胞数量(P<0.01),降低Bcl-2的表达(P<0.05)。补充不同剂量LBP后,Caspase-3的阳性表达均极显著低于模型组(P<0.01)。200mg.kg-1 LBP组生精细胞Bax的阳性细胞数量极显著低于模型组(P<0.01);Bcl-2的表达随LBP剂量的增加而提高,其中200mg.kg-1 LBP组阳性表达极显著高于模型组(P<0.01),Bcl-2/Bax比值也随着LBP剂量的增加而上升。结果表明,枸杞多糖通过调节凋亡相关基因的表达,抑制生精细胞凋亡,从而缓解双酚A引起的雄性生殖损伤。

枸杞多糖对糖尿病大鼠视网膜caspase-3、Bcl-2和Bax表达的影响

目的 探讨枸杞多糖对糖尿病大鼠视网膜病变的保护作用及作用机制。方法 采用链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病大鼠动物模型。将60只大鼠随机分为对照组、模型组、枸杞多糖低、中、高浓度组。枸杞多糖低、中、高浓度组分别灌胃给予枸杞多糖50、100、200mg/kg,干预12w后观察大鼠视网膜病理学变化情况,采用TUNEL法检测大鼠视网膜神经细胞凋亡情况。采用RT-PCR检测视网膜caspase-3、Bcl-2、BaxmRNA,采用Western印迹法检测视网膜caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达水平。结果 与对照组比较,模型组视网膜细胞出现水肿,排列稀疏紊乱,膜盘间隙出现空泡样,视网膜细胞凋亡指数明显升高(P<0.05),视网膜caspase-3和BaxmRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),视网膜Bcl-2mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。与模型组比较,枸杞多糖低、中、高浓度组视网膜细胞水肿减轻,细胞层次清晰,排列整齐,视网膜细胞凋亡指数明显下降(P<0.05),视网膜caspase-3和BaxmRNA和蛋白表达水平均明显下降(P<0.05),视网膜Bcl-2mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论 枸杞多糖可通过升高视网膜Bcl-2mRNA和蛋白的表达水平,降低视网膜caspase-3和BaxmRNA和蛋白表达水平减少视网膜神经节细胞凋亡,有效防治糖尿病视网膜病变。

纳米炭吸附5-FU淋巴靶向化疗对胃癌组织及转移淋巴结bcl-2、bax及caspase-3表达的影响

目的探讨纳米炭吸附5-FU淋巴靶向化疗对胃癌组织、转移淋巴结及正常胃组织中bcl-2、bax及caspase-3表达的影响。方法将2005年10月至2006年8月在我科住院的28例胃癌患者分为淋巴靶向化疗(LNTC)组(n=14)和对照组(n=14)。LNTC组先以纳米炭吸附5-FU行淋巴靶向化疗后再行手术,对照组直接手术。术毕取胃癌组织、转移淋巴结及正常胃组织,采用免疫组化法检测其中bcl-2、bax及caspase-3表达情况。结果LNTC组中胃癌组织及转移淋巴结内bcl-2表达阳性率低于对照组(28.6%比78.6%,25.0%比70.0%),bax表达阳性率高于对照组(85.7%比28.6%,80.0%比30.0%),caspase-3表达阳性率高于对照组(57.1%比14.3%,55.0%比15.0%),2组间差异有统计学意义(P<0.05);正常胃组织中三者表达阳性率2组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论纳米炭吸附5-FU淋巴靶向化疗可使胃癌组织及转移淋巴结内bcl-2表达下降,bax和caspase-3表达增加,影响这些凋亡调节分子表达可能是其诱导肿瘤细胞凋亡的机理之一。

二苯乙烯苷对同型半胱氨酸诱导血管内皮细胞凋亡及bcl-2、bax、caspase-3表达的影响

目的:研究何首乌二苯乙烯苷(TSG)对同型半胱氨酸(Hcy)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡及bcl-2、bax和caspase-3 mRNA表达的影响。方法:建立Hcy(3 mmol/L)所致培养HUVECs核损伤模型,TSG(1和10μmol/L)提前2 h预孵育,然后再以Hcy处理,作为TSG保护组。用Hoechst 33342核染色法观察HUVECs细胞核损伤状态,以流式细胞术检测细胞凋亡情况,用实时荧光定量RT-PCR法检bcl-2、bax和caspase-3 mRNA的表达。结果:经3 mmol/L Hcy处理后,与正常培养的细胞相比,HUVECs核损伤加重,凋亡细胞比例升高,bcl-2表达降低(P<0.01),bax和caspase-3表达增加(P<0.01)。TSG 1μmol/L和10μmol/L预孵育后再经3 mmol/L Hcy处理,与单经3 mmol/L Hcy损伤模型组相比,HUVECs细胞核损伤降低,凋亡率下降,bcl-2的表达增加(P<0.05),bax和caspase-3表达降低(P<0.05)。结论:TSG具有降低Hcy所致HUVECs的细胞损伤和抑制凋亡的作用,其机制可能与影响bcl-2、bax和caspase-3的表达有关。

藤黄酸对人结直肠癌细胞凋亡及Bax、Bcl-2和Caspase-3表达的影响

目的:研究藤黄酸对结直肠癌细胞凋亡及Bax、Bcl-2和Caspase-3表达的影响。方法:藤黄酸对SW480、LOVO细胞进行干预,CCK-8法检测增殖抑制;光镜观察细胞形态变化;免疫荧光染色技术检测凋亡;Western Blot法测定Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白的表达。结果:藤黄酸抑制SW480、LOVO细胞增殖,且抑制作用随浓度及时间的增加而增强(P<0.05);藤黄酸诱导SW480、LOVO细胞发生凋亡,增强Bax、Caspase-3蛋白的表达,减弱Bcl-2蛋白的表达,提高Bax/Bcl-2比值(P<0.05)。结论:藤黄酸抑制SW480、LOVO细胞增殖并诱导凋亡,其机制可能与提高Bax/Bcl-2比值、激活Caspase-3相关。

中药筋脉通对高糖培养海马神经元细胞Bax、Bcl-2和Caspase-3蛋白表达的影响

目的探讨中药筋脉通含药血清对高糖培养海马神经元细胞的保护作用。方法采用血清药理学方法制备筋脉通含药血清(JMT),原代培养新生鼠海马神经元细胞分别接种于不同条件的培养基中,分为正常对照组、高糖组、阳性对照组以及JMT大、中、小剂量组。不同培养基中培养72 h后使用Western blotting检测其Bax、Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达。结果与正常对照组相比,高糖组Caspase-3、Bax表达明显增加(P<0.01),Bcl-2的表达下降(P<0.05);与高糖组相比,阳性对照组和JMT各剂量组的Caspase-3、Bax表达明显下降(P<0.01),Bcl-2的表达升高(P<0.05);与阳性对照组相比,JMT各剂量组的Caspase-3、Bax表达下降(P<0.05),筋脉通大、中剂量组Bcl-2的表达增加(P<0.05)。结论筋脉通含药血清可能通过提高Bcl-2蛋白的表达,减少Bax、Caspase-3的表达,上调Bcl-2/Bax的比值,从而减少海马神经元细胞的凋亡。

针刺联合亚低温对脑缺血／再灌注损伤大鼠Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达的影响

目的探讨针刺联合亚低温方法对脑缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤大鼠梗死面积比及Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达的影响。方法将50只SD健康雄性大鼠常规饲养1周后,随机选取假手术组10只,余40只用Zea Longa线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞局灶脑I/R模型,待造模成功后,再将40只SD大鼠随机分为模型组、针刺组、亚低温组、针刺联合亚低温组,每组各10只。治疗72 h后,使用TTC染色检测脑梗死面积比、免疫组化法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的阳性细胞数。结果与假手术组比较,模型组大鼠梗死面积比、Bax、Caspase-3蛋白表达水平明显增高,Bcl-2表达水平显著下降,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,各治疗组大鼠梗死面积比、Bax、Caspase-3蛋白表达水平明显降低,Bcl-2表达水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);各治疗组之间Bcl-2、Bax、Caspase-3的差异无统计学意义(P>0.05),但脑梗死面积比针刺联合亚低温组较针刺组和亚低温组低,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论针刺联合亚低温治疗可通过减少脑梗死面积比、提高Bcl-2表达水平、降低Bax与Caspase-3蛋白表达从而实现对脑细胞的保护作用。

益气养阴通络法对急性心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡Bax、Bcl-2、Caspase3表达的影响

目的:观察益气养阴通络法对大鼠心肌细胞凋亡Bax、Bcl-2和Caspase3表达的影响,并探讨其作用机制。方法:健康SD大鼠60只,随机分为6组,正常组、模型组、西药组(盐酸地尔硫卓片)、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组。对模型组、中药组、西药组实验动物进行造模,复制急性心肌缺血的模型。西药组及中药组分别给予盐酸地尔硫卓片、中药双参通脉颗粒灌胃2周。采用Western Blotting法检测各组心肌组织中Bax、Bcl-2、Caspase3的表达水平。结果:与正常组比较,模型组Bcl-2表达均显著降低,Bax、Caspase3表达升高(P<0.01或P<0.05)。与模型组比较,各组Bcl-2表达均显著升高,Bax、Caspase3表达均降低(P<0.01或P<0.05)。与模型组比较,中药治疗组中,高剂量组Bcl-2表达明显升高,Bax、Caspase3表达明显降低(P<0.05);西药组与模型组相比,Bcl-2表达明显升高(P<0.01),Caspase3表达明显降低(P<0.05),Bax表达有降低趋势(P>0.05)。中药组高剂量组与西药组相比,Bcl-2表达无明显差异(P>0.05)。结论:益气养阴通络法能够上调急性心肌梗死大鼠心肌细胞Bcl-2表达,下调Bax、Caspase3表达。

N-乙酰-5-羟色胺(NAS)对视网膜缺血再灌注损伤(RIRI)大鼠视网膜活性Caspase-3、Bcl-2、Bax表达的影响

目的探讨N-乙酰-5-羟色胺(N-acetylserotonin,NAS)对视网膜缺血再灌注损伤(retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI)大鼠视网膜活性Caspase-3、Bcl-2、Bax表达的影响。方法取健康成年Sprague-Dawley大鼠66只,采用随机数字表法随机分为正常对照组(6只)、缺血再灌注组(30只)与药物组(30只),药物组于造模前30 min腹腔注射5 mg·kg-1NAS,缺血再灌注组腹腔注射同等剂量的生理盐水,缺血再灌注组与药物组按RIRI后时间,分为6 h、12 h、24 h、48 h、72 h五个亚组。采用HE染色法观察各组视网膜形态学变化,免疫组织化学染色检测各组大鼠视网膜活性Caspase-3、Bcl-2及Bax蛋白表达。结果HE染色显示正常对照组大鼠视网膜结构清晰,各层细胞排列紧密;缺血再灌注组大鼠RIRI后6 h、12 h视网膜各层高度水肿,24 h后水肿逐渐减轻,神经节细胞逐渐减少,分布较紊乱,随着时间延长,视网膜神经节细胞大片缺失;药物组6 h、12 h较缺血再灌注组细胞水肿明显减轻,24 h、48 h、72 h组较缺血再灌注组细胞排列规整,神经节细胞数量减少减轻。缺血再灌注组视网膜活性Caspase-3阳性细胞数在灌注后6 h开始表达增加,阳性细胞数为(561.15±37.19)个·mm^(-2),24 h达到较高水平,阳性细胞数为(1522.61±84.36)个·mm^(-2),随后逐渐下降,药物组视网膜各时间点活性Caspase-3阳性细胞数均显著少于缺血再灌注组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。正常对照组视网膜可见大量Bcl-2阳性细胞;缺血再灌注组RIRI后6 h Bcl-2阳性细胞开始下降,12 h后继续减少,24 h降至较低水平;药物组各时间点Bcl-2阳性细胞数均显著多于缺血再灌注组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。正常对照组大鼠视网膜几乎未见Bax阳性细胞;缺血再灌注组RIRI后6 h神经节细胞层及内核层可见Bax阳性细胞,24 h达到较高水平,48 h开始下降;药物组各时间点Bax阳性细胞均显著少于缺血再灌注组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论 NAS可促进RIRI大鼠视网膜Bcl-2蛋白的表达,抑制Bax蛋白的表达,降低活性Caspase-3蛋白表达,减轻细胞凋亡,具有神经保护作用。

右归丸对肾阳虚大鼠卵巢细胞Caspase-3、TNFα、Bcl-2、Bax表达的影响

目的:研究右归丸对大鼠卵巢卵泡细胞凋亡的影响与作用机理。方法:以雌性SD大鼠注射糖皮质激素造成肾阳虚模型,采用免疫组织化学方法观察了右归丸对肾阳虚大鼠卵巢的卵泡细胞TNFα、Caspase3、Bcl2、Bax表达的影响。结果:在对大鼠卵巢卵泡细胞Bcl2表达的影响上,右归丸低剂量组、金匮肾气丸组与模型组存在明显的差异(P<0.05),右归丸低剂量组、金匮肾气丸组可通过上调bcl2水平,发挥抑制凋亡的作用(P<0.05),TNFα、Caspase3、Bax也存在相应改变。结论:提示右归丸温阳补肾、填精补血的现代机理之一,可能与该药调节卵泡细胞凋亡途径上的Bcl2、Caspase3、Bax表达有关。同时中成药金匮肾气丸也具有相似的作用。

蛇葡萄素改变Bcl-2/Bax表达和激活caspase-3诱导人肝癌细胞Bel-7402凋亡

目的探讨蛇葡萄素在体外诱导人肝癌细胞株Bel-7402的凋亡作用及其可能机制。方法以不同浓度的蛇葡萄素作用于体外培养的人肝癌细胞株Bel-7402,应用MTT法检测培养24、48和72h的细胞生长情况;荧光染色观察细胞核的形态学改变;琼脂糖凝胶电泳分析细胞DNA变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot检测细胞caspase-3、Bcl-2和Bax的表达情况。结果蛇葡萄素对Bel-7402细胞的生长有明显的增殖抑制作用,呈浓度和时间依赖性。24、48、72h的IC50值分别是89.6±16.1、36.2±6.5和15.3±3.0mg·L-1。经荧光染色后可观察到典型的凋亡小体。细胞DNA电泳后呈现出凋亡细胞典型的DNAl adder。流式细胞术检测细胞凋亡率呈时间和浓度依赖性。caspase-3和Bcl-2蛋白表达量逐渐降低,Bax蛋白表达量逐渐增加,呈明显的浓度依赖性。结论蛇葡萄素能诱导体外培养的人肝癌Bel-7402细胞凋亡,其作用具有时间和浓度依赖性。下调Bcl-2、上调Bax表达,活化caspase-3是蛇葡萄素诱导Bel-7402细胞凋亡的可能机制之一。

乳酸盐腹膜透析液对人腹膜间皮细胞凋亡及bcl-2、bax表达和caspase-3活性的影响

目的:探讨不同浓度乳酸盐腹膜透析液(L-PDS)对腹膜间皮细胞(HPMC)凋亡和bcl-2、bax表达及caspase-3活性的影响。方法:采用酶消化法从人腹膜组织中分离间皮细胞,建立稳定的体外培养模型,分别用浓度为1.50%、2.50%和4.25%的L-PDS与HPMC共同培养,同时设对照组。采用流式细胞术检测HPMC凋亡,采用RT-PCR法测定bcl-2及bax mRNA的表达,采用免疫荧光法检测caspase-3的活性。结果:与对照组比较,L-PDS各组HPMC凋亡率增加,bcl-2 mRNA的表达降低,bax mRNA表达升高,caspase-3活性增加,上述指标变化中2.50%及4.25%L-PDS组与对照组比较差异有显著性(P<0.05),4.25%L-PDS组与2.50%L-PDS组比较差异也有显著性(P<0.05),而1.50%L-PDS组与对照组比较差异无显著性(P>0.05)。结论:L-PDS可诱导HPMC凋亡,其机制可能是通过对bcl-2及bax mRNA表达的改变以及激活caspase-3活性而实现。