大黄鱼C型凝集素受体Clec4e的分子鉴定及凝集特性

为了揭示硬骨鱼C型凝集素受体(C-type lectin receptor,CTLR)的生物学功能,实验以从大黄鱼转录组数据库中筛选出的一个CTLR基因—C型凝集素结构域家族4成员E基因(Clec4e)为研究对象,研究其分子特征、表达分布和凝集特性。结果显示,LcClec4e cDNA全长1546 bp,开放阅读框(ORF)771 bp,编码254个氨基酸。LcClec4e的N端有一个跨膜区,无信号肽,C端含有一个糖识别结构域(CRD),其中含有糖结合位点EPN和WFD以及6个可形成二硫键的保守半胱氨酸。系统发育分析表明,LcClec4e与多种鲈形目鱼类Clec4e具有较近的亲缘关系。荧光定量PCR结果显示,LcClec4e在所检测的10种组织中呈组成型分布,且在肝脏中表达量最高;LcClec4e在来源于大黄鱼头肾组织的原代巨噬细胞、淋巴细胞和粒细胞中均有表达,且在巨噬细胞中表达量最高;经灭活溶藻弧菌刺激后,LcClec4e在3种免疫细胞中的表达均极显著上调。原核表达的重组LcClec4e胞外段(recombinant LcClec4e-extracellular domain,rLcClec4e-ex)具有Ca^(2+)依赖性的凝集活性,可凝集小鼠、家兔的红细胞,以及嗜水气单胞菌、变形假单胞菌、溶藻弧菌和坎氏弧菌等4种水产常见的革兰氏阴性菌。D-葡萄糖、D-果糖、D-甘露糖、D-麦芽糖、α-乳糖和脂多糖均可抑制rLcClec4e-ex对大黄鱼重要病原菌变形假单胞菌的凝集作用,说明LcClec4e可能与变形假单胞菌表面的糖类物质结合。上述结果提示,LcClec4e可能作为一种模式识别受体,通过结合病原菌表面的糖类病原体相关分子模式来识别病原,参与大黄鱼抗细菌感染的免疫防御。

烟曲霉相关C型凝集素受体研究进展

烟曲霉(Aspergillus fumigatus,A.fumigatus)是最普遍的空气传播真菌病原体,可导致免疫功能低下患者发生致命的侵袭性曲霉病。对病原体与宿主免疫系统的相互作用过程的了解是理解其致病性的关键。通过保守的跨膜或可溶性的模式识别受体(pattern recognition receptor,PRRs)识别病原体表面上的保守分子结构,称为病原体相关分子模式(pathogen associated molecular patterns,PAMPs)。C型凝集素受体(C-type lectin receptors,CLRs)是PRRs中主要受体家族之一,CLRs可以通过C型凝集素样结构域(Ctype lectin-like domains,CTLDs)来识别β-葡聚糖、甘露糖、几丁质等真菌细胞壁成分,从而诱导固有免疫和获得性免疫来清除病原体。目前烟曲霉中所涉及的CLRs主要为Dectin-1、Dectin-2、MelLec、DC-SIGN等,这些CLRs在宿主细胞识别烟曲霉中起着至关重要的作用,并且针对Dectin-1及Dectin-2已开发出新型抗烟曲霉药物。因此为了进一步了解与烟曲霉相关的各类CLRs的作用机制及其相关信号通路,为开发新型抗真菌药物提供一种新思路,文章对与烟曲霉相关的CLRs最新研究进展进行了综述。

新型C型凝集素受体mincle的研究进展

巨噬细胞诱导型C型凝集素受体mincle是一种新发现的非经典型C型凝集素受体，主要表达于抗原递呈细胞表面，可以在某些真菌、结核分枝杆菌、坏死细胞的刺激下与相关配体结合，激活核因子-κB（NF—κB）途径，引起炎性因子的表达，从而在宿主的固有免疫应答过程中发挥一定的作用。目前，mincle受体在一些免疫相关疾病中作用机制的研究成为热点，但关于其在眼科炎性感染性疾病中作用的研究甚少，深入研究mincle受体与眼科感染性疾病的关系可以为相关疾病的免疫治疗提供新的思路。就mincle受体的基本概念、作用机制、与炎性疾病的关系以及其在眼科疾病研究中的展望进行综述。

C型凝集素受体在寄生虫感染免疫调节中的作用

C型凝集素(C-type lectin)是一类钙依赖性糖结合蛋白,其受体依赖钙离子(Ca2+)的参与来识别碳水化合物配体。目前研究发现,该类受体可识别糖蛋白并激活下游免疫。本文总结了数种C型凝集素受体在寄生虫感染中的作用。

C型凝集素受体与Th17细胞免疫在真菌感染中的研究进展

Th1、Th2细胞是经典的辅助T细胞,分别以分泌INF-γ、IL-4为特征。Th17细胞是近期发现的辅助T细胞,以分泌IL-17为特征,能诱导多种炎性反应及髓系细胞、上皮细胞等抗微生物应答。Th17细胞分化是当前关注的焦点。已有研究结果证实,Th17细胞应答能驱动保护性的抗真菌免疫反应[1],但其介导的炎性效应与自身免疫疾病相关。抗原提呈细胞（antigen-presenting cell,APC）上的模式识别受体（pattern recognition receptors,PRRs）是研究Th17细胞免疫的重要领域。

树突状细胞表面C型凝集素受体表达对绒毛外细胞滋养细胞生物学行为的影响

目的采用基因克隆技术构建C型凝集素受体(CLR)过表达/siRNA慢病毒载体,观察胎盘来源的树突状细胞表面CLR过表达或低表达对人绒毛外细胞滋养细胞(EVCT)侵袭力、黏附能力和凋亡的影响。方法通过质粒转染和RNA干扰技术获取过表达和低表达CLR基因的树突状细胞。将分离、培养及鉴定后的EVCT分别与过表达和低表达CLR基因的树突状细胞共培养(过表达组和低表达组)。采用体外侵袭试验、黏附能力实验和AnnexinⅤ/PI双染法检测共培养对EVCT侵袭、黏附能力及凋亡的影响。以共培养前的EVCT作为对照组。结果过表达组EVCT的侵袭能力与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),低表达组EVCT的侵袭能力明显弱于对照组(P<0.01)。过表达组和低表达组与对照组的黏附率比值分别为(94.2±2.3)%和(52.8±1.5)%,低表达组EVCT的黏附能力明显下降(P<0.01)。过表达组、低表达组和对照组的细胞凋亡率分别为(3.9±0.8)%、(8.2±1.4)%和(1.1±0.3)%,低表达组细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.01)。结论抑制树突状细胞表面CLR表达可使EVCT的侵袭力和黏附能力显著减弱,凋亡率显著增高;提示树突状细胞表面CLR表达异常可能是EVCT免疫损伤和子痫前期发病的重要机制之一。

C型凝集素受体CLR与负性免疫调节

树突状细胞(dendriticcells,DC)是专职性抗原提呈细胞,其主要通过吞噬作用、胞饮和受体介导的胞吞作用摄取抗原。DC表面表达的C型凝集素受体(C-typelectinreceptors,CLR)和Toll样受体(Toll-likereceptors,TLR)能通过受体介导的内吞这一途径分别摄取糖蛋白和微生物抗原。CLR在体内参与负性免疫调节:识别糖基化的自身抗原诱导免疫耐受、负性调节TLR信号通路并且某些病原体能利用其诱导耐受功能以逃避免疫应答。深入研究CLR的结构与功能有助于理解自身免疫性疾病的发病机制,并可能为自身免疫性疾病的防治提供新的干预手段。

C型凝集素受体CLR对树突状细胞功能的调控效应

树突状细胞(Dendritic cells,DC)是专职性抗原提呈细胞,其表面表达的C型凝集素受体(C-type lectin receptors,CLR)在DC的摄取糖蛋白和识别微生物抗原,并将抗原信息提呈给T、B淋巴细胞的过程中发挥重要作用,从而在调节抗真菌寄生虫感染、过敏反应和肿瘤免疫中扮演重要角色。故通过研究C型凝集素受体对DC功能的调控效应来深入了解疾病的发生发展并进一步调控其过程具有重要意义。本文将对近期相关研究成果作一综述。

C型凝集素受体Dectin-2和Dectin-3的单克隆抗体制备

目的克隆人C型凝集素受体dectin-2和dectin-3胞外区基因并进行原核表达及制备它们的单克隆抗体。方法利用PCR扩增编码人dectin-2和dectin-3胞外区的基因序列,分别克隆到原核表达载体pET28a(+)中,IPTG诱导基因的原核表达;纯化后免疫Balb/c小鼠,融合并筛选获得克隆化的杂交瘤细胞株,制备Dectin-2和Dectin-3的单克隆抗体;利用ELISA、FACS和Western印迹法检测抗体的效价和特异性;检测Dectin-2和Dectin-3的单克隆抗体是否能够特异性阻断相应受体的功能。结果成功构建原核表达质粒pET28a(+)-Dectin-2和pET28a(+)-Dectin-3,并在E.coli BL21(DE3)中诱导Dectin-2和Dectin-3胞外区的高效表达。纯化目的蛋白后免疫Balb/c小鼠,融合获得8株Dectin-2和12株Dectin-3的阳性杂交瘤细胞。进一步克隆化筛选获得7株Dectin-2和8株Dectin-3的单克隆细胞株,并且其分泌的抗体能够特异结合Dectin-2和Dectin-3胞外区的原核表达蛋白。利用单克隆细胞株制备小鼠腹水,纯化获得Dectin-2和Dectin-3的单克隆抗体。单克隆细胞株D2-7和D3-2产生的抗体能够特异结合RAW中表达的人Dectin-2和Dectin-3蛋白及小鼠骨髓来源巨噬细胞中Dectin-2和Dectin-3蛋白。抗体功能实验显示:单克隆细胞株D2-7和D2-10产生的抗体能够阻断Dectin-2受体介导白念珠菌菌丝态刺激引起的NF-κB激活,而单克隆细胞株D3-1和D3-2产生的抗体能够阻断Dectin-3受体介导白念珠菌菌丝态刺激引起的NF-κB激活,并且具有剂量依赖性及高度特异性。结论成功获得高纯度的Dectin-2和Dectin-3胞外区蛋白,并分别获得了特异、高效价的单克隆抗体。

酵母多糖影响人朗格汉斯细胞C型凝集素受体的研究

探究酵母多糖(Zymosan)对人朗格汉斯细胞(Langerhans cells,LCs)C型凝集素受体(C-type lectin receptors,CLRs)的影响。收集健康志愿者血液样本,Ficoll淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞,CD14磁珠分选CD14+细胞,用含有GM-CSF(1 000 U/m L)、IL-4(1 000 U/m L)、TGFβ-1(10 ng/m L)的培养液诱导培养LCs,Zymosan刺激LCs,8、24 h后收集细胞。提取Zymosan实验组和对照组细胞RNA,实时RT-PCR分析5种CLRs(Dectin-1、Dectin-2、DC-SIGN、Mincle、MRC-2)mRNA的水平,扩增产物测序鉴定。共检测10个个体来源LCs在酵母多糖刺激后其CLRs mRNA变化的情况。在10组样本中,有6组Dectin-2受体mRNA较对照组增加(变化倍数≥2),其中3组增加明显(变化倍数≥5),最大增加倍数为20.91;有5组Mincle受体mRNA较对照组增加(变化倍数≥2),其中4组增加明显(变化倍数≥5),最大增加倍数为19.98;有1组MRC-2受体mRNA较对照组明显增加(变化倍数≥5)。Dectin-1和DC-SIGN受体mRNA没有增加。Zymosan能增加部分个体来源LCs内Dectin-2、Mincle和MRC-2受体mRNA的水平,而对Dectin-1和DC-SIGN受体mRNA的水平没有影响。本研究结果完善了Zymosan调节机体免疫功能的作用机制。

C型凝集素受体在肿瘤免疫作用中的研究进展

C型凝集素受体(CLRs)是一种高表达于树突状细胞(DCs)的模式识别受体(PRRs),它参与了由DCs介导的针对肿瘤的非特异性免疫和特异性免疫。激活表达于DCs上的CLRs可显著提升机体免疫系统对肿瘤细胞的杀伤作用。本文将以CLRs中的Dectin-1和Dectin-2受体为例,对其在肿瘤免疫中发挥的作用及参与此过程的相关信号通路进行综述,并据此初步探讨CLRs未来在肿瘤免疫治疗中可能的应用。

人C型凝集素受体dectin-1单克隆抗体的制备

目的:克隆获得并原核表达人dectin-1基因的胞外段,以其作为抗原,制备人C型凝集素受体dectin-1的单克隆抗体。方法和结果:利用RT-PCR技术从人的外周血中克隆获得人dectin-1基因,克隆到pCDNA 3.0(+)载体中,获得pCDNA3.0(+)-dectin-1质粒。将dectin-1胞外段[dectin-1(202bp-744bp)]克隆到pET28a(+)载体,构建原核表达质粒pET28a(+)-dectin-1(202bp-744bp),转到大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中,IPTG诱导目的片段原核表达,得到高效表达的dectin-1(202bp-744bp),镍柱亲和层析纯化后免疫BALB/c小鼠,取抗体滴度高的小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,获得15株阳性杂交瘤细胞株,利用有限稀释法进行单克隆杂交瘤细胞株的筛选,获得5株单克隆细胞株。用单克隆细胞株制备小鼠腹水模型,经辛酸-硫酸铵沉淀法纯化获得dectin-1的单克隆抗体。经蛋白质印迹法验证,此单克隆抗体能有效地识别人和小鼠的dectin-1蛋白。结论:成功制备获得dectin-1蛋白的特异、高效的单克隆抗体。

C型凝集素受体和Toll样受体在子前期重度患者胎盘中的表达

目的分析子前期(PE)患者胎盘组织中C型凝集素样受体家族中DC-SIGN和甘露糖受体(MR)以及Toll样受体(TLR)家族中TLR-2和TLR-4的表达情况。方法采集PE重度患者(PE组,n=20)及正常妊娠妇女(NP组,n=20)的新鲜胎盘标本;采用免疫组织化学技术对胎盘组织中DC-SIGN、MR、TLR-2和TLR-4的表达进行定位分析;采用Western blotting法检测胎盘组织中的DC-SIGN、MR、TLR-2和TLR-4的蛋白表达。结果两组胎盘组织中均有DC-SIGN、MR、TLR-2和TLR-4的表达,主要位于胎盘合体滋养层细胞,在细胞滋养层细胞中亦有少量表达。PE组与NP组比较,胎盘组织TLR-4阳性细胞表达率明显升高(P<0.01);DC-SIGN、MR阳性细胞表达率明显降低(P<0.01,P<0.05),TLR-2阳性细胞表达率的差异无统计学意义(P>0.05)。结论相对于正常晚期妊娠妇女,PE患者胎盘组织中C型凝集素受体DC-SIGN和MR表达减少,TLR-4过度表达;两种受体家族活化平衡失调可能是PE发病机制中的关键环节之一。

血清C型凝集素受体、PCT、SAA与深部真菌感染患儿预后的关系分析

目的分析血清C型凝集素受体(CLRs)、降钙素原(PCT)、淀粉样蛋白A(SAA)与深部真菌感染患儿预后的关系。方法选取2019年8月~2021年8月我院收治的深部真菌感染患儿49例作为真菌组,选取同期诊断为细菌感染患儿56例作为细菌组,另选取同期健康体检儿41例作为对照组。所有患儿均检验血清CLRs、PCT、SAA水平,并依据预后情况将真菌组又分为死亡组(7例)和康复组(42例)。以ROC曲线评估血清上述指标对深部真菌感染患儿的预后效能。结果三组患儿血清CLRs、PCT、SAA水平比较:对照组<真菌组<细菌组(P<0.05)。49例深部真菌感染患儿中有7例死亡,42例康复出院,康复组患儿血清CLRs、PCT、SAA水平低于死亡组(P<0.05)。ROC曲线显示,血清CLRs、PCT、SAA水平诊断深部真菌感染患儿预后的ACU分别为0.862、0.966、0.898。结论血清CLRs、PCT、SAA水平与深部真菌感染紧密相关,检测其水平可为深部真菌感染患儿诊断和预后评估提供参考信息。

C型凝集素受体与抗真菌免疫

Toll样受体(TLR)的发现为研究病原生物的识别和免疫应答的起始开辟了新的视角,然而近期研究发现"非-TLR"受体在该过程尤其在抗真菌免疫中亦起着重要作用。其中研究甚为活跃的是C型凝集素受体(CLR)家族的一些成员,包括甘露糖受体、DC-SIGN、Dectin-1、Dectin-2及胶原凝集素。本文对这些受体在真菌识别、摄取、杀伤及其在宿主免疫反应的诱导和调节中所发挥的作用予以综述。

C型凝集素受体Dectin-2的生物学特性及功能

树突细胞相关凝集素2（Dectin-2）是一种新发现的C型凝集素受体，具有一个碳水化合物识别域CRD，可识别高甘露糖结构，广泛存在于树突状细胞等固有免疫细胞表面。由于其具有抗真菌病原体感染和紫外线诱导耐受等作用，因此在机体的免疫系统中发挥重要作用。对于Dectin-2等C型凝集素受体的深入研究将有利于我们对微生物感染、肿瘤免疫和自身免疫等方面有更深入的认识，从而对预防和治疗疾病起着指导作用。

C型凝集素受体CLEC-2的研究进展

C型凝集素样受体-2（CLEC-2）是一个非经典型的c型凝集素受体，主要表达在血小板、中性粒细胞等细胞表面，在马来西亚蝮蛇蛇毒蛋白rhodocytin和跨膜唾液酸糖蛋白podoplanin等相关配体的刺激下，能通过细胞质尾部的YXXL结构域形成二聚体，从而激活syk依赖的信号传导。最近有很多研究显示：CLEC-2在血小板活化聚集、肿瘤转移、血栓形成以及HIV在体内扩散中起着重要的作用。因此，对CLEC-2的进一步研究有利于为血小板相关疾病的治疗提供新的思路和理论指导。

巨噬细胞诱导型C型凝集素受体在脑梗死中的研究进展

脑卒中是全球死亡和致残的主要原因,其中脑梗死发病率占所有脑卒中的近80%[1].目前应用最广泛的脑梗死治疗手段是溶栓,但需在4.5 h的时间窗内完成,并且仍伴随着神经元缺血损伤和再灌注引起的脑组织损伤,因此需要一种可以靶向调节神经保护且不只是溶解凝块的有效治疗方法[2]。

C型凝集素受体在抗真菌免疫中的核心作用

近20年来，侵袭性真菌感染的发病率显著升高，主要原因是侵入性医疗操作的应用、广谱抗生素的使用、免疫抑制治疗等现代医学实践以及AIDS流行，由于其可导致极高的病死率而受到越来越多的重视。对于处于免疫抑制状态的个体，真菌感染可危及生命。针对健康个体应对持续暴露真菌病原能力的相关研究提示：健全的免疫系统可以有效阻止真菌感染。尽管目前有关针对真菌免疫机制的了解不及其他病原菌，但近年来已认识到C型凝集素受体（C—typeIectinreceptors，CLRs）在抗真菌免疫中的重要作用。