C-C趋化因子受体2阳性外泌体抑制单核细胞浸润改善缺血再灌注后心肌损伤的实验研究

目的探讨C-C趋化因子受体2阳性(CCR2^(+))外泌体调控小鼠心肌缺血再灌注(IR)损伤的作用机制。方法将12只C57小鼠完全随机分为野生型(WT)假手术组、WT手术(IR模型)组、CCR2-外泌体手术组和CCR2^(+)外泌体手术组,其中后3组均构建了心肌IR损伤模型并给予相应处理。超声检测心脏结构及功能;Masson三色特殊染色法检测心脏组织内胶原沉积;转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸缺口末端标记法检测心肌细胞凋亡;免疫组织化学染色及实时荧光定量聚合酶链反应法检测单核细胞招募相关C-C趋化因子配体2(CCL2)表达以及单核细胞表面CCR2表达;流式细胞术检测心肌IR后梗死部位淋巴细胞抗原6复合体C(Ly6C)和CD_(43)单核细胞数量。结果心肌IR手术后7 d,CCR2^(+)外泌体手术组小鼠心脏纤维化面积小于IR模型组[(16.8±8.1)%比(45.7±3.8)%];射血分数明显低于WT假手术组,但高于IR模型组;小鼠心肌细胞凋亡数量小于IR模型组;小鼠心脏中CCR2蛋白相对表达量小于IR模型组;小鼠再灌注区域CCR2阳性细胞面积小于IR模型组;小鼠再灌注部位Ly6C+的单核细胞数明显低于IR模型组,CD_(43)^(+)的单核细胞数明显高于IR模型组;小鼠心脏中CCL2 mRNA和蛋白相对表达量小于IR模型组(均P<0.05)。结论CCR2^(+)外泌体表现出明显的抗心肌IR损伤的作用,其机制是CCL2表达减少抑制单核细胞浸润,从而减轻了心肌损伤和抑制心力衰竭。

瞬时受体电位香草酸亚型1受体及C-C趋化因子受体2在盐敏感性高血压所致肾脏损害中的作用

目的观察瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)受体基因缺陷和C-C趋化因子受体2(CCR2)阻断剂对盐敏感性高血压所致肾脏损害的影响。方法野生型和TRPV1基因缺陷(TRPV1-/-)小鼠通过切除左侧肾脏、皮下包埋醋酸脱氧皮质酮(DOCA)和饮用盐水建立DOCA-盐高血压模型。DOCA-盐高血压组(野生型和TRPV1-/-小鼠n均=8)和DOCA-盐高血压-RS504393组(野生型和TRPV1-/-小鼠n均=8)分别皮下注射溶媒和特异性的CCR2阻断剂RS504393,假手术组野生型和TRPV1-/-小鼠(n均=7)仅左肾切除和给予正常饮用水。实验共4周,实验期间和结束时分别检测动脉收缩压、24 h尿白蛋白排泄量、尿8-异构前列腺素排泄量和肌酐清除率。取右肾进行病理组织学分析,比较肾小球硬化指数、肾小管间质损伤程度及单核/巨噬细胞浸润程度。结果与相应的假手术组比较,野生型DOCA-盐高血压组和TRPV1-/-DOCA-盐高血压组的血压显著升高,24 h尿白蛋白和尿8-异构前列腺素排泄量显著增加,肌酐清除率显著下降(P均<0.05);肾小球硬化指数和肾小管间质损伤程度显著升高,且单核/巨噬细胞浸润数量显著增加(P均<0.05)。除血压外,TRPV-/-DOCA-盐高血压组上述病理变化均显著高于野生型DOCA-盐高血压组(P均<0.05)。RS504393处理组的上述异常变化显著弱于相应的DOCA-盐高血压组(P均<0.05)。除假手术组外,DOCA-盐高血压组和DOCA-盐高血压-RS504393组的血压差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论在野生型和TRPV1-/-小鼠中,CCR2阻断剂均可抑制DOCA-盐高血压所致的肾脏损害及肾内单核/巨噬细胞浸润,并且其抑制作用在TRPV1-/-小鼠中明显增强,提示TRPV1受体可能通过抑制CCR2所介导的单核/巨噬细胞浸润来减轻盐敏感性高血压所造成的肾脏损害。

C-C趋化因子受体2在盐敏感性高血压所致肾脏损害中的作用

目的探讨C-C趋化因子受体2(CCR2)在盐敏感性高血压所致肾脏损害中的作用。方法通过切除小鼠左侧肾脏、皮下包埋醋酸脱氧皮质酮(DOCA)和饮用盐水制备盐敏感性高血压小鼠模型,DOCA-盐高血压小鼠分为模型组和CCR2受体阻断剂组,分别皮下注射溶媒和特异性的CCR2受体阻断剂RS504393,对照组小鼠仅左肾切除和给予正常饮用水。检测动脉收缩压、24 h尿白蛋白排泄量、8-异构前列腺素排泄量、肌酐清除率、肾小球纤维样硬化指数、单核/巨噬细胞浸润程度。结果与对照组相比,模型组血压升高、24 h尿白蛋白和8-异构前列腺素排泄量增加、肌酐清除率下降、肾脏有较明显的肾小球纤维样硬化和肾小管间质损害,并伴有明显的单核/巨噬细胞浸润(P<0.05)。RS504393能显著抑制上述异常变化(P<0.05),使各项肾功能和肾形态学指标基本恢复正常,但RS504393对血压无影响。结论 CCR2受体阻断剂可抑制DOCA-盐高血压所致肾脏损害,CCR2受体介导的单核/巨噬细胞浸润在盐敏感性高血压诱导的肾脏损害中发挥重要作用。

鞘氨醇激酶1通过阻止miRNA-19b-3p介导的C-C趋化因子受体2抑制促进肝纤维化

【据《Hepatology》2018年9月报道】题：鞘氨醇激酶1通过阻止miR-19b-3p介导的CCR2抑制促进肝纤维化（作者Guo J等）多种慢性肝病最终可进展为肝纤维化,如果不予以治疗,可进一步发展为肝硬化甚至肝癌,危及患者生命。因此,肝纤维化的早期防治特别关键。肝星状细胞（HSCs）和Kupffer细胞（KCs）的激活调控慢性肝脏疾病进展为肝纤维化。由于肝纤维化的发病机制复杂,目前临床上仍缺乏特异性、针对性的治疗药物和手段。

乌头碱调节C-C基序趋化因子配体2/C-C基序趋化因子受体2信号通路对膀胱癌细胞抗肿瘤活性及其作用机制研究

目的 探讨乌头碱调节C-C基序趋化因子配体2(CCL2)/C-C基序趋化因子受体2(CCR2)信号通路对膀胱癌细胞抗肿瘤活性及其作用机制研究。方法 研究起止时间为2021年12月至2022年10月。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测2.5、5.0、10.0、20.0、30.0μmol/L乌头碱处理后的人膀胱癌5637细胞存活率,筛选出合适的乌头碱作用浓度。将5637细胞分为对照组、乌头碱低剂量(10μmol/L)组、乌头碱高剂量(20μmol/L)组、乌头碱高剂量(20μmol/L)+空载组、乌头碱高剂量(20μmol/L)+CCL2过表达组,分组处理后,采用CCK-8法、5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(Edu)染色法及Hoechst 33258染色分别检测各组5637细胞存活率、增殖率、凋亡率;采用Transwell实验及划痕实验分别检测各组5637细胞侵袭数、迁移率;采用免疫荧光染色检测各组5637细胞凋亡相关蛋白BCL2相关X蛋白(Bax)和B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)表达比值(Bax/Bcl-2);采用免疫印迹法检测各组5637细胞CCL2/CCR2信号通路相关蛋白及上皮间质转化标志蛋白[神经钙黏素(N-cadherin)、锌指E盒结合同源盒1(ZEB1)、紧密连接蛋白1(ZO-1)、上皮钙黏素(E-cadherin)]表达。结果 与对照组相比,乌头碱低剂量组、乌头碱高剂量组、乌头碱高剂量+空载组细胞CCL2(0.69±0.09、0.20±0.03、0.19±0.04比1.21±0.13),CCR2(0.78±0.12、0.26±0.06、0.27±0.07比1.33±0.20)、Ncadherin(0.65±0.06、0.12±0.02、0.11±0.03比1.24±0.12)与ZEB1蛋白表达、存活率、增殖率、侵袭数、迁移率均降低(P<0.05),Bax/Bcl-2、细胞ZO-1与E-cadherin蛋白表达均升高(P<0.05);乌头碱高剂量组、乌头碱高剂量+空载组细胞CCL2、CCR2、N-cadherin与ZEB1蛋白表达、存活率、增殖率、侵袭数、迁移率相比乌头碱低剂量组进一步降低(P<0.05),Bax/Bcl-2、细胞ZO-1与Ecadherin蛋白表达进一步升高(P<0.05)。与乌头碱高剂量组相比,乌头碱高剂量+CCL2过表达组细胞CCL2、CCR2、N-cadherin与ZEB1蛋白表达、存活率、增殖率、侵袭数、迁移率升高(P<0.05),Bax/Bcl-2、细胞ZO-1与E-cadherin蛋白表达降低(P<0.05)。结论 乌头碱可通过CCL2/CCR2信号通路而抑制膀胱癌细胞存活、增殖及侵袭和迁移,促使其凋亡。

CC类趋化因子受体2、Th1/Th2细胞在IgA肾病大鼠肾间质纤维化中的表达及意义

目的检测IgA肾病大鼠肾间质纤维化中CC类趋化因子受体2(C-C motif chemokine receptor 2,CCR2)的表达和辅助性T细胞1/2(helper T cell 1/2,Th1/Th2)的含量,并观察其在肾脏纤维化中的作用。方法40只SD雄性大鼠,随机分为模型组和对照组,每组20只。采用脂多糖+改良牛血清白蛋白+四氯化碳法构建免疫球蛋白A(IgA)肾病模型。观察大鼠肾组织病理改变和IgA沉淀,计算胶原纤维占肾组织百分比,采用Katafuchi评分标准评估肾小管间质损伤程度。蛋白质印迹测定肾组织CCR2水平。双抗体夹心酶联免疫吸附法测定血清白细胞介素-4(IL-4)和干扰素-γ(IFN-γ)水平。流式细胞术检测Th1/Th2细胞比例。结果模型组大鼠肾组织胶原纤维面积百分比和Katafuchi评分显著高于对照组(P<0.05);模型组大鼠肾组织CCR2、血清IL-4水平、Th2细胞含量及IL-4/IFN-γ比值显著高于对照组,血清IFN-γ水平、Th1细胞含量显著低于对照组(P<0.05);CCR2和IL-4水平及IL-4/IFN-γ比值与胶原纤维面积百分比、Katafuchi评分呈正相关(P<0.05);IFN-γ水平与胶原纤维面积百分比、Katafuchi评分呈负相关(P<0.05)。结论CCR2和Th1/Th2失衡参与IgA肾病大鼠肾间质纤维化发生和发展,拮抗CCR2和调节Th1/Th2平衡有可能减轻IgA肾病大鼠肾脏纤维化改变。

血清几丁质酶-3类蛋白-1、CC趋化因子受体2水平与急性缺血性脑卒中患者病情严重程度的关系及对预后的评估价值

目的探讨血清几丁质酶-3类蛋白-1(CHI3L1)、CC趋化因子受体2(CCR2)水平与急性缺血性脑卒中(AIS)病情严重程度的关系及对预后的评估价值。方法选取2021年6月至2022年12月于邯郸市第一医院就诊的AIS患者129例作为AIS组,采用美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评估病情严重程度,将患者分为轻度组63例、中度组39例和重度组27例,随访3个月后依据改良Rankin量表(mRS)分为预后良好组97例和预后不良组32例。另选取同期97例体检者作为对照组。检测并比较AIS组与对照组、不同严重程度和不同预后AIS患者血清CHI3L1、CCR2水平。利用二元Logistic回归法分析AIS患者预后的影响因素,受试者工作特征(ROC)曲线评估CHI3L1、CCR2水平对AIS患者预后的预测价值。结果AIS组血清CHI3L1、CCR2水平高于对照组(t=38.958、21.382,P<0.05);轻度组、中度组和重度组血清CHI3L1、CCR2水平差异有统计学意义(F=31.538、34.760,P<0.05);预后良好组患者血清中的CHI3L1、CCR2水平低于预后不良组(t=6.226、8.694,P<0.05);Logistic回归结果显示,CHI3L1、CCR2水平均是AIS患者预后不良的危险因素(OR=1.493、2.593,P<0.05);ROC曲线结果显示,血清CHI3L1、CCR2及两者联合预测AIS患者预后的曲线下面积分别为0.869、0.882、0.965,敏感度为70.10%、86.60%、87.63%,特异度为93.75%、90.62%、96.87%,两者联合预测优于血清CHI3L1、CCR2单独预测(Z=2.990、2.931,P<0.05)。结论AIS患者病情越严重血清CHI3L1、CCR2水平越高,两者均可预测AIS患者预后不良,两者联合预测效能更佳。

鸦胆子苦醇通过CC趋化因子配体2-C-C趋化因子受体2信号通路对骨肉瘤细胞增殖、凋亡和免疫逃逸的影响

目的:探讨鸦胆子苦醇(BRU)调节CC趋化因子配体2(CCL2)-C-C趋化因子受体2(CCR2)信号通路对骨肉瘤(OS)细胞增殖、凋亡和免疫逃逸的影响。方法:将骨肉瘤细胞系MG-63分为MG-63组(未处理的MG-63细胞)、L-BRU组(25 nmol/L鸦胆子苦醇处理MG-63细胞)、M-BRU组(50 nmol/L鸦胆子苦醇处理MG-63细胞)、H-BRU组(75 nmol/L鸦胆子苦醇处理MG-63细胞)、GW0742组(1μmol/L CCL2-CCR2信号通路激活剂GW0742处理MG-63细胞)、H-BRU+GW0742组(1μmol/L GW0742和75 nmol/L鸦胆子苦醇处理MG-63细胞),MTT法检测鸦胆子苦醇对正常人成骨细胞系hFOB1.19细胞的毒性,CCK8法检测MG-63细胞增殖,流式细胞仪检测MG-63细胞、CD8+T细胞凋亡,ELISA法检测外周血单个核细胞(PBMC)上清液IFN-γ、TNF-α水平,Western Blot法检测CCL2-CCR2通路蛋白以及凋亡相关蛋白水平。结果:0~500 nmol/L鸦胆子苦醇对hFOB1.19细胞无明显毒性影响;与MG-63组相比,L-BRU组、M-BRU组、H-BRU组光密度(OD)值,Bcl-2、CCL2、CCR2、PD-L1蛋白水平及CD8+T细胞的凋亡率均显著降低(P<0.05),凋亡率,IFN-γ、TNF-α水平及Bax、Cleaved-Caspase-3蛋白水平均显著升高(P<0.05),而GW0742组以上指标趋势相反;与H-BRU组相比,H-BRU+GW0742组光密度值,Bcl-2、CCL2、CCR2、PD-L1蛋白水平及CD8+T细胞的凋亡率均显著增加(P<0.05),凋亡率,IFN-γ、TNF-α水平及Bax、Cleaved-Caspase-3蛋白水平均显著降低(P<0.05)。结论:鸦胆子苦醇可能通过抑制CCL2-CCR2信号通路对骨肉瘤细胞增殖、凋亡和免疫逃逸产生影响。

C-X-C趋化因子受体4增强Toll样受体2在肺炎衣原体感染促进动脉粥样硬化病变形成中的作用

[目的]探究C-X-C趋化因子受体4(CXCR4)在肺炎衣原体(C.pn)感染促进动脉粥样硬化(As)病变形成中的作用。[方法]以高脂饮食为基础,建立C.pn感染诱导ApoE^(-/-)、ApoE^(-/-)+Toll样受体2(TLR2)^(-/-)、ApoE^(-/-)+TLR2^(-/-)+AMD3100小鼠As模型,ELISA检测ApoE^(-/-)小鼠血清C.pn IgG、IgM抗体水平,PCR检测肺组织C.pn特异性DNA,油红O染色和HE染色观察主动脉及主动脉根部脂质沉积和As病变面积,比色法测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)和高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)水平,ELISA检测血清白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素6(IL-6)含量。[结果]ApoE^(-/-)小鼠C.pn感染模型成功建立。与对照组相比,C.pn感染后ApoE^(-/-)小鼠主动脉及主动脉根部脂质沉积量增加89.08%和71.83%,As病变面积增加34.12%(均P<0.05);与C.pn感染组相比,TLR2^(-/-)+C.pn感染组主动脉及主动脉根部脂质沉积量减少46.16%和75.73%,As病变面积减少63.37%(均P<0.05);与TLR2^(-/-)+C.pn感染组相比,TLR2^(-/-)+AMD3100+C.pn感染组主动脉及主动脉根部脂质沉积量减少26.19%和56.94%,As病变面积则减少22.24%(均P<0.05)。与对照组相比,C.pn感染后血清TC、TG和LDLC水平分别升高0.62倍、1.43倍和1.34倍,血清IL-1β和IL-6含量分别增加4.10倍和6.00倍(均P<0.05);与C.pn感染组相比,TLR2^(-/-)+C.pn感染组血清TC、TG和LDLC水平分别降低56.96%、50.41%和66.64%,血清IL-1β和IL-6含量分别减少66.72%和69.54%(均P<0.05);与TLR2^(-/-)+C.pn感染组相比,TLR2^(-/-)+AMD3100+C.pn感染组血清TC、TG和LDLC水平分别降低52.18%、58.56%和60.61%,血清IL-1β和IL-6含量分别减少28.84%和43.18%(均P<0.05)。[结论]CXCR4可增强TLR2在升高血脂水平及炎症因子含量中的作用,进而参与C.pn感染诱导的As病变形成。

趋化因子受体CXCR2在腹主动脉瘤中的表达及其临床意义

目的探讨CXC趋化因子受体2(CXCR2)在腹主动脉瘤(AAA)中的表达及其临床意义。方法选择2019年7月—2022年7月我院80例AAA作为观察组,同时期行腹主动脉-股动脉移植术者40例作为对照组,分别取观察组AAA前壁组织与对照组腹前动脉血管吻合处正常动脉壁组织,比较2组CXCR2、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白及mRNA表达水平,比较不同临床病理特征AAA患者CXCR2蛋白表达情况,采用Pearson相关性分析CXCR2与MMP-9蛋白表达量的相关性。结果观察组CXCR2、MMP-9蛋白表达阳性率、蛋白表达量及mRNA相对表达量均高于对照组(P<0.01)。瘤体直径≥5 cm、有心脑血管意外史AAA患者CXCR2蛋白表达阳性率分别高于瘤体直径<5 cm、无心脑血管意外史患者(P<0.01,P<0.05)。CXCR2与MMP-9蛋白表达量呈正相关(P<0.01)。结论CXCR2在AAA患者主动脉瘤组织中表达升高,可能与MMP-9具有协同作用,参与AAA的发生与发展。

老年2型糖尿病周围神经病变与血清趋化因子调节激活正常T细胞表达和分泌因子、C-X-C基序趋化因子配体12、C-C基序趋化因子配体2水平的相关性

目的探讨老年2型糖尿病(T2DM)周围神经病变(DPN)与血清趋化因子调节激活正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)、C-X-C基序趋化因子配体12(CXCL12)、C-C基序趋化因子配体2(CCL2)的关系。方法选取2019年3月~2021年10月河北省邯郸市人民医院确诊的老年T2DM患者181例,根据是否并发DPN将其分为单纯T2DM组(89例)和DPN组(92例)。收集所有患者一般临床资料、实验室检查指标、血清趋化因子RANTES、CXCL12、CCL2水平及感觉神经传导速度和运动神经传导速度并分组进行比较。采用Pearson相关分析评估DPN患者血清趋化因子RANTES、CXCL12、CCL2水平与一般临床指标及神经传导速度的相关性;采用多因素logistic回归分析评估DPN发病的影响因素。结果DPN组血清趋化因子RANTES、CXCL12、CCL2、糖化血红蛋白(HbA1c)、总胆固醇(TC)水平及T2DM病程、高血压病、高脂血症、视网膜病变患者比例均显著高于单纯T2DM组,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、感觉神经传导速度、运动神经传导速度均显著低于单纯T2DM组(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,DPN患者血清趋化因子RANTES、CXCL12、CCL2水平与T2DM病程、高血压病、高脂血症、视网膜病变、HbA1c、TC均呈正相关,与HDL-C、感觉神经传导速度、运动神经传导速度均呈负相关(P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,RANTES、CXCL12、CCL2水平高、T2DM病程长是T2DM患者并发DPN的独立危险因素(P<0.05)。结论DPN患者血清趋化因子RANTES、CXCL12、CCL2水平升高,且与神经传导速度呈负相关。

CXC趋化因子受体1/2在急性白血病中的异常表达及临床意义探析

背景CXCR家族已成为恶性肿瘤领域的研究热点,积极寻找并探究与急性白血病(acute leukemia,AL)发生、发展及预后相关的CXCR家族成员,在抗白血病基础研究与临床诊疗中具有重要意义。目的探索骨髓微环境中CXC趋化因子受体1/2(CXC chemokine receptor 1/2,CXCR1/2)在AL患者骨髓单个核细胞中的表达水平及其与AL患者临床特征、疗效及预后的关系,为寻找AL的治疗靶点和病情监测提供新方向。方法收集2018年11月-2020年12月福建医科大学附属协和医院86例初诊(new-diagnosed,ND)AL患者骨髓标本同时收集26例健康者标本,其中男性17例,女性9例,中位年龄36.5(范围:23~49)岁。采用qRT-PCR技术检测两组人群骨髓单个核细胞中CXCR1/2表达。以CXCR1/2中位表达水平(Expressionmedian)作为界值,将ND-AL患者分为CXCR1/2高表达组和低表达组,分析不同CXCR1/2表达水平与AL患者临床特征及指标之间的关系和临床意义。结果86例ND-AL患者中,包括29例急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)患者和57例急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者。AL组中CXCR1[Md(IQR):0.691(0.176~2.14)vs 0.278(0.088~0.613),P<0.05]、CXCR2相对表达量[Md(IQR):1.938(0.729~3.681)vs 0.419(0.079~1.268),P<0.01]均高于健康对照组,AML组与ALL组的CXCR1/2相对表达量差异无统计学意义(P>0.05);CXCR1/2的高表达与AL不良临床特征和指标有关(P<0.05),易出现髓外浸润、复发难治等不良结局。结论AL患者的CXCR1/2表达上调,其对于AL的病情监测有一定的参考价值。

NapA蛋白诱导巨噬细胞分泌趋化因子单核细胞趋化蛋白1和白细胞介素8的机制

目的:研究幽门螺杆菌NapA蛋白诱导巨噬细胞分泌趋化因子单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)和白细胞介素8(interleukin-8,IL-8)的机制。方法:利用NapA蛋白处理巨噬细胞,然后使用ELISA法检测上清中MCP-1和IL-8的表达量。使用C29、ST2825、SB203580、SP600125以及PDTC和巨噬细胞预先共孵育1 h,分别抑制Toll样受体2(toll-like receptors 2,TLR2)、髓样分化因子(myeloid differentiation factor 88,MyD88)、核糖核酸酶p蛋白亚基p38(ribonuclease p-protein subunit p38,p38)、应激活化蛋白激酶(c-Jun N-terminal kinase,c-Jun)和核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)的活性,然后再加入NapA蛋白孵育4 h,收集上清并检查其中MCP-1和IL-8的表达量。结果:NapA蛋白刺激巨噬细胞后,MCP-1和IL-8的表达量明显高于未处理组。利用抑制剂C29抑制TLR2的活性,NapA蛋白诱导的MCP-1和IL-8表达量降低。使用ST2825、PDTC以及SB203580分别抑制MyD88、NF-κB以及p38的活性,能够降低NapA蛋白诱导巨噬细胞分泌MCP-1和IL-8的能力,但是抑制c-Jun不影响NapA蛋白诱导巨噬细胞分泌MCP-1和IL-8。结论:幽门螺杆菌NapA蛋白通过TLR2/MyD88/NF-κB通路诱导巨噬细胞分泌MCP-1和IL-8。

骨髓微环境中CXC趋化因子配体8介导急性髓系白血病发生、发展的调控机制与临床意义

目的:通过检测不同病情阶段急性髓系白血病(AML)患者CXC趋化因子配体8(CXCL8)的水平变化,分析其与AML患者临床病情及预后的关联性,探索骨髓微环境中CXCL8对白血病发生、发展及恶性生物学行为的调控机制,为AML的基础研究和临床诊治提供借鉴与参考。方法:收集不同病情阶段AML患者骨髓标本,采用ELISA检测CXCL8含量;利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测不同AML细胞系中CXCL8特异性受体CXCR1/2表达情况;选取U937细胞为AML疾病模型,给予不同浓度外源性rCXCL8干预U937细胞,观察细胞形态学变化,并利用CCK-8法检测细胞增殖,qRT-PCR检测CXCR1/2表达变化;将初诊AML患者BM-MSC与U937细胞共培养,ELISA检测共培养体系CXCL8变化差异;Annexin V/PI双染流式细胞术分别检测rCXCL8、anti-CXCL8对U937细胞凋亡的影响,Western blot揭示其间伴随的分子机制。结果:初诊及复发AML患者CXCL8水平显著高于健康者(P<0.05),复发阶段CXCL8水平显著高于其他病情阶段(P<0.01),而与健康者相比,CR阶段且无感染的AML患者CXCL8水平差异无统计学意义(P>0.05)。BM-MSC与U937细胞共培养体系中CXCL8含量及其共培养体系下U937细胞CXCL8 mRNA水平均显著高于未加入BM-MSC的单培养Mono组(P<0.05)。利用rCXCL8干预U937细胞可通过上调Bcl-2表达并下调Bax表达促进细胞增殖,并上调CXCL8特异性受体CXCR1/2表达。通过拮抗CXCL8(anti-CXCL8)后,上调Bax表达并下调Bcl-2表达同时抑制ERK1/2信号通路活化水平诱发U937细胞凋亡。结论:CXCL8与AML病情、预后转归密切相关,是AML患者疾病进展、预后评估的有效监测指标。骨髓微环境中CXCL8是介导白血病细胞恶性增殖、免疫逃逸的重要趋化因子,通过拮抗CXCL8可诱导U937细胞发生凋亡,其机制可能与Bcl-2家族蛋白表达变化、抑制ERK1/2信号通路活化水平有关。

以C-C基序趋化因子配体2(CCL2)为受体挖掘治疗新型冠状病毒肺炎(COVID-19)潜在中药单体化合物

目的:C-C基序趋化因子配体2(CCL2)为受体探索治疗新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的中药单体化合物及作用机制。方法:以“C-C motif chemokine 2”为检索词在中药系统药理学分析平台(TCMSP)检索作用于CCL2受体的中药单体化合物,并收集其作用靶点。在GeneCards及OMIM数据库中以“fever”“cough”“pneumonia”“coronavirus”为检索词收集相应靶点,并添加“木瓜样蛋白酶(PLP)”“树突状细胞特异性细胞间黏附分子-3结合非整合素因子(DC-SIGN)”,合并作为COVID-19相关靶点。UniProt数据库标化靶点基因名,取中药单体化合物靶点与疾病靶点的交集。运行Cytoscape软件构建中药单体化合物-交集靶点网络,用交集靶点通过STRING数据库及Cytoscape软件构建蛋白互作(PPI)网络;借DAVID数据库进行GO功能富集、KEGG通路富集,而预测中药单体化合物治疗COVID-19的作用机制。然后将所有中药单体化合物与CCL2、新型冠状病毒(SARS-CoV-2)3CL水解酶和血管紧张素转化酶Ⅱ(ACE2)进行分子对接。结果:中药单体成分-靶点网络中包含单体成分2个,交集靶点153个,PPI网络分析显示关键靶点涉及AKT1、IL6、VEGFA等。GO功能富集所得GO条目115个,其中涉及CCL2条目有10个,KEGG通路富集所得信号通路97条,其中涉及CCL2有9条。分子对接结果显示槲皮素、汉黄芩素与CCL2、SARS-CoV-23CL水解酶和ACE2的亲和力与推荐化药相近。结论:槲皮素、汉黄芩素可与CCL2结合作用于肿瘤坏死因子信号通路、查加斯病(美国锥虫病)、甲型流感信号通路,从而可能发挥抗COVID-19的作用。

神经干细胞移植对脑缺血再灌注损伤大鼠CXC趋化因子1和2及其趋化因子受体2表达的影响

目的探讨神经干细胞(NSCs)移植对大鼠脑缺血再灌注损伤梗死区CXC趋化因子1(CXCL1)和CXC趋化因子2(CXCL2)及CXC趋化因子受体2(CXCR2)表达的影响。方法线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血2 h再灌注模型,实验动物随机分为假手术组、模型组和NSCs组。NSCs组尾静脉注射PKH26标志的NSCs细胞悬液,缺血72 h后行神经功能损害评分(NSS),2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)法检测脑梗死体积,苏木精-伊红(HE)染色观察梗死区病理变化,Western blot和实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测梗死区CXCL1、CXCL2、CXCR2蛋白和mRNA表达。结果脑缺血后72 h,模型组和NSCs组NSS评分和脑梗死体积高于假手术组(P<0.05);NSCs组NSS评分和脑梗死体积低于模型组(P<0.05)。HE染色可见模型组梗死区大量炎性细胞浸润,而NSCs组梗死区炎性细胞浸润较少;NSCs组在梗死区有红色荧光信号表达,而假手术组和模型组未发现红色荧光信号。模型组CXCL1、CXCL2、CX-CR2蛋白和mRNA相对表达高于假手术组(P<0.05);NSCs组CXCL1、CXCL2、CXCR2蛋白和mRNA相对表达低于模型组(P<0.05)。结论 NSCs移植具有促进脑缺血损伤神经功能恢复和减少脑梗死体积的作用,其机制可能与其下调炎症趋化因子CXCL1、CXCL2及其受体CXCR2表达、进而抑制炎症反应有关。

高同型半胱氨酸血症大鼠主动脉平滑肌细胞中巨噬细胞炎性蛋白1α和C-C型趋化因子受体1的表达

目的通过检测高同型半胱氨酸血症大鼠胸主动脉平滑肌细胞中巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α)和C-C型趋化因子受体1(CCR1)蛋白的表达,探讨高同型半胱氨酸血症引起动脉粥样硬化(AS)的机制。方法8周龄SD雄性大鼠16只随机分为对照组和高蛋氨酸组,每组8只。对照组给予普通饲料喂养,高蛋氨酸组在普通饲料喂养的基础上加质量分数2%的蛋氨酸。喂养8周后处死大鼠,心脏采血,取胸主动脉。肉眼及光镜下观察血管形态学改变,采用高效液相色谱法测定血浆同型半胱氨酸(Hcy)浓度,S-P免疫组织化学染色法检测MIP-1α和CCR1的表达。结果(1)血浆Hcy浓度:高蛋氨酸组大鼠血浆Hcy浓度(45.74±9.65)mmol.L-1显著高于对照组(7.38±2.28)mmol.L-1(P<0.01)。(2)形态学改变:肉眼观可见对照组大鼠胸主动脉内膜光滑,高蛋氨酸组胸主动脉内膜粗糙、隆起;光镜下可见对照组大鼠主动脉内膜内皮细胞排列整齐,高蛋氨酸组内膜细胞排列紊乱,脂质沉积。(3)免疫组织化学染色结果:MIP-1α和CCR1蛋白的阳性表达表现为细胞质呈棕褐色。MIP-1α和CCR1蛋白在高蛋氨酸组的阳性表达强于对照组,二者在高蛋氨酸组的阳性表达平均灰度值明显低于对照组(P<0.01)。结论高同型半胱氨酸血症可诱导大鼠胸主动脉平滑肌细胞MIP-1α及其受体CCR1的表达,引起血管壁的炎症,导致AS形成。

趋化因子CCL20及其受体CCR6在肺腺癌组织中的表达及与复发转移的关系研究

目的通过观察复发和非复发肺腺癌患者癌组织中CCL20和CCR6的表达情况,探讨CCL20和CCR6在肺腺癌发生发展中的作用。方法选取2009年2月—2011年12月河北省人民医院收治的肺腺癌患者162例,根据随访期间的复发转移情况分为复发组(n=50)和非复发组(n=112)。采用免疫组织化学染色检测CCL20和CCR6的表达;采用实时荧光定量PCR检测CCL20、CCR6 mRNA的表达,采用蛋白质印迹(Western blot)法检测CCL20、CCR6蛋白的表达。结果 CCL20在肺腺癌组织中主要表达于细胞膜和细胞质,CCR6在肺腺癌组织中主要表达于细胞质,二者在肺腺癌癌旁组织中均无明显表达。复发组CCL20、CCR6高表达率〔CCL20:38(76.0%)比9(8.0%);CCR6:33(66.0%)比7(6.3%)〕和染色指数〔CCL20:(150.4±10.2)比(62.5±8.5);CCR6:(134.4±11.3)比(58.0±9.5)〕均高于非复发组,差异有统计学意义(P<0.05)。复发组CCL20、CCR6 mRNA表达较非复发组分别增加82.3%、56.4%,CCL20、CCR6蛋白表达较非复发组分别增加292.0%、188.0%,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 CCL20和CCR6在肺腺癌组织中呈高表达,且与肺腺癌的发生发展相关。

晚期蛋白质氧化产物(AOPP)对血液透析患者单核细胞趋化因子受体CXCR2的影响

目的 探讨不同透析膜对维持性血液透析 (MHD)患者晚期蛋白质氧化产物 (AOPP)及单核细胞趋化因子受体CXCR2的影响。方法 通过高效液相色谱法和流式细胞术测定长期采用铜仿膜 (CU)和聚砜膜 (PSU)透析患者外周血晚期蛋白质氧化产物 (AOPP)及单核细胞趋化因子受体CXCR2表达。结果 MHD患者血浆AOPP水平明显增加 (P <0 .0 5) ,其中CU组为 (81.7± 7.1)ng/ml;PSU组为 (64.5± 7.3 )ng/ml,与正常对照组 (49.3± 6.1)ng/ml相比均有显著差异 (P <0 .0 1,P <0 .0 5) ;而PSU组与CU组相比 ,外周血AOPP水平明显下降 (P <0 .0 5)。CXCR2在正常人外周血单核细胞中无表达 ,而在尿毒症未透析组及血液透析组均有表达 ,其中未透析组表达较低 ,而血液透析组表达较高 ,CU膜血液透析组较PSU血液透析组表达要高 (P <0 .0 5)。经相关分析结果显示 :CU组与PSU组内AOPP水平与CXCR2表达均呈现良好的相关性 (r=0 .640 9与 0 .583 ,P <0 .0 5)。结论 血液透析通过血液 -透析膜间相互反应 ,导致细胞内环境处于“氧化应激”状态 ,外周血AOPP水平明显增高 ;而增高的AOPP水平可活化单核细胞 ,表达CXCR2增多。然而不同透析膜对MHD患者AOPP及单核细胞趋化因子受体CXCR2的影响有所不同 。

大鼠脊髓钝挫伤后单核细胞趋化蛋白-1与趋化因子受体2的表达变化

目的:探讨单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和趋化因子受体2(CCR2)在脊髓钝挫伤(SCC)大鼠的表达及其对运动功能和感觉功能的影响。方法:SD大鼠随机分为损伤(SCC组)术后12h、3d、7d、14d组及假手术组共5组。Allen打击法建立SCC模型,进行BBB评分,光热尾痛法测定大鼠温痛觉潜伏期,RT-PCR检测CCR2和MCP-1基因相对表达量,免疫组织化学观察MCP-1和CCR2在脊髓前角和后角的表达。结果:SCC后BBB评分降低,7d与14dBBB评分明显增高。SCC后3、7d温痛觉潜伏期较假手术组缩短。SCC后CCR2mRNA在12h和3d时表达量增高;随后在7、14dCCR2mRNA降低。MCP-1mRNA的表达量在12h、3d、7d增高,14dMCP-1mRNA下降。MCP-1和CCR2在脊髓前角主要表达在神经元中,在脊髓后角主要表达于神经胶质细胞和神经元。结论:MCP-1和CCR2可能作为重要的因子参与脊髓损伤早期的继发性损伤,导致大鼠运动功能和感觉功能障碍。