条锈菌诱导的小麦C3HC4型锌指蛋白基因的克隆及其特征分析

应用电子克隆和RT-PCR方法,从小麦叶片中首次分离出1个条锈菌诱导的编码C3HC4型锌指蛋白基因的cDNA序列,暂被命名为TaZFP1。TaZFP1包含一个完整的849 bp的开放阅读框,编码282个氨基酸,具有C3HC4保守结构域;小麦TaZFP1氨基酸序列与水稻OsZFP1相似性达89%,与玉米ZmZFP1相似性达81%。TaZFP1在小麦根、茎、叶组织中表达量基本一致。在小麦与条锈菌的亲和、非亲和互作中,TaZFP1基因均受条锈菌诱导高水平表达,且非亲和组合表达量高于亲和组合,表明TaZFP1可能参与小麦对条锈菌的防御反应。

青蒿鳖甲汤对阴虚内热型系统性红斑狼疮患者血清免疫球蛋白和补体C3、C4的影响

目的探讨中药青蒿鳖甲汤治疗阴虚内热型系统性红斑狼疮(SLE)的疗效,并观察其对血清免疫球蛋白和补体C 3、C 4水平的影响。方法选取本院风湿免疫科收治的76例SLE患者,采用随机数表法分为对照组和观察组,各38例。对照组给予常规西医治疗,观察组给予常规西药联合中药青蒿鳖甲汤治疗,均持续治疗3个月。检测2组治疗前后血清免疫球蛋白(IgA、IgG、IgM),补体C 3、C 4水平,SLE活动度评分(SLEDAI)和中医证候评分变化,并评估2组临床疗效。结果2组治疗后血清IgA、IgG、IgM均较治疗前下降,补体C 3、C 4水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,观察组治疗后血清IgA、IgG、IgM显著降低,补体C 3、C 4水平显著升高(P<0.05);2组治疗后SLEDAI评分均较治疗前显著下降(P<0.05),且观察组显著低于对照组(P<0.05)。治疗后,对照组乏力、睡眠差、五心烦热、口干、脱发、月经不调、脉细数评分与治疗前相比,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,观察组各中医症候评分均较治疗前和对照组显著降低(P<0.05)。观察组治疗总有效率显著高于对照组(P<0.05)。结论常规西医治疗基础上联合青蒿鳖甲汤能有效降低阴虚内热型SLE患者血清免疫球蛋白水平,提高补体C 3、C 4水平。

C3H1型锌指结合蛋白36介导的星形胶质细胞活化在肌萎缩侧索硬化症运动神经元退变中的作用

目的探讨C3H1型锌指结合蛋白36(ZFP36L1)介导的星形胶质细胞活化在肌萎缩侧索硬化症(ALS)运动神经元退变中的作用。方法以铜锌超氧化物歧化酶1(SOD1)-G93A转基因小鼠作为动物模型,同窝野生型小鼠作为对照(突变型及野生型小鼠各时间点分别取13只小鼠);Real-time PCR、Western blotting检测小鼠发病早期、中期及晚期脊髓内ZFP36L1 mRNA及蛋白变化,免疫荧光染色检测ZFP36L1在脊髓内的表达及分布;出生后1~2 d新生小鼠15只,建立SOD1-G93A突变型原代星形胶质细胞模型,Real-time PCR、Western blotting检测星形胶质细胞内ZFP36L1 mRNA及蛋白水平的变化,si-ZFP36L1转染SOD1-G93A突变型原代星形胶质细胞,Western blotting检测转染效率,Western blotting及ELISA检测转染后星形胶质细胞分泌炎性因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素18(IL-18)变化;沉默SOD1-G93A突变型原代星形胶质细胞内ZFP36L1后,与SOD1-G93A突变型NSC34细胞共培养,通过5’-乙炔基-2’-脱氧尿苷(EdU)实验和观察增殖细胞核抗原(PCNA)的水平明确ZFP36L1对NSC34细胞增殖的影响,通过TUNEL实验及观察剪切Caspase-3(cleaved-Caspase-3)的水平明确ZFP36L1对NSC34细胞凋亡的影响,以转染空白小干扰RNA(siRNA)作为对照组。结果与野生型小鼠相比,ZFP36L1在SOD1-G93A转基因小鼠脊髓组织内mRNA及蛋白水平均下调,在野生型小鼠脊髓组织内,ZFP36L1主要与β-微管蛋白Ⅲ(β-tubulinⅢ)阳性的神经元共表达,而SOD1-G93A突变型小鼠的脊髓组织内,ZFP36L1在神经元内表达减弱,与胶质纤维酸性蛋白(GFAP)标记的星形胶质细胞共表达明显增加;SOD1-G93A突变型原代星形胶质细胞内ZFP36L1表达增加,si-ZFP36L1能明显降低SOD1-G93A突变型原代星形胶质细胞内ZFP36L1水平;沉默ZFP36L1后星形胶质细胞分泌炎性因子TNF-α、IL-18明显降低。此外,沉默ZFP36L1后,SOD1-G93A突变型原代星形胶质细胞能显著增强NSC34细胞增殖活性,抑制NSC34细胞凋亡。结论在ALS发病过程中,星形胶质细胞被激活,ZFP36L1通过星形胶质细胞分泌的炎性因子促进了ALS运动神经元的退变。

老年2型糖尿病患者尿白蛋白/肌酐比值与血清补体C3、C4的相关性分析

目的:研究2型糖尿病患者尿白蛋白/肌酐比值(ACR)与血清补体C3、C4关系。方法:选取2019年6月-2020年6月本院收治的107例2型糖尿病患者为研究对象,按照UAER情况分为单纯糖尿病组(A组:UAER<20 μg/min)30例、早期糖尿病肾病组(B组:20 μg/min≤UAER≤200 μg/min)46例、糖尿病肾病组(C组:UAER>200 μg/min)31例。另选择同期本院收治的老年健康体检者37例为对照组。比较各组的各项生化指标,分析ACR与各项指标的相关性。结果:各组生化指标水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。A、B、C组的SBP、DBP、FPG、HbA1c、TC、TG、LDL-C、ACR、C4、CRP水平均明显高于对照组,C3、HDL-C水平明显低于对照组(P<0.05);B、C组的SBP、DBP、FPG、ACR、CRP水平均明显高于A组,C3水平明显低于A组(P<0.05);C组SBP、ACR、CRP水平均明显高于B组,C3水平均明显低于B组(P<0.05)。经Pearson相关性分析,老年2型糖尿病患者ACR与SBP、CRP均呈正相关,与血清C3呈负相关(P<0.05)。结论:2型糖尿病患者ACR与血清补体C3存在密切相关,与补体C4无相关性,其中补体C3可能参与了糖尿病肾病的发生、发展过程。

2型糖尿病患者甘露聚糖结合凝集素和补体C_3、C_4、备解素的表达及其意义

目的探讨2型糖尿病患者甘露聚糖结合凝集素(MBL)、C3、C4和备解素(Pf)水平的变化及意义。方法2型糖尿病患者40例,正常对照组24例。测定循环血清中MBL、C3、C4和Pf水平。同时测定糖脂代谢指标及尿微量白蛋白排泄率。结果2型糖尿病患者血清中MBL和Pf水平无明显变化,C3和C4水平增高。糖化血红蛋白和甘油三酯(TG)是MBL的独立预测因素,TG、体重指数(BM I)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)进入C3回归方程,TG是C4的独立预测因素。结论C3、C4水平与肥胖及脂肪代谢异常有关,MBL与2型糖尿病肾脏并发症无直接关系。

水稻OsC2HC-1锌指蛋白基因的表达分析及对盐碱逆境的响应

迄今,已从水稻中发现多种参与非生物胁迫反应的锌指蛋白基因,多为C2H2型,对于水稻C2HC型锌指蛋白基因的研究少有报道。本研究用RT-PCR技术从日本晴cDNA中克隆已知基因(AK103785)全长1019bp,编码339个氨基酸。经BLAST比对,确定其含有一个C2HC型锌指结构域,命名为OsC2HC-1,将OsC2HC-1::GFP融合导入酵母细胞和洋葱表皮细胞,亚细胞定位表明OsC2HC-1在细胞核中。实时荧光定量PCR检测80mmol/LNaCl,30mmol/LNaHCO3胁迫处理水稻叶和根中OsC2HC-1基因转录表达受其诱导显著增加。小量诱导优化pGEX-6p-3::OsC2HC-1在宿主菌BL21(DE3)中原核蛋白表达条件,表明诱导时间4h,28℃为最优条件,融合蛋白大量诱导纯化得到以包涵体的形式稳定存在,约为63kD的融合蛋白,为抗体的制作准备了条件。35S启动下过表达OsC2HC-1::GFP基因拟南芥萌发后期抗性分析实验表明,在125mmol/LNaCl,1mmol/LNaHCO3,3mmol/LNaHCO3胁迫下,过表达OsC2HC-1::GFP的拟南芥比野生型优势生长,表现出较强的盐碱抗性和抗氧化性,说明OsC2HC-1基因与抗盐碱性及抗氧化性有关。

血清Chemerin、CTRP3、RBP4在肥胖2型糖尿病患者中的变化及意义

目的探讨血清趋化素(Chemerin)、C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白3(CTRP3)、视黄醇结合蛋白4(RBP4)在肥胖2型糖尿病患者中的变化及意义。方法选择2015年2月至2017年2月该院接诊44例2型糖尿病肥胖组[体质量指数(BMI)≥28kg/m2]和36例2型糖尿病非肥胖组(BMI<28kg/m2),并选择同期在该院接受体检的健康者40例作为对照组。分析肥胖2型糖尿病患者中血清Chemerin、CTRP3、RBP4的变化及意义。结果 2型糖尿病肥胖组血清Chemerin、RBP4明显高于非肥胖组和对照组,血清CTRP3明显低于非肥胖组和对照组(P<0.05);治疗后,2型糖尿病肥胖组治疗后血清Chemerin、RBP4仍明显高于非肥胖组,血清CTRP3低于仍非肥胖组(P<0.05);BMI是血清Chemerin的独立影响因素,BMI、TG是血清CTRP3的独立影响因素,年龄、BMI、TG是血清RBP4的独立影响因素(P<0.05)。结论血清Chemerin、CTRP3、RBP4在肥胖2型糖尿病的发生、发展中起着重要作用,该研究可为肥胖2型糖尿病的药物干预提供新的治疗靶点。

hsCRP和补体C3及C4与糖尿病微血管并发症的相关性研究

目的探讨2型糖尿病(T2DM)患者超敏C反应蛋白(hsCRP)和补体C3及C4水平与糖尿病微血管并发症(DMC的相关性。方法以124例T2DM患者为研究对象,根据有无微血管并发症分为非DMC组与DMC组,比较组间血清hsCRP和C3及C4水平差异。结果 DMC组hsCRP和补体C3及C4水平显著高于非DMC组(P <0.05)。采用协方差分析模型,排除其他影响因素后,DMC组hsCRP和C3及C4水平较非并发症组高(P <0.05);校正炎性因子之间的影响后,DMC组hsCRP、C4水平较非并发症组高(P <0.05)。结论监测T2DM患者hsCRP、C3及C4水平,有助于DMC的识别及早期预防;hsCRP和C4是比C3更好的预测DMC的炎性指标。

2型糖尿病血浆ZBED3与HbA1c的相关性研究

目的探讨血浆锌指蛋白3(ZBED3)水平与糖化血红蛋白(HbA1c)的相关性。方法 2013-2016年选取278例研究对象,测定不同糖耐量人群血浆ZBED3表达水平,分析与HbA1c及其他代谢指标关系。结果随着ZBED3浓度升高HbA1c呈升高的趋势;ZBED3是影响HbA1c的独立危险因素;ZBED3在口服葡萄糖试验后呈现先增高后降低的过程。结论 ZBED3在2型糖尿病和糖耐量受损患者中表达升高,可能与参与血糖的调节并受胰岛素影响。

ZFP36L1通过下调细胞周期蛋白D1抑制舌癌细胞增殖

C3H1型的锌指蛋白36 (zinc finger protein 36,C3H type-like 1,ZFP36L1)是一种高度保守且具有CCCH型RNA结合结构域的蛋白质。近年来,ZFP36L1在多种肿瘤中的作用被报道,但是在舌癌中的表达型和作用机制尚不清楚。Western印记结合荧光定量PCR检测发现,ZFP36L1在舌癌细胞中的表达明显低于人永生化表皮细胞Hacat。在相对低表达ZFP36L1的舌癌细胞SCC15和SCC25中,稳定过表达ZFP36L1,细胞计数实验发现,SCC15细胞的数目由(4.768±0.09225)×10~3个降低到(3.089±0.09745)×10~3个,SCC25细胞的数目由(6.274±0.01311)×10~3个降低到(4.037±0.01173)×10~3个;平板克隆实验提示,SCC15和SCC25细胞克隆数目是对照组的0.67倍,0.68倍,0.7倍和0.59倍,0.57倍,0.59倍;过表达ZFP36L1组G_1期的SCC15和SCC25细胞分别由61.82±0.8933%增加到88.72%±0.8378,由56.31%±1.029增加到71.7%±0.9303;而S期的细胞由25.21%±0.9865减少到11.31%±0.6567,由28.58%±0.8182减少到18.61%±0.6798。过表达ZFP36L1能明显下调SCC15和SCC25细胞中细胞周期蛋白D1(cyclinD1)的蛋白质水平。过表达ZFP36L1组的SCC15和SCC25细胞中,细胞周期蛋白D1 mRNA的表达量分别是对照组的0.217倍和0.175倍。在舌癌细胞中,上调细胞周期蛋白D1的表达水平可消除由过表达ZFP36L1引起的细胞增殖能力降低。总之,ZFP36L1在舌癌中呈低表达;可通过下调细胞周期蛋白D1的表达,抑制舌癌细胞增殖。

MTSS1和RBCK1在卵巢癌组织中的表达及其与临床病理特征和预后的关系

目的 回顾性探讨卵巢癌组织中肿瘤转移抑制基因1(MTSS1)、ranbp2型和c3hc4型锌指1(RBCK1)表达、患者临床病理特征与预后的关系。方法 回顾性收集2021年8月至2023年8月期间青岛大学附属青岛市海慈医院(青岛市中医医院)收治的120例卵巢癌患者在术中切除的卵巢癌癌组织及其癌旁组织标本。行免疫组织化学法检测卵巢癌组织和癌旁组织中MTSS1、RBCK1的表达,并收集患者的临床资料[年龄、分化程度、淋巴结转移、国际妇产科学联合会(FIGO)分期、病理类型、腹水];采用Spearman相关性分析卵巢癌组织中MTSS1与RBCK1表达的相关性;采用Kaplan-Meier法分析卵巢癌组织MTSS1、RBCK1表达与患者预后的关系;采用Cox回归分析卵巢癌患者预后的影响因素。结果 卵巢癌组织MTSS1、RBCK1阳性表达率分别为26.67%、23.33%,低于癌旁组织MTSS1、RBCK1阳性表达率(62.50%、74.17%),差异均有统计学意义(P<0.05)。临床资料比较显示,MTSS1、RBCK1表达水平与FIGO分期、淋巴结转移及分化程度有关(P<0.05);Spearman相关分析卵巢癌组织中MTSS1和RBCK1的之间表达呈正相关(r=0.812,P<0.05)。生存分析结果显示,卵巢癌组织MTSS1、RBCK1阳性表达患者5年生存率为84.37%、82.14%,均高于MTSS1、RBCK1阴性表达患者(55.68%、57.60%),差异均有统计学意义(P<0.05)。低分化程度、FIGO分期Ⅲ+Ⅳ期、淋巴结转移、RBCK1阴性表达和MTSS1阴性表达均是卵巢癌患者死亡的危险因素(P<0.05)。结论 MTSS1、RBCK1在卵巢癌患者中低表达,且两者表达水平与淋巴结转移、FIGO分期、分化程度有关,二者可能是影响卵巢癌患者预后的特异性指标。

枳抗逆基因PtrZPT2-3克隆与表达分析

【目的】分离和克隆枳双锌指蛋白基因PtrZPT2-3(GenBank登录号为KF279693),了解其在枳响应环境胁迫和逆境相关激素诱导的表达情况。【方法】以枳[Poncirus trifoliata(L.)Raf]实生苗为试验材料,对植株进行低温、干旱、高盐、ABA处理,使用电子克隆和RT-PCR的方法从枳中克隆到一个新的C2H2型锌指蛋白基因,命名为PtrZPT2-3,并研究该基因在4种胁迫处理下的表达模式。【结果】PtrZPT2-3的cDNA序列长930 bp,含有534 bp的开放阅读框(ORF),编码178个氨基酸残基的蛋白,蛋白推测分子质量为19.54 kDa,蛋白的等电点是8.91。PtrZPT2-3包含2个C2H2型锌指结构域,在其C-末端含有一个转录抑制结构域(DLN)。系统发生分析结果表明,PtrZPT2-3与植物中已经发现的双锌指蛋白ZPT2-14、JrZFP2、PtaZFP2、ZPT2-12、ZPT2-13亲缘关系较近。半定量表达分析结果表明,枳PtrZPT2-3基因在干旱和ABA胁迫下的根、茎、叶中表达上调。【结论】枳PtrZPT2-3是C2H2型锌指蛋白家族的新成员,可能在柑橘响应干旱和ABA胁迫的过程中起了重要的作用。

嗜热Ⅱ型内含子Tel3c/4c-RT结构域活性位点分析

【背景】嗜热Ⅱ型内含子是一类由内含子RNA和内含子编码蛋白(intron encoded protein,IEP)组成且在高温条件下能够在染色体上高频移动的反转录转座子,目前已被开发为高效基因打靶工具Thermotargetron,阐明其活性催化位点,对深入研究其“归巢”机制及开发新型遗传工具具有重要意义。【目的】筛选嗜热Ⅱ型内含子Tel3c/4c-RT结构域关键活性位点,并获得失活反转录功能的内含子编码蛋白突变体。【方法】先利用生物信息学技术分析并筛选可能影响Tel3c/4c-RT反转录功能的关键氨基酸位点;然后对筛选到的关键氨基酸位点进行定点突变,并以Thermotargetron质粒为基础构建失活反转录功能的突变型嗜热Ⅱ型内含子打靶系统;最后以大肠杆菌lacZ基因为例,通过蓝白斑计数分析突变型Thermotargetron系统的打靶效率,体内验证Tel3c/4c-RT结构域关键活性位点突变对嗜热Ⅱ型内含子打靶效率的影响。【结果】共筛选到15个可能影响反转录活性的氨基酸位点,包括D194、I195、S196、G197、C198、F199、Q241、G242、R274、Y275、A276、D277、D278、L324和G325。其中,当G242和R274这2个位点突变后,嗜热Ⅱ型内含子Tel3c/4c的“归巢”效率几乎完全丧失,表明G242和R274是影响嗜热Ⅱ型内含子Tel3c/4c-RT结构域反转录功能的最核心催化位点。【结论】筛选并获得影响嗜热Ⅱ型内含子Tel3c/4c-RT结构域反转录功能的关键催化位点,为深入研究嗜热Ⅱ型内含子的“归巢”机制及其功能应用开发奠定了良好的基础。

miR-200c的分子生物学研究进展

微小核糖核酸(microRNA,miRNA)是在真核生物中发现的一类内源性的、具有调控功能的非编码RNA,其中miR-200家族成员被发现广泛参与了生物体的多种生理病理过程,特别是miR-200c被证实与肿瘤的上皮间质转化过程密切相关,而且对多种肿瘤的研究表明,miR-200c的分子生物学地位突出,参与了包括TGF-β信号通路、Notch信号通路、MAPK信号通路、TLR4/NF-κB信号通路、PI3K-AKT信号通路等多个经典的细胞内信号转导机制,同时还参与构成了miR-200c/锌指E盒结分蛋白(ZEB)双向负反馈回路,对肿瘤细胞的增殖、分化、凋亡、侵袭等过程有着非常大的影响。细胞间的增殖、凋亡等机制存在一定的共性,本文对miR-200c的分子生物学研究进展作一综述,希望通过对miR-200c分子生物学的综合认识,能为miR-200c向其他学科的拓展研究提供一定的启发。

蒲公英根提取物通过下调Nanos1表达抑制三阴性乳腺癌细胞恶性表型的研究

目的:探究蒲公英根提取物对三阴性乳腺癌(Triple-negative breast cancer, TNBC)细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响及其作用机制。方法:采用CCK-8法检测蒲公英根提取物对MDA-MB-231人乳腺癌细胞及4T1小鼠乳腺癌细胞增殖的抑制作用。通过划痕实验与Transwell侵袭实验检测蒲公英根提取物对两种细胞系迁移及侵袭能力的影响。利用RNA-seq测序分析蒲公英提取物对TNBC转录组的影响,并对Nanos C2HC型锌指蛋白1(Nanos C2HC-type zinc finger 1,Nanos1)的表达及患者预后进行分析。结果:与空白对照组相比,蒲公英根提取物组细胞增殖能力降低,迁移距离降低,侵袭数量下降(P<0.01);蒲公英根提取物组细胞Nanos1表达下调(P<0.01),且Nanos1的低表达与乳腺癌患者生存时间呈正相关(P<0.01)。结论:蒲公英根提取物通过下调Nanos1的表达抑制TNBC细胞增殖、迁移及侵袭能力。

整合文献计量学、血清药物化学及网络药理学辨识经典名方化肝煎关键质量属性研究

目的基于有效性初步辨识化肝煎治疗胃炎的关键质量属性。方法通过文献计量学分析探析化肝煎主要临床适应证;采用UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS技术对化肝煎体外化学成分及体内入血移行成分进行分析鉴定;使用Cytoscape软件,构建化肝煎"入血成分-胃炎靶点-通路"网络图,通过拓扑学分析,得到网络中与主要临床适应证密切相关的核心功效成分。结合文献数据支撑,确定化肝煎的关键质量属性。结果化肝煎临床上主要用于治疗各种类型的胃炎。体外共鉴定出化肝煎中泽泻醇B、贝母辛、圣草次苷、苯甲酰氧化芍药苷等75个成分,体内共检测到16个化肝煎入血原型成分,分别为莽草酸、丹皮酚、芍药苷、牡丹皮苷E、西贝母碱、贝母素甲、贝母素乙、贝母辛、对羟基苯甲酸、香风草苷、香草乙酮、6-去甲氧基桔皮素、甜橙黄酮、川陈皮素、3,5,6,7,8,3,,4’-七甲氧基黄酮、桔皮素。化肝煎治疗胃炎涉及AKT1、TNF、VEGFA、MAPK1、EGFR等95个潜在靶点,可能通过调控C型凝集素受体、PI3K-Akt、白细胞介素-17、肿瘤坏死因子等信号通路发挥治疗作用。甜橙黄酮、3,5,6,7,8,3’,4’-七甲氧基黄酮、川陈皮素、丹皮酚、芍药苷作为化肝煎的关键质量属性。结论辨识的化肝煎关键质量属性可为经典名方复方制剂研发提供依据。