推拿对CCI模型大鼠海马CaMK Ⅱ和SYP蛋白表达的影响

目的:研究推拿对CCI模型大鼠海马突触相关蛋白CaMKⅡ和SYP表达的影响。方法:32只SD大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组和推拿组。在CCI术后第4天介入推拿按揉法干预,持续14天。采用机械足反射阈值(PWT)观察大鼠疼痛行为的变化,HE染色观察左侧海马神经元形态与结构,免疫荧光染色与Western Blot分别观察推拿对CCI大鼠海马CaMKⅡ和SYP蛋白表达的影响。结果:行为学结果显示,模型组大鼠PWT明显降低,推拿可缓解CCI大鼠疼痛(P<0.05);HE染色显示,与空白组及假手术组相比,模型组海马神经元损伤,排列紊乱,结构松散,细胞固化萎缩明显,推拿可在一定程度上减少神经元损伤;免疫荧光染色结果显示,CCI减少大鼠海马CaMKⅡ阳性表达,推拿可增加阳性表达(P<0.05);Western Blot结果显示,CCI大鼠海马SYP蛋白表达降低,推拿可升高SYP蛋白表达(P<0.05)。结论:推拿可减少CCI大鼠海马神经元损伤,推拿镇痛机制可能是通过上调海马CaMKⅡ与SYP表达,改善海马突触可塑性而起效。

CaM/CaMK Ⅱ在脾气虚证大鼠脑肠微环境中的表达及四君子汤干预效应研究

目的:从Ca M信号通路关键基因揭示脾气虚证发生及益气健脾法干预作用机制。方法:脾气虚证大鼠为研究对象,采用实时荧光定量RT-PCR、Western Blot技术检测不同阶段大鼠脑、肠Ca M信号通路关键基因Ca M/Ca MKⅡmRNA和蛋白的动态表达,并分析四君子汤干预效应机制。结果:从大鼠小肠组织看,脾气虚证大鼠相对于正常大鼠Ca M/Ca MKⅡmRNA和蛋白表达升高,经四君子汤治疗后明显降低;从大鼠脑组织看,脾气虚证大鼠相对于正常大鼠Ca M/Ca MKⅡmRNA和蛋白表达降低,经四君子汤治疗后明显升高。结论:脑肠微环境中Ca M信号传导通路关键基因Ca M/Ca MKⅡ的动态表达与脾气虚证形成有关,四君子汤通过影响其表达对脾气虚证起到时相性动态干预。

八肽胆囊收缩素及其受体拮抗剂对吗啡戒断大鼠脑内CaMK Ⅱ蛋白表达的影响

目的观察八肽胆囊收缩素(CCK-8)、CCK-1受体拮抗剂L-364,718及CCK-2受体拮抗剂LY-288,513对吗啡戒断大鼠额叶皮质、海马、纹状体细胞内钙/钙调蛋白依赖性的蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)表达的影响。方法建立吗啡依赖及纳洛酮催促戒断大鼠模型,观察CCK-8、L-364,718及LY-288,513对吗啡依赖大鼠戒断症状的影响;采用Western blot方法检测上述脑区CaMKⅡ蛋白表达的变化。结果①CCK-8、L-364,718及LY-288,513能明显改善吗啡依赖大鼠戒断症状的发生;②与盐水对照组相比,吗啡依赖组大鼠额叶皮质、海马、纹状体细胞内CaM KⅡ蛋白表达明显升高;纳洛酮催促戒断后上述脑区CaM KⅡ蛋白表达较吗啡依赖组均明显降低;③CCK-8、L-364,718及LY-288,513均使吗啡戒断大鼠额叶皮质、海马及纹状体内CaMKⅡ蛋白表达升高。结论 CaMKⅡ参与了吗啡依赖及戒断的形成,CCK-8及其受体拮抗剂抑制吗啡依赖大鼠戒断反应的机制可能与其对相关脑区CaMKⅡ蛋白表达的调节有关。

三七总皂甙对吗啡戒断大鼠海马组织CaMK Ⅱ活性及CaMK Ⅱ α亚基蛋白表达的影响

目的:研究三七总皂甙(Panax notoginseng,PNS)对吗啡戒断大鼠海马组织CaMK Ⅱ活性及CaMK Ⅱα亚基蛋白表达的影响,探讨PNS抑制吗啡戒断症状的作用机制。方法:应用剂量递增法建立大鼠吗啡躯体依赖模型(MOR组),采用腹腔注射(ip)纳洛酮建立催促戒断模型(NAL组),大鼠在给予吗啡的同时,采用3种不同剂量PNS(100、200、400mg·kg-1)进行灌胃(ig)。应用放射酶法测定CaMK Ⅱ活性,Western blot方法检测CaMK Ⅱα亚基蛋白表达。结果:(1)MOR组CaMK Ⅱ活性降低,CaMK Ⅱα亚基蛋白表达升高;(2)NAL组CaMK Ⅱ活性和CaMK Ⅱα亚基蛋白表达均显著升高;(3)PNS可以剂量依赖性地抑制纳洛酮催促戒断所引起CaMK Ⅱ活性和CaMK Ⅱα亚基蛋白的升高。结论:PNS可能通过抑制纳洛酮催促戒断所引起的CaMKⅡ活性和CaMK Ⅱα亚基蛋白表达的升高来缓解大鼠吗啡戒断症状。

骨髓间充质干细胞治疗血管性痴呆大鼠行为学及海马CaM、CaMK Ⅱ表达水平的影响

目的探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stromal cells,BMSCs)侧脑室移植治疗血管性痴呆(vascular dementia,VaD)模型对大鼠行为学及海马钙调蛋白(calmodulin,CaM)、钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ(calcium/calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)表达的影响。方法以全骨髓贴壁法培养大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stromal cells,BMSCs);流式细胞仪对所培养BMSCs进行表面抗原鉴定;成纤维生长因子(basic fibroblast growth factorbfic,b FGF)和丁羟基茴香醚(beta hydroxy acid,BHA)诱导BMSCs分化为神经元细胞,并对诱导后的细胞,进行神经元特异性的免疫组化鉴定;采用改良四血管法制备Va D模型,设立对照组,造模4 w后将VaD大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、BMSCs治疗组。观察4 w后实验大鼠的行为学表现及应用Real-time PCR检测海马CaM、CaMKⅡ表达水平。结果 BMSCs治疗组行为学表现有明显改善。其海马CaM、CaMKⅡmRNA表达比模型组降低(P<0.05)。结论侧脑室移植BMSCs显著改善VaD大鼠行为学表现,并使其海马CaM、CaMKⅡ表达降低。

酸枣仁汤对抑郁模型大鼠海马CaMK Ⅱ基因表达影响的实验研究

目的:观察酸枣仁汤对于抑郁模型大鼠海马部位的CaMKⅡ基因表达的影响。方法:复制慢性轻度不可预见性应激抑郁大鼠模型,采用酸枣仁汤、氟西汀治疗抑郁模型大鼠,测定其体质量、糖水消耗、旷场试验行为活动前后得分变化情况;并采用Western-blot法检测空白组、模型组、西药组和中药组大鼠海马中CaMKⅡ基因的表达情况,RT-PCR法检测大鼠海马内CaMKⅡ基因的mRNA表达水平。结果:抑郁模型大鼠体质量增长速度减慢,糖水消耗减少,海马内CaMKⅡ基因表达减少;中药高剂量组CaMKⅡ基因表达上调显著。结论:通过空白组、模型组、西药组的对比发现,酸枣仁汤可以显著改善抑郁模型大鼠的行为活动;上调大鼠抑郁模型海马CaMKⅡ基因表达,减少神经元细胞凋亡,具有抗抑郁作用。

楤木皂苷C对缺血/再灌注原代大鼠心肌细胞兴奋收缩偶联及CaMK Ⅱ的调控作用

目的探讨从龙牙楤木总皂苷中分离得到的楤木皂苷C(aralosdie C,SMC)对缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤的大鼠心肌细胞收缩功能和钙瞬变的影响,及钙调蛋白激酶Ⅱ(Ca MKⅡ)在其中发挥的作用。方法采用Langendorff心脏灌流系统分离原代大鼠心肌细胞,分为对照组(Control组)、模型组(I/R组)、楤木皂苷C组(I/R+SMC8μmol·L^(-1))、抑制剂组(I/R+KN-93 1μmol·L^(-1)+SMC 8μmol·L^(-1)),采用细胞收缩与离子浓度同步测定系统同步检测SMC通过调控Ca MKⅡ对单个I/R细胞收缩功能和钙瞬变的影响。结果 8μmol·L^(-1)SMC作用5 min和未加入SMC的I/R成年大鼠心肌细胞收缩功能进行比较,发现SMC处理可明显促进I/R成年大鼠心肌细胞收缩功能的恢复,SMC改善心肌细胞收缩的同时,其钙瞬变也相应改善,并且SMC使钙瞬变幅度和[Ca2+]i上升/下降的速率明显升高,但加入KN-93抑制Ca MKⅡ后,除稳态钙息值无变化外,SMC对钙瞬变的作用效果降低。结论 SMC可明显改善I/R成年大鼠心肌细胞的收缩功能和钙瞬变,其作用机制可能与Ca MKⅡ有关。

鞘内注射硫酸镁和吗啡对切口痛大鼠脊髓背角p-αCaMK Ⅱ表达的影响

目的观察鞘内注射(it)硫酸镁(MgSO4)和吗啡对切口痛大鼠脊髓背角磷酸化钙—钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱα(p-αCaMKⅡ)表达的影响。方法所有大鼠术前8d鞘内置管,用机械缩足反射阈值、热缩足潜伏期和累计疼痛评分来评价大鼠疼痛行为学变化;用免疫组织化学和Western blot法来测定吗啡和硫酸镁对大鼠脊髓背角p-αCaMKⅡ表达的影响。结果术前或术后30minit吗啡5μg或MgSO4188μg和吗啡2.5μg使术后2h的机械性缩爪阈值(MWT)和热刺激缩爪阈值(TWL)明显延长(P<0.01),累积疼痛评分明显降低(P<0.01);术前30minitMgSO4375μg或吗啡5μg或MgSO4188μg和吗啡2.5μg使大鼠术后2h脊髓背角p-αCaMKⅡ表达明显减少(P<0.05)。结论在大鼠切口痛模型中,it吗啡5μg或MgSO4188μg和吗啡2.5μg具有确切的抗伤害作用,其抗伤害作用可能与抑制脊髓背角p-αCaMKⅡ表达有关。

吗啡条件性位置偏爱大鼠脑伏核中CaMK Ⅱ及NOS阳性神经元变化

目的:研究吗啡条件性位置偏爱(CPP)大鼠伏核中CaMK Ⅱ及NOS的阳性神经元变化。方法:采用免疫组织化学实验方法观察CaMK Ⅱ及NOS阳性神经元的形态及数目的变化。结果:与正常对照组比较,吗啡模型组CaMK Ⅱ及NOS的阳性神经元数均明显升高(P<0.01)。结论:吗啡CPP大鼠伏核中显示CaMK Ⅱ及NOS的阳性神经元增多,参与了吗啡精神依赖的形成。

吗啡戒断性焦虑大鼠边缘系统CaMK Ⅱ含量及其磷酸化水平的改变

目的:观察吗啡戒断大鼠焦虑产生时其边缘系统主要脑区/核团、海马、杏仁核、前额叶皮质神经细胞CaMK Ⅱ的含量和磷酸化水平的改变。方法:48只大鼠随机分为生理盐水对照组(n=18)、模型组(n=18)、丁螺环酮组(n=12)。模型组和丁螺环酮组用剂量递增法建立大鼠吗啡依赖模型,停药后,丁螺环酮组给予丁螺环酮,模型组给予生理盐水。在吗啡自然戒断的72 h,用高架十字迷宫检测其焦虑行为,然后再用蛋白免疫印迹技术检测各组大鼠海马、杏仁核、前额叶皮质神经细胞CaMK Ⅱ的含量和磷酸化水平。结果:与生理盐水对照组和丁螺环酮组比较,模型组CaMK Ⅱ蛋白含量和β亚基磷酸化水平均显著升高(均P<0.01)。结论:吗啡戒断大鼠的边缘系统海马、杏仁核、前额叶皮质神经细胞CaMK Ⅱ含量、CaMK Ⅱβ亚基磷酸化水平的增高,这可能是吗啡依赖戒断焦虑行为产生的分子机制之一。

高原低氧状态下大鼠肺组织HIF-1α、CaMK Ⅱδ及血清HIF-1α的表达及相互关系

目的探讨大鼠肺组织及血清中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和钙调蛋白激酶Ⅱδ(CaMKⅡδ)在高原低氧状态下的表达水平及其相互关系。方法应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠血清HIF-1α含量,应用蛋白质印迹法(Western blotting)检测大鼠肺组织中HIF-1α和CaMKⅡδ表达水平,并对所得结果行相关分析。结果高原组大鼠血清HIF-1α表达明显升高,于第3天起与平原组相比出现明显差异,差异均具有统计学意义(P<0.05);高原组大鼠肺动脉压明显升高,于第3天起与平原组相比出现明显差异,差异均具有统计学意义(P<0.05),并具有时间依赖性;高原组大鼠肺组织中CaMKⅡδ表达明显高于平原组,也具有时间依赖性;高原组大鼠肺组织HIF-1α表达明显高于平原组,这与血清表达水平一致。结论高原低氧状态可使大鼠肺组织CaMKⅡδ表达显著升高。其与肺动脉压和HIF-1α升高在时间上基本一致,提示它们与低氧环境中肺平滑肌细胞内钙离子活动增强致肺动脉压力升高有关。血清及肺组织中HIF-1α表达水平的增高,可能是CaMKⅡδ表达水平增加的初始动力。

SH-SY5Y神经细胞中α7神经型尼古丁受体基因过表达对CaMK Ⅱ和CREB的影响

目的研究SH-SY5Y神经细胞中α7 nAChR基因过表达对CaMKⅡ和CREB的影响。方法复苏稳定转染α7 nAChR-pc DNA3.1质粒及空载质粒的SH-SY5Y神经细胞后,用含G418的培养液进行筛选培养;应用实时荧光定量PCR法和蛋白印迹法(Western blot)检测α7 nAChR基因过表达组、空载质粒组和正常对照组细胞中CaMKⅡ、CREB mRNA及蛋白表达水平的变化。结果与对照组相比,α7 nAChR基因过表达细胞组的CaMKⅡ、CREB mRNA表达水平分别增加了116.8%和114.7%(P<0.01);及CaMKⅡ、CREB蛋白表达水平分别增加了8.7%(P>0.05)和41.4%(P<0.05)。结论α7 nAChR的神经保护作用可能与上调细胞CaMKⅡ、CREB水平有关。

不同训练方式对大鼠骨骼肌纤维类型转化和CaMK Ⅱ/MEF2传导途径的影响

目的:探讨间歇速度训练和耐力训练对大鼠骨骼肌纤维类型转化及钙调蛋白激酶/肌细胞增强因子2(CaMK Ⅱ/MEF2信号传导通路的影响。方法:成年雄性SD大鼠(8周龄) 18只,随机分成间歇速度训练组(IST),耐力训练组(ET),设空白组(C),每组6只,IST组采用75 m/min×1 min、20 m/min×1 min的交替训练6次,跑台坡度15,持续时间12 min/d;ET组采用速度30m/min、跑台坡度7、持续时间90 min/d的耐力训练。干预8周后,分别取小鼠右侧胫骨前肌、比目鱼肌,酶联免疫吸附法检测骨骼肌琥珀酸脱氢酶(SDH)、乳酸脱氢酶(LDH)活性,ATP酶染色法观察Ⅰ、Ⅱ型肌纤维面密度、数密度变化情况,SDS-PAGE凝胶电泳技术观察骨骼肌MHC亚型百分比含量、骨骼肌mRNA表达谱测序分析及qRT-PCR技术检测CaN、CaMKⅡ、MEF2水平。结果:相比C组,ET组SDH活性显著上升,LDH活性降低(P<0.05);IST组胫骨前肌中LDH活性值升高(P<0.01)。ET组胫骨前肌MHCⅡa%升高,MHCⅡb%降低(P<0.05),比目鱼肌MHCI%和MHCⅡa%升高,MHCⅡb%均降低(P<0.05)。相比IST组,ET组胫骨前肌MHCⅡx%升高(P<0.05)。相比C组,ET组胫骨前肌I、Ⅱ型纤维纤维密度上升,IST组Ⅱ型纤维纤维密度提高,IST组、ET组比目鱼肌I型纤维纤维密度上升(P<0.05)。相比C组,ET组骨骼肌CaN、CaMKⅡ、MEF2 mRNA表达水平增高,IST组CaN、CaMKⅡ、MEF2 mRNA表达水平下降(P<0.01)。Illumina高通量测序筛选骨骼肌纤维转化相关因子及关联分析,运动干预促使骨骼肌纤维转化相关因子表达变化富集于TGF-β/Smad3、CaN/MEF2、AdipoQ等信号通路,而耐力训练显著提高骨骼肌纤维转化、干细胞功能相关信号通路的富集。结论:耐力训练促进向氧化型肌纤维转化(慢肌),而间歇速度训练向酵解型肌纤维转化(快肌),并伴随着CaMK Ⅱ/MEF2传导途径中CaN、CaMKⅡ、MEF2基因的高表达。

药物成瘾中的CaMK Ⅱ信号转导机制

钙／钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ（Ca2＋／calmodulin—dependentproteinkinaseⅡ，CaMKⅡ）是一种多功能丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶，分布全身，在脑内分布尤其丰富，与神经递质合成和分泌、受体调节、细胞骨架结构调节、轴突传递、长时程增强（long—termpotentiation，LTP）以及基因表达密切相关。近年来研究表明，CaMKⅡ信号转导通路在镇痛及药物成瘾中发挥了重要作用。

CaN和CaMK Ⅱ在单核细胞活化信号传导中的作用

目的 观察CaN和CaMKⅡ在LPS诱导人单核细胞活化的细胞内信号传导过程中的作用。 方法 以CaN抑制剂CsA或CaMKⅡ抑制剂KN93预处理已经分化的人单核细胞系U 93 7后 ,再用LPS刺激 ,采用Western印迹法检测细胞内IκB -α水平及胞核内NF -κB水平的变化 ,并用MTT法测定上清液中TNF -α水平变化。 结果 CsA和KN 93均可明显抑制LPS刺激U 93 7细胞后胞核内NF -κB水平及上清液中TNF -α水平的升高。

CaMK Ⅱ-Smad1促进外周神经的轴突再生

背景:哺乳动物中枢神经系统损伤后轴突不能再生,主要是由于损伤处抑制性微环境和自身再生能力减弱导致的。研究发现,外周神经系统损伤后具有一定的再生能力,因此通过研究促进外周神经系统再生的基因来探索中枢神经系统修复的方法。CaMKⅡ作为神经元重要的蛋白激酶家族之一,它的上调能够提高神经元再生能力;同样在成年小鼠中Smad1蛋白的急性耗竭也会阻碍轴突在体内的再生。这些基因都可以直接或者间接调控神经元轴突再生,但是具体如何调控神经再生,目前还不够清楚。目的:采用腹腔注射CaMKⅡ抑制剂与激活剂的方法研究CaMKⅡ-Smad1信号通路对背根神经节神经元轴突再生的影响,探究CaMKⅡ和Smad1调节背根神经节神经元轴突再生的作用机制。方法:取40只ICR小鼠进行实验,随机分成4组:KN93对照组、KN93实验组、CdCl2对照组、CdCl2实验组,连续7 d腹腔注射CaMKⅡ抑制剂KN93或CaMKⅡ激活剂CdCl2之后取背根神经节组织进行体外培养,3 d后统计分析背根神经节神经元轴突再生的长度,Western blot实验检测背根神经节神经元中p-Smad1蛋白表达。结果与结论:①与KN93对照组比较,KN93实验组背根神经节神经元轴突再生能力受到抑制,p-Smad1蛋白表达下降,差异有显著性意义;②与CdCl2对照组比较,CdCl2实验组背根神经节神经元轴突再生能力得到促进,p-Smad1蛋白表达上升,差异有显著性意义;③结果表明CaMKⅡ-Smad1信号通路对背根神经节神经元轴突再生有调控作用。

基于大鼠海马CaMK Ⅱ表达探讨复方四维亚铁散抗铅中毒机制

目的明确CaMKⅡ表达与铅中毒的关系,阐明小儿复方四维亚铁散排铅作用机制。方法选取60只健康的清洁级Wister雄性大鼠建立染铅模型,将染铅大鼠随机分为6组,每组10只,即空白对照组、模型对照组、乙二胺四乙酸对照组、复方四维亚铁散低、中、高剂量组。观察6组Wister大鼠血铅浓度、学习记忆力和海马长时程增强(LTP)变化情况,检测大鼠海马CaMKⅡ及其蛋白表达水平。结果与空白对照组相比,模型对照组大鼠逃避潜伏期延长,有效区逗留时间缩短,平台停留次数减少,海马LTP变化幅度降低、时程缩短,CaMKⅡ及其蛋白表达水平降低(P<0.05);与模型对照组对比,复方四维亚铁散高、中、低剂量组大鼠逃避潜伏期缩短,有效区逗留时间延长,平台停留次数增多,海马LTP变化幅度增高、时程延长,CaMKⅡ及其蛋白表达水平升高(P<0.05);与模型对照组相比,乙二胺四乙酸对照组大鼠逃避潜伏期缩短,有效区逗留时间延长,平台期停留次数增加,海马LTP变化幅度增高、时程延长,CaMKⅡ及其蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论铅中毒影响大脑学习记忆功能,表现在反应学习记忆能力的CaMKⅡ水平的降低;复方四维亚铁散作用于染铅组大鼠,使CaMKⅡ及其蛋白表达水平上调,证明其具有明显排铅作用。

抗纤益心方对扩张型心肌病大鼠心肌细胞PKA/CaMKⅡ信号通路及线粒体膜电位的影响

目的通过抗纤益心方干预扩张型心肌病大鼠,探讨该药在扩张型心肌病心肌细胞PKA/CaMKⅡ信号通路及线粒体膜电位方面的作用。方法扩张型心肌病大鼠通过饮用呋喃唑酮复制,连续10周后通过心脏彩超确定模型复制成功,随机分为抗纤益心方低剂量组、抗纤益心方中剂量组、抗纤益心方高剂量组、卡托普利组和模型组,另设正常组。药物干预4周后观察各组大鼠心肌细胞超微结构;心肌细胞ATP、Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATP酶活力;心肌细胞CaMKⅡ、PKA、UCP2 mRNA表达。用去甲肾上腺素诱导H9c2心肌细胞肥大模型,药物干预24 h后检测心肌细胞线粒体膜电位水平。结果与正常组相比,各模型组大鼠心肌细胞线粒体受损,心肌细胞ATP、Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATP酶活力明显降低,UCP2 mRNA、CaMKⅡmRNA均明显升高,PKA mRNA明显降低,心肌线粒体膜电位水平明显下降(P<0.05或P<0.01)。各药物干预组对心肌细胞线粒体有不同程度的保护作用,对所测指标有不同程度的改善,尤其以抗纤益心方高剂量组更为明显(P<0.05或P<0.01)。结论抗纤益心方可以减轻DCM模型大鼠心肌细胞线粒体损伤,改善心肌细胞能量代谢及舒缩功能,改善心肌细胞PKA/CaMKⅡ信号通路及线粒体膜电位水平是其机制之一。

前扣带回皮层中CaMKⅡα^(+)GAD67^(+)神经元在大鼠神经病理性疼痛和焦虑抑郁共病中的作用

目的探讨前扣带回皮层(ACC)中表达钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)的兴奋性神经元和表达谷氨酸脱羧酶67(GAD67)的抑制性神经元在神经病理性疼痛以及焦虑、抑郁共病中的作用。方法雄性SD大鼠72只,随机分为假手术组(Sham)、神经病理性疼痛组(CCI)、神经病理性疼痛+CaMKⅡα非激活组(CCI+hM4Di^(-))、神经病理性疼痛+CaMKⅡα激活组(CCI+hM4Di^(+))、神经病理性疼痛+GAD67非激活组(CCI+hM3Dq^(-))、神经病理性疼痛+GAD67激活组(CCI+hM3Dq^(+))。通过由专门设计药物技术激活的设计受体(DREADDs)偶联hM3Dq或hM4Di,以细胞类型和时间依赖性的方式调控神经元活性。以机械缩足阈值(PWT)、热缩足潜伏期(PWL)评估疼痛行为,旷场试验、新环境进食抑制试验、强迫游泳试验评估焦虑、抑郁样行为,WesternBlot检测CaMKⅡα和GAD67表达,c-Fos免疫荧光染色检测神经元激活情况。结果与Sham组相比,CCI组大鼠术后表现出机械痛觉过敏和热痛觉超敏反应以及焦虑、抑郁样行为;对侧ACC中CaMKⅡα蛋白表达水平升高,GAD67蛋白表达水平降低;免疫荧光染色显示CaMKⅡα+神经元激活增多,GAD67^(+)神经元激活减少。与CCI+hM4Di^(-)组大鼠相比,CCI+hM4Di^(+)组在术后28 dPWL、PWT升高,焦虑和抑郁样行为改善。与CCI+hM3Dq^(-)组相比,CCI+hM3Dq^(+)组在术后28dPWL、PWT升高,焦虑、抑郁样行为减少。结论抑制ACC中CaMKⅡα+兴奋性神经元或激活GAD67^(+)抑制性神经元能起到减轻NP大鼠疼痛,改善焦虑、抑郁样行为的作用。

CaMKⅡ参与调控成骨细胞分化和凋亡的研究进展

成骨细胞分化和凋亡在维持骨稳态中起着至关重要的作用,异常的成骨细胞分化或凋亡会导致多种骨代谢疾病。钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)是一类广泛存在于体内的多功能蛋白激酶家族,它通过将细胞内的Ca^(2+)信号转化为多种生理或病理的细胞反应,在成骨细胞的分化和凋亡调控中发挥着重要作用。CaMKⅡ对成骨细胞分化的影响主要通过3个信号通路实现:(1)通过1α-25(OH)_(2)D_(3)膜介导信号通路调节成骨细胞的分化;(2)参与WNT/Ca^(2+)信号通路;(3)通过RUNX2-OSX信号通路影响成骨细胞分化。这些信号通路共同作用于成骨细胞,促进其成熟和功能发挥。CaMKⅡ在成骨细胞凋亡中的作用则涉及调节内质网应激反应和调控Bax/Bcl-2表达比例。这些机制对于成骨细胞的存活和凋亡至关重要,影响骨组织的稳定性和重建。总体而言,CaMKⅡ作为一个多功能信号分子,在成骨细胞分化和凋亡的调控中扮演重要角色。对CaMKⅡ的进一步研究,特别是在骨代谢疾病治疗中的应用,是未来研究的一个重要方向。