新生隐球菌CAP64荚膜缺陷株ura5突变株的筛选和鉴定

目的 :筛选和鉴定新生隐球菌 CAP6 4荚膜缺陷株 ura5突变株。方法 :(1 )用体外基因重组技术将 G4 1 8抗性基因插入到新生隐球菌 1 .2 kb的 ura5基因中 ;(2 )用电转化方法将体外重组片段导入受体菌 ;(3)利用 5 -氟乳清酸 (5 - FOA)反筛选法筛选 ura5突变株 ;(4 )用遗传学鉴定营养缺陷株的方法鉴定突变体。结果 :1株突变株 ura5基因的序列与重组片段相同 ;其Southern杂交显示在 2 0 kb和 7kb处出现 2条杂交条带 ;该突变株能在 SDU、SDU和 YEPD/ G4 1 8平板上生长 ,不能在 SD平板生长 ;其生长曲线显示突变株生长速度依赖于尿嘧啶的提供量。 结论 :获得了 1株新生隐球菌 CAP6 4荚膜缺陷株 ura5突变株 ,建立了新生隐球菌 CAP6 4荚膜缺陷株转化系统 ,为 CAP6

无荚膜隐球菌CAP64对小胶质细胞凋亡的影响

目的 观察无荚膜隐球菌CAP64对鼠小胶质细胞凋亡的影响。方法 无荚膜隐球菌CAP64与小胶质N9细胞株共孵育,用流式细胞仪检测5个不同时段N9细胞的凋亡指数。结果 2、4、8、16、24h N9细胞平均凋亡指数分别为9 33%、12 93%、15 37%、16 30%、20 5%,与空白组、灭活组凋亡指数比较,差异均有显著性(P<0 05)。结论 无荚膜隐球菌CAP64可以诱导小胶质细胞凋亡。

新生隐球菌5种血清型的CAP64基因的序列分析

目的多糖荚膜是新生隐球菌的重要的毒性因子,应用荚膜多糖抗原可以进行新生隐球菌的血清分型。方法该研究分析了5种血清型的CAP64基因的序列的相似性,作者扩增了CAP64基因一个约550bp的DNA序列,扩增产物经纯化后克隆到T载体上,转化至大肠杆菌JM109株中,通过聚合酶链反应(PCR)鉴定阳性克隆并测序。结果 5种血清型CAP64序列的比较显示其间的碱基差异为61～91bp,相似性为83.75%～88.03%,其核酸序列的差异是多位点的,主要在227～231bp之间;氨基酸的分析结果与此类似。结论 5种血清型的CAP64基因存在着一定的差异。