细胞外基质刚度诱导CCL5合成以提高非小细胞肺癌免疫治疗响应

目的探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞外基质刚度调控趋化因子配体5(C-C motif chemokine ligand 5,CCL5)的机制,揭示CCL5对NSCLC的免疫治疗响应的影响。方法通过TCGA数据库分析NSCLC细胞外基质刚度与CCL5表达的相关性;根据NSCLC细胞外基质刚度设计不同刚度的聚丙烯酰胺水凝胶,获得响应水凝胶基质刚度力学加载的H1299细胞并对其进行转录组测序,利用q-PCR验证高基质刚度对CCL5表达的影响;进一步利用NSCLC患者转录组数据探究CCL5与免疫治疗响应的相关性。结果高细胞外基质刚度可以上调CCL5的表达,并且干扰素-γ(interferonγ,IFN-γ)介导的信号通路可能参与了该过程;CCL5高表达的NSCLC患者,肿瘤组织中细胞毒性T细胞的丰度更高,与抗程序性死亡受体-1(programmed cell death protein 1,PD-1)治疗响应性有关。结论细胞外基质刚度增加可促进CCL5合成,CCL5可通过增加肿瘤组织中细胞毒性T细胞浸润提升NSCLC的免疫治疗响应性。

肝郁化火型迟发性痤疮女性病人血清趋化因子CCL5、CXCL10表达与病人病情的关系

目的:通过检测肝郁化火型迟发性痤疮女性病人血清趋化因子CCL5、CXCL10表达水平,分析其与病人病情关系。方法:收集80例肝郁化火型迟发性痤疮女性病人作为痤疮组,根据痤疮Pillsbury国际改良分级法分为轻组(n=23)、中组(n=32)、重组(n=25)。以同时段一般资料有可比性的80名女性体检健康者作为对照组。采用酶联免疫吸附法检测血清CCL5、CXCL10表达水平以及炎性因子白细胞介素(IL)-1β、干扰素-γ(IFN-γ)、IL-2水平,并分析其在各组中表达差异。Pearson法分析CCL5、CXCL10与IL-1β、IFN-γ、IL-2的相关性。结果:痤疮组血清CCL5、CXCL10、IL-1β、IFN-γ、IL-2表达水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。血清CCL5、CXCL10表达水平与痤疮组病人年龄、体质量指数、经期状态无关(P>0.05);月经前加重病人血清CCL5、CXCL10表达水平高于月经前无加重者,差异有统计学意义(P<0.01)。重组、中组及轻组血清CCL5、CXCL10、IL-1β、IFN-γ、IL-2表达水平逐次降低,差异有统计学意义(P<0.05)。相关性显示,CCL5、CXCL10均与IL-1β、IFN-γ、IL-2存在正相关关系(P<0.05~P<0.01)。结论:肝郁化火型迟发性痤疮女性病人血清中CCL5、CXCL10呈上调表达,病情越重,其表达水平越高,可为临床评估和治疗迟发性痤疮病情严重度提供参考。

血清CCL5、sB7-H3水平联合对儿童难治性支原体肺炎的诊断价值

目的 探究儿童难治性支原体肺炎患儿血清中趋化因子(C-C基元)配体5(CCL5)和可溶性B7-H3(sB7-H3)的表达水平,以及其诊断价值。方法 选取2019年1月至2022年1月我院98例支原体肺炎患儿作为研究对象,根据患儿病情严重程度分为普通型支原体肺炎组(n=55)和难治性支原体肺炎组(n=43)。采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清CCL5、sB7-H3水平并比较;采用Pearson法分析血清CCL5、sB7-H3水平之间的相关性;Logistic回归分析发生儿童难治性支原体肺炎的影响因素;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清CCL5、sB7-H3水平联合对儿童难治性支原体肺炎的诊断价值。结果 难治性支原体肺炎组和普通型支原体肺炎组患儿的年龄、性别以及体重差异无统计学意义(P>0.05),发热时间、合并高热、气促、肺不张、肺实变方面的差异有统计学意义(P<0.05);与普通型支原体肺炎相比,难治性支原体肺炎组血清CCL5、sB7-H3水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);经Pearson法分析,难治性支原体肺炎患儿的血清CCL5、sB7-H3水平呈正相关(r=0.650,P<0.001);Logistics回归分析结果显示,发热时间、合并高热、气促、肺不张、肺实变、CCL5、sB7-H3是儿童难治性支原体肺炎的独立危险因素(P<0.05);血清CCL5、sB7-H3水平诊断儿童难治性支原体肺炎的曲线下面积(AUC)分别为0.953、0.903,截断值分别为3.79 ng/L、20.10ng/mL,灵敏度分别为84.69%、90.82%,特异度分别为95.56%、86.67%,且CCL5、sB7-H3联合诊断儿童难治性支原体肺炎的AUC为0.973,灵敏度为89.80%,特异度为95.56%。结论 儿童难治性支原体肺炎患儿血清CCL5、sB7-H3水平均升高,血清CCL5、sB7-H3水平联合可能较好地诊断儿童难治性支原体肺炎。

类风湿关节炎患者外周血白细胞CCL5表达水平与TNF-α抑制剂治疗效果的相关性研究

目的探讨类风湿关节炎(RA)患者外周血白细胞中C-C模式趋化因子配体5(CCL5)表达水平差异与肿瘤坏死因子-α(TNF-α)抑制剂治疗效果的关系。方法收集临床接受TNF-α抑制剂治疗RA患者外周血样本,提取外周血白细胞mRNA,利用Q-PCR方法检测CCL5表达水平。接受TNF-α抑制剂治疗后,按照治疗结果将所有RA患者分为治疗敏感组与耐药组,比较两组患者外周血白细胞CCL5表达水平。利用ROC曲线明确CCL5表达水平对TNF-α抑制剂治疗效果区分情况,并比较两组患者治疗前后CCL5的表达变化情况。结果收集接受TNF抑制剂治疗RA患者外周血样本各40例,根据治疗后疾病缓解情况确定治疗敏感患者17例,耐药患者23例。TNF-α抑制剂治疗耐药患者外周血白细胞中CCL5表达水平显著高于治疗敏感患者(P<0.05),ROC曲线表明,CCL5表达水平可以有效区分TNF-α抑制剂敏感患者与耐药患者(AUC=0.965),并且敏感组CCL5表达水平在接受TNF抑制剂治疗后显著降低,但耐药组其表达水平无明显变化。结论TNF-α抑制剂治疗耐药RA患者外周血白细胞CCL5表达水平显著高于治疗敏感患者,并且其表达水平在接受治疗前后差异无统计学意义。外周血白细胞CCL5可作为预测TNF-α抑制剂治疗效果的潜在标志物。

miR-335-3p靶向调控CCL5在TNF-α诱导椎间盘退变中相关机制

目的探讨在炎性激活条件下的椎间盘退变(IDD)过程中miR-335-3p靶向调控趋化因子配体(CCL)5的机制及可能抑制IDD进展的方法。方法建立人髓核(NP)细胞的原代培养,肿瘤坏死因子(TNF)-α诱导NP细胞,Trizol法获取NP细胞总RNA,随后对mRNA及miRNA进行高通量测序分析。对miR-335-3p靶向结合mRNA进行预测,结合STRING富集分析miRNA靶标基因,确定TNF-α影响NP细胞的关键基因。应用The Human Protein Atlas(https://www.proteinatlas.org/)分析CCL5及其下游调控蛋白受体趋化因子受体(CCR)5基因在免疫相关细胞中的表达水平。应用Targetscan预测miR-335-3p与CCL53′UTR序列的靶向结合位点。结合promega的双荧光素酶报告系统使用turner仪器进行测量。将人NP细胞分成:Control组(NP细胞)、TNF-α组、mimic-NC组、miR-335-3p mimic组。使用Lipofectamine RNAiMAX将miR-335-3p mimic或miR-NC寡核苷酸序列转染入人NP细胞。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)方法检测miR-335-3p的表达情况。Western印迹实验检测NP细胞外基质相关蛋白的表达水平。结果与Control组比较,TNF-α组miR-335-3p基因表达水平显著下调(P<0.01),CCL5基因表达水平显著上调(P<0.01);miR-335-3p mimic组miR-335-3p表达水平较mimic-NC组显著上调(P<0.01),CCL5表达水平显著较mimic-NC组下调(P<0.01)。与Control组比较,TNF-α组生长分化因子(GDF)5和性别决定区Y框蛋白(SOX)9蛋白显著下调,而基质金属蛋白酶(MMP)2蛋白表达水平显著上调(P<0.01);与mimic-NC组比较,miR-335-3p mimic组MMP2蛋白表达水平显著下调,而GDF5和SOX9蛋白显著上调(P<0.01)。结论miR-335-3p在TNF-α诱导的炎症条件下可特异性下调CCL5,从而逆转TNF-α诱导的软骨生成因子SOX9的异常表达。

Phe112、Trp86和Tyr108对CCR5与趋化因子CCL5结合及趋化作用的影响

目的:揭示人趋化因子受体5(human C-C chemokine receptor 5,hCCR5)中与人趋化因子配体5(hu⁃man C-C motif chemokine ligand 5,hCCL5)结合并影响hCCL5趋化作用的关键氨基酸。方法:根据生物信息学分析提示的信息,采用定点突变技术,对CCR5受体中Phe112、Trp86和Tyr108分别构建了CCR5-F112A、CCR5-W86A和CCR5-Y108A突变体质粒,并通过慢病毒感染技术感染人胚胎肾细胞HEK293T,分别获得了CCR5-F112A、CCR5-W86A和CCR5-Y108A突变体细胞株。通过激光共聚焦显微镜技术,进一步检测了这些突变对CCR5受体与趋化因子CCL5结合的影响。此外,通过CCK8细胞增殖和Transwell侵袭实验,检测了这些突变对趋化因子CCL5对CCR5受体所带来的肿瘤细胞增殖和侵袭的影响。结果:实验结果显示,CCR5中的Phe112或Trp86位点发生突变后,CCR5受体与CCL5的结合能力以及CCL5的趋化作用均显著减弱,但Tyr108并不显著。结论:CCR5受体中Phe112和Trp86是影响CCR5与CCL5结合的关键氨基酸。此外,这些构建的突变体,也可为进一步揭示CCL5/CCR5生物轴对其在肿瘤疾病中重要生物学功能的研究提供实验研究工具。

趋化因子CCL5在非小细胞肺癌中的表达及生物学功能探究

目的探讨CC基序趋化因子配体5(CCL5)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达情况及临床应用价值。方法收集在徐州医科大学附属宿迁医院首次就诊确诊为NSCLC并行手术治疗的72例患者癌组织、癌旁组织及其临床资料,用免疫组化法检测癌组织及癌旁组织CCL5表达情况;用Realtime PCR检测CCL5mRNA在NSCLC和健康对照者血清中的表达;分析CCL5表达情况与患者临床、病理特征之间的相关性及其对预后影响。体外培养肺腺癌A549细胞,siRNA-CCL5转染细胞,观察下调CCL5表达后细胞增殖、迁移、侵袭能力的变化。结果TCGA数据分析结果显示CCL5mRNA表达水平在肺腺癌和鳞癌中明显增加;免疫组化结果显示CCL5在NSCLC组织表达较癌旁组织明显上调,并且CCL5高表达与NSCLC患者淋巴结转移情况、TNM分期存在正相关(P=0.019,P=0.033);而与患者性别、年龄、病理类型无明显相关性;NSCLC血清中高表达CCL5mRNA,K-M分析结果显示血清CCL5 mRNA表达的上调与患者无进展生存率(PFS)存在明显的相关性;Cox多因素比例风险模型评估提示组织中CCL5高表达与患者预后有相关性;下调CCL5表达后A549细胞增殖受到抑制,侵袭、迁移能力下降。结论CCL5在NSCLC患者中表达水平上调,与淋巴结转移及肿瘤分期存在一定相关性,与NSCLC患者的预后相关,体外干扰CCL5可降低肺腺癌细胞增殖、迁移功能。CCL5可能成为NSCLC治疗的一个靶点。

高甲基化相关的CCL5低表达促进肝癌细胞增殖及免疫抑制

目的肝细胞癌的进展与免疫微环境的失调密切相关。趋化因子在招募免疫细胞进入肿瘤组织的过程中起着重要作用。本文探讨了CCL5在肝癌进展中的作用。方法通过GEO数据库分析CCL5在肝癌组织中的表达及与患者预后的关联,通过免疫组织化学染色检测CCL5在肝癌患者临床标本中的表达情况,通过TCGA数据库分析CCL5与免疫浸润的相关性及表达量异常的原因。结果CCL5在肝细胞癌组织中表达下降并与患者预后不良相关。CCL5低表达与肝癌组织中的免疫细胞浸润减少有关,而过表达CCL5能够抑制肝癌细胞的增殖。启动子DNA高甲基化引起了CCL5在肝癌组织中的低表达。结论高甲基化相关的CCL5低表达能够促进肝癌免疫抑制及肿瘤细胞的增殖,CCL5可作为肝癌的一个预后指标和潜在治疗靶点。

外周血单个核细胞CCL5表达水平作为类风湿关节炎与骨性关节炎潜在鉴别诊断标志物的研究

目的 探讨类风湿关节炎(RA)与骨性关节炎(OA)患者外周血单个核细胞(PMBC)中C-C模式趋化因子配体5(CCL5)表达水平差异,以及其作为类风湿关节炎与骨性关节炎潜在鉴别诊断标志物的可能性。方法 收集临床RA与OA患者外周血样本,以健康人做对照,提取PMBC中mRNA,利用Q-PCR方法检测CCL5表达水平。比较RA、OA患者PMBC中CCL5表达差异,并对比类风湿因子(RF)与抗环瓜氨酸肽抗体(ACPA)在RA与OA鉴别诊断中的作用,利用ROC曲线明确CCL5表达水平对RA与OA的区分情况,对CCL5表达水平与RA严重程度进行相关性分析。结果 收集RA与OA患者外周血样本各30例,RA患者PMBC中CCL5表达水平显著高于OA患者(P<0.05),其在RA与OA鉴别诊断中的灵敏度、特异性、阳性预测值、阴性预测均高于RF,ROC曲线表明,CCL5表达水平可以有效区分RA与OA患者(AUC=0.823),RA患者CCL5表达水平与TJC(关节压痛指数)、SJC(肿胀关节指数)、DAS28评分呈显著正相关(P<0.05),其相关系数分别为0.60、0.75、0.79。结论 RA患者PMBC中CCL5表达水平显著高于OA患者,并与RA严重程度呈显著正相关,PMBC中CCL5可作为潜在的RA与OA鉴别诊断标志物。

circSMARCA5通过CCL5富集Treg细胞促进非小细胞肺癌细胞的增殖

目的:检测circSMRCA5在非小细胞肺癌(NSCLC)组织和细胞中的表达,以及其在NSCLC发生发展中的潜在功能和机制。方法:用qPCR法检测circSMARCA5在NSCLC组织中的表达。使用慢病毒转染法将circSMARCA5过表达质粒和对照质粒pLC5分别转染人肺癌A549和H1975细胞。采用qPCR法检测稳定转染细胞中circSMARCA5的表达水平。通过CCK-8、克隆形成、细胞周期和异种移植瘤实验检测circSMARCA5过表达对A549和H1975细胞生物学行为的影响。通过转录组测序、KEGG和GO富集分析,确定circSMARCA5可能的靶基因。分别构建circSMARCA5过表达A549、Lewis细胞BABL/c裸鼠和免疫正常的C57小鼠皮下移植瘤模型,观察circSMARCA5对裸鼠皮下移植瘤生长的影响,流式细胞术检测对Lewis细胞移植瘤组织中Treg细胞水平的影响。结果:circSMARCA5在NSCLC组织中呈高表达(P<0.01)。过表达circSMARCA5可以在体外促进NSCLC细胞的增殖(P<0.05,P<0.01)。体内实验中,circSMARCA5可以促进裸鼠皮下移植瘤的生长(P<0.01)。机制上,经KEGG和GO富集分析,确定C-C趋化因子配体5(CCL5)为circSMARCA5的下游靶基因。过表达circSMARCA5组A549和H1975细胞中CCL5的表达量增加(均P<0.05)。circSMARCA5介导的CCL5上调促进了免疫正常的C57小鼠皮下移植瘤的生长。C57小鼠皮下移植瘤制备成的单细胞悬液行流式细胞术检测显示,circSMARCA5过表达组的Treg细胞比例高于对照组[(3.1±0.5)%vs(1.0±0.1)%,P<0.05]。结论:circSMARCA5在NSCLC组织中呈高表达,其可能通过CCL5将Treg细胞招募到肿瘤中,导致肿瘤的免疫逃逸,促进NSCLC的进展。

CCL5在胃癌患者肿瘤组织和血清中的表达及临床意义

目的:检测胃癌患者组织及血清中的CCL5的表达并探讨血清中CCL5表达的临床意义。方法:选择临床病理资料齐全的胃癌蜡块标本48例,取癌组织和癌旁组织(对照组),采用SP免疫组化法检测CCL5在胃癌组织及癌旁组织中的表达。抽取新诊断胃癌患者50例(均未行手术及放化疗)及健康志愿者16例(对照组)的血清标本,采用ELISA检测CCL5在胃癌患者及健康志愿者血清中的表达,研究血清中CCL5的表达水平与胃癌的病理因素及生物学行为之间的关系。结果:CCL5在胃癌患者组织及血清中呈高表达,与对照组相比,明显升高,具有统计学差异(P<0.001),胃癌患者血清中CCL5的表达水平与胃癌组织浸润深度、淋巴结转移情况、TNM分期情况及肿瘤分化程度均具有相关性(P<0.001),与患者的性别及年龄无相关性。结论:CCL5可能成为胃癌患者肿瘤分期及疾病进展的重要分子标志。

肿瘤相关巨噬细胞和CCL5在胃癌中的表达及其相关性研究

目的:研究胃癌中肿瘤相关巨噬细胞(TAM)与CCL5的表达及其相关性。方法:选择临床病理资料齐全的胃癌蜡块标本48例,癌旁组织作为对照,采用SP免疫组化法检测CD68和CCL5在胃癌组织及癌旁组织中的表达,并采用Spearman相关性统计方法对其相关性进行统计。结果:CD68和CCL5在胃癌组织中均呈阳性表达,且明显高于癌旁组织(P<0.01);CD68和CCL5与胃癌组织浸润深度、淋巴结转移情况、TNM分期情况及肿瘤分化程度均具有相关性(P<0.001),且胃癌中CD68和CCL5的表达程度呈正相关(P<0.01,r=0.759)。结论:CD68和CCL5对胃癌的发生、侵袭和转移起重要的促进作用,提示TAM分泌的CCL5可能促进胃癌侵袭转移。

趋化因子CCL5/RANTES在糖尿病合并肝癌中的作用机制

目的观察不同糖浓度培养人肝癌细胞株HepG2和鼠源性细胞株H22趋化因子CCL5 mRNA表达水平,比较H22细胞株在糖尿病鼠和正常小鼠中的成瘤能力,探索CCL5在糖尿病合并肝癌中的作用机制。方法不同糖浓度培养液(5.5、25 mmol/L)体外培养人肝癌HepG2细胞和鼠源性肝癌H22细胞,细胞划痕实验测定细胞的迁移能力;提取不同糖浓度培养HepG2和H22细胞的总RNA,RT-PCR法检测细胞中趋化因子CCL5 mRNA表达水平;构建糖尿病鼠模型,对比糖尿病鼠和正常鼠的成瘤能力,并且通过免疫组织化学法检测瘤组织中CCL5的表达。结果随着培养液中糖浓度的增加HepG2细胞的迁移能力随之增强;高浓度葡萄糖培养HepG2和H22细胞中的CCL5 mRNA表达相对高于低糖培养;鼠源细胞H22在糖尿病小鼠中成瘤速度快于正常小鼠,糖尿病鼠成瘤组织中CCL5表达量高于正常血糖的小鼠瘤组织(P<0.05)。结论高糖培养HepG2和H22细胞可使CCL5表达增加。高血糖可致患肝癌的风险增加,并加快肿瘤的生长,趋化因子CCL5可能在糖尿病致肝癌生长、转移中发挥作用。

趋化因子CCL5表达与肾透明细胞癌病理特征及预后的相关性研究

目的:明确趋化因子CCL5表达水平与肾透明细胞癌患者病理特征及患者预后的相关性。方法:收集本院2006年1月至2014年1月行手术治疗并术后病理证实为肾透明细胞癌患者肿瘤及对应癌旁组织标本(90例),术后随访时间为18~90个月,应用免疫组织化学、蛋白印迹法、ELISA方法分别检测趋化因子CCL5表达、血清浓度状况,分析CCL5表达与肾脏透明细胞癌临床病理特征及预后的关系。结果:肾透明细胞癌患者血清中趋化因子CCL5浓度显著高于正常非肿瘤患者(P=0.015 2);趋化因子CCL5在肾透明细胞癌组织内蛋白表达水平显著高于癌旁组织(P<0.01);CCL5表达强度与肿瘤大小(P<0.01)、病理分级(P<0.01)、临床分期(P<0.05)呈正相关性,而与性别与年龄关系不密切(P>0.05);CCL5表达强度与患者总生存时间(OR)呈负相关性且具有显著性差异(P<0.001)。结论:趋化因子CCL5表达水平与透明细胞癌患者病理特征及预后关系密切,其异常高表达可能是促进透明细胞癌发生发展的重要原因,并有可能作为肾透明细胞癌早期监测指标及潜在治疗靶点。

CCR2、CCL5、CCR5和CCL1基因多态性与中国汉族儿童结核病易感性的关联研究

目的探讨CCR2、CCL5、CCR5和CCL1的基因多态性与中国汉族儿童结核病易感性的关系。方法收集353例汉族儿童结核病患者,以同期查体的400名儿童作为对照,采用病例对照研究,应用高通量MassARRAY技术对于CCR2、CCL5、CCR5和CCL1基因的SNP位点进行基因分型研究。结果 CCR2、CCL5、CCR5和CCL1基因SNP位点的等位基因、基因型以及单体型在结核病组和对照组的分布差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 CCR2、CCL5、CCR5和CCL1的基因多态性与中国汉族儿童结核病易感不存在相关性。

实验性自身免疫性脑脊髓膜炎小鼠中IL-27对CCL5表达的影响

目的探讨白介素-27(interleukin-27,IL-27)对中枢神经系统(central nervous system,CNS)炎性趋化因子(chemokine RANTES,CCL5)的调节作用,以及在小鼠实验性自身免疫性脑脊髓膜炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)中的治疗效果。方法 40只雌性C57BL/6小鼠建模后,分别于第0、7、14、21天用Western blot检测CNS中IL-27和CCL5的变化。另将50只小鼠随机分为正常组、EAE组、EAE+IL-27组、EAE+SC144(IL-27受体抑制剂)组和EAE+PBS组,定期观察动物行为变化,并在建模后21 d检测CCL5的表达。结果建模后,IL-27在CNS中的表达随时间逐渐升高,而CCL5的表达随时间先升高后下降。经IL-27干预后,小鼠神经功能缺损较对照减轻(P<0.05),而SC144组小鼠神经功能缺损较其他组加重(P<0.05)。在21 d,CCL5在IL-27干预组的表达较EAE模型组明显降低(P<0.05),而在SC144组较EAE模型组显著增高(P<0.05)。结论在EAE模型中,IL-27抑制CCL5的表达,从而发挥抗炎作用减轻小鼠神经功能缺损。

紫外线治疗前后银屑病患者皮损角质形成细胞趋化因子CCL5/RANTES的表达

CCL5/RANTES（regulated upon activation,normal T-cell expressed and secreted）是一种细胞趋化因子,研究证明其与银屑病的发病相关[1-3]。紫外线照射是一种有效的银屑病治疗方法,但是,关于紫外线与CCL5/RANTES的相关性还不清楚。笔者采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定紫外线治疗前、后银屑病皮损角质形成细胞培养上清液中CCL5/RANTES含量,探讨紫外线治疗与银屑病皮损表皮中CCL5/RANTES含量的关系。

驱化因子CCL5介导骨髓间充质干细胞增加肾透明细胞癌细胞侵袭迁移能力

目的:明确骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)对肾透明细胞癌侵袭迁移能力的影响,并通过体内、体外研究阐明阻断趋化因子CCL5信号对于抑制肾细胞癌侵袭进展效应评价。方法:利用体外细胞共培养模型,验证BM-MSCs细胞对于肾癌细胞系侵袭迁移能力的影响,利用细胞因子芯片筛选潜在差异性表达的趋化因子,在患者肿瘤组织及对应正常肾脏组织中确认该差异性细胞因子的表达情况,最终通过体外细胞侵袭、转移模型及体内小鼠成瘤实验,利用CCL5中和抗体特异性阻断该信号通路,验证该信号通路作用的特异性。结果:骨髓间充质干细胞可以显著增加肾癌细胞系(OS-RC-2、SW839)体外侵袭、迁移能力(P<0.05);蛋白印迹法提示高侵袭性相关蛋白表达MMP9、MMP2提高(P<0.05),并增加细胞EMT过程;细胞因子芯片筛选后发现细胞共培养后CCL5信号特异性高表达(P<0.05);Western blot蛋白印迹法显示肿瘤组织中CCL5蛋白表达水平较正常肾脏组织提高(P<0.05);体外细胞侵袭、迁移实验结果提示,CCL5特异性中和抗体阻断后能够显著抑制BM-MSCs导致的肾细胞癌侵袭、迁移能力(P<0.05);体内小鼠成瘤实验发现CCL5特异性中和抗体阻断能够显著降低小鼠总体生存时间(P<0.05)。结论:BM-MSCs能够特异性通过CCL5信号增加肾透明细胞癌侵袭、迁移能力,特异性阻断CCL5信号后能够显著抑制肾癌细胞侵袭、迁移及延长荷瘤小鼠的生存时间,CCL5是潜在的肾透明细胞癌治疗新靶点。

趋化因子CCL5在类风湿关节炎患者滑液炎性细胞中的表达

目的:观察趋化因子CCL5在类风湿关节炎患者体内的产生来源,以及CCL5水平与类风湿关节炎的症状和实验室检查指标的相关性。方法:选择2004-06/10遂宁市人民医院及川北医学院附属医院收治的类风湿关节炎患者28例,以同期收治的骨关节炎患者21例为对照。所有患者取空腹外周血,有膝关节积液的11例类风湿关节炎患者和6例骨关节炎患者同时抽取关节液。用酶联免疫吸附法测定两组患者血清及滑液中CCL5水平,并对患者外周血白细胞和滑液炎性细胞体外产生CCL5进行检测。用直线相关回归分析法分析类风湿关节炎患者血清CCL5水平与关节肿胀指数、血沉、C反应蛋白之间的相关性。结果:49例患者进入结果分析。①CCL5水平:血清中类风湿关节炎患者明显高于骨关节炎患者[(911±388),(499±289)ng/L,P<0.05];滑液中类风湿关节炎患者也明显高于骨关节炎患者[(1390±187),(662±154)ng/L,P<0.01];而且类风湿关节炎患者滑液中CCL5水平明显高于血清中(P<0.01)。②相关性分析:类风湿关节炎患者血清CCL5水平与关节肿胀指数、血沉、C反应蛋白呈正相关(r=0.3229,0.4001,0.3735,P<0.05)。③白细胞体外产生CCL5水平:类风湿关节炎患者滑液明显高于外周血和骨关节炎患者滑液(P<0.05);但两组患者外周血白细胞体外产生CCL5无差异(P>0.05)。结论:①类风湿关节炎患者血清CCL5水平增高,且与类风湿关节炎的活动性病变(关节肿胀指数、血沉、C反应蛋白)有显著相关性,表明CCL5在类风湿关节炎的病理过程中起重要作用。②患者滑液炎性细胞是CCL5产生的主要来源。

循环血CCL2、CCL5、CXCL10在HBV相关性肝病中表达水平的差异及相关性分析

目的:探讨HBV相关性肝病患者循环血CCL2、CCL5、CXCL10水平的表达差异与临床意义。方法:收集在本院检测或治疗的乙肝病毒携带者20例、慢性乙型肝炎患者75例、慢性重型乙型肝炎患者20例、乙肝肝硬化患者20例、乙肝肝癌患者20例的循环血标本及临床资料,以同期体检而无HBV感染的20例健康体检者为对照组。采用ELISA法检测研究对象循环血中CCL2、CCL5、CXCL10的表达水平,荧光定量PCR法检测乙肝病毒(HBV-DNA)载量,用7600-020全自动生化分析仪检测肝功能的ALT、AST等,分析CCL2、CCL5、CXCL10表达水平的差异与临床意义。结果:慢性乙型肝炎患者轻、中、重度组循环血CCL2、CCL5、CXCL10的表达水平与乙肝病毒携带者及健康对照组比较显著升高,且慢性乙型肝炎患者重度组表达水平最高,五者间比较,F值分别为824.90,595.51,810.41,差异具有统计学意义(P<0.01);在HBV相关性肝病患者间,随着病情加重其循环血CCL2、CCL5、CXCL10表达水平逐渐升高,重型乙型肝炎组水平最高,六组间比较,F值分别为226.77、196.14、133.09,差异具有统计学意义(P<0.01);慢性乙型肝炎组患者循环血CCL2、CCL5、CXCL10水平与HBV-DNA载量呈正相关系(r值分别为:0.32、0.3、0.41,P<0.05);HBV相关性肝癌组CCL2水平与HBV-DNA载量呈正相关系(r值为:0.57,P<0.05),其余各HBV相关性肝病组的CXCL10与CCL2、CCL5水平与HBV-DNA载量无相关关系(P>0.05);慢性乙型肝炎组CCL2、CCL5、CXCL10表达水平间呈正相关系(r值为0.88、0.88,P<0.05),其余各HBV相关性肝病患者组CCL2、CCL5、CXCL10表达水平间无相关关系(P>0.05)。结论:循环血CCL2、CCL5、CXCL10表达水平在HBV相关性肝病患者中明显升高,可能介导了肝组织的炎症反应与免疫损伤的发生,并在HBV相关性肝病患者的肝组织炎症发生及慢性化、纤维化和肝细胞癌变的进程中可能发挥了重要的调控作用。