CD8^+CD28^-Ts、CD3^+CD56+NKT细胞在B细胞非霍奇金淋巴瘤患者外周血中分布的分析

背景及目的:目前认为B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)常伴随免疫抑制,CD8+CD28-Ts(Ts)细胞和CD3+CD56+NKT(NKT)是新鉴定的新型免疫抑制性调节细胞,在肿瘤的免疫抑制及免疫逃逸机制中起重要作用,但它们在B细胞淋巴瘤患者外周血的分布情况及其免疫抑制中的作用目前尚不清楚。本文通过分析两者在化疗前及化疗后B-NHL患者外周血中比例及变化规律,初步探讨它们在B-NHL的免疫抑制作用及其影响因素,为有效干预患者的免疫功能提供参考。方法:应用流式细胞仪检测79例治疗前的B-NHL患者、经4～6周期化疗后完全缓解(CR)的18例患者、30例健康志愿者外周静脉血中NKT及Ts细胞的比例。结果:在79例治疗前B-NHL患者的外周血中,Ts细胞比例为(18.19±5.03)%,较正常对照组(11.20±3.49)%明显增高(P<0.01);NKT的比例为(6.08±3.29)%,亦较正常对照组的(3.52±1.56)%明显增高(P<0.01)。Ts在不同临床分期的患者之间无显著性差异P>0.05;Ⅰ期为(17.56±4.10)%、Ⅱ期为(18.05±5.64)%、Ⅲ期为(18.14±5.58)%、Ⅳ期为(18.95±4.64)%;在不同恶性程度的患者之间亦无显著性差异P>0.05;低度恶性为(17.81±5.24)%、中度恶性为(18.37±4.83)%、高度恶性为(18.31±5.93)%;在治疗前(18.64±4.55)%和CR后(19.42±4.95)

人外周血Vα24 NKT细胞和CD3^+CD56^+CIK细胞生物学特性的比较研究

目的进一步认识Vα24 NKT细胞和CIK细胞在生物学特性的差异。方法从人外周血单个核细胞扩增NKT细胞和CIK细胞;经免疫磁珠纯化获得高纯度的TCRVα24+NKT细胞和CD3+CD56+CIK细胞。运用流式细胞术测定纯化后的NKT细胞和CIK细胞的表型、细胞因子和细胞坏死相关因子的表达情况,并用DIOC18染色及流式细胞术测定纯化后的NKT细胞和CIK细胞的细胞杀伤活性。结果经纯化TCRVα24+Vβ11+NKT细胞和CD3+CD56+CIK细胞的纯度均达到>90%;纯化后的Vα24 NKT细胞多数为CD4+和DN NKT细胞,高表达TCRVα24、Vβ11、CD3、CD161,低表达CD56;而纯化后的CIK细胞则以CD8+T细胞为主,高表达CD3、CD56,低表达CD161,几乎不表达TCRVα24和Vβ11。在抗原刺激下,CD3+CD56+CIK细胞的IFN-γ、TNF-α、Perforin、FasL、TRAIL表达水平均高于NKT细胞,但CD3+CD56+CIK细胞几乎不分泌IL-4,而NKT细胞则分泌高水平的IL-4;CD3+CD56+CIK细胞对肿瘤细胞株K562、U937、Jurkat的杀伤率均远远高于NKT细胞。结论TCRVα24+NKT细胞和CD3+CD56+CIK细胞是两类完全不同的细胞群,在抗肿瘤免疫和免疫调节中可能起着不同的作用。

初诊恶性肿瘤患者外周血CD3^+ CD56^+ NKT样细胞的检测

目的:探讨初次诊断为恶性肿瘤患者的外周血CD3^+ CD56^+ T淋巴细胞(NKT样细胞)及T调节细胞(regulatory T cells,Treg)的比率并分析其意义。方法:用流式细胞仪检测健康体检者(A组)、非恶性肿瘤患者(B组)、初诊恶性肿瘤患者Ⅰ~Ⅱ期(C组)、初诊恶性肿瘤患者Ⅲ~Ⅳ期(D组)4组患者外周血中CD4^+ CD25^(high)CD127^(low)细胞占CD4+T淋巴细胞的百分率(Treg细胞)及CD3~ +CD56^+细胞占CD3^+T淋巴细胞的百分率(NKT样细胞)。结果:A、B、C、D 4组患者外周血中Treg细胞分别为(6.72±3.16)%、(6.49±2.83)%、(6.80±3.07)%、(7.63±3.47)%,4组之间比较差异均无显著性(均P>0.05);A、B、C、D4组患者外周血中NKT样细胞分别为(3.13±1.66)%、(2.56±1.27)%、(7.22±2.70)%、(7.72±3.10)%,A、B两组患者的外周血NKT样细胞差异无显著性(P>0.05),C、D两组患者比A、B两组患者的外周血NKT样细胞明显升高(P<0.05)。结论:初次诊断为恶性肿瘤的患者外周血中NKT样细胞有明显升高的趋势。

NKG2D在口腔鳞癌患者CD3(+)CD56(+)NKT细胞中的作用

目的:探讨口腔鳞癌患者CD3(+)CD56(+)NKT细胞NKG2D受体抗肿瘤免疫的调节作用。方法:分别从30例口腔鳞癌患者和30例正常人外周血中提取CD3(+)CD56(+)NKT细胞,实时定量PCR和Western印迹分析NKG2D在分子水平和蛋白水平的表达差异。通过siRNA-NKG2D转染方法,分析NKG2D受体对CD3(+)CD56(+)NKT细胞的细胞毒性,分泌IL-2和IFN-μ的影响。采用SPSS13.0软件包对数据进行t检验和方差分析。结果:口腔鳞癌患者CD3(+)CD56(+)NKT细胞NKG2D的表达显著低于正常人(P<0.05);转染siRNA-NKG2D的CD3(+)CD56(+)NKT细胞对肿瘤细胞的杀伤作用显著降低。结论:与正常人相比,口腔鳞癌患者中CD3(+)CD56(+)NKT细胞因NKG2D表达下降,其肿瘤免疫调控作用受到影响。这些发现为NKG2D应用于口腔鳞癌的免疫治疗奠定了基础。

CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞及其细胞因子在Graves病患者体内的表达

目的探讨CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞(NKT细胞)及其细胞因子[白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]在毒性弥漫性甲状腺肿[Graves病(GD)]患者体内的表达情况。方法选择19例GD患者作为实验组,另选择19例健康志愿者作为对照组。检测并比较两组甲状腺功能指标[血清游离三碘甲腺原氨酸(FT3)、血清游离甲状腺素(FT4)、促甲状腺激素(TSH)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)]、IL-6、TNF-α及NKT细胞水平,IL-2、IL-10阳性率,探讨FT4、TSH、TPOAb与NKT细胞及细胞因子的相关性。结果实验组FT3、FT4、TPOAb、TNF-α和NKT细胞水平均高于对照组,TSH和IL-6水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组IL-2和IL-10阳性率分别为89.47%、100.00%,均高于对照组的0、0,差异有统计学意义(P<0.05)。IL-2、IL-10、TNF-α、NKT细胞水平与FT4、TSH和TPOAb水平密切相关,IL-6水平与TSH水平密切相关(P<0.05)。以TSH水平为因变量,IL-2、IL-6、IL-10、TNF-α、NKT细胞水平为自变量,采用进入法纳入变量,结果显示IL-10水平与TSH水平呈负相关(P<0.05)。以TPOAb水平为因变量,IL-2、IL-6、IL-10、TNF-α和NKT细胞水平为自变量,采用进入法纳入变量,结果显示IL-10水平与TPOAb水平呈负相关(P<0.05)。结论GD患者外周血NKT细胞水平增加,其相关的细胞因子在GD发病中具有重要意义。

CD3^+CD56^+NKT样细胞在急性白血病患者体内表达的研究

目的探讨CD3+CD56+NKT样细胞在急性白血病患者治疗前后体内的表达情况。方法分别取急性白血病(急性髓系白血病43例,急性淋巴细胞白血病12例,急性混合细胞白血病5例)及非恶性肿瘤(10例)患者骨髓血2ml送流式细胞仪检测,比较白血病患者治疗前后及非恶性肿瘤患者体内CD3+CD56+NKT样细胞的表达情况。结果急性白血病患者初治组与非恶性肿瘤患者对照组间比较,急性白血病患者骨髓中CD3+CD56+NKT样细胞比例明显比对照组低(P<0.01);急性白血病患者治疗后骨髓中CD3+CD56+NKT样细胞比例明显比治疗前高(P<0.01),且与缓解程度及时间呈正相关;急性白血病患者治疗后骨髓中CD3+CD56+NKT样细胞比例与非恶性肿瘤对照组比较无统计学意义(P>0.05);不同类型白血病之间,急性早幼粒细胞白血病治疗后CD3+CD56+NKT样细胞比例明显较其他类型高(P<0.05),急性髓系白血病(除M3外)与急性淋巴细胞白血病之间比较CD3+CD56+NKT样细胞比值结果比较无统计学意义(P>0.05)。结论急性白血病患者CD3+CD56+NKT样细胞反映了机体的免疫功能,化疗后CD3+CD56+NKT样细胞明显增多可能是预后较好的标志之一。

CD3^+CD56^+NKT样细胞在胃癌患者外周血中的检测及其功能下降的机制

目的分析CD3^+CD56^+NKT细胞在胃癌患者外周血中的应答水平和功能特征,并初步探讨其功能下降的机制。方法采用流式细胞术检测胃癌患者外周血中CD3^+CD56^+NKT样细胞的比例及其功能,同时采用胃癌患者外周血浆刺激单个核细胞并加入抗体阻断,探讨外周血中细胞因子对CD3^+CD56^+NKT样细胞功能的影响,最后分析其功能变化与疾病进展的关联性。结果与正常对照组和胃溃疡患者组相比,胃癌患者外周血中CD3^+CD56^+NKT样细胞的比例无统计学差异;但其表达的INF-γ和TNF-α水平显著下降(P<0.05);体外刺激实验显示,胃癌患者外周血来源的TGF-β1可抑制CD3^+CD56^+NKT样细胞分泌INF-γ和TNF-α(P<0.05);晚期胃癌患者外周血中表达INF-γ和TNF-α的CD3^+CD56^+NKT样细胞水平显著低于早期胃癌患者(P<0.05)。结论胃癌患者外周血中的TGF-β1抑制了CD3^+CD56^+NKT样细胞的抗肿瘤功能,从而导致了胃癌的进展。

妊娠期Graves病患者体内CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞表达与妊娠结局的相关性研究

目的探讨CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞在妊娠期Graves病(grave disease,GD)患者体内的表达情况及其与妊娠结局的相关性。方法选取2018年10月至2021年3月东莞东华医院收治的53例妊娠期GD患者作为GD组,同期选取53例正常妊娠者作为对照组。依据随访结果将GD组分为正常结局组、流产组、产后出血组、低出生体重儿组4个亚组。采用流式细胞仪检测CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞的数目。抽取外周静脉血检测2组甲状腺激素游离三碘甲状腺原氨酸(free triiodothyronine,FT3)、游离甲状腺素(free thyroxine,FT4)的水平及甲状腺过氧化物酶抗体(thyroid peroxidase antibody,TPOAb)、甲状腺球蛋白抗体(thyroglobulin antibody,TGAb)和促甲状腺素受体抗体(thyrotropin receptor antibody,TRAb)的滴度。比较GD组与对照组间CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞的数目与甲状腺激素、甲状腺激素抗体指标水平。分析GD组患者NKT细胞与甲状腺功能指标的相关性,GD组各亚组患者间CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞数目差异,并分析细胞数目与妊娠结局的相关性。结果GD组患者外周血中CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞的数目明显低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);GD组患者血清中FT_(3)、FT_(4)、TPOAb、TGAb和TRAb水平明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。相关性分析显示,GD组患者血清中FT_(3)、FT_(4)、TPOAb、TGAb和TRAb水平与外周血中CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞的数目呈负相关,差异具有统计学意义(P<0.05)。流产组、产后出血组、低出生体重儿组患者血清中CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞的平均数目均低于正常结局组,差异具有统计学意义(P<0.05);调控年龄、BMI等因素后,CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞的数目仍然是流产等不良妊娠结局的独立危险因素。结论CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞在妊娠期Graves病患者体内表达降低,并与Graves病严重程度及不良妊娠结局具有一定的相关性,积极检测妊娠期Graves病患者CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞表达水平具有重要的临床应用价值。

CD_3^+CD_(56)^+NKT细胞及CD_3^-CD_(56)^+NK细胞在恶性肿瘤患者的临床意义研究

背景与目的细胞毒性淋巴细胞在抗肿瘤免疫效应中发挥着重要作用,CD3+CD56+NKT细胞作为一类新的具有细胞毒性的效应细胞,目前关于其抗肿瘤意义的探讨主要集中于血液系统恶性疾病,而在实体肿瘤中的应用和临床价值研究尚少。本研究旨在初步探讨抗肿瘤细胞CD3+CD56+NKT细胞及CD3-CD56+NK细胞在恶性肿瘤患者外周血的表达状态及其临床意义。方法采用流式细胞术分析118例恶性肿瘤患者(55例肺癌患者和63例乳腺癌患者)及46例健康对照组外周血中的T细胞亚群及CD3+CD56+NKT细胞、CD3-CD56+NK细胞表达。结果恶性肿瘤患者组CD3+CD8+T细胞、CD3+CD56+NKT细胞以及CD3-CD56+NK细胞表达率均明显高于健康对照组(P<0.01)。肺癌患者中以CD3+CD8+T细胞和CD3+CD56+NKT细胞明显增加为主;乳腺癌患者中以CD3+CD56+NKT细胞和CD3-CD56+NK细胞明显增加为主。结论CD3+CD56+NKT细胞在肺癌和乳腺癌患者的抗肿瘤效应中占据重要地位,而CD3+CD8+CTL和CD3-CD56+NK细胞在不同类型肿瘤患者中具有不同的重要性。

T细胞及NKT细胞在类风湿性关节炎相关性间质性肺病的表达

目的探讨外周血T细胞亚群及CD3^+CD56^+NKT细胞在类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)相关性间质性肺病中的表达及意义。方法收集23例正常对照组,30例RA患者急性发作期、恢复期,11例确诊RA相关性间质性肺病(RA-interstitial lung disease,RA-ILD)患者外周血单个核细胞,分别检测T细胞亚群及CD3^+CD56^+NKT细胞的表达情况。结果 RA患者急性发作期间CD3^+T淋巴细胞较正常对照组明显升高,且无论是CD3^+CD4^+的T细胞(P<0.01),CD3^+CD56^+NKT细胞(P<0.01)或CD3^+CD8^+的T细胞都明显升高(P<0.05)。在RA患者恢复期,上述异常升高或下降的指标都趋向正常。在RA-ILD患者的外周血PBMC中,CD3^+CD8^+的T细胞(P<0.01),CD3^+CD56^+NKT细胞(P<0.05),较正常对照组都明显升高,CD3^+CD4^+的T细胞的明显减少(P<0.01)。结论在RA及RA-ILD患者体内的存在T细胞亚群及NKT细胞的平衡失调,可能参与疾病的进展,成为免疫调节治疗的靶点。

CD_3^+ CD_(56)^+ NKT细胞在中晚期胃癌治疗中的临床疗效观察

目的:评估CD3+CD56+NK T细胞治疗73例中晚期胃癌的疗效及不良反应。方法:血细胞分离机采集患者外周血单个核细胞,加入细胞因子rhINF-γ、rhIL-2、rhIL-1及CD3McAb培养,10 d后定向诱导成CD3+CD56+NKT细胞,分次回输给患者,每疗程回输细胞总数为(5~10)×109个。治疗4 w后,用流式细胞仪检测患者外周血T细胞亚群状态及细胞因子水平,以评价细胞免疫功能,结合临床指标综合评价疗效,同时观察不良反应。结果:在73例接受治疗的患者中,部分缓解(PR)+微效(MR)为37例(50.68%),稳定(SD)21例(28.76%),进展(PD)15例(20.54%);CD3、CD4、CD8T细胞的百分比在治疗后均较治疗前显著增高(P<0.05),且72.60%(53例)的患者CD4/CD8比例调整至正常;80.82%(59例)的患者治疗后Th1类细胞因子分泌增加,61.64%(45例)的患者Th1/Th2细胞因子比例恢复平衡;治疗后42例食欲增加,51例体力及睡眠改善,23例体重回升大于治疗前体重的5%;输注后的副反应包括寒颤、发热、呕吐、兴奋失眠、皮疹、疲乏,经对症处理后短时缓解,无1例出现毛细血管渗漏综合征(SCLS)及实质脏器的损害。结论:过继性CD3+CD56+NKT细胞输注治疗能显著调整中晚期胃癌患者的免疫功能,改善临床症状,是一种安全、有效的辅助治疗手段。

CD3^-CD56^+NK细胞及CD3^+CD56^+NKT样淋巴细胞在急性白血病患者中的变化

目的通过分析急性白血病患者发病时以及缓解时外周血CD3^-CD56^+NK细胞及CD3^+CD56^+NKT样淋巴细胞的数量以及功能变化,进一步了解急性白血病患者免疫功能状态。方法使用流式细胞分析外周血CD3^-CD56^+NK细胞及CD3^+CD56^+NKT样淋巴细胞的数量,同时分析上述两群细胞内的干扰素表达水平来评估细胞的功能。结果CD3^+CD56^+NKT样淋巴细胞数量在急性白血病发病时显著增加,经化疗获得完全缓解后数量又下降到正常健康人水平,并且无论在发病时还是缓解时CD3^+CD56^+NKT样淋巴细胞内干扰素水平均明显下降。CD3^-CD56^+NK细胞的变化有所不同,在发病时数量以及功能改变均不明显,而在疾病缓解时,急性淋巴细胞白血病患者CD3^-CD56^+NK细胞的数量下降明显,急性髓系白血病患者CD3^-CD56^+NK细胞的功能下降明显。结论急性白血病患者发病时可能产生免疫反应,但免疫细胞功能缺陷可能参与疾病的发生进展,其中CD3^+CD56^+NKT样淋巴细胞的变化可能与疾病的关系更密切,且急性髓系白血病患者免疫细胞功能异常更明显。