超声引导下粗针活检术联合CD34免疫组化标记在隆突性皮肤纤维肉瘤诊断中的应用

目的探讨超声引导下粗针活检术联合CD34在隆突性皮肤纤维肉瘤的诊断中的应用价值。方法回顾性分析于术前经超声引导下粗针活检术及CD34免疫组化标记诊断为隆突性皮肤纤维肉瘤的32例患者的病理资料与超声检查结果,并将其与手术后病理结果进行对比分析。结果32例患者中,30例患者于术前经超声引导下粗针活检术及CD34免疫组化标记诊断为隆突性皮肤纤维肉瘤,1例患者诊断为“倾向于隆突性皮肤纤维肉瘤”,另1例考虑“间叶源性肿瘤,不能除外纤维肉瘤”。术后病理结果提示31例患者为隆突性皮肤纤维肉瘤,1例患者为纤维肉瘤型皮肤纤维肉瘤。超声引导下粗针活检术联合CD34免疫组化标记诊断隆突性皮肤纤维肉瘤与术后病理结果的符合率为93.75%(30/31)。结论超声引导下粗针活检术联合CD34免疫组化标记诊断隆突性皮肤纤维肉瘤的准确性高,具有较大的临床应用价值。

脐血CD34^+细胞体外短期培养扩增研究

为寻找更有效的体外扩增脐血CD34 + 细胞的造血细胞因子组合 ,采集健康产妇脐带血 ,用免疫磁珠法分选CD34 + 细胞。采用SCF、FLT3 L、TPO和IL 34种具有早期作用的细胞因子的不同组合进行脐血CD34 + 细胞短期无血清液体培养 ,观察培养前后有核细胞、CD34 + 细胞、CD34 + /CD38- 细胞、CFU GEMM、CFU GM和BFU E数量的变化。结果在 3种不同的细胞因子组合中 ,同时应用SCF、FLT3 L、TPO和IL 34种细胞因子培养 7d的扩增效果最好。突出的发现是在这种条件下CD34 + /CD38- 细胞亚群达到平均 1 97.9倍的扩增效果。提示 :SCF、FLT3 L、TPO和IL 34种细胞因子是脐血CD34 +

CD34^(+)细胞数对单倍体造血干细胞移植治疗恶性血液病的影响

背景:单倍体造血干细胞移植与较高的植入功能不良相关,因此经常要求更高的CD34^(+)细胞数量,但现有研究关于异基因造血干细胞移植CD34+细胞剂量和研究终点关系的结论是有争议的。目的:探究CD34^(+)细胞数对单倍体造血干细胞移植治疗恶性血液疾病临床结果的影响。方法:纳入2019年1月至2021年12月期间于郑州大学第一附属医院造血干细胞移植中心行单倍体造血干细胞移植的恶性血液病患者,总计135例。结合既往研究结果及移植中心经验,以CD34+细胞数5.0×10^(6)/kg为截止点,将队列分为2组。评估两组的移植物植入情况、复发率及非复发死亡率、总生存期和无进展生存期等相关临床指标。结果与结论:①CD34+细胞剂量与血小板的植入相关,高剂量组血小板的植入时间早于低剂量组(14 d vs.16 d,P=0.013)。②两组患者3年总生存期无显著差异(67.5%vs.53.8%,P=0.257);两组间的无进展生存期也无显著性差异(65.6%vs.44.2%,P=0.106),但根据疾病风险指数(DRI)进行分层分析后发现低危患者高剂量组的3年无进展生存期较低剂量组升高(72.0%vs.49.3%,P=0.036)。③高剂量组3年累积复发率小于低剂量组(16.0%vs.33.5%,P=0.05)。④两组100 d内非复发死亡率高剂量组大于低剂量组,但无显著差异(17.3%vs.6.7%,P=0.070);进行分层分析发现,高危患者中高剂量组100 d内非复发死亡率明显高于低剂量组(20.0%vs.3.3%,P=0.046)。⑤综上所述,输注>5.0×10^(6)/kg的CD34^(+)细胞可促进血小板早期植入,可改善移植中低危风险患者的3年无进展生存期,并且降低移植后累积复发率;但在高危患者中,高剂量CD34+细胞导致移植后100 d内的非复发死亡率增高,考虑可能与移植后早期重度急性移植物抗宿主病的发生增多相关,因此考虑对回输高剂量CD34+细胞的患者应加强移植物抗宿主病的监测。

浅表性CD34阳性纤维母细胞肿瘤6例临床病理分析及文献复习

目的探讨浅表性CD34阳性纤维母细胞肿瘤(superficial CD34 positive fibroblastic tumors,SCPFT)的临床病理特点、免疫表型、诊断和鉴别诊断。方法回顾性分析6例SCPFT,行常规HE染色、免疫组化EliVision法染色。应用FISH法检测PRDM10基因断裂情况,并复习相关文献资料。结果6例SCPFT患者中,男性2例、女性4例。其中4例肿块位于下肢皮下,1例位于下腹部,另1例位于外阴。镜检:肿瘤细胞排列呈束状、实片状,细胞核明显多形性或畸形,核仁明显,可见核内假包涵体,胞质嗜酸性,部分区域细胞呈上皮样,未见核分裂象,间质散在少量炎细胞,免疫表型:肿瘤细胞弥漫强表达CD34和INI1,部分细胞表达CK(AE1/AE3),不表达SMA、CD68、desmin、S-100、CD31和ERG,Ki67增殖指数低于3%。FISH检测:4例SCPFT行FISH检测,其中3例PRDM10呈阳性。结论SCPFT是新近报道的一种软组织肿瘤,具有交界性或低度恶性生物学行为,诊断需与多种CD34阳性的软组织肿瘤相鉴别,避免过度诊断及治疗。

CD34^+细胞在变应性鼻炎外周血和鼻黏膜中的表达

目的探讨CD34+细胞在变应性鼻炎患者外周血和鼻黏膜中的表达及髓外CD34+细胞可能参与变应性鼻炎鼻黏膜中的炎性细胞特别是嗜酸粒细胞(eosinophils,EOS)局部生成的可能性。方法取变应性鼻炎发作期和非发作期患者各12例,两组患者分别取外周血,用流式细胞仪做CD34+细胞记数;分别取鼻黏膜,用免疫组化方法标记CD34+细胞,在尽可能排除血管内皮细胞和纤维细胞CD34+阳性表达后,计数CD34+细胞。结果变应性鼻炎患者发作期外周血中CD34+细胞表达明显高于非发作期患者外周血中CD34细胞的表达(P<0.05),鼻黏膜中CD34+细胞主要表达于黏膜下层EOS聚集区,非发作期患者鼻黏膜中CD34+细胞表达明显高于发作期的鼻黏膜(P<0.01),并与活化的EOS数呈负相关。结论变应性鼻炎外周血、鼻黏膜中CD34+细胞的表达,提示了髓外CD34+细胞可能参与变应性鼻炎鼻黏膜中的炎性细胞特别是EOS的局部生成。

Bcl-2与CD34在基底细胞癌和毛发上皮瘤中的表达及意义

目的:探讨B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)和集落分化抗原34(CD34)在基底细胞癌和毛发上皮瘤中的表达及意义。方法:选取2008年1月—2023年9月常熟市第五人民医院收治的基底细胞癌和毛发上皮瘤143例,根据不同疾病类型将患者分成毛发上皮瘤组(n=85)和基底细胞癌组(n=58),对所有患者进行免疫组化检查,比较Bcl-2与CD34在不同疾病中的表达。结果:基底细胞癌组Bcl-2表达的阳性率为100.00%,CD34表达的阳性率为0.00%,毛发上皮瘤组Bcl-2表达的阳性率为89.41%,CD34表达的阳性率为13.48%,两组Bcl-2表达阳性率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Bcl-2在基底细胞癌诊断中的敏感度高于CD34,特异度低于CD34,差异有统计学意义(P<0.05);两种检查方式在基底细胞癌诊断中的准确率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Bcl-2在毛发上皮瘤诊断中的敏感度高于CD34,特异度低于CD34,差异有统计学意义(P<0.05);两种检查方式的准确率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:Bcl-2在基底细胞癌和毛发上皮瘤中呈高表达,在疾病的鉴别诊断中具有重要意义。CD34基底细胞癌中不表达,在毛发上皮瘤呈低表达,对于疾病的诊断和鉴别无显著意义。

CD34和S100共表达的ALK重排皮肤梭形细胞肿瘤2例及文献复习

目的报道2例具有独特形态学特征、CD34和S100共表达的间变性淋巴瘤激酶(ALK)重排皮肤梭形细胞肿瘤,以提高临床医师对该类软组织梭形细胞肿瘤的认识。方法收集2例外院会诊的病例,采用免疫组化EnVision二步法检测肿瘤中vimentin、ALK(D5F3)、BCL2、CD34及Ki-67的表达情况。1例使用荧光原位杂交(FISH)法断裂探针、1例通过二代测序(NGS)检测ALK基因重排。结果形态学上,肿瘤细胞由温和的梭形细胞或卵圆形细胞构成,呈束状或漩涡状排列,间质玻璃样变及黏液变性,可见较多开放的血管腔。该类肿瘤同时表达CD34和S100,存在ALK基因重排。结论2例CD34和S100共表达的ALK重排皮肤梭形细胞肿瘤具有独特的形态学,具有相同的免疫组化表达及分子特征,与NTRK重排梭形细胞肿瘤具有相似的临床病理学特征。

加减神效瓜蒌散联合扶阳罐治疗乳腺良性疾病的疗效及对CD34和α-SMA的干预作用

目的探究加减神效瓜蒌散配合扶阳罐治疗乳腺良性疾病的疗效及时造血祖细胞抗原CD34和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的干预作用。方法选择广西壮族自治区梧州市中医医院2022年1月至2024年12月符合纳入标准的90例乳腺良性疾病患者,随机分成3组,每组30例。治疗组予加减神效瓜蒌散联合扶阳罐,对照A组予口服托瑞米芬,对照B组予口服乳块消颗粒。比较3组的疗效,以及治疗前后CD34和α-SMA的水平变化。结果治疗组有效率为86.7%,优于对照A、B组,疼痛比例有所降低;治疗组CD34表达水平显著高于对照A、B组(均P<0.05),α-SMA表达水平显著低于对照A、B组(均P<0.05)。结论加减神效瓜蒌散联合扶阳罐治疗乳腺良性疾病具有良好的疗效,值得临床参考和推广。

CD34和D2-40在原发性结肠腺癌中的表达及与伴淋巴结转移状态的关系

目的:探讨原发性结肠腺癌(colon adenocarcinoma,COAD)组织中血管和淋巴管标志物CD34(CD34 Molecule)和D2-40(又称Podoplanin)标记的癌胚抗原M2A的表达及其意义。方法:采用免疫组织化学Elivision TM plus法检测60例COAD组织和4例癌旁正常组织中CD34与D2-40标记的M2A蛋白表达,计数CD34阳性的微血管密度和D2-40阳性的微淋巴管密度,并分析其与COAD临床病理参数的关系。结果:在COAD组织中,CD34、D2-40阳性的微血管密度和微淋巴管密度高于癌旁正常组织(P<0.05)。COAD组织中的CD34微血管密度与病变部位有关,右半结肠癌患者中CD34微血管密度明显高于左半结肠癌患者(P<0.05);伴肠系膜淋巴结转移的COAD组织中CD34微血管密度与D2-40微淋巴管密度呈正相关(P<0.05)。结论:CD34和D2-40标记M2A蛋白在COAD组织中高表达,并且在伴肠系膜淋巴结转移状态下二者呈正相关,提示它们可能协同参与COAD淋巴结转移的发生。

急性髓系白血病患者白血病细胞CD34和CD38抗原的表达及其临床意义

目的:探讨初诊急性髓系白血病(AML)患者白血病细胞CD34和CD38抗原表达与预后的关系,阐明CD34和CD38抗原表达在预测AML患者预后中的作用。方法:收集初诊AML患者94例,采用流式细胞术检测AML患者白血病细胞CD34和CD38抗原的表达,依据CD38抗原表达将患者分为CD34+CD38-组(n=36)和CD34+CD38+组(n=58)。2组患者诱导方案均为IA方案。比较2组患者完全缓解率(CRR)、复发率、中位总生存时间(OS)、中位无病生存时间(DFS)和生存率。结果:CD34+CD38-组患者CRR为77.8%,CD34+CD38+组为86.2%,2组患者诱导治疗后CRR比较差异无统计学意义(P>0.05);CD34+CD38-组患者总复发率和1年内复发率(53.8%和36.0%)均高于CD34+CD38+组(27.9%和14.3%)(P<0.05);CD34+CD38-组患者中位OS(13.60个月)小于CD34+CD38+组(20.33个月)(P<0.05);CD34+CD38-组患者中位DFS(12.87个月)小于CD34+CD38+组(33.93个月)(P<0.05)。CD34+CD38-组患者1年和2年生存率(52.8%和38.9%)低于CD34+CD38+组(75.9%和48.3%)(P<0.05)。结论:白血病细胞CD34+CD38-抗原的表达为初诊AML患者提供一个新的预后指标,表达CD34+CD38-抗原患者预后不良。

高频彩超结合血清CD34、Tg、VEGF诊断甲状腺癌的临床价值

目的分析高频彩超结合血清细胞表面的唾液黏蛋白(CD)34、甲状腺球蛋白(Tg)、血管内皮生成因子(VEGF)诊断甲状腺癌的临床价值。方法选取2018年1月至2023年10月医院收治的50例疑似甲状腺癌患者,均采用高频彩超诊断,并检测Tg、VEGF、CD34表达。以手术病理结果为金标准,分为良性组与恶性组,分析对甲状腺癌的诊断价值。结果恶性组收缩期峰值流速(PSV)、阻力指数(RI)高于良性组,血流分级3级占比率高于良性组,纵横比>1、内部微钙化、后方衰减占比率均高于良性组(P<0.05)。恶性组血清Tg、VEGF、CD34表达水平均高于良性组(P<0.05)。绘制受试者工作特征曲线(ROC)后,高频彩超结合血清Tg、VEGF、CD34预测甲状腺癌的灵敏度(93.30%)、特异度(92.50%)均高于单一指标(P<0.05)。结论高频彩超结合血清CD34、Tg、VEGF表达诊断甲状腺癌的临床价值较高。

骨髓增生异常综合征患者骨髓CD34^-和CD34^+细胞凋亡与增殖的意义及对生存的影响(英文)

本研究分析骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓CD34+和CD34-细胞凋亡和增殖情况,探讨MDS的发病机制,并判断其与疾病预后的关系。流式细胞术分析20例高危MDS、20例低危MDS患者及10例正常对照者骨髓CD34+细胞的比例、CD34+细胞和CD34-细胞凋亡、增殖的百分率,计算各组中的凋亡/增殖(A/P)比。并用单变量和多变量生存分析法分析CD34+细胞和CD34-细胞增殖和凋亡对预后的影响。结果表明:①MDS高危组患者骨髓CD34+细胞的比例明显高于低危组(P<0.05),而低危组与对照组比较无显著差异;②CD34+,CD34-细胞的凋亡率在MDS低危组中均为最高,明显高于MDS高危组和对照组。在低危组中,CD34-细胞的凋亡率为(80.36±1.82)%,明显高于CD34+细胞的(54.75±2.18)%(P<0.05),而在高危组中,CD34+,CD34-细胞的凋亡率无显著差异;③CD34+细胞的增殖率在MDS高危组中最高,明显高于低危组和对照组,而CD34-细胞的增殖率在MDS高危和低危组间无显著差异。高危组CD34+细胞的增殖率为(50.67±3.37)%,明显高于CD34-细胞的(30.99±1.96)%(P<0.05);④CD34+、CD34-细胞的A/P值在MDS低危组均明显高于高危组和正常对照组,而CD34-细胞的A/P值在MDS高、低危组均明显高于CD34+细胞的A/P值(P<0.05)。此外,CD34+细胞的凋亡率与生存及预后明显相关。结论:CD34+细胞百分率随MDS危险度增加而逐渐增加,在低危组中以CD34-细胞的凋亡占主导,随着病情进展,在高危组中则以CD34+细胞的增殖占主导,提示异常的凋亡和增殖在MDS的发生和发展中起重要作用。此外,CD34+细胞的凋亡率可能是独立的预后不良因素,抑制凋亡可能诱导MDS向白血病的转化。

乳腺癌组织ER、P63、CD34表达水平及其与临床病理特征的关系分析

目的:研究乳腺癌组织雌激素受体(ER)、P63、CD34表达水平及其与临床病理特征的关系。方法:选取南通市通州区中医院2021年1月—2023年10月收治的72例乳腺癌患者开展研究。采集乳腺癌组织及癌旁正常组织,以免疫组织化学法检测ER、P63、CD34表达水平。对比不同乳腺组织ER、P63、CD34表达情况,分析上述三项蛋白表达情况与临床病理特征的关系。结果:乳腺癌组织ER及CD34阳性率均高于癌旁正常组织,而P63阳性率低于癌旁正常组织(均P<0.05)。病灶直径≥2 cm、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、淋巴结转移乳腺癌患者ER、CD34阳性率均高于病灶直径<2 cm、TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移乳腺癌患者;而P63阳性率均低于病灶直径<2 cm、TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移乳腺癌患者(均P<0.05)。结论:乳腺癌组织ER、CD34呈异常高表达,而P63呈异常低表达。上述三项蛋白表达水平与乳腺癌病灶直径、TNM分期及淋巴结转移密切相关。

中剂量rhG-CSF对正常供者外周血CD34^+细胞动员效果

本研究探讨中等剂量600μg/d粒细胞集落刺激因子(GCSF)对正常供者CD34+细胞的动员效果及动员前后外周血单个核细胞中T细胞亚群的变化。对2002-2004年我科31例健康供者给予rhGCSF600μg/d,在动员的第4天开始采集外周血干细胞(PBSC),并检测动员前后白细胞总数、动员后的有核细胞(NC)数、单个核细胞(MNC)数、CD34+细胞数及粒巨噬细胞集落形成单位(CFUGM),同时观察动员及采集过程中的不良反应。对12例供者GCSF动员前后外周血单个核细胞中T细胞亚群的变化进行了观察。结果显示:600μg/d组与既往使用的300μg/d组相比,rhGCSF动员后的外周血细胞中NC、MNC和CD34+细胞及CFUGM显著增加(P<0.05),受者造血重建时间缩短(P<0.05),动员和采集过程中的不良反应发生率无明显上升(P>0.05),无严重不良反应发生。动员后CD3+细胞在PBMNC中的比例较动员前下降(15.05±3.3)%,(P<0.05)。动员前后CD4+/CD8+淋巴细胞的比值无明显变化(P>0.05)。结论:600μg/d的GCSF对正常供者的动员效果好,受者造血重建快,无严重不良反应发生。动员后PBMNC中CD3+细胞的下降及CD4+/CD8+淋巴细胞比值无明显变化,从而使得移植后急性GVHD的发生率无明显上升。

人骨髓间充质干细胞体外支持脐血CD34^+细胞增殖的研究

为了研究人骨髓间充质干细胞(MSC)作为滋养层细胞体外支持脐血CD34+细胞扩增的作用,将MSC和胎儿骨髓来源的成纤维细胞样骨髓基质细胞系(HFCL)经60Coγ线照射后分别制备细胞滋养层,比较不同滋养层细胞和添加或不加细胞因子对脐血CD34+细胞增殖数及LTC-IC数的影响。结果表明,无论有无添加细胞因子(rhFL、rhSCF、rhTPO),HFCL滋养层组培养12天扩增细胞数明显高于MSC滋养层组,以第0天细胞数为100%(下同),有细胞因子组为(9797±361)%vs(7061±418)%,无细胞因子组为(5305±354)%vs(1992±247)%,均P<0.01。MSC滋养层组CD34+细胞扩增数与HFCL滋养层组相比无显著差异[(825±305)%vs(820±191)%,P>0.05],但在细胞因子存在时低于HFCL滋养层组[(939±212)%vs(1617±222)%,P<0.01]。MSC滋养层组维持脐血中LTC-IC的能力明显优于HFCL滋养层组[第5周CFU-GM数(129.95±8.73)个/105接种细胞数vs(89.81±10.29)个/105接种细胞数,P<0.05];细胞因子存在时,其作用更为明显[第5周CFU-GM数(192.93±4.95)个/105接种细胞数vs(90.47±14.28)个/105接种细胞数,P<0.01]。MSC与HFCL按一定比例混合,可提高扩增效率。当MSC与HFCL之比为4∶1时,集落形成数量最高,达(186.89±11.11)个/105接种细胞数,明显高于比例为3∶2(131.45±13.02)个/105接种细胞数和二者单用组[前者(138.92±14.84)个/105接种细胞数,后者(64.63±6.11)个/105接种细胞数;均P<0.01]。结论:MSC维持脐血中LTC-IC集落形成的能力优于基质细胞系HFCL,HFCL支持脐血CD34+细胞的增殖能力优于MSC,MSC加上适量HFCL可显著提高CD34+细胞扩增效率。

原子力显微镜观测CD34阳性细胞的形貌结构

目的用原子力显微镜观测正常人及表达CD34抗原的白血病细胞表面的形貌结构,并比较两者的异同。方法从健康人和M2b型白血病患者各3例骨髓标本中分离出单个核细胞,利用免疫磁柱法纯化CD34+细胞,流式细胞仪检测其纯度。用光学显微镜和原子力显微镜进行观测。结果光学显微镜下两种来源的CD34+细胞形貌相似。原子力显微镜下可观测到细胞表面有许多微绒毛突起,表面粗糙度在不同来源细胞内部呈正态分布,正常人及表达CD34抗原的白血病细胞表面在平均粗糙度、均方根粗糙度方面有显著差别。结论M2b型CD34+白血病细胞较正常CD34+细胞表面皱折程度显著降低。

B淋巴细胞白血病骨髓B细胞CD34^+CD38^+和CD34^+CD38^(low/-)细胞亚群的临床意义

本研究比较发病时免疫表型为CD34+CD38+和CD34+CD38low/-两组B淋巴细胞白血病(B-ALL)的生物学特性,并探讨其临床意义。选取54例初发B-ALL并经多参数流式细胞术检测为CD34+的B-ALL患者,根据CD38表达不同将其分为CD34+CD38+组(n=35)和CD34+CD38low/-组(n=19)。利用实时定量PCR的方法分别进行BCR-ABL,TEL-AML1和WT1基因的检测。随访标本利用7色流式细胞术检测微量残留病(MRD),平均随访时间12个月(1-28个月),平均随访间隔2个月(1-5个月)。结果表明,两组患者发病时WBC,血小板和血红蛋白水平及BCR-ABL,TEL-AML1和WT1基因阳性表达的比例均无统计学差异(P>0.05)。在诱导缓解后,CD34+CD38+组微量残留病阳性(MRD+)为28.57%(10/35),CD38low/-组MRD+为68.42%(13/19),CD34+CD38low/-组MRD+的检出率明显高于CD34+CD38+组(P<0.01)。在复发率上,CD34+CD38+组有2例,分别在第94天和第245天复发,复发率为5.71%(2/35)。CD34+CD38low/-组有7例复发,复发率为36.84%(7/19),中位复发时间263 d(46-468 d),两组间具有明显统计学差异(P<0.01)。本研究以16岁为年龄分界点,CD34+CD38+组16岁以上患者为8人(8/35),CD34+CD38low/-组16岁以上患者为10人(10/19),两组间有统计学差异(P<0.05)。结论:CD34+CD38low/-患者在成人中比例较高,且CD34+CD38low/-组在治疗后更易出现MRD+和复发。

CD34抗原的生物学特性及其临床应用

CD34抗原是一种高度糖基化Ⅰ型跨膜蛋白,它选择性的表达于人类造血干细胞(HSC),祖细 胞(PC)和血管内皮细胞(EC)表面。CD34+细胞并非通常所指的原始细胞,而是存在于淋巴细胞群内的造血 干细胞,随干细胞的分化成熟而逐渐消失。目前,已经证实了最原始的造血干细胞是CD34-细胞。本文对 CD34抗原、CD34+细胞和CD34-细胞的生物学特性以及临床应用进行了综述。

IL-12、IL-15在急性髓系白血病患者骨髓来源CD34+白血病细胞转化为NK细胞中的作用机制研究

分析IL-12、IL-15在急性髓系白血病患者骨髓来源CD34+白血病细胞转化为NK细胞中的作用机制。方法:选取本院2021年12月~2022年12月期间收治的30例急性髓系白血病患者,提取患者BM-MNC,构建NK细胞诱导体系,A组加入SCF、IL-7、IL-12、IL-15,B组加SCF、IL-7、IL-2、IL-15。5周诱导分化结束后,对NK细胞活化情况进行检测。对NK细胞相关基因表达水平进行实时定量PCR检测,取K562细胞和患者来源原代白血病细胞分别作为靶细胞,取培养第5周的A、B组的NK细胞作为效应细胞,对NK细胞杀伤活性进行检测。结果:诱导分化前,BM-MNC中NK细胞和CD34+细胞所占比例分别为(0.46±0.11)%、(80.35±5.12)%。诱导分化后,A组NK细胞所占比例明显高于B组(P<0.05);但两组CD34 细胞所占比例组间差异不明显(P>0.05)。A组CD69+、Kp46+、NKG2D+表达比例均明显高于B组(P<0.05)。经组间差异检验,B组GranzymeB、TNF-α和IFN-y基因相对表达水平均显著低于A组(P<0.05)。对两组NK细胞对不同效靶比K562细胞与患者来源细胞的杀伤率进行统计和比较,结果显示,在不同的效靶比下,NK细胞对本组K562细胞以及骨髓血来源白血病细胞的杀伤率均存在一定的差异。其中,均呈现出效靶比越大,相应的杀伤率越高的特点。对两组NK细胞在同一效靶比下对不同细胞的杀伤情况进行比较,可知,对患者来源细胞的杀伤率均明显高于K562细胞(P<0.05)。开展组间比较,结果显示在同一效靶比下,A组细胞组合对K562细胞以及患者来源细胞的杀伤率均显著高于B组(P<0.05)。结论:IL-12、IL-15细胞因子组合可体外诱导分化CD34+白血病细胞为NK细胞,且具有一定的杀伤活性。

阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者骨髓CD34^+CD59^+细胞与正常人CD34^+细胞生存、增殖、扩增性能的比较

目的探索阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)患者骨髓CD34CD59细胞体外扩增的方法,并对其与正常人CD34+细胞的生存、增殖及扩增性能进行比较,为PNH患者实现自体骨髓移植(ABMT)或自体外周血干细胞移植(APBSCT)提供重要的实验基础。方法应用免疫磁珠富集纯化CD34+细胞,然后用流式细胞仪分选出PNH患者的CD34+CD59+细胞及正常人CD34+细胞。对两种细胞在不同造血生长因子组合下,进行体外扩增液体培养2周。并对扩增前及扩增不同阶段的细胞进行体外半固体培养。结果(1)PNH患者CD34+CD59+细胞在体外能得到有效的扩增,在细胞因子合理组合作用下,第7天时CD34+CD59+细胞绝对数扩增约23.49倍。2PNH患者CD34+CD59+细胞与正常人CD34+细胞存在部分相同或相似的特性。在体外扩增过程中,对细胞因子的反应有相同的趋势,均为扩增第7天达到扩增高峰,均在SCF+IL-3+IL-6+FL+Tpo+Epo组合条件下达到最大扩增能力。并且扩增后的细胞仍有形成CFU的能力,均能很好地保持CD59抗原,无GPI锚连蛋白的丢失。(3)正常人CD34+细胞在生存、增殖、形成CFU的能力及扩增能力上均明显强于PNH患者的CD34+CD59+细胞。结论(1)PNH患者CD34+CD59+细胞在体外能得到有效的扩增,临床上应用具有一定的可行性,能满足大多数PNH患者ABMT或APBSCT的需要。(2)