外周血CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞、TLR4、hCMV-IgM与动脉粥样硬化型急性脑梗死患者颈动脉粥样硬化的关系

目的探讨外周血CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞、TLR4、人巨细胞病毒(hCMV)-IgM与动脉粥样硬化型急性脑梗死(As-ACI)患者颈动脉粥样硬化的关系。方法选取89例As-ACI患者(脑梗死组),另选取健康体检者43例(对照组)。根据颈内动脉超声结果将As-ACI患者分为内膜正常组、内膜增厚组、斑块组、狭窄组。比较各组外周血CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞水平、单个核细胞TLR4表达水平、hCMV-IgM抗体阳性率和内膜中膜厚度(IMT)。分析As-ACI患者颈动脉狭窄的危险因素,分析CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞、TLR4与IMT的相关性及其对颈动脉狭窄的预测价值。结果脑梗死组CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞、HDLC水平低于对照组,TLR4表达、hCMV-IgM抗体阳性率、TC、TG、LDLC、hs-CRP水平、IMT高于对照组(P<0.05)。内膜正常组、内膜增厚组、斑块组、狭窄组CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞水平依次降低,TLR4表达、hCMV-IgM抗体阳性率、IMT依次增高(P<0.05)。CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞水平与IMT呈负相关,TLR4表达与IMT呈正相关(P<0.05)。高血压、CD4^(+)CD25^(+)Treg表达、TLR4表达、hCMV-IgM抗体阳性是As-ACI患者颈动脉狭窄的危险因素(P<0.05)。CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞、TLR4表达水平联合检测的预测价值高于单独检测(P<0.05)。结论外周血CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞、TLR4、hCMV-IgM抗体阳性率与As-ACI患者颈动脉粥样硬化进展有关,外周血CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞、TLR4联合可以较好预测病变过程。

RhoA、CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞、MYBL2在胃癌患者中的表达及对预后和生存时间的影响

目的:探讨RhoA、CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞、成髓细胞瘤转录因子第2亚型(MYBL2)在胃癌患者中的表达及对预后和生存时间的影响。方法:选取2017年1月至2019年1月于本院就诊的134例胃癌患者术后癌组织标本作为研究对象,另选取其中62例胃癌患者相应的癌旁组织标本及40例同期非胃癌患者正常胃黏膜组织标本进行对照,检测癌组织、癌旁组织、正常胃黏膜组织中RhoA、CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞、MYBL2的表达情况,分析其对胃癌预后及生存时间的影响。结果:RhoA,CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞、MYBL2在癌组织中的阳性率均明显高于癌旁组织和正常胃黏膜组织(P<0.05)。胃癌患者术后平均生存时间为(28.61±1.34)个月,其中RhoA、CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞、MYBL2阳性患者的生存时间均短于阴性患者(P<0.05)。RhoA(+)、CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞(+)、MYBL2(+)是胃癌患者预后的危险因素(P<0.05)。结论:检测RhoA,CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞、MYBL2的表达可作为胃癌病情严重程度、预后及生存时间评估的重要补充手段。

慢性乙型肝炎患者外周血CD4^＋CD25^＋Treg与CD4^＋和CD8^＋ T淋巴细胞亚群的相关研究

目的:探讨慢性乙型肝炎患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的含量和CD4+CD8+T淋巴细胞亚群分布,两者之间相关性及与HBV的相关性。方法:采用流式细胞术检测50例慢性乙型肝炎患者和20例健康对照者外周血中CD4+CD25high、CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞表达及CD3/CD4/CD8 T淋巴细胞亚群,荧光定量PCR法检测HBV DNA含量。结果:慢性乙型肝炎患者外周血中CD4+CD25highTreg明显高于健康对照组(P<0.01),且随HBV DNA载量增加,患者外周血中CD4+CD25highTreg细胞的水平逐渐升高。慢性乙型肝炎患者外周血中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞也相应增高,且与CD4+CD25highTreg细胞的变化成正相关(r=0.890,P<0.001)。与健康对照组比较,患者组CD4+T细胞百分率及CD4+/CD8+比值均降低,而CD3+T细胞和CD8+T细胞百分率差异无显著性(P>0.05)。CD4+CD25highTreg细胞与HBV DNA取对数后成正相关(r=0.782,P<0.001),与谷丙转氨酶(ALT)成正相关(r=0.432,P<0.005);与CD3+、CD4+、CD8+T细胞水平及CD4+/CD8+比值均无相关性(P>0.05)。CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞及CD4+/CD8+比值与HBV DNA载量之间亦无相关性(P>0.05)。结论:慢性乙型肝炎患者外周血中CD4+CD25+Treg细胞增高,且与HBV的复制水平及ALT增高具有一致性,而T细胞亚群是否可作为监测CHB患者免疫状态的指标需进一步探讨。

斑秃患者外周血CD4^+ CD25^+ Treg细胞计数及TGF-β_1的表达

目的通过检测斑秃患者外周血中CD4+CD25+Treg细胞计数、转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达水平,探讨斑秃的发病机制。方法采用流式细胞技术检测50例未治疗的斑秃患者外周血中CD4+CD25+Treg细胞的水平变化,ELISA法检测血清中TGF-β1含量,并进行相关性分析,以30例健康者作为正常对照。结果斑秃患者组外周血CD4+CD25+Treg细胞占T淋巴细胞的比率和血清TGF-β1浓度均低于正常对照组(P均<0.01),且重型患者组显著低于正常对照与局限型患者组(P<0.01),局限型患者组低于正常对照组(P<0.05)。斑秃患者外周血CD4+CD25+Treg细胞水平,血清中TGF-β1含量均与SALT评分呈显著负相关(r=-0.566,-0.471;P均<0.01),而两者呈显著正相关(r=0.584,P<0.01)。结论斑秃患者外周血中CD4+CD25+Treg细胞与血清中TGF-β1呈一定相关性,且两者与斑秃病情的严重程度相关;CD4+CD25+Treg细胞的数量减少和TGF-β1表达降低可能与斑秃的细胞免疫失调有关。

不明原因复发性流产小鼠模型CD4^+CD25^+ Treg的比例及Foxp3表达的变化

目的分析比较小鼠正常妊娠模型和流产模型中CD4+CD25+调节性T细胞CD4+CD25+Treg的比例、Foxp3蛋白表达水平及胎盘吸收率,探讨CD4+CD25+Treg与不明原因复发性流产的关系。方法以雌性CBA/J×雄性Balb/c为对照组,以雌性CBA/J×雄性DBA/2J为流产组,各10对,于妊娠第14天采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)分析CD4+CD25+Treg在CD4+细胞中所占比例,Western blot检测并比较2组CD4+T细胞中Foxp3的表达,并观察2组小鼠的胎盘吸收情况。结果流产组CD4+CD25+Treg所占比例为(10.1±0.59)%低于对照组(15.5±0.78)%(P<0.05)。流产组胚胎吸收率为(25.6±3.5)%,明显高于对照组(2.4±1.6)%(P<0.01)。流产组Foxp3谱带密度相对值为0.30±0.018,低于正常组的0.68±0.025(P<0.05)。结论小鼠的自然流产模型建立成功,流产组孕鼠CD4+CD25+Treg的比例和Foxp3蛋白表达水平明显低于正常妊娠组,提示流产组高流产率可能与CD4+CD25+Treg数量和Foxp3的表达减少有关,CD4+CD25+Treg细胞的数量减少和功能缺陷可能是不明原因复发性流产的发生机制之一。

升血小板胶囊对免疫性血小板减少性紫癜CD_4^+CD_(25)^+Treg细胞的影响

目的:探讨升血小板胶囊对免疫性血小板减少性紫癜患者外周血CD+4CD+25Treg细胞计数和分泌因子水平的影响。方法:选取医院收治的免疫性血小板减少性紫癜患者66例,以随机数字法分为两组;对照组常规泼尼松治疗,观察组在对照组的基础上服用升血小板胶囊,对比临床疗效;并分别于治疗前后抽取患者空腹静脉血,以流式细胞法测定CD+4CD+25Fox P3+Treg细胞计数,以ELISA试剂盒测定IL-10及TGF-β1血清含量。结果:两组患者的总有效率无显著差异,但观察组的整体临床疗效和显效率均显著高于对照组(P<0.05)。治疗前,两组患者外周血CD+4CD+25Fox P3+Treg细胞计数比和血清IL-10、TGF-β1血清含量无显著差异(P>0.05);治疗后,两组患者各项指标均有不等程度的升高,且观察组显著高于对照组(P<0.05)。结论:CD+4CD25调节性T细胞数量减少或功能缺陷可能参与了免疫性血小板减少性紫癜的发病进程,升血小板胶囊可能能够通过该环节发挥治疗作用。

炎症性肠病患者外周血CD4^＋CD25^＋Treg细胞及其特异标志物Foxp3表达水平的研究

目的:通过检测炎症性肠病(IBD)不同病期患者以及对照组外周血CD4+CD25+Treg及其特异标志物Foxp3的表达,来分析与IBD疾病活动性关系,探讨CD4+CD25+Treg和Foxp3在IBD发病机制中的作用。方法:52例IBD患者和35例正常对照组分别应用流式细胞术和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测外周血中CD4+CD25+T细胞亚群的百分率测定和外周血单个核细胞Foxp3mRNA的表达水平。结果:IBD患者外周血CD4+CD25+Treg细胞比例明显低于疾病缓解期患者和正常对照组(P<0.01);活动期IBD患者中使用激素和/或免疫抑制剂与未使用激素和/或免疫抑制剂结果差异有统计学意义;IBD患者外周血单个核细胞(PBMC)中Foxp3 mRNA表达水平低于缓解期和正常人,差异有显著性(P<0.05);缓解期Foxp3 mRNA水平与正常人差异无显著性(P>0.05);IBD患者外周血CD4+CD25+Treg细胞表达率及PBMC中的Foxp3 mR-NA表达水平与疾病活动指数评分呈负相关性。结论:活动期IBD患者外周血CD4+CD25+Treg细胞及Foxp3 mRNA表达下调,而恢复期其表达回升,且二者呈正相关,并与临床活动评分呈负相关,因此认为CD4+CD25+Treg细胞和Foxp3可能参与疾病的发生发展,与疾病的活动性密切相关。

花姜酮对小鼠CD4^+CD25^+Treg细胞分化功能的影响及机制

目的:建立小鼠CD4^+CD25^+Treg细胞的体外诱导及培养方法,同时探讨花姜酮(Zerumbone)对Treg细胞的分化、分泌功能的影响及其机制。方法:从BABL/c小鼠的脾脏分离、纯化CD4^+CD62L^+T细胞,加入转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β(5 ng/mL)、白细胞介素(interleukin,IL)-2(30μg/mL)促进CD4^+CD62L^+T细胞向Treg细胞分化。Treg细胞被分为5组:正常组、模型对照组、Zerumbone(1μmol/L)组、Zerumbone(10μmol/L)组、Zerumbone(30μmol/L)组。流式细胞术检测各组Treg细胞的比例,酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)方法检测IL-10含量,Foxp3、IL-10 mRNA的表达用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测。结果:本实验方法使Treg细胞的诱导比例明显升高(P<0.01)。与模型对照组相比,Zerumbone组的Treg细胞比例呈剂量依赖性升高(P均<0.05)。IL-10蛋白的表达与模型对照组比较也呈剂量依赖性升高(P均<0.05),Foxp3、IL-10 mRNA的表达同样升高(P<0.05),其中Zerumbone(30μmol/L)组升高最明显(P<0.01)。结论:在体外实验中,Zerumbone可以促进BABL/c小鼠体内的CD4^+CD62L^+T细胞向Treg细胞分化,并促进IL-10蛋白的表达,其机制可能与诱导CD4^+CD25^+Treg特异性转录因子Foxp3的表达有关。

慢性丙型病毒性肝炎患者CD4^+CD25^+ Treg细胞与自身抗体的相关性研究

目的探讨慢性丙型病毒性肝炎患者CD4^+CD25^+Treg细胞水平与自身抗体之间的关系及其临床意义。方法选取2013年10月至2015年2月该院收治的324例新入院且未经治疗的慢性丙型病毒性肝炎患者,利用间接免疫荧光和免疫印迹方法检测患者自身抗体谱的表达状况,同时使用流式细胞术计数患者外周血CD4^+CD25^+Treg细胞数量。结果 324例慢性丙型病毒性肝炎患者,有136例患者至少有1项自身抗体阳性,另有188例慢性丙型病毒性肝炎患者自身抗体谱表达均为阴性。自身抗体阳性组CD4^+CD25^+Treg细胞百分比明显低于自身抗体阴性组(P<0.05);同时慢性丙型肝炎患者CD4^+CD25^+Treg细胞水平随着自身抗体表达数的增加而降低,呈负相关。结论对HCV感染患者进行CD4^+CD25^+Treg细胞水平监测,能有效预判患者发生免疫耐受的可能性。

CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg及CD19^(+)CD69^(+)B细胞在狼疮性肾炎患者外周血中的水平变化及其与疾病活动度的关系

目的研究CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg、CD19^(+)CD69^(+)B细胞在狼疮性肾炎中的水平变化与及其与病活动度的关系。方法选取我院于2018年10月至2020年10月收治的108例狼疮性肾炎患者作为研究组,根据系统性红斑狼疮的疾病活动指数(SLEDAI)分为轻度活动度组(38例)、中度活动度组(44例)、重度活动度组(26例),另选取同期于我院行肾穿刺活检证实为微小病变患者为对照组(50例)。检测受试者外周血中CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg、CD19^(+)CD69^(+)B细胞水平,分析各组间细胞水平差异,采用ROC曲线分析CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg、CD19^(+)CD69^(+)B细胞诊断狼疮性肾炎的价值,采用Pearson相关性分析各细胞与疾病活动度间的相关性。结果研究组患者外周血CD19^(+)CD69^(+)B细胞、TNF-α、CA199水平均显著高于对照组(P<0.05),而CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg明显低于对照组(P<0.05)。不同严重程度狼疮性肾炎患者外周血CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg、CD19^(+)CD69^(+)B细胞、TNF-α、CA199水平差异有统计学意义(P<0.05),其中重度组患者外周血CD19^(+)CD69^(+)B细胞、TNF-α、CA199水平最高。Pearson相关性分析显示,CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg、CD19^(+)CD69^(+)B细胞分别与SLEDAI评分呈现负、正相关性,相关系数r分别为-0.458、0.468。采用ROC曲线分析显示,CD19^(+)CD69^(+)B细胞、CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg诊断狼疮性肾炎的曲线下面积分别为0.801(95%CI=0.722~0.880)、0.839(95%CI=0.775~0.903)。两者联合诊断的曲线下面积为0.885(95%CI=0.826~0.944),高于单独检测(P<0.05)。结论CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg、CD19^(+)CD69^(+)B细胞在狼疮性肾炎患者外周血中处于异常水平状态,且水平与疾病活动度相关,两者联合检测可作为诊断狼疮性肾炎的新指标。

五味温通除痹胶囊联合中药熏蒸对AS患者外周血CD4^+CD25^+CD127^(low/-)Treg表达的影响

目的:观察五味温通除痹胶囊联合中药熏蒸对督寒型强直性脊柱炎(AS)患者的临床疗效及对外周血CD4^+CD25^+CD127^(low/-)Treg表达的影响。方法:将78例督寒型AS患者按随机数字表法分为治疗组和对照组,治疗组给予五味温通除痹胶囊口服并联合中药熏蒸治疗;对照组给予柳氮磺胺吡啶口服,2组疗程均为8周。对2组中医证候评分、总体疗效评价、中医证候疗效评价及CD4^+CD25^+Treg等实验室指标进行观察。结果:治疗组第4、8周有效率明显高于对照组,中医证候显效率及总有效率高于对照组;与对照组比较,治疗组患者治疗后中医证候积分、总体以及腰背痛VAS评分、BASDAI、BASFI功能评分、ASDAS评分均显著降低。结论:五味温通除痹胶囊联合中药熏蒸能显著上调督寒型AS外周血CD4^+CD25^+CD127^(low/-)Treg表达,有效改善AS患者临床症状。

CD4^+CD25^+Treg在急性淋巴细胞白血病患者外周血中的表达及其体外实验研究

目的初步探讨CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+ regulatory T cells,CD4+CD25+Treg)在急性淋巴细胞白血病(acute lymphocytic leukemia,ALL)患者化疗前及化疗缓解后外周血中的表达水平,并研究患者血清能否诱导外周血CD4+CD25-T细胞转化为CD4+CD25+Treg。方法①采用流式细胞术分别检测ALL初诊组、化疗完全缓解或部分缓解组及正常对照组外周血中CD4+CD25+T细胞所占比例,然后通过荧光定量RT-PCR检测各组外周血中转录因子Foxp3mRNA的表达水平,并逐层分析比较。②采集正常人外周血单个核细胞后,对照组用正常人血清,实验组用患者血清并分别设浓度梯度进行培养,72h后采用流式细胞术、荧光定量RT-PCR分别检测CD4+CD25+T细胞和Foxp3mRNA表达。结果ALL化疗缓解组CD4+CD25+T细胞及Foxp3mRNA表达水平均明显高于ALL初诊组和正常对照组(P<0.05),后两者之间CD4+CD25+T细胞水平无统计学差异(P>0.05),但ALL初诊组Foxp3mRNA含量较正常对照组明显升高(P<0.01),差异具有统计学意义;并且血清培养对照组CD4+CD25+T细胞水平及Foxp3mRNA含量均明显低于实验组(P<0.05),且其表达并不随血清浓度的增加而升高。结论CD4+CD25+Foxp3+Treg在ALL初诊组及化疗缓解组患者外周血中比例明显升高,且初步表明患者血清中的可溶性物质可诱导外周血CD4+CD25+T细胞转化为CD4+CD25+Treg,提示CD4+CD25+Treg可能是ALL免疫抑制的一个重要原因。

S180腹水癌小鼠肿瘤浸润淋巴细胞中CD4^+CD25^+Treg细胞在肿瘤逃逸中的作用

目的:研究肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)中CD4+CD25+Treg细胞及免疫监视功能的变化,探讨CD4+CD25+Treg细胞在肿瘤免疫逃逸中的作用。方法:建立小鼠S180腹水癌模型,采集S180腹水癌小鼠TIL、脾脏细胞及对照组小鼠脾脏细胞,采用流式细胞术检测CD4+CD25+Treg细胞、CD8+T细胞、NK细胞的数量及NKG2D的表达水平,采用RT-PCR方法检测Foxp3 mRNA的表达水平,采用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测CD8+T细胞的杀伤功能。结果:与对照组小鼠比较,S180腹水癌小鼠脾脏、TIL中CD4+CD25+Treg细胞数量和Foxp3 mRNA表达均明显增高(P<0.05),并且肿瘤组小鼠TIL中CD4+CD25+Treg细胞数量和Foxp3 mRNA表达较肿瘤组小鼠脾脏均明显增高(P<0.05);TIL中CD8+T细胞数量明显增高(P<0.05),其杀伤功能却有所下降;TIL中NK细胞数量及NKG2D表达均明显增高(P<0.05)。结论:肿瘤局部CD4+CD25+Treg细胞数量增加、功能增强,可能是肿瘤逃避免疫监视的机制之一。

乙型肝炎患者治疗前后外周血CD4^+CD25^+Tregs TCR CDR3谱系漂移特征分析

目的:探讨AHB患者急性期及恢复期、CHB患者恩替卡韦治疗前后外周血PBMC中CD4^+CD25^+Tregs TCR CDR3谱系漂移特征的变化。方法:采集4例正常人、3例AHB患者(急性期和恢复期)及4例CHB患者恩替卡韦治疗前后外周抗凝静脉血,分离外周血PBMC;磁珠分选法分选CD4^+CD25^+Tregs,提取总RNA,逆转录合成c DNA;根据TCRβ链24个可变区基因(TRBV)家族设计相应的上游引物,并在β链恒定区(BC)设计一条共用的FAM荧光标记下游引物及对照引物。PCR扩增出24个包含完整CDR3区的TRBV家族的PCR产物,电泳鉴定目的片段;PCR产物送上海基康用毛细管电泳法进行基因扫描;用Peak Scanner Software v1.0软件分析研究对象TRBV家族CDR3谱系特征;采用配对t检验(paired-sample t test)检测AHB患者急性期及恢复期、CHB患者恩替卡韦治疗前后TRBV家族谱系漂移率差异。结果:3例AHB患者急性期呈现普遍谱系漂移的TRBV4、10、14、16、19家族在恢复期多转变为正态的多峰谱型,AHB患者恢复期外周血CD4^+CD25^+Tregs TRBV家族CDR3谱型漂移率显著低于急性期(t=9.456,P=0.011);TRBV8、11、13.2、15、16、18、20在3例CHB患者抗HBV治疗前出现克隆增生,TRBV1、5.2、6、12、14、24在3例CHB患者抗HBV治疗后出现克隆增生。CHB患者抗病毒治疗后TRBV家族CDR3谱型漂移率高于治疗前(t=-0.666,P=0.553)。结论:AHB患者急性期呈现谱系漂移的TRBV4、10、14、16、19家族在恢复期多转变为正态的多峰谱型,推测这种转变可能与HBsAg、HBeAg转阴相关。CHB患者在治疗前TRBV8、11、13.2、15、16、18、20家族克隆增生的Tregs可能通过下调机体的细胞免疫应答,阻碍病毒清除;随着药物导致病毒载量的显著下降,TRBV1、5.2、6、12、14、24家族克隆增生的Tregs可能更有助于诱导机体出现免疫耐受,导致HBV不能彻底清除。

变应性鼻炎患者外周血CD_4^+ CD_(25)^+ Treg细胞检测及临床意义

目的了解变应性鼻炎患者外周血CD+4CD+25Treg细胞含量并探讨其临床意义。方法采用流式细胞仪分别检测变应性鼻炎15例外周血淋巴细胞中CD+4T细胞占T细胞比例以及CD+4CD+25Treg细胞占CD+4T细胞的比例,并与15例健康对照者进行比较。结果变应性鼻炎患者外周血CD+4T细胞占T细胞比例与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);变应性鼻炎患者外周血中CD+4CD+25Treg细胞、Foxp3+CD+4CD+25T细胞占CD+4T细胞的比例与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),2组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论变应性鼻炎患者CD+4CD+25Treg细胞在外周血中比例明显减少,这可能在变应性鼻炎的发病机制中起重要作用。

外周血CD4^+CD25^+ Treg细胞与HBV携带者相关性的Meta分析

目的:探讨CD4+CD25+Treg细胞在乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)携带者及相关感染状态中分布特征,以期揭示其与HBV携带者的相关性,为临床干预提供依据.方法:计算机检索Pubmed、SCI、Embase、CNKI、万方及维普等数据库,依据NewcastleOttawa Scale(NOS)标准评价文献质量,按照PICOS原则提取资料,采用RevMan5.1软件进行Meta分析.结果:纳入文献24篇.HBV携带者外周血Treg细胞含量较健康对照高(P=0.01);与HBV携带者比较,慢性乙型肝炎Treg细胞含量较高(P=0.12),急性乙型肝炎较低(P=0.15);慢性HBV携带者Treg细胞高于非活动性HBsAg携带者(P=0.01).Treg细胞含量与HBV DNA、丙氨酸转氨酶是否存在相关性,因研究一致性差,结论尚不能确定.结论:CD4+CD25+Treg细胞可能成为影响HBV携带者预后及转归的重要因素.

应用CD4^+CD25^+Treg细胞诱导大鼠肾移植免疫耐受的研究

目的应用供体抗原特异性CD4+CD25+Treg细胞诱导移植免疫耐受,抑制大鼠肾移植慢性排斥反应。方法以SD、Wister大鼠分别为供、受体建立同种异体肾移植慢性排斥反应动物模型;受体脾细胞悬液同供体肾组织抗原孵育培养,诱导获得对供体抗原的特异性;采用MACS法分选具有供体抗原特异性的CD4+ CD25+T细胞,FACS流式细胞法检测分选的CD4+CD25+T细胞及CD4+CD25+Treg细胞纯度;获得之供体抗原特异性CD4+CD25+Treg细胞于同种异体肾移植术后2、4、6、8、10周,分别经尾静脉注射入受者体内(实验组,n=12),选取未注射组为对照(n=12)。观察两组移植肾脏存活时间;术后第10、40、80天MTT法检测比较两组受体脾细胞对供体抗原刺激反应程度;术后第10、20、40、60、80天分别监测各组血肌酐水平。结果FACS流式细胞法检测分选的CD4+CD25+T细胞得率为4.13%,分离纯度为73.34%;CD4+CD25+Treg细胞纯度为65.22%。所分选之CD4+CD25+Treg细胞成功获得供体抗原特异性,对供体抗原的抑制率(IR)为85.4%。移植肾存活时间:治疗组移植肾存活时间为(98.83±6.66)d,显著长于对照组的(78.25±4.71)d,组间差异有统计学意义(P<0.05);术后第40、80天治疗组脾细胞对供体抗原刺激反应程度均明显低于对照组,两组间差异有统计学意义(P<0.05)。术后第20、40、60、80天对照组血肌酐指标明显高于治疗组,同治疗组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论供体抗原特异性CD4+CD25+Treg细胞可特异性抑制受体对供体抗原的免疫反应,有效抑制了移植肾慢性排斥反应的发生。

儿童AITP治疗前后CD_4^+CD_(25)^(High)Foxp3^+Treg细胞与Foxp3基因表达的变化

目的探讨CD4+CD25HighFoxp3+Treg细胞在儿童急性特发性血小板减少性紫癜(AITP)发病中的作用及对丙种球蛋白、激素治疗的效应关系。方法流式细胞仪检测AITP患儿治疗前后CD4+CD25HighFoxp3+Treg细胞比例变化,RT-PCR法检测外周血单个核细胞中Foxp3 mRNA的表达。结果单用激素或联用激素和丙种球蛋白治疗后AITP患儿CD4+CD25HighFoxp3+Treg细胞比例和Foxp3基因表达水平较治疗前和正常对照组明显增高(P<0.01),其中联用丙种球蛋白和激素组的增高水平更为明显(P<0.01)。结论CD4+CD25HighFoxp3+Treg细胞比例下降及Foxp3基因表达降低是AITP的发病机制之一,丙种球蛋白和激素可以通过诱导其扩增及活化发挥治疗AITP的作用。

小剂量环磷酰胺对正常小鼠CD4^+CD25^+Treg细胞的调节作用

目的比较多次与单次应用小剂量环磷酰胺(CTX)对小鼠CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)数量及功能的影响,明确小剂量CTX可否多次用于下调Treg细胞。方法 C57BL/6小鼠32只,随机分为正常对照、单次、两次及三次CTX注射组共4组,各组每10天腹腔注射20 mg/kg CTX或等体积PBS,末次给药后3 d,流式细胞技术测小鼠脾细胞中Treg细胞占CD4+T细胞百分比;同时3-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法比较各组脾细胞中T、B细胞增殖功能,中性红吞噬试验比较各组巨噬细胞吞噬功能。结果各实验组小鼠脾细胞中Treg细胞占CD4+T细胞百分比显著低于对照组(P<0.05),而各实验组间差异无统计学意义(P>0.05)。各实验组T、B细胞增殖指数及巨噬细胞吞噬功能明显高于对照组(P<0.05),但各实验组间差异无统计学意义(P>0.05)。应用CTX后Treg细胞数量与T、B细胞增殖功能及巨噬细胞吞噬功能呈线性负相关。结论多次与单次小剂量应用CTX对小鼠Treg细胞数量的下调作用无差异,下调Treg细胞后对免疫细胞的调节功能也无差异,小剂量CTX可多次用于下调正常小鼠Treg细胞。

补肾法对支气管哮喘慢性持续期肾虚证患者CD4^+CD25^+Foxp^(3+)Treg细胞及生活质量的影响

【目的】观察补肾法对支气管哮喘慢性持续期肾虚证患者CD4^+CD25^+Foxp^(3+)Treg细胞和Foxp3 mRNA表达的影响及对患者生活质量的改善作用。【方法】将60例慢性持续期肾虚证支气管哮喘患者随机分为对照组、穴注组与肌注组,每组20例。对照组维持入组前的常规西医治疗方案,穴注组与肌注组在原有治疗基础上加喘可治注射液穴注双侧足三里穴或肌肉注射,疗程均为90 d。观察各组治疗前后外周血CD4^+CD25^+Foxp^(3+)Treg细胞及Foxp3 mRNA表达的变化、成人哮喘生命质量评分量表(AQLQ)及哮喘控制测试量表(ACT)评分变化。【结果】(1)治疗后,除对照组CD4^+CD25^+Foxp^(3+)Treg细胞比例无显著性变化外,各组CD4^+CD25^+Foxp^(3+)Treg细胞比例及Foxp3 mRNA表达均较治疗前显著升高(P<0.01),且穴注组和肌注组的升高作用均优于对照组(P<0.01);同时,穴注组Foxp3 mRNA表达也较肌注组显著升高(P<0.05)。(2)治疗后,除对照组对刺激原的反应、自我健康的关心和肌注组对刺激原的反应无显著性变化外,各组AQLQ各维度评分及其总分均较治疗前显著改善(P<0.05或P<0.01);且穴注组和肌注组在改善活动受限、哮喘症状、自我健康的关心及其总分方面均优于对照组(P<0.01);同时,穴注组在改善活动受限方面也优于肌注组(P<0.01)。(3)治疗30 d及90 d后,各组ACT评分均显著升高(P<0.05或P<0.01),且治疗90 d后,穴注组和肌注组均较治疗30 d后显著升高(P<0.01);治疗30 d及90 d后,穴注组和肌注组的ACT评分均较对照组显著升高(P<0.01)。【结论】喘可治注射液能够调节哮喘慢性持续期患者的外周血T淋巴细胞亚群的紊乱状态,使之恢复平衡,改善患者的临床症状和生活质量。