冠状动脉粥样硬化斑块内的炎症反应与CD40信号传导

冠状动脉粥样硬化斑块内的炎症反应促使冠状动脉内不稳定斑块的形成和破裂 ,在此基础上发生细胞成分的活化并介导血栓形成 ,是绝大多数急性冠状动脉综合征发生的主要原因。近年来的研究发现 ,白细胞分化抗原 40 (CD40 )信号通路参与了动脉粥样硬化斑块内主要细胞成分炎症反应的调节 ,本文对CD40信号与冠状动脉粥样硬化斑块内炎症反应的相关问题作一综述。

CD40信号介导同种反应中CD4^+T细胞生物学功能的研究

目的探讨CD40信号在血管内皮细胞(ECV)与人外周血CD4+T细胞体外共培养的同种反应中的生物学功能。方法采用免疫磁珠阴性选择法分离获得人外周血CD4+T细胞,将纯化的CD4+T细胞与高表达CD40分子的ECV体外共培养,同时应用功能型CD154单克隆抗体阻断CD40信号,通过检测不同时间点的共培养上清IL-2、IFN-γ水平及CD4+T细胞的增殖来评价CD40信号在同种反应中的生物学效应。结果CD4+T细胞与ECV共培养组上清中的IL-2和IFN-γ水平高于含有CD154单克隆抗体的阻断效应组,差异有统计学意义(P<0.05);此外,CD154单克隆抗体通过阻断CD40共信号,能有效地抑制CD4+T细胞活化,并使之对同种抗原的刺激,维持在较低的应答水平,在共培养的第6天差异最为显著(P<0.05)。结论CD40信号参与ECV介导的CD4+T细胞分泌IL-2和IFN-γ,并介导CD4+T细胞对同种抗原的免疫反应;CD154单克隆抗体等多种干预CD40信号的生物制剂可能在移植排斥的免疫负性调节中具有潜在的应用价值。

B细胞CD40信号分子经NF-κB途径对pim-1激酶表达的调控

pim 1是一种编码丝氨酸 /苏氨酸蛋白激酶的主要原癌基因。TNFR家族成员CD4 0信号分子可通过NF κB途径使pim 1基因转录增加并引起pim 1蛋白含量的增加 ,该实验证明了这一点。另外 ,研究表明 :BCR和LPS受体复合物也可调节B细胞中pim 1的含量 ,其与B细胞生长增殖有一致性 ,所以 ,pim 1含量多少可能是B细胞生长。

EB病毒编码潜伏性膜蛋白1的信号传导和生物学特性及与CD40的相关性

EB病毒(EBV)编码的癌基因LMP1可使病毒在免疫系统的细胞中长期存活,并为EBV介导的人静止B细胞永生化过程所必需。它通过接头蛋白肿瘤坏死因子穴TNF雪受体相关因子(TRAFs)和TNF受体相关死亡结构域蛋白(TRADD),激活NF-κB、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和JAK/STAT等信号途径,上调B细胞上粘附分子LFA-1、ICAM-1和共刺激分子B7-1的表达,调节B细胞抗体和细胞因子的分泌。它在信号传导方面与TNF受体家族的CD40有很大的相似性,二者都以脂筏为载体协同传递信号。鉴于和CD40的密切相关性,LMP1的研究成为免疫学领域的一个热点。

川芎嗪对腹膜间皮细胞CD40表达的影响

目的 :探讨川芎嗪对腹膜间皮细胞CD4 0表达的影响。方法 :分离、培养大鼠腹膜间皮细胞 ,分别用 4 2 5 %腹透液、4 2 5 %腹透液加γ 干扰素 (IFN γ ,10 0u/ml)、4 2 5 %腹透液加川芎嗪 4 0mg/L、4 2 5 %腹透液加IFN γ 10 0u/ml加川芎嗪 4 0mg/L刺激细胞 30min ,以DMEM /F12培养基为对照组。通过逆转录 多聚酶链反应 (RT PCR)及流式细胞仪 (FACS)检测间皮细胞CD4 0表达。结果 :4 2 5 %腹透液刺激后腹膜间皮细胞CD4 0mRNA及其蛋白的表达明显高于对照组 (P <0 0 1) ;4 2 5 %腹透液加IFN γ联合刺激后 ,间皮细胞CD4 0mRNA及其蛋白的表达明显高于对照组及单纯 4 2 5 %腹透液组 (P <0 0 1)。加入川芎嗪后 ,可显著减低单纯 4 2 5 %腹透液及 4 2 5 %腹透液加IFN γ引起的CD4 0mRNA及其蛋白的高表达 (P <0 0 1)。结论 :单纯腹透液及腹透液加IFN γ可显著增加腹膜间皮细胞CD4 0的表达 ,而川芎嗪对腹膜间皮细胞CD4 0的表达有显著的抑制作用。在长程腹膜透析 (CAPD)过程中 ,加入川芎嗪可能有助于减轻透析液引起的慢性炎症反应 ,从而防止或延缓腹膜纤维化的发生。

基于CD40/NF-κB信号通路研究凉血散瘀汤在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的:探讨凉血散瘀汤经CD40/NF-κB信号通路对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法:模型对照组、尼莫地平组、凉血散瘀汤低剂量组、凉血散瘀汤高剂量组大鼠建立局灶性脑缺血再灌注损伤模型(每组20只,雌雄各半),另设空白对照组(20只)。各药物组给予相应药物灌胃,空白对照组和模型对照组给予等体积生理盐水,持续给予3个月。实验结束后,测定各组大鼠脑梗死体积、神经运动行为评分、水肿指数,应用RT-PCR法及蛋白印迹法测定脑组织分化簇40(CD40)、核因子κB(NF-κB)mRNA和蛋白水平。结果:模型对照组脑梗死体积、神经运动行为评分、水肿指数、脑CD40、NF-κB mRNA和蛋白表达水平高于空白对照组(P<0.05);尼莫地平组、凉血散瘀汤低剂量组、凉血散瘀汤高剂量组脑梗死体积、神经运动行为评分、水肿指数、脑CD40、NF-κB mRNA和蛋白表达水平低于模型对照组(P<0.05),且随着凉血散瘀汤给药剂量的逐渐增加,脑梗死体积、神经运动行为评分、水肿指数、脑CD40、NF-κB mRNA和蛋白表达水平逐渐降低(P<0.05);凉血散瘀汤低剂量组脑梗死体积、神经运动行为评分、水肿指数、脑CD40、NF-κB mRNA和蛋白表达水平高于尼莫地平组(P<0.05)。凉血散瘀汤高剂量组脑梗死体积、神经运动行为评分、水肿指数、脑CD40、NF-κB mRNA和蛋白表达水平与尼莫地平组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:凉血散瘀汤对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有明显保护作用,对局灶性脑缺血再灌注损伤的炎症反应具有明显抑制作用;其机制可能与凉血散瘀汤抑制局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织CD40、NF-κB表达进而抑制CD40/NF-κB信号通路的激活有关。

CD40-CD40L信号通路与急性冠脉综合征相关性研究进展

CD40及其免疫调节配体CD40L是一对互补跨膜糖蛋白,分别属于神经生长因子受体(NGFR)/肿瘤坏死因子受体(TNF-R)超家族和肿瘤坏死因子(TNF)超家族成员,参与许多疾病的发生发展过程。研究发现,CD40-CD40L通路不仅与免疫性疾病(自身免疫性疾病和免疫缺陷病)的发展进程密切相关,同时还介导炎症反应,几乎贯穿急性冠状动脉综合征(acute coronary syndrome, ACS)全过程。现就CD40-CD40L通路与急性冠脉综合征的相关性做一简要概述,以期进一步为探讨CD40-CD40L通路与心血管疾病的预防、治疗提供理论依据。

抗B7-1和抗CD40L单抗延长小鼠皮肤移植物存活实验研究

将C57BL/6小鼠腹部全层皮肤移植于BALB/c小鼠中段背部,实验分组(每组7只小鼠):1.B7-1功能性单抗(4E5)治疗组;2.抗CD40L单抗(4F1)治疗组;3.4E5+4F1治疗组,各单抗以20㎎/㎏的剂量注入腹腔内;4.空白对照组,只注射同等量的生理盐水。注射时间为移植后0﹑1﹑3﹑5d,观察移植皮肤排斥情况。于术后第6天分别杀死各组受体和供体鼠,取受体脾细胞与供体作混合淋巴细胞反应(MLR)。收集培养6d的初次反应细胞,检测再次MLR。结果发现,与对照组相比,各单抗治疗组皮肤移植物存活时间延长(P<0.05﹚;与各单独应用4F1和4E5相比,联合使用4F1和4E5产生一定的协同作用,但未能进一步延长移植物的寿命(P>0.05)。初次单向MLR:4F1﹑4E5和4F1+4E5治疗组受体T淋巴细胞在MLR中表现对供体淋巴细胞特异性低反应性,能有效抑制T细胞对同种异体抗原的初次应答。再次单向MLR:4F1﹑4E5﹑4F1+4E5对供体淋巴细胞在再次反应中仍保持着对同种抗原的反应性,与对照组无显著差异,未能诱导特异性免疫耐受。综上结果证实,anti-CDB7-1mAb(4E5)和anti-CD40LmAb(4F1)作为新型免疫抑制剂,在一定程度上抑制细胞免疫应答,干预排斥反应。

EDDE联合依折麦布对高脂血症合并WSI患者血脂、炎症/神经通路及脑细胞凋亡因子的影响

目的探究依达拉奉右莰醇(EDDE)联合依折麦布在高脂血症合并分水岭脑梗死(WSI)患者治疗中的潜在机制。方法选取2021年3月至2023年12月郑州市第二人民医院收治的80例高脂血症合并WSI患者纳入研究,按随机数表法分为研究组和对照组各40例,对照组患者在常规治疗的基础上采用依折麦布治疗,研究组在对照组治疗的基础上联合EDDE治疗,连续治疗14 d。治疗后比较两组患者的临床疗效,以及治疗前后的血脂水平[高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)]、CD40/CD40L炎症信号通路[白介素-1(IL-1)、白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)、可溶性CD40配体(sCD40L)]、磷酸肌醇-3-激酶(PI3K)/苏氨酸蛋白激酶(AKT)神经信号通路、脑细胞凋亡因子[抗凋亡因子(Livin)、可溶性凋亡相关因子(sFas)、sFas配体(sFasL)]、功能恢复情况[神经功能缺损(NIHSS)、认知功能(MMSE)]。结果研究组患者的治疗总有效率为92.50%,明显高于对照组的75.00%,差异有统计学意义(P<0.05);治疗14 d后,研究组患者TC、TG、LDL-C明显低于对照组,HDL-C高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗14 d后,研究组患者IL-1、IL-6、sCD40水平分别为(8.12±1.25)pg/mL、(1.53±0.34)pg/mL、(185.29±45.32)pg/mL,明显低于对照组的(13.78±1.64)pg/mL、(2.55±0.40)pg/mL、(289.18±52.25)pg/mL,IL-10水平为(49.10±4.28)pg/mL,明显高于对照组的(37.75±5.44)pg/mL,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗14 d后,研究组患者PMBC内的PI3K、AKT、mTOR蛋白表达分别为1.34±0.23、1.25±0.26、1.57±0.35,明显高于对照组的1.10±0.19、1.11±0.21、1.23±0.24,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗14 d后,研究组患者的血清sFasL、sFas水平分别为(2.42±0.41)ng/mL、(3.65±0.47)ng/mL,明显低于对照组的(4.26±0.58)ng/mL、(6.04±0.59)ng/mL,Livin水平为(9.57±1.18)μmol/L,明显高于对照组的(7.42±1.05)μmol/L,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗14 d后,研究组患者的NIHSS评分(7.46±1.62)分,明显低于对照组的(10.85±2.26)分,MMSE评分(21.32±3.14)分,明显高于对照组的(17.49±2.57)分,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论EDDE联合依折麦布治疗高脂血症合并WSI能调控患者的CD40/CD40L炎症信号通路、PI3K/Akt神经信号通路及神经凋亡相关分子表达,促进患者认知功能和神经功能恢复,与单纯依折麦布治疗相比,联合EDDE治疗效果更好。

狼疮方对慢性GVHD狼疮样肾炎小鼠模型的作用

目的探讨狼疮方治疗狼疮肾炎的有效性及作用机理。方法采用慢性移植物抗宿主病(GVHD)狼疮样小鼠模型,经狼疮方、强的松治疗后分别检测血清抗ds-DNA抗体、脾细胞CD40表达及肾脏功能,并观察形态学变化。结果(1)血清抗dsDNA抗体为模型组与正常对照组比较差异有显著性(P＜0．01)；狼疮方组及强的松组与正常对照组比较差异无显著性(P＞0．05)。(2)脾细胞CD40表达的平均荧光强度及阳性细胞百分率模型组均显著高于正常对照组(P＜0．05或P＜0．01)；狼疮方组及强的松组与正常对照组比较差异无显著性。(3)肾脏病理学半定量分析显示各治疗组肾小管间质损伤总积分和肾小球硬化指数均明显低于模型组(P＜0．05或P＜0．01),病变较模型组均显著减轻。结论狼疮方具有一定的免疫抑制作用,可能通过干扰CD40信号,减少自身抗体产生,从而对慢性GVHD狼疮样肾炎小鼠模型具有一定的防治作用。

CD40在大鼠腹膜间皮细胞的表达及其功能研究

目的 研究腹膜间皮细胞CD40的表达、调节因素及其活化后与细胞间黏附分子1(ICAM-1)分泌的相关性。方法 分离、培养大鼠腹膜问皮细胞,用IFN-γ、TNF-α、IL-1刺激24 h,通过逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)及流式细胞仪(FACS)检测分析间皮细胞CD40表达。通过CD40单克隆抗体(CD40mAb)活化间皮细胞CD40,用FACS检测分析间皮细胞ICAM-1的表达。结果 间皮细胞结构性表达低水平的CD40。IFN-γ、IL-1可显著增加间皮细胞表面CD40mRNA及其蛋白的表达,而以IFN-γ增幅最大。TNF-α对间皮细胞CD40mRNA及其蛋白的表达无显著增加作用。用IFN-γ增加间皮细胞CD40表达的同时,加入CD40mAb活化CD40受体可显著增强间皮细胞ICAM-1的表达。结论 腹膜间皮细胞功能性表达CD40,其与腹腔中阳性CD40配体(CD40L+)细胞相互作用,可能在腹腔局部防御中发挥重要作用,其结果对于限制炎症的发生和发展具有积极意义。

免疫炎症对良性前列腺增生细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨由巨噬细胞(MAs)诱导的免疫炎症对前列腺增生(BPH)细胞增殖和凋亡的影响及可能的机制。方法:MAs经过丙二醇甲醚醋酸酯(PMA)刺激后,与BPH细胞(BPH-1)一起培养,然后进行雄激素受体(AR)抑制剂或抗CD40L抗体处理。检测处理前和处理后T淋巴细胞(CD4、CD8)、B淋巴细胞(CD20)、巨噬细胞(MAs)(CD68)、雄激素受体(AR)和炎症因子IL-1、IL-6、TNF-α的生物标志物。用MTT法、集落形成试验和流式细胞仪观察细胞增殖和凋亡情况。采用定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blot检测凋亡相关蛋白和MAPK信号通路相关蛋白的表达。结果:与空白对照组(B-BPH-1组)相比,MAs处理组(M-BPH-1组)细胞增殖率明显升高,凋亡率显著下降,Bcl-2表达升高,Bax表达降低,免疫炎症因子IL-1、IL-6、TNF-α的表达明显升高,AR、CD40和CD40L的mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.01)。与生理盐水组相比,CD40L单克隆抗体低剂量组(L-CD40L组)和CD40L单克隆抗体高剂量组(H-CD40L)组细胞增殖能力均受到抑制,细胞克隆数量均减少,细胞凋亡率明显上升,Bcl-2表达降低,Bax表达显著升高,免疫炎症因子IL-1、IL-6、TNF-α的表达均下降(P<0.01)。与生理盐水组相比,AR抑制剂低剂量组(L-AR抑制剂组)和AR抑制剂高剂量组(H-AR抑制剂组)细胞增殖率明显均降低,克隆细胞数量均减少;H-AR抑制剂组细胞凋亡率升高,Bcl-2表达降低,Bax表达升高,免疫炎症因子IL-1、IL-6、TNF-α的表达均下降(P<0.01)。与B-BPH-1组相比,M-BPH-1组的JNK、ERK和p38的磷酸化水平明显升高,而H-CD40L组和H-AR抑制剂组JNK、ERK和p38磷酸化水平明显被抑制,并呈浓度依赖性(P<0.01)。结论:由MAs诱导的免疫炎症可通过激活MAPK信号通路调节AR和CD40/CD40L表达,促进BPH-1细胞增殖并抑制凋亡。

内皮细胞损伤在马兜铃酸肾病中的作用及其机制

目的通过观察马兜铃酸-I(AA-I)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖、凋亡、分泌、转分化的影响,探讨其与共刺激分子CD40/CD40L、转化生长因子-β1(TGF-β1)/TGF-βⅡ型受体(TGF-βⅡR)的关系。方法应用不同刺激浓度的AA-I作用于HUVEC,分别采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法和流式细胞仪(FCM)检测AA-I对HUVEC增殖和凋亡的影响;FCM检测血管内皮细胞的标志分子血管内皮生长因子受体(Flk1),共刺激分子CD40L、促纤维化细胞因子TGF-βⅡR表达的变化;Western blot法测定肌成纤维细胞的标志蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、CD40、TGF-β1表达的变化;酶联免疫吸附法检测HUVEC分泌TGF-β1的变化。结果不同浓度AA-I作用于HUVEC培养96 h后,高浓度AA-I导致细胞增殖受到抑制,各刺激浓度均可导致凋亡,Flk1表达下调、α-SMA表达上调,共刺激分子CD40/CD40L、TGF-β1/TGF-βⅡR表达增加,明显促进TGF-β1的分泌(P<0.05),上述实验数据改变均呈明显的剂量相关性。结论 AA-I不仅能够抑制内皮细胞增殖,促进其凋亡,并能使其向平滑肌样细胞转化和纤维化。

人B淋巴母细胞系体外培养方法的优化及其影响因素

目的探讨体外建立健康人外周血B淋巴母细胞样细胞系(B-LCLs)的优化方法及其影响因素。方法用EB病毒感染健康人外周血中分离的单个核细胞(PBMC),加入CD40激发型抗体(5C11)、CpGDNA免疫调节基因序列以诱导B淋巴细胞增殖,环胞菌素A(CysA)抑制T淋巴细胞的活性。光学显微镜下观察B-LCLs的形态特征,利用流式细胞术分析B-LCLs膜表面分子CD19的表达水平。结果PBMC经EBV感染3周后转化成永生化B-LCLs。转化后的B淋巴母细胞体积增大积聚成团,可进一步分裂增殖并长期传代培养。CD40激发型抗体(5C11)及CpG免疫调节基因序列联合EBV感染人PBMC,明显地提高了转化效率,转化后的LCLs保持了成熟B淋巴细胞的生物学特征。结论CD40信号激发和CpG免疫调节基因序列联合运用能有效地促进EBV对人B淋巴细胞的转化及体外建系。